Prctica 5: PRECIPITACION, SEPARACION Y PUNTO ISOELECTRICO DE LAS PROTEINAS

INTRUDUCCIN:
Las protenas no son nicamente polipptidos,
sino que son polipptidos con una secuencia de
OBJETIVOS:
aminocidos propia. Si se altera la secuencia de
1.- Conocer las pruebas de separacin de
aminocidos de una protena, pueden
protenas
e identificar
los principales
Tubo
No
1
2 factores
3
producirse
anomalas
funcionales
y
que afectanClara
su solubilidad.
de Clara
de Clara
de
enfermedades. Para separar una protena de
2.-Determinar
el punto isoelctrico
de la insulina,
huevo
huevo filtrada,
huevo
otros compuestos se pueden emplear diversas
basndosefiltrada,
en sus propiedades
solubilidad
a
dil. dil. 1:3de(mL)
+ filtrada,
dil.
tcnicas. Una de estas tcnicas se basa en la
diferentes valores
de pH.
1:3 (mL)
+ NaOH 0.1 N 1:3
(mL)+
baja solubilidad que tienen las protenas en
HCl 0.1 N (mL)
regulador de
Biuret
Interpretacin
disoluciones salinas concentradas. El hecho de
(mL)
acetatos 0.1
que una protena se disuelva en un medio
M, pH 4.7
Filtrado 1
Color
Prueba
acuoso se debe a su capacidad de formar
(mL)
positiva
Poca violceoMayor
Precipitacin
puentes de hidrogeno con el agua: a mayor
Precipitado Color
Prueba
cantidad de puentes de hidrogeno mayor Observacione precipitacin solubilizacin, de protena,
1
violceo
positiva
de protena, formacin
turbidez,
solubilidad. La accin de la sal es liberar el agua s
Filtrado 2
Color azul Prueba
poca
ligera
de formacin de
unida a la protena por puentes de hidrogeno, lo
negativa
formacin
espuma.
espuma.
cual provoca su precipitacin. Otro mtodo d
Precipitado Color
Prueba
de espuma.
separacin de protenas consiste en hacerlas
2
violceo
positiva
interactuar con cationes de metales o aniones
RESULTADOS: Precipitacin por efecto de
3.0
3.0
3.0
de cidos, el compuesto resultante precipita. En Etanol 96
pH y disolventes:
(mL)
su punto isoelctrico, la carga total de la
protena es cero; pero; usualmente las protenas
Formacin
poseen carga positiva o negativa, dependiendo Observacione Coagulacin Solubilizacin
s
de
la
de
la
de un
del pH de la solucin en que se encuentran y de
Salting
Out
protena.
protena.
coloide.
la mezcla de aminocidos cargados que
contengan. En una solucin de una protena,
cuando el valor del pH supera el del punto
isoelctrico, los grupos cargados positivamente
se desprotonan y, por lo tanto, la protena
presenta una carga negativa; por el contrario, si
el valor de pH se encuentra por debajo del punto
isoelctrico, los grupos ionizables
se
protonan y la protena adquiere carga
positiva.

Alumnos:
Flores Hernndez Carlos I.
Garca Mrquez Reynaldo
3IM2

Seccin: 3

Precipitacin por metales pesados:

Determinacin del punto isoelctrico de
la insulina.
T
u
b
o

A
In
ci ce su
d
tat lin
o
o
a
a
de 40
c
so U/
t di m
ic o
L
Filtrado 1
o
0.
0. 2
Precipitado
2
M
1
M ( 2
Filtrado
(
m
m
L)
Precipitado
2L)
0. 0. 0.
2
02 06
3
m

p Obse
H rvacio
nes

Biuret
Color
violceo
Color
violceo
Color azul
Color
violceo
3 Liger
. amen
6 te

Interpretaci
n
Prueba
positiva
Prueba
positiva
Prueba
negativa
Prueba
positiva

Prctica 5: PRECIPITACION, SEPARACION Y PUNTO ISOELECTRICO DE LAS PROTEINAS

2 Tubo
0. No
0.
1
10
Clara de
5
huevo
filtrada
3 0. dil.
0.
A:3 0
(mL) 20
5
Observaci
ones
4

0.
0
1

0.
24

0.
0
0

0.
25

L
9 turbio
2
0. 41 Liger
06 . amen
+ Cloruro
+ Nitrato
m 5 te
mercrico
de plata
L
6 turbio
5%
(mL)
0. 5 Preci 2% (mL)
06 . pitad
Precipitado Precipitad
m 3 o
blanco
o blanco
L
4 color
blanc
o
0. 6 Crista
06 . lino
m 4
L
3
0. 9 Crista
06 . lino
m 0
L
2

3
+ Acetato
de plomo
5% (ml)
Precipitado
blanco

Clculos: (tubos
1-4) pH= pKa + log

+
Cloruro
de bario
5% (mL)
Poco
precipita
do
blanco

+ NaCl
5%
(mL)

+
Agua

Cristali
no

Cristal
ino

o.o8
0.12

1.-pH= 4.7423+ log

o . o 16
0.18

= 3.69

2.-pH= 4.7423+ log

= 4.56

3.-pH= 4.7423+ log

o .16
0.04

4.-pH= 4.7423+ log

o .196
0.004

(Tubo 5) pH=

5.-pH=

[base ]
[acido ]

1
2

1
2

pKa+

4.7423+

1
2

= 5.34

= 6.43

1
2 log[base] +7
log [0.2] + 7 =

9.02
El punto isoelctrico se da en l tuvo 3 a un pH
de 5.43
Discusin de resultados:
El mtodo de separacin de protenas salting
out se basa en las diferencias de solubilidades
entre protenas y en la competencia entre sal y
protena por las molculas de agua, donde las
sales con fuerza inica mayor se solubilizan con
el agua y por lo tanto precipita la protena. En el
experimento realizado, al ir precipitando

protenas, se concentraba ms la sal en la

solucin sobrenadante por lo tanto se fueron
separando protenas de diferentes pesos
moleculares y a la par haciendo prueba de
biuret para cerciorarse que estaban presentes
las protenas hasta que en cierto punto la
prueba de biuret result negativa y entonces ya
no haba protenas por separar.Debido a la
interaccin de cargas de la protena con el
medio que le rodea se comporta de maneras
distintas. Cuando la protena se encuentra en un
medio cido se desnaturaliza y por lo tanto
precipita, sin embargo cuando se encuentra en
un medio alcalino se solubiliza. Al agregar etanol
la constante dielctrica se combina con la del
agua y se pierde afinidad con el disolvente por
lo tanto se hace ms notoria la
precipitacin.Respecto al comportamiento de las
protenas con sales de metales pesados, las
protenas precipitan en su presencia ya que las
sales rompen los enlaces qumicos que
estabilizan la estructura tridimensional de la
protena formando complejos, se desdobla y por
lo tanto se desnaturaliza precipitndose. Con el
NaCl no sucede ya que no es un metal lo
suficientemente fuerte para romper los enlaces
de la protena y formar el complejo, y ya que la
protena est diluida en agua el NaCl se disocia
con el agua.
Conclusin:
La precipitacin de protenas depende pH y
solubilidad.
Clara de huevo diluida precipita a pH cido y
solubiliza a pH bsico.
Clara de huevo diluida precipita en presencia de
sales de Hg, Ag, Pb, Ba.
El punto isoelctrico de la insulina se detecta
con la formacin de un precipitado blanco.
El punto isoelctrico de la insulina es a pH 3.85.

Prctica 5: PRECIPITACION, SEPARACION Y PUNTO ISOELECTRICO DE LAS PROTEINAS

BIBLIOGRAFA:
Albert L. Lehninger Bioquimica Ediciones
Omega Octava reinmpresion 1984.
http://borinot-mseguid.blogspot.mx/2009/06/quepasa-con-la-insulina-glargina.html

Voet, Donald/ Voet Jdidth G, / Pratt, Charlotte W.

(2007).Fundamentos de bioqumica. Segunda
edicin. Editorial medica panamericana. Madrid,
Espaa. Pp: 101-105 Rendina George. (1974),

Tcnicas de Bioqumica Aplicada. Ed.

Interamericana, D.F. Mxico, Pp. 59