Tema 5. Fosforilacin oxidativa y cadena respiratoria.

nico tema de fosforilacin oxidativa, todos las dems son fosforilaciones a nivel de sustrato.
Funcin metablica de la cadena respiratoria.
El poder reductor generado en las rutas metablicas (NADH y FADH2) se usa en reacciones
redox. Para las dems reacciones necesitamos compuestos ricos en energa (ATP) que tambin
es generado en el ciclo de Krebs.
La clula tiene que convertir la energa redox en energa de enlace (convertir NADH y FADH2
en ATP), para que la clula lo pueda usar para todas las dems reacciones.
Esto ocurre en la membrana interna mitoncondrial (el ciclo de Krebs ocurre en la matriz
mitocondrial).
Mecanismo.
1. La cadena de transporte de electrones acopla el bombeo de electrones del NADH y del
FADH2 con el bombeo de protones de la matriz mitocondrial al espacio
intermembrana.
2. Cuando los protones refluyen a favor de gradiente desde el espacio intermembrana
hasta la matriz mitocondrial a travs de la ATP sintasa se genera ATP.

El complejo I coge los electrones del NADH y se los da a la ubiquinona (Q). El complejo II coge
los electrones del Succinato, formando fumarato, y se los da a la ubiquinona. El complejo III
coge los electrones de la ubiquinona y se los pasa al citocromo C y por ltimo el complejo IV
coge los electrones del citocromo C y se los da al O2 para formar H2O.

Mitocondria.
1. Tiene 2 membranas, membrana externa y membrana interna:
La membrana externa de la mitocondria es muy permeable a molculas pequeas,
iones
Por el contrario, la membrana interna (tiene crestas y pliegues) es muy impermeable
a molculas pequeas e iones. Esto permite crear el gradiente con los protones.
Dentro de la membrana interna tenemos la cadena respiratoria, la ADP/ATP
traslocasa y la ATP sintasa.
2. Dentro de la mitocondria hay un espacio intermembrana (entre la membrana interna
y la membrana externa) y una matriz mitocondrial (dentro de la membrana interna).

El espacio intermembrana tambin se le llama lado P o Positivo (se nos acumulan

muchos protones, y tiene carga positiva).

La matriz mitocondrial tambin se llama lado N o negativo (haba protones que

volvemos a bombear luego se nos genera una carga negativa). En la matriz
mitocondrial se da el ciclo de Krebs, la beta oxidacin de cidos grasos, oxidacin
de cidos grasos, ribosomas, otras enzimas

Concepto de transduccin de energa mitocondrial.

Tenemos energa tipo redox (NADH y FADH2) y esta energa la convertimos en un gradiente
electroqumico, la usamos para bombear protones (ponemos en el espacio intermembrana
gran cantidad de protones). Ahora usamos esta energa para, con la ATP sintasa, generar ATP,
que ya podemos utilizar para todas las reacciones (energa qumica de enlace). Esto es el
concepto de transduccin de energa mitocondrial.

Transduccin de energa.
La cadena respiratoria est acoplada a la fosforilacin oxidativa.

Ecuacin redox de la respiracin.

En la cadena respiratoria mitocondrial los electrones se transfieren desde el NADH o el FADH2
hasta el O2. Esto nos da energa suficiente para generar ATP.
Sin la cadena respiratoria.
-

De 1 NADH -> 1 ATP

De 1 FADH2 -> 1 ATP

Con la cadena respiratoria:

-

1 NADH -> 2,5 ATP

1 FADH2 -> 1,5 ATP

La ventaja de usar la cadena respiratoria y la fosforilacin oxidativa es que la clula va a

obtener ms energa a partir de la misma cantidad de poder reductor. Sin embargo la cadena
respiratoria tampoco es 100% eficiente.

Donadores de electrones.
Las 2 principales molculas de poder reductor son NADH y FADH2. Del ciclo de Krebs
obtenemos 3 y 1 respectivamente de cada una de estas molculas. El FAD tambin puede
provenir de otras fuentes. Hemos visto los dos de abajo que provienen del ciclo de Krebs, pero
tambin puede venir de cidos grasos o de la gluclisis (se convierte en gicerol).

Secuencia de la cadena respiratoria.

Los complejos I y II transportan en paralelo hacia la ubiquinona u coenzima Q, que es paso
obligatorio de los electrones procedentes de estos complejos.

Determinacin de la secuencia en la que actan los transportadores.

Cmo se determin en qu orden estaban todos los componentes? Formas:
1. Calculando potenciales de reduccin estndar. Sabemos que los electrones van a ir de
potenciales ms negativos a ms positivos, luego viendo los potenciales de las
semirreacciones podemos ordenarlas obteniendo una idea del orden aproximado que
pueden tener en la clula.
2. Quitando el oxgeno podemos ver tambin en qu orden se iban reduciendo (el ltimo
se reducira primero y el de arriba del todo se reducira cuando se hubiesen reducido
todos los dems).
3. Usando inhibidores de la cadena respiratoria que actan a diferentes niveles. Por
ejemplo: al inhibir la transferencia de oxgeno, todos los compuestos de la izquierda
hasta llegar al O2 se quedaran reducidos.

Transportadores electrnicos de la cadena respiratoria.

Se puede transportar un electrn solo o acompaado de algn protn.
La cadena respiratoria consta de una serie de transportadores electrnicos capaces de aceptar
y donar 1 o 2 electrones.
Cada componente de la cadena acepta electrones del transportador precedente y se los
transfiere al siguiente en una secuencia especfica.
Complejos:
-

NAD, FAD/FMN (son hidrosolubles).

Ubiquinona o CoQ (hidrfoba).

Citocromos: son protenas con grupo prosttico hemo.

Protenas ferro-sulfuradas (protenas con Fe asociado a tomos de S).

Ubiquinona, Coenzima Q o Q10.

Es una molcula pequea e hidrfoba, porque tiene grupo isoprenoide (cadena repetida 10
veces, por eso se llama Q10). Coenzima Q10 es la ms comn en humanos y hace referencia al
nmero de isoprenos. Se localiza dentro de la membrana mitocondrial interna.
La UQ va a ser capaz de estar oxidada, completamente reducida, o semireducida (de manera
que estar en estado semiquinona). Cuando est completamente reducida se denomina
Ubiquinol, y si est oxidada se denomina ubiquinona. Puede aceptar tambin 1 electron
formndose radical semiquinona.
Es capaz de actuar como unin entre un dador de 2 electrones y un aceptor de 1 e (puede
hacer de traductor o intrprete). Es capaz de transportar 2 electrones y 2 protones.
Debido a que es pequea e hidrfoba difunde a travs de la membrana interna mitocondrial,
actuando de lanzadera de equivalentes de reduccin entre otros transportadores electrnicos
de la membrana, menos mviles.

Protenas ferro-sulfuradas.
Bsicamente tendremos 1, 2 o 4 hierros inorgnicos complejados con azufres inorgnicos o de
cistenas. Las protenas ferrosulfuradas solamente transportan un electrn.

Citocromos.
Los citocromos tienen unido un grupo prosttico hemo que puede ser grupo A, grupo B o
grupo C. Tambin puede haber diferentes subtipos (a1, a2, c1, c2, c3).
El citocromo a3 tiene todas las posiciones ocupadas excepto 1, que est libre, y le permite
unirse al oxgeno.
La mayora de citocromos forman parte de los complejos en la membrana plasmtica, pero el
citocromo C es una excepcin y es soluble.

Citocromo C.
El citocromo C tambin est involucrado en otros procesos como la muerte celular de la clula.
El citocromo C es soluble y se est moviendo normalmente por el espacio intermembrana. Si el
citocromo C se encuentra fuera de la membrana le da una alerta a la clula y hace que se
autodestruya. (lo nico que hay que saberse del citocromo C).

Componentes de la cadena respiratoria mitocondrial.

Complejo I: NADH coenzima Q oxidoreductasa, NADH deshidrogenasa.
Complejo II: succinato coenzima Q - oxidoreductasa, succinato deshidrogenasa.
Complejo III: coenzima Q - citocromo C oxidoreductasa.
Complejo IV: citocromo oxidasa.

Complejo I.
Cogemos 2 electrones del NADH y los pasamos al FMN, luego a centros ferrosulfurados, y por
ltimo lo acaba pasando a la ubiquinona (que tambin coge dos protones). Este proceso tiene
un incremento de G bastante negativo, luego es bastante exergnico. La clula aprovecha esta
energa que hemos generado simplemente por el trasvase de electrones para bombear 4
protones al espacio intermebrana desde la matriz (concepto ms importante).

Complejo II.
Est anclado a la membrana, y a l llega el succinato que se convierte luego en fumarato. Los
electrones van a pasar a lo largo de los diferentes centros (FAD, centros ferrosulfurados) y al
final se lo acaba pasando a la ubiquinona, de manera que sta queda reducida. La gran
diferencia entre el complejo II y el complejo I es que en el complejo II, los electrones obtenidos
al pasar de FADH a FAD y de succinato a fumarato, no tenemos suficiente energa para
bombear protones. Este complejo no bombea protones al espacio intermembrana. (Por eso el
fadh tiene menos energa, no es capaz de bombear tantos electrones).

Complejo III.
Tiene un centro ferrosulfurado que es la protena de Rieske (importante). Tiene dos
citocromos tambin. En l tiene lugar el ciclo Q:
Cuando llega la ubiquinona en estado reducido, llega a la protena de Rieske y el ubiquinn le
suelta 1 electrn, al centro ferrosulfurado de la protena de Rieske (stos solamente pueden
coger de 1 en 1 los electrones). La protena de Rieske luego se lo da al citocromo C1, que luego
se lo da al citocromo C. El otro electrn que tiene el ubiquinn se lo va a soltar a alguien
diferente. Se lo suelta al citocromo B, pasa al H y luego ve una ubiquinona completamente
oxidada, y se lo da pasando al estado semiquinona. Los protones se bombean
automticamente al espacio intermebrana.
En la segunda mitad del ciclo, una ubiquinona vuelve a ceder un electrn a la protena de
rieske y acaba en otro citocromo C, y la semiquinona que habamos formado vuelve a captar
otro electrn y dos protones para formarse QH2. Al final hemos transportado 2 electrones a 2
citocromos C, y hemos bombeado 4 protones, dos protones al principio y luego otros 2.

Complejo IV.
El oxgeno es el ltimo aceptor. Slo bombea 2 protones (si tenemos en cuenta 1 nico tomo
de oxgeno). Si coge 1 molcula de O2 se bombean 4 protones. Para una molcula de oxgeno
vamos a obtener 2 molculas de agua, y necesitaramos 4 molculas de citocromo C. Para dar
2 molculas de agua vamos a necesitar 4 electrones.
El complejo IV tiene un grupo hemo a3, con una posicin libre para que se una el oxgeno, y el
cobre B que tambin participa en la cesin de electrones al oxgeno.
Inhibidores:
Rotenona: bloquea el complejo I.
Antimicina : bloquea el complejo III.
CN y CO2 : ihiben el complejo IV.
El bombeo de protones hacia la membrana era en contra de gradiente, y ahora lo hacemos a
favor de gradiente y ahora es cuando generamos la energa.

Por qu los electrones entran de 2 en 2 en la cadena respiratoria y acaban transportndose

de 1 en 1.
Debido al principio de exclusin de Pauling: Porque el aceptor final O2 tiene una disposicin
electrnica que no permite aceptar electrones de 2 en 2.

Especies reactivas de oxgeno.

Si damos un electrn se forma el radical superxido. Cuado le damos uno ms formamos el in
perxido (al cual podemos darle 1 proton, 2 o ninguno) cuando le damos un electrn ms al
perxido de hidrgeno formamos una molcula de agua y un radical hidroxilo, al cual le damos
un electrn y formamos otra molcula de agua.

Estrategias de la clula para evitar dao por ROS (especies reactivas de oxgeno).
-

O2- -> superxido dismutasa.

H2O2 -> catalasa.

ROO- -> glutatin reductasa y glutatin peroxidasa

Fosforilacin oxidativa.
Consiste en sintetizar ATP mediante un proceso exergnico (bombeamos protones a favor de
gradiente).

Mecanismo de la ATP sintasa.

La ATP sintasa es un rotor molecular que acopla el proceso endergnico de rotacin (se
translocan protones a travs de F0 y esto provoca la rotacin del cilindro de subunidades c y la
subunidad gamma roten alrededor del eje de gamma) con el proceso exergnico de
translocacin de protones del lado P al N.

La ATP sintasa funciona de la siguiente forma: los centros activos estn en la interfase entre las
subunidades alfa y beta. Existen 3 estados conformacionales (cada sitio tiene siempre una
conformacin, y stas van cambiando con la entrada de protones):
-

O (open, vaca (no lleva protones).

L (loose, une sustratos, une el ADP con el Pi).

T (tight, une ATP).

Cuando entra un protn, en F1 se cambia de conformacin de L a T, el sitio T pasa a O y el sitio

O pasa a L.
La subunidad F1 abarca abarca: cilindro de subunidades alfa y beta, subunidad b y subunidad
gamma. La subunidad F0 abarca la subunidad a y la c (rota).

Regulacin de la respiracin y fosforilacin oxidativa.

Lo ms importante es conocer que la fosforilacin oxidativa est regulada por las necesidades
energticas de la clula. Cuando hay poco ATP se estimula para producirlo, y cuando hay
mucho, se inhibe la FO.

Estequiometria de la fase III del catabolismo. Razn P/O.

Se define como la cantidad de ADP fosforilado (cantidad de ATP que vamos a formar) por
cantidad de O consumido.
La razn P/O va a ser 2,5 si los electrones provienen del NADH y 1,5 si provienen del FADH2.
NADH -> 10 H+ -> 2,5 ATP/O
FADH2 -> 5 H+ -> 1,5 ATP/O

Cul es el rendimiento energtico de un mol de acetilCoA a partir de la fase III del

catabolismo? La acetil CoA entra en un ciclo de Krebs donde se producen 3 NADH y 1 FADH2.
Luego 3 moles de NADH + 1 mol de FADH2 + 1 mol GTP = 3x2,5 + 1,5x1 + 1 ATP = 10 ATP por
cada molcula de acetil coA que entra en el ciclo de Krebs.

Regulacin de la respiracin y de la fosforilacin oxidativa.

Convertimos energa en forma de poder reductor en energa en forma de ATP.
Vamos a tener un incremento de G redox, parte de esta energa se utilizar en bombear
protones (ser mayor o igual, ya que el incremento de energa libre de los protones
bombeados, nunca ser igual ya que el rendimiento no es 100%), y luego esta energa ser
utilizada para generar ATP. Tambin es mayor la delta de G de H que la delta de G de sntesis
de ATP, ya que la eficiencia no es del 100%, porque parte de esta energa se desperdicia.
La regulacin va a estar regulada por la concentracin de ATP / ADP + fosfato inorgnico que
haya en el citosol. Va a estar regulado por las necesidades energticas de la clula, y se
controla por la disponibilidad de sustratos (ADP, Pi, O2, y compuestos que en la mitocondria

producen NADH y FADH). La respiracin ocurre en condiciones aerobias, en ausencia de

oxgeno no puede ocurrir (entonces la clula recurre a la fermentacin).
El proceso de regulacin de fosforilacin oxidativa depender de la cantidad de energa que
necesite la clula y de la disponibilidad de los sustratos.

Regulacin de la produccin de ATP.

Tanto el ATP como el poder reductor en altas concentraciones actan de inhibidor en la
gluclisis y en el ciclo de Krebs y en el ciclo de la fosforilacin oxidativa.
Por el contrario, cuando los niveles energticos de las clulas son bajos, se favorecen todos
estos procesos.

Agentes que interfieren en la fosforilacin oxidativa.

-

Inhiben la transferencia de electrones.

o

Rotenona -> inhibe el complejo I (hay que saber el nombre y qu complejo

inhibe).

Carboxina -> inhibe el complejo II.

Antimicina A -> inhibe el complejo III.

CN- Co, azida sdica -> inhibe el complejo IV.

Inhiben la ATPsintetasa o complejo V.

o

Oligomicina.

Venturicidina.

DCCD (diciclohexi

Desacoplan la fosforilacin oxidativa y la transferencia de electrones.: favorecen que

pasen los protones del espacio intermembrana a la matriz y se llaman desacoplantes
porque en este caso desacoplan las dos cosas, hacemos que la cadena respiratoria siga
funcionando pero no producimos ATP.
o

Dinitrofenol.

FCCP.

TErmogenina.

Para inhibir la cadena respiratoria, no basta con inhibir el complejo I (ya que los electrones
entraran por el complejo II) ni el complejo II (ya que entraran por el complejo I). Si inhibimos
el complejo III, a la larga acaba parndose la produccin de ATP.
Tanto si inhibimos la cadena respiratoria, la ATP sintasa se nos acabar parando, como si
inhibimos la ATP sintasa, se nos acabar parando la cadena respiratoria (porque llega un
momento en que hay tal concentracin de protones en el espacio intermembrana que el
gradiente ser demasiado grande).
Normalmente los desacoplantes sern cidos dbiles liposolubles. Al ser dbiles pueden estar
protonados o desprotonados, y al ser liposolubles pueden difundir (una vez protonados) por la
membrana interna mitocondrial, y una vez que estn dentro se desprotonan y liberan
protones (a efectos prcticos cogen protones de fuera y los meten dentro, luego deshacen el
gradiente). Los animales que hibernan liberan gran cantidad de una protena desacoplante, ya
que genera calor.

Termogenina y termognesis.
Genera calor. La termognesis en la mitocondria de la gasa parda est bajo control hormonal.
Los osos en hibernacin.