UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

Direccin General de Investigacin y Posgrado

-Centro de Biologa-

Estudiantes: Darwin Guamn

Mishelle Guamn
David Apolo
Pamela Andino
Daro Guerrn

Carrera: Ingeniera Agronmica

Asignatura: Biologa
Grupo: 2

Ciclo: 1er Sem C Fecha: 29/04/2015.

1. Tema: Extraccin de ADN.

2. Objetivo general
Realizar la extraccin de ADN de un tejido vegetal.

3. Objetivos especficos: tareas a ejecutar

3.1 Conocer el proceso de extraccin de ADN.

3.2 Observar la estructura fibrilar del ADN.

3.3 Reconocer que tipos de procesos y sustancias que se est utilizando para la extraccin del
ADN.
4. Introduccin.
El presente trabajo es importante y de gran inters para conocer ms a fondo sobre el
estudio de la vida, todos sabemos que el ADN es donde se guarda todo el material gentico
que es trasmitido de una generacin a otra y que esto ha permitido salvar a muchas especies y
hacerlas ms fuertes. Una forma ms fcil de poder estudiar el ADN es extrayndolo y
separndolo ya sea de tejidos animales o vegetales para el estudio que se desee alcanzar.

La estructura del ADN es una pareja de largas cadenas de nucletidos. Una larga hebra de
cido nucleco est enrollada alrededor de otra hebra formando un par entrelazado. Dicha
hlice mide 3,4 nm de paso de rosca y 2,37 nm de dimetro, y est formada, en cada vuelta,
por 10,4 pares de nucletidos enfrentados entre s por sus bases nitrogenadas.
Slo tenemos un 30% ms de genes que un diminuto gusano, el cual tiene solo un
milmetro de longitud y posee 959 clulas, en tanto que nosotros alrededor de 100 billones. Y
mientras que los seres humanos poseemos aproximadamente 100.000 millones de neuronas, el
diminuto gusano cuenta unicamente con 302.
5. Marco terico
ADN

Es una molcula de gran tamao que guarda y transmite de generacin en generacin toda
la informacin necesaria para el desarrollo de todas las funciones biolgicas de un organismo.
El ADN est formado por la unin paralela de dos cadenas, cada cadena se encuentra
conformada por 4 diferentes nucletidos. Lo que hace que el ADN sea tan variado (por
ejemplo de peces, plantas, bichos, humanos etc.) es la posicin y la cantidad de estos cuatro
nucletidos a lo largo de las dos cadenas, a esta secuencia se le llama cdigo gnico o
gentico,o bien genoma. El ADN de todos los organismos vivos est formado por solo stos
cuatro nucletidos.
Su estructura fue dilucidada en 1953 por los cientficos Watson y Crick, descubrimiento
que aos ms tarde los hara ganadores del premio Nobel.
Si pudisemos tomar una cadena de ADN humano y la estirramos de forma lineal nos
daramos cuenta que el ADN humano tiene una longitud de extremo a extremo de 2 metros, el
ADN se enrolla sobre protenas y se compacta formando los cromosomas.
El ADN de manera global dirige la sntesis de todas las protenas, se podra decir en
trminos ms sencillos que el ADN es una acumulacin de genes (fragmentos de ADN) y cada
gen es la clave para la produccin de una protena.

6. Materiales, equipos y reactivos

Materiales
-

Mortero
Cultivo vegetal in vitro
Tubo eppendorf
Micropipeta

Equipos.
-

ultracentrfuga

espectrofotmetro

Reactivos
-cetaf (vafer).
-alcohol
isoamilico
-cloroformo
-alchochol
isamilico
-etanol al 75%
- Compuesto TE.

7. Metodologa.
Este tema es una
investigacin
analtica,
experimental.
2

7.1 Procedimiento.
7.1 Tomamos el tejido joven del cultivo vegetal In vitro y lo depositamos en el
mortero y lo impregnamos con cetaf que es un buffet esto para que las enzimas
se desnaturalicen y no acten cortando nuestro ADN, al momento de macerar en
el mortero para separar las clulas.
7.2 Luego la muestra la vertimos en un tubo eppendorf para posteriormente
colocar en el bao Mara a 72 C de 45 minutos a 1 hora.
7.3 Despus colocamos alcohol isoamilico 24.1relacion 24 de cloroformo y 1 de
alcohol isamilico 500 microlitros, agitamos vigorosamente hasta que nos d una
solucin lechosa, esa la vamos a dejar reposar 5 minutos.
7.4 Pasado ese tiempo colocamos la muestra en la ultracentrfuga a 13mil rpp
durante 10 minutos, eso va hacer que se separe toda la basura de los tejidos de
las clulas se van a ir al fondo y en la superficie va a quedar un lquido que va a
ser el sobrenadante en el cual va estar la molcula de ADN pero normalmente as
no la vamos a ver porque esta disuelta.
7.5 Con la micropipeta cogemos ese sobrenadante y los vamos a transferir a otro
tubo eppendorf, una vez que lo hayamos puesto en el tubo eppendorf tomamos
un volumen similar de isospropanol frio (500 microlitros) y los ponemos en ese
sobrenadante para que se deshidrate las molculas ADN es decir las molculas
de ADN que estaban rodeadas de molculas de agua sean retiradas y por este
efecto el ADN se vaya uniendo y despus de un tiempo ya se pueda observar el
ADN de un aspecto blanco.
7.6 Si no nos sale suficiente ADN, ponemos en la centrifuga por 5 minutos a 10
mil rpp eso va ha hacer que se recoja ese ADN y se pegue en el fondo del tubo y
se forme un pellet (bola de ADN), quitamos el sobrenadante y nos queda el pellet
que es nuestro ADN es cual lo vamos a re suspender en etanol al 75% para
limpiarlo. Una vez hecho esto lo tenemos ah un momento y lo pasamos a la
ultracentrfuga.
7.7 Hecho esto quitamos ese etanol y esperamos a que se seque y le colocamos
un compuesto llamado TE que es otro buffer que va a servir para proteger a
nuestro ADN.
7.8 Por ltimo podemos coger si hay suficiente ADN con la punta de la
micropipeta y cuantificarlo para determinar la concentracin y calidad del ADN
para esto hacemos uso del espectrofotmetro el cual nos mide la absorbencia
que es la cantidad de luz que pasa atreves de la solucin de ADN.

9. Resultados.

As fue como se vio el ADN que se pudo separar en

forma de hilos. Este fue el resultado final de esta
prctica, con la utilizacin de varios compuestos
que nos permitieron la extraccin del ADN.

10. Discusin.
En la realizacin esta prctica se pudo obtener ADN a
partir de una muestra de tejido vegetal in vitro utilizando
diferentes compuestos para su entera apreciacin al extraer
ADN se comprueba que este es el material gentico que se transite de generacin en
generacin siendo este obtenido en el laboratorio una especie de hilos blanquecinos.

11. Conclusiones.
11.1 Se realiz diferentes proceso para extraer el ADN vegetal, es por ello que podemos decir
que la ciencia avanzado grandes pasos como para que cualquier persona pueda realizar este
tipo de prcticas y con los materiales que tenemos a nuestro alcance.
11.2 Se identific el ADN de un vegetal despus de centrifugarse, de tal manera que se
observ como una bola de hileras blanquecinas.
11.3 Esta prctica fue un xito ya que se sigui paso a paso como se debe de extraer y separar
el ADN.
12. Recomendaciones.
12.1 Realizar con mayor tiempo la prctica, los estudiantes debern tener conocimientos
previos de la prctica que se va a realizar es decir conocer para que se utilizaran los diferentes
tipos de sustancias, reconocer todos los materiales y pedirlos con anticipacin al profesor.
12.2 Realizar la prctica de manera precisa utilizando las cantidades exactas de las sustancias.
12.3 Se sugiere que se lo realice en un laboratorio amplio para que todos los estudiantes
puedan apreciar los resultados de esta prctica.
13. Bibliografa.

De Paz, C. (2012) El ADN Recuperado de http://www.syngenta.com.mx/que-esadn.aspx

La Rosa, D. Vargas, M. (2014). extraccin
Recuperado de:
http://www.jpimentel.com/ciencias_experimentales/pagwebciencias/pagweb/la_cienci
a_a_tu_alcance_II/quimica/Experiencias_quimica_extraccion_de_adn.htm

14. Anexos