Manual Micro 2015

CECyTEG PUEBLO NUEVO
Realizar anlisis microbiolgico
Nombre: _____________________________________
Grupo: ____________ Fecha: ____________________
Realiza anlisis microbiolgico
NOMBRE
Competencia
a
Des
arrol
lar
Habilidades
Instrucciones
para
el
alu
mno
Instrucciones
para
el
Doc
ente
Recursos
Mat
erial
es
de
Apo
yo
Actitudes a
For
mar
El MICROSCOPIO
No.
Manejar las tcnicas bsicas de los anlisis microbiolgicos.
Identificar cada una de las partes del microscopio, su uso adecuado y

cuidados, en un anlisis microbiolgico directo.
Al transportar el microscopio, tener cuidado de que no se muevan las
piezas. Sujtalo del brazo y la base.
Cuando enfoques, mover los tornillos suave y despacio.
Al enfocar con 4X, automticamente est para 10X, 40X.
Supervisar en todo momento el uso adecuado del microscopio.
Contar con diferentes preparaciones, para su observacin. Contar con las

instalaciones del taller y/o laboratorio
Orden, Limpieza y
Responsabili
dad
Manera
did
Realizando adecuadamente la
ct
prctica, manteniendo su
ica
rea de trabajo limpia y
de
entregando su reporte en
log
tiempo y forma.
rar
las
Competencias
Gen
ric
Se conoce y valora a s mismo y aborda problemas y retos teniendo en
as a
cuenta los objetivos que persigue.
Des
arrol
lar
Manera
Did
ctic
a de Cuestionarios previos de la tcnica de enfoque.
logr
arla
s
INTRODUCCIN.
Uno de los instrumentos esenciales para el estudio de microorganismos, tejidos y clulas es el
microscopio, que es un aparato de ptica, del cual existen varios tipos: simple, compuesto, electrnico, etc.
El primer criterio de clasificacin, es el tipo de energa que utilizan para formar la imagen, este
criterio lo divide en dos grupos:
A) FOTONICOS: Son aquellos que utilizan la luz, ya sean natural o artificial por mucho tiempo tambin se
les ha denominado pticos.
B) ELECTRONICOS: Son los que forman la imagen con un flujo de electrones que como lentes, tienen
campos magnticos.
Los fotnicos segn el nmero y disposicin de sus lentes se clasifican en:
I) SIMPLES. Son los que trabajan como si fuesen una sola lente, sea que efectan la operacin de
amplificacin de la imagen en una ocasin.
II) COMPUESTOS. Son los que efectan la operacin de amplificacin de la imagen en dos o ms
ocasiones.
La funcin principal del microscopio es permitir al observador distinguir estructuras con claridad, a
esta funcin se le conoce como PODER DE RESOLUCION. La resolucin es ms importante que la
amplificacin, por que no siempre es necesario obtener la imagen ms grande posible, sino que es
indispensable observar con claridad los detalles finos.
El estudio del microscopio lo iniciaremos conociendo el nombre de las partes que lo forman.
Enseguida se enlistan estas estructuras, las que van precedidas de un numero, el cual colocaras en el
esquema del microscopio, anexo.
OPTICAS:
1.- OCULAR
2.- TUBO DEL OCULAR
3.- TUBO DEL MICROSCOPIO.
4.- OBJETIVO LUPA PANORAMICA
5.- OBJETIVO SECO DEBIL.
6.7.8.9.-
MECANICAS:
A) REVOLVER
B) PINZAS DE LA PLATINA
C) PLATINA
D) BRAZO
E) COLUMNA.
F) TORNILLO MACROMETRICO
G) TORNILLO MICROMETRICO
H) BASE
I) RIOSTRATO DE LA LUZ
OBJETIVO SECO FUERTE.

OBJETIVO DE INMERSION.
DIAFRAGMA.
LAMPARA.
Tradicionalmente se ha conocido a los objetivos con el nombre de; LUPA, SECO DEBIL, SECO
FUERTE Y OBJETIVO DE INMERSION.
Los objetivos secos, son cuando entre la preparacin y la lente frontal del objetivo no se coloca ningn
lquido de continuidad. El objetivo de inmersin es cuando se coloca un medio de continuidad que puede ser
aceite mineral.
3
El poder de amplificacin de los objetivos son: lupa panormica, objetivo 10 X, ( seco dbil), objetivo 40
X ( seco fuerte), objetivo 60 X ( seco fuerte ), objetivo 100 X ( de inmersin ).
OBJETIVO:
Al finalizar la prctica el alumno ser capaz de explicar la funcin de cada parte del microscopio y de
manejar correctamente el microscopio.
MATERIAL:
Un microscopio.
Un portaobjetos
Un cubreobjetos
Una lanceta
Muestra
MANEJO DEL MICROSCOPIO
El manejo del microscopio es bastante sencillo, aunque al principio cuesta trabajo, los pasos a seguir son:
1. Colocar el microscopio en un lugar seguro, adems el observador deber estar cmodo.
2. Revisar que este completo, de lo contrario comunicarlo al profesor.
3. Girar el revlver para colocar la lupa panormica (el objetivo ms pequeo), en posicin de observacin
cuidando que ninguno de los objetivos roce con la platina al girar el revlver.
4. Baje la platina a tope.
5. Iluminacin: prenda el aparato.
6. Una vez iluminado el microscopio, proceda a colocar la preparacin sobre la platina, la que quedara
sujeta por las pinzas de la misma. Tenga cuidado de que el material de estudio quede sobre el
condensador.
7. Observe por el ocular y de ser necesario corrija la cantidad de luz y sin dejar de observar inicie el enfoque,
el que se consigue bajando lentamente la platina, con el tornillo macromtrico hasta dejar la imagen lo
ms claramente posible.
8. Una vez enfocado el microscopio, proceda a definir la imagen con el tornillo micromtrico, a partir de este
momento el nico tornillo de enfoque que deber usar es el micromtrico.
9. Si el microscopio qued bien enfocado en la lupa panormica, automticamente lo esta el resto de los
objetivos; solo basta girar el revlver para cambiar de objetivo y para enfocar adecuadamente, basta girar
lentamente el tornillo micromtrico.
La lupa panormica nos permite observar un campo grande, pero con poco aumento, esto es til para
elegir el campo ms adecuado en forma rpida. El seco dbil da mayor aumento pero con un campo ms
pequeo, por ultimo el seco fuerte nos da aumentos an mayores, pero con campos ms pequeos.
EL OBJETIVO DE INMERSION, es til cuando se requieren grandes poderes de amplificacin y se
utiliza de la siguiente manera: Una vez que se tiene enfocado el microscopio con un seco fuerte, se gira
parcialmente el revlver quedando a la mitad, entre objetivo seco fuerte y objetivo de inmersin, coloque una
gota de aceite mineral, sobre la preparacin, complete el giro del revlver para que quede el objetivo de
inmersin en eje de observacin, con el tornillo micromtrico, suba la preparacin para que el objetivo toque
el aceite y logre su enfoque fino con el mismo tornillo.
LO ANTERIOR SE RESUME DICIENDO QUE A MAYOR PODER DE AMPLIFICACION MENOR
CAMPO DE OBSERVACION.
OBSERVACIONES.
Da nombre a cada parte del microscopio

1. _________________________
2. _________________________
3. _________________________
4. _________________________
5. _________________________
6. _________________________
7. _________________________
8. _________________________
9. _________________________
10. _________________________
11. _________________________
12. _________________________
13. _________________________
14. _________________________
15. _________________________
CUESTIONARIO.
1.- Cul es la diferencia entre el microscopio simple y compuesto?
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
2.- Cuantos tipos de microscopio se conocen actualmente?
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
3.- Investiga qu es el poder de resolucin.
_______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
4.- Cuales son los objetivos secos y en que consiste este nombre?
_______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
5.- Cul es el objetivo de inmersin?
_______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
6.- Cul es la funcin del microscopio?
_______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
CONCLUSIONES
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_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
NOMBRE
Competencia
a
Des
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Habilidades
ESTERILIZACION DE MATERIAL POR CALOR HUMEDO
No.
Operar la tcnica de esterilizacin de material por calor hmedo, como

tcnica bsica para un anlisis microbiolgico.
Efecta la tcnica de esterilizacin atendiendo las indicaciones de tu

Instrucciones
para
el
alu
mno
docente, el cual te indicar el orden de envoltura del material.

Realiza con responsabilidad cada uno de los pasos cuidando los
parmetros requeridos para que obtengas un producto de calidad.
Maneja con cuidado el material de vidrio y la autoclave.

Instrucciones
para
el
Doc
ente
Recursos
Mat
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es
de
Apo
yo
Actitudes a
For
mar
Competencias
Gen
ric
as a
Des
arrol
lar
Manera
Did
ctic
a de
logr
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s
Especificar el material que se puede utilizar para cada tipo de

esterilizacin.
Verificar el acomodo del material en la autoclave.
Usar cinta testigo, para verificar la eficacia de la tcnica de esterilizacin.

Si no se cuanta con autoclave, tener lista olla de presin.
Orden, Limpieza y
Responsabilidad
Manera
Seguir con precaucin cada paso,

para
una
buena
esterilizacin.
Desarrolla innovaciones y propone soluciones a problemas a partir de

mtodos establecidos.
Realizar varias veces la tcnica de envoltura, con diferentes materiales.
Nombre: ______________________________________
Grupo: ___________ Fecha:______________________
INTRODUCCIN
El proceso de esterilizacin es mediante el cual se destruyen todas las formas de vida bacteriana,
una sustancia o material es estril cuando est libre de microorganismos.
Los microorganismos se eliminan o inhiben mediante procedimientos fsicos y agentes qumicos.
Dentro de los qumicos tenemos los desinfectantes como, Alcohol, Fenol, Iones de metales pesados,
etc. Sin embargo un desinfectante, es un agente qumico capaz de matar las formas de vida, pero no
necesariamente las esporas de los microorganismos patgenos.
Los procedimientos fsicos consisten en la aplicacin de calor que es el ms simple para esterilizar,
solo con una condicin de que el material no se dae con el suministro de calor. Para ello existen dos
mtodos fsicos: Calor Seco y Calor Hmedo.
OBJETIVO:
El alumno aprender a manejar los diferentes tipos de esterilizacin de material de vidrio ms
comunes en el laboratorio de microbiologa.
MATERIAL
Cajas de petri
Pipetas
Matraces Erlenmeyer
Tubos
Papel de envoltura
Autoclave (olla de presin)
Cinta testigo
Nota: la cantidad de material depender, de lo disponible.
PROCEDIMIENTO:
1. Lavar todo el material de vidrio a esterilizar, enjuagar finalmente con agua destilada.
2. Las cajas de petri se envuelven individualmente en el papel de envoltura y se sellan con cinta.
3. Los tubos de ensaye y matraces, se etiquetan y se les coloca un tapn de algodn, cubrindolos
posteriormente con papel de envoltura o aluminio, esto para evitar que el algodn se humedezca.
4. Las pipetas se envolvern en el papel, se coloca un pequeo algodn en el extremo donde se pipetea y
se sellan con cinta.
5. Para meter el material a la olla es necesario colocar agua al nivel de la rejilla y ahora si acomodar el
material.
6. Cerrar la autoclave y abrir la vlvula para permitir la salida del aire.
7. Cuando sea suficiente el vapor eliminado cerrar la vlvula.
8. Observar el manmetro y cuando marque 15 libras de presin (la temperatura estar a 121C) empezar
a contar tiempo de esterilizacin (15 min.) mantener esta temperatura, bajando la flama.
8
9. Pasado el tiempo de esterilizacin apagar completamente la flama y esperar a que el manmetro

marque cero y solo hasta entonces abrir la tapa, sacar el material con guante aislante o con lienzo
seco.
NOTA: Los medios de cultivo frecuentemente se esterilizan por calentamiento en la autoclave a una
temperatura y tiempos adecuados para cada uno. Otros medios, por su contenido en agentes inhibitorios no
requieren esterilizacin e incluso su carcter inhibitorio y diferencial suelen verse afectados si se someten a
elevadas temperaturas.
OBSERVACIONES
Tener mucho cuidado al manejar el material ya que es de vidrio, sobretodo al estarlo envolviendo.
RESULTADOS:
Verifica con tu maestro que la esterilizacin este bien realizada, para esto puedes usar cinta testigo.
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CUESTIONARIO:
1. Qu es esterilizacin?
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2. Cules son las condiciones de esterilizacin para material?
_______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
3. Por qu es importante envolver bien el material?
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4. Qu finalidad tiene el tapn de algodn en las pipetas?
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______________________________________________________________________________________
5. Explica Por qu es necesario sacar el aire de la olla de presin?
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6. En qu consiste la esterilizacin por calor seco y para que se utiliza?
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CONCLUSIONES:
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Nombre: ____________________________________
Grupo: ________ Fecha: ______________________
10
NOMBRE
Competencia
a
Des
arrol
lar
Habilidades
TINCIONES DE LOS MICROORGANISMOS
No.
Aplicar diferentes tinciones microbiolgicas, de acuerdo a las necesidades

del estudio microbiolgico.
Efecta la tcnica de tincin atendiendo las indicaciones de tu docente,
Instrucciones
para
el
alu
mno
el cual te indicar cual es la ms conveniente.

Cuidado con los tiempos y orden de aplicacin de cada colorante.

Instrucciones
para
el
Doc
ente
Recursos
Mat
erial
es
de
Apo
yo
Actitudes a
For
mar
Estimar los tiempos de aplicacin de tinciones,

observaciones en tiempos adecuados.
para hacer
las
Se recomienda tener preparaciones testigo, para comparacin de los

alumnos.
Orden, Limpieza y
Responsabilidad
Manera
did
Tener presente que el orden
ctica
ser el xito de la
de
tcnica
logra
rlas
Competencias
Gen
ric
as a
Des
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Manera
Did
ctic
Realizando la prctica y los resultados compararlos con bibliogrficos o
a de
bien con preparaciones testigo.
logr
arla
s
11
INTRODUCCIN
Las caractersticas morfolgicas y estructurales de los microorganismos pueden ser determinadas
por el examen de especies apropiadamente preparadas, cuando se utiliza el campo brillante del microscopio
en el examen, es conveniente que las clulas sean teidas para hacerlas ms fcilmente visibles. Las
clulas sin teir son prcticamente transparentes y son mejor observadas por las tcnicas de tincin que
permiten un control crtico de la iluminacin.
Los colorantes se combinan qumicamente con los componentes del protoplasma bacteriano; por lo
que resulta muy severo el proceso, esto es, si la clula no haba muerto durante la fijacin, el proceso de
coloracin la mata. Los colorantes ms usados son sales.
OBJETIVO:
El alumno realizar algunas tinciones diferenciales para bacterias (Gram), la identificacin de
organelos en los microorganismos como los mohos (azul de metileno)
MATERIAL
2 Portaobjetos
1 asa de nicromo
2 Mechero Bunsen
Microscopio
Piseta
Pinzas punta roma
Cinta diurex
REACTIVOS
Gram (cristal violeta, lugol, safranina)
Azul de metileno
Alcohol-acetona 1:1
PROCEDIMIENTO:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
TINCION DE GRAM
Preparar el frotis y fijarlo al calor.
Cubrirlo con solucin de cristal violeta al 1% en agua por 1 min.
Lavar con agua (lavado de canto).
Cubrirlo nuevamente con lugol durante 1.5 min.
Lavar nuevamente con agua.
Decolorar con alcohol-acetona (1:1).
Lavar con agua.
Cubrir el frotis con safranina al 0.5% en agua por 20 a 30 seg.
Lavar con agua, dejar secar y observar al microscopio con el objetivo de inmersin.
TINCIN DE AZUL DE METILENO

1. Colocar una gota pequea de azul de metileno en un portaobjetos limpio.
12
2. Con una cinta diurex, tomar la muestra, esto es, en el dedo pulgar de la mano derecha, con la otra mano
tomar la caja para abrirla.
3. Colocar la muestra sobre el colorante.
4. Observar al microscopio con 4x, 10x, 40x.
OBSERVACIONES
Analizar los resultados, comparando una tincin con otra.
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_______________________________________________________________________________________
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_______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
RESULTADOS
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_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
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_______________________________________________________________________________________
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CUESTIONARIO
1. Para que sirve una tincin en microbiologa?
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______________________________________________________________________________________
2. Por qu es ms fcil la tincin de azul de metileno que la de Gram?
_______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
3. Describe 3 diferencias entre bacterias gram (+) y gram (-)
_______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
4. Explica cual de los dos grupos de bacterias gram son ms patgenas para el humano.
_______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
5. Qu efecto tendr el colorante sobre el microorganismo?
_______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
13
CONCLUSIONES
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______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
Nombre: ___________________________________
Grupo: _______ Fecha: ______________________
14
TCNICAS DE SIEMBRA
NOMBRE
Competencia
a
Des
arrol
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Habilidades
Instrucciones
para
el
alu
mno
Instrucciones
para
el
Doc
ente
Recursos
Mat
erial
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de
Apo
yo
Actitudes a
For
mar
No.
4, 5
Aplicar las tcnicas de siembra en los anlisis microbiolgicos, incluyendo

la preparacin y dilucin de la muestra.
Efectuar las tcnicas de siembra atendiendo las indicaciones de tu

docente.
Jerarquizar el orden de aplicacin de las tcnicas, especificando su uso y
prioridad, para verificar que el alumno desarrolle su competencia.
Revisar que las cajas sean colocadas de manera apropiada en la
incubadora y a la temperatura correcta.
Practicar la tcnica sobre gelatina casera.
Orden, Limpieza y
Responsabilidad
Manera
did
cti
ca
de
log
rarl
as
Seguir la secuencia para la

aplicacin de la tcnica.
Competencias
Gen
ric
as a
Des
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Manera
Did
ctic Lectura previa de la norma NOM-109-SSA-1-1994.
a de Variar el tipo de muestra, para aplicar en diferentes condiciones las
logr
tcnicas de siembra.
arla
s
15
TOMA DE MUESTRA
Actividad previa a la prctica de dilucin y mtodos de siembra de microorganismos.
La tcnica de recoleccin de muestra para su anlisis microbiolgico establece una serie de
precauciones y condiciones que deben ser observadas a fin de obtener resultados significativos en el
trabajo.
Puede tratarse de un alimento sospechoso de haber causado una infeccin o intoxicacin, puede
tratarse de un control de calidad rutinario, puede ser un alimento con un grado de frescura incierto, o puede
ser un problema de investigacin sobre la causa de intoxicacin.
El tamao de la muestra (peso, volumen a granel o en lotes) est determinado por la cantidad de
alimento disponible, para lo que se recomienda lo siguiente:
Utilizar recipientes, bolsas y material estril para su recoleccin, cubrirlos con papel estraza o
aluminio para su proteccin.
Al colectar la muestra evitar tierra aire, estornudos y saliva, solo abrir lo necesario del recipiente a la
hora de tomar la muestra e inmediatamente cerrar.
Es importante que el recipiente sea estril y libre de sustancias que pudieran afectar la viabilidad del
microorganismo. Rotular debidamente anotando cualquier observacin para ser tomada en cuenta en el
anlisis. Si son envases tomar por niveles y al azar ya sea en cajas, piezas, costales pequeos, etc. Si son a
granel o piezas grandes obtener de diversas posiciones y no mezclar en el mismo recipiente.
Transportar las muestras lo ms rpido posible sobre todo si son alimentos perecederos o
semiperecederos y mantenerlos en refrigeracin de dos a ocho grados o congelacin si son alimentos
congelados.
DILUCIN DE MUESTRA
INTRODUCCIN:
Al diluir una muestra se pretende facilitar el conteo de las ufc (unidad formadora de colonias por
gramo o ml de muestra). En este mtodo un factor que disminuye el grado de confianza es que solo se toma
una porcin pequea de la muestra (10%), ya que en las muestras no se presenta una distribucin
homognea de los microorganismos, corriendo el riesgo de que la porcin tomada de muestra no sea
realmente representativa, introduciendo as un grado de incertidumbre.
En general, pueden presentarse tres situaciones en que se requiere realizar diluciones:
1) Se puede necesitar levantar una cosecha de clulas de una especie particular que se tiene a mano.
2) Puede ser necesario determinar el nmero de tipos de organismos presentes en un material dado.
3) Se puede desear aislar un tipo particular de microorganismo de una fuente natural.
Puede resultar sumamente difcil hacer que microorganismos a los que microscpicamente se
observa creciendo en un ambiente natural, crezca en cultivo puro en un medio artificial
OBJETIVO:
Por medio de una serie de diluciones el alumno ser capaz de reducir la concentracin de una
muestra, que incluso puede llegar a conocer el nmero de microorganismos, para posteriormente aplicar
alguna de las tcnicas de siembra.
MATERIAL
Tubos de ensaye o cultivo
Gradilla
Pipetas de 1y 10 ml estriles
REACTIVOS
Agua o solucin Buffer
Muestra problema
16
Frascos de dilucin
Autoclave
Varilla L
Mecheros Bunsen
Incubadora
PROCEDIMIENTO:
DILUCIONES (PRACTICA 4 Y 5)
1. Esterilizar material necesario.
2. En un tubo de ensaye estril se coloca 1 ml de muestra a analizar y se diluye con 9 ml de buffer.
3. De esta manera de la primera dilucin (1:10) se toma 1 ml (con pipeta estril) y se diluye con 9 ml del
disolvente.
4. De la anterior dilucin (1:100) se toma 1 ml y se adicionan 9 ml de disolvente para obtener una dilucin
1:1000.
5. Se repite el procedimiento hasta obtener la dilucin deseada que puede ser hasta 1:10000 o 1:100000 o
ms.
6. De aqu se puede pasar a cajas de petri (Sembrar por gota, extensin o vaciado).
7. NO CONFUNDIR las pipetas y tener cuidado de tener el material rotulado previamente a la siembra
TCNICA POR VACIADO (PRACTICA 4)

1. Esterilizar material (cajas petri).
2. Preparar medio de cultivo.
3. Utilizar la serie de diluciones.
4. Inocular las cajas con 0.5ml de la dilucin deseada.
5. Agregar suficiente medio en estado lquido a temperatura de 30 a 35 C.
6. Mezclar suavemente en forma de ocho y dejar que se solidifique para incubar.
TECNICA POR EXTENSION EN SUPERFICIE (PRACTICA 5)

1. Esterilizar material (cajas petri)
2. Preparar medio de cultivo.
3. Vaciar el medio a las cajas de petri.
4. Dejar solidificar y secar incubando 3 hr a temperatura ambiente.
5. Utilizar diluciones preparadas (tcnica anterior).
6. Inocular de cada dilucin 0.1 ml sobre la superficie de la placa por duplicado.
7. Extender con la varilla el inoculo en la superficie de la placa pasando la varilla repetidas veces.
8. Dejar a temperatura ambiente 15 min y despus incubar a 35 C durante 48 hr.
NOTA: Utilizar una varilla para cada dilucin
En la tcnica de extensin en superficie, tener cuidado de que cuando se inicie a girar la varilla d por lo
menos una vuelta completa
OBSERVACIONES
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_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
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_______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
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17
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
RESULTADOS
Muestra: __________________________________________
Dilucin
Vaciado en placa
No. de UFC
Extensin en superficie
No. de UFC
Gota
No. de UFC
1: 10
1: 100
1: 1000
1: 10000
Nota: UFC es unidades formadoras de colonias
Compara las tcnicas aplicadas
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
CUESTIONARIO:
1.A que tipo de muestras se recomienda hacer varias diluciones?
_______________________________________________________________________________________
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2.Qu tcnica result ser ms precisa?
_______________________________________________________________________________________
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3.A que se debe que algunas muestras tienen altos conteos?
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_______________________________________________________________________________________
4.Por qu usamos un buffer como diluyente?
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_______________________________________________________________________________________
_
CONCLUSIONES:
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
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_______________________________________________________________________________________
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19
NOMBRE
Competencia
a
Des
arrol
lar
Habilidades
No.
AISLAMIENTO DE BACTERIAS
Realizar resiembras adecuadas para los anlisis microbiolgicos.
Efecta la tcnica de aislamiento de bacterias atendiendo las

Instrucciones
para
el
alu
mno
indicaciones de tu docente.
Tener cuidado de tomar el asa de manera correcta
Instrucciones
para
el
Doc
ente
Recursos
Mat
erial
es
de
Apo
yo
Actitudes a
For
mar
Hacer hincapi sobre la importancia del aislamiento en la propia caja,

para no perder el objetivo de dicha tcnica.
incubadora.
Practicar previamente el uso del asa, para no romper el medio de cultivo,

preparar cajas por duplicado
Orden, Limpieza y
Respons
abilidad
Manera
didc
tica
de
logra
rlas
Seguir
la
secuencia
para
un
aislamiento adecuado de bacterias
Competencias
Gen
ric
as a
Des
arrol
lar
Manera
Did
ctic
Identificar las destrezas de cada alumno, para el manejo del material y
a de
guiarlos en la aplicacin de la tcnica.
logr
arla
s
20
Nombre: _____________________________________
Grupo: _______________ Fecha: ________________
INTRODUCCIN
Para estudiar las propiedades de un microorganismo dado, es necesario manejarlo en cultivo puro,
libre de otro tipo de microorganismos. El mtodo de estra cruzada par aislamiento de colonias de
microorganismos, esta basado en la dilucin sucesiva de la muestra original de modo que en la segunda o
tercera estra, queden clulas separadas unas de otras, con lo cual se logra que dichas clulas al
reproducirse formen colonias separadas unas de otras y originadas a partir de un solo microorganismo.
Puede no haber crecimiento debido a un mal manejo de la tcnica o porque no hay
microorganismos, en caso de no haber crecimiento puede ser por mala manipulacin al hacer las estras, por
lo que no hay dilucin. Contaminacin por no trabajar en condiciones de esterilidad. Alta densidad celular en
la muestra original, por lo que requieren diluciones previas.
OBJETIVO
Aplicar la tcnica de estra para el aislamiento de bacterias.
MATERIAL
Cajas petri
Asa
Mecheros
Incubadora
Autoclave
Matraz erlenmeyer
Probeta
REACTIVOS
Agar nutritivo
Muestra problema o siembra anterior
Agua destilada
PROCEDIMIENTO
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Esterilizar material necesario.

Preparar medio de cultivo, dejar solidificar.
Descargar el inoculo primario en un extremo de la caja ya sea con el asa o con hisopo.
Esterilizar el asa y hacer de 4 a 5 estras, esterilizar nuevamente el asa.
Voltear la caja en un ngulo de 90 y a partir de las anteriores estriaciones, hacer otras tantas.
Repetir el proceso hasta obtener 4 grupos de estriaciones en la caja.
OBSERVACIONES
21
Anota las caractersticas generales del resultado de la estriacin.

_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
RESULTADOS
Realiza un dibujo de las colonias obtenidas y determina lo siguiente:
Morfologa colonias Macro
Tamao
Hacer dibujos de las caractersticas

Dimetro
Confluencia
Separacin
Elevacin
Elevadas o Planas
Apariencia por la luz transmitida
Centros oscuro
Apariencia por la luz reflejada
Brillo u opaca
CUESTIONARIO
1.Qu ventajas tiene la tcnica de asilamiento?
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
2.Qu desventaja tiene?
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
3.En que casos se pudiera emplear esta tcnica?
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
4.Por qu es importante determinar la morfologa macroscpica de las colonias?
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
22
5.De que manera influye el trabajo del analista y la zona de esterilidad para obtener un resultado confiable?
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
CONCLUSIONES
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
Nombre: _____________________________________
Grupo: ____________ Fecha: ___________________
Nombre: ____________________________________
Grupo: _____________ Fecha: _________________
23
NOMBRE
Competencia
a
Des
arrol
lar
Habilidades
RECUENTO BACTERIANO DE MESOFILICOS

AEROBIOS POR VACIADO EN PLACA
No.
Determinar de manera aproximada los microorganismos viables de

contaminar un alimento, ya sea fruta u hortaliza, o en ambos.
Efecta la tcnica de Mesoflicos atendiendo las indicaciones de tu

Instrucciones
para
el
alu
mno
docente, el cual te indicar el orden de envoltura del material.

Asegurarte de realizar una distribucin correcta de la muestra
Instrucciones
para
el
Doc
ente
Recursos
Mat
erial
es
de
Apo
yo
Actitudes a
For
mar
Verificar que el alumno comprenda la tcnica, antes de realizar la
prctica.
Sondear entre los alumnos la forma de preparar los medios de cultivo.
incubadora.
Se recomienda hacer las siembras por duplicado.
Orden, Limpieza y
responsab
ilidad
Manera
didc
tica
de
logra
rlas
Seguir la secuencia para el

recuento adecuado de Mesoflicos
Competencias
Gen
ric
as a
Des
arrol
lar
Manera
Did
ctic
a de
logr
arla
s
24
INTRODUCCIN
La precisin del mtodo radica principalmente en: Homogeneizacin de la muestra, volumen, manejo
de muestra, nmero de diluciones, temperatura de incubacin. Esta tcnica determina el nmero de
bacterias que se encuentran en la muestra.
Dentro de los mtodos empleados para determinar microorganismos, ninguno de estos mtodos
permite la determinacin de nmeros exactos de microorganismos y aunque algunos mtodos de anlisis
son mejores que otros cada uno tienen sus limitaciones.
Algunos de stos mtodos son directos, en ellos se encuentra directamente cada microorganismo,
este mtodo no permite distinguir clulas viables de las clulas muertas en cambio en los mtodos indirectos
el analista observa algn producto de microorganismo que guarda relacin en su intensidad o abundancia
con los microorganismos originalmente presentes en la muestra, en este tipo de pruebas nicamente
participan los microorganismos viables y de ellos un grupo seleccionado de acuerdo a las condiciones
ambientales, la composicin del medio de cultivo.
OBJETIVO
Determinar el nmero total de bacterias viables que se encuentran presentes en la muestra.
MATERIAL
Cajas petri (estriles)
Pipetas estriles de 10 ml y 1 ml
Matraces de 250 ml
Tubos con tapn de rosca
Incubadora
Olla de presin
Esptula
Vaso de precipitado 250 ml
Gradilla
Plancha de calentamiento
Campana de flujo laminar
Mecheros Bunsen
Probeta
REACTIVOS
Agar para cuenta estndar
Buffer de fosfatos
Agua destilada
PROCEDIMIENTO:
Preparar el medio de agar cuenta estndar: 23.5 gr de medio en un litro de agua, esterilizar a 15 lb
durante 15 min.
1.Homogeneizar la muestra.
2.Transferir 10 ml de la muestra al matraz con 90 ml de Buffer, homogeneizar.
3. Continuar las diluciones usando alcuotas de 1 ml con 9 ml de buffer. Al concluir cada dilucin inocular 1ml
en cada caja petri, antes de preparar la siguiente dilucin. No inocular la muestra sin diluir.
4.Completar en ambos casos hasta la cuarta dilucin.
5.Agregar a cada caja de 12 a 15 ml de medio Agar- cuenta estndar fundido y manteniendo caliente el
medio de 35 a 37C.
6.Incorporar el inoculo al medio por rotacin de caja sobre un superficie lisa y dejar solidificar.
7.Incuba a 37C durante 48 hr.
8.Contar las colonias en todas las cajas, en aquellas que contengan menos de 300 una mitad representativa
de la caja si contiene aproximadamente 301 a 500 colonias multiplicar por 2 el resultado; una cuarta parte
representativa de la caja si el numero en toda la placa es aproximadamente de 501 a 800 y multiplicar por
25
cuatro si el nmero de colonias es mayor de 800 contar con 5 cuadros mayores de la cuadricula del
contador y multiplicar por 13.
9. Repetir el recuento una vez concluida la primera lectura.
10. Reportar microorganismos viables por gramo o mililitro de la muestra analizada 30, 300 colonias /ml.
OBSERVACIONES:
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
RESULTADOS:
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
CUESTIONARIO
1. Por qu se establece un conteo de 30 300 colonias por placa?
_______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
2. Qu medio se pueden usar para est propsito?
_______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
3. Qu caractersticas tiene en cuanto a composicin este medio?
_______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
4. Elaborar un medio para la determinacin de mesoflicos aerobios Cul sera y d su composicin?
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
CONCLUSIONES
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
26
Nombre: _____________________________________
Grupo: ___________ Fecha: ____________________
27
NOMBRE
Competencia
a
Des
arrol
lar
Habilidades
RECUENTO DE HONGOS Y LEVADURAS
No.
Distinguir las caractersticas que diferencian a los hongos y levaduras,

presentes en alimentos frescos y procesados a bases de frutas y
hortalizas.
Efecta la tcnica de recuento de hongos y levaduras atendiendo las

indicaciones de tu docente, el cual te indicar el orden de envoltura del
Instrucciones
para
el
alu
mno
material.
Considerar cualquier detalle como base para la identificacin de los
hongos y levaduras.
Instrucciones
para
el
Doc
ente
Recursos
Mat
erial
es
de
Apo
yo
Actitudes a
For
mar
Verificar que el alumno comprenda las estructuras a diferenciar en los
hongos y levaduras, antes de realizar la prctica.

Sondear entre los alumnos la forma de preparar los frotis de las
muestras.
incubadora.
Apoyarse en esquemas bibliogrficos de los hongos y levaduras.
Orden, Limpieza
y
respon
sabilida
d
Manera
did
ct
ica En la medida de que se trabaje en orden,
de se tendr xito en los resultados.
log
rar
las
Competencias
Gen
ric
as a
Des
arrol
lar
28
Manera
Did
ctic
a de
logr
arla
s

INTRODUCCIN
La importancia de los hongos en los alimentos puede considerarse desde diferentes puntos de vista.
A.
Por su utilidad
B.
Por su alteracin en los alimentos
C.
Produccin de toxinas y su efecto en los animales y en el ser humano.
D.
En algunos alimentos su nmero se asocia generalmente a deficiencias en las prcticas
higinicas de fabricacin y almacenamiento.
Algunas diferencias que presentan los hongos con respecto a las bacterias son: La velocidad de
crecimiento en ms lenta, la demanda de un ambiente aerbico, la tendencia de algunas especies de
desarrollar extensivamente sobre placas de cultivo.
La presencia de hongos en los alimentos se asocia a diferentes prcticas higinicas de fabricacin y
almacenamiento.
Los recuentos pueden referirse a fragmentos de micelio de hongos que han desarrollado en el alimento
de esta manera se conoce la cantidad de la materia prima utilizada en la fabricacin.
OBJETIVO
Analizar un alimento, cuales quiera, para determinar la presencia de hongos y levaduras.
MATERIAL
Cajas petri
Gradilla
Pipetas de 1 ml y 10 ml
Mecheros Bunsen
Vaso de precipitado 250 ml
Matraces 250 ml
Incubadora
Olla de presin
Esptula
Tubos con tapn de rosca
Mortero con pistilo
Plancha de calentamiento
Campana de flujo laminar
REACTIVOS
Medio de cultivo: Agar de papa dextrosa
Buffer de fosfatos
Agua destilada
PROCEDIMIENTO
1.Sembrar frutas a excepcin de naranja o alguna hortaliza, paleta, nieve de frutas.
2.Realizar diluciones 1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000
NOTA: Homogeneizar adecuadamente las diluciones para permitir un fcil conteo e identificacin.
3.Realice la tcnica de vaciado en placa para cada dilucin.
4.Prepara medio de cultivo y esterilzalo.
5.Vaciar a las cajas petri
6.Dejar enfriar hasta que el medio este semislido.
7.Incubar a 28C durante 24 48 hrs
8.Contar las colonias de hongos y levaduras presentes en las muestras.
29
OBSERVACIONES
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
RESULTADOS
Anote en forma de cuadro las caractersticas morfolgicas de las diferentes colonias de hongos y
levaduras observadas.
Alimento
Hongos
Conteo
Caractersticas
Levaduras
Conteo
Caractersticas
CUESTIONARIO
1.De la composicin del medio empleado.
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
2.Mencione otro medio de cultivo empleado en el aislamiento de hongos as como su composicin.
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
3.Mencione 5 ejemplos de productos obtenidos por la accin de los hongos.
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
4.Mencione 3 objetivos de la prctica diferentes a los que se presentan en la misma y concluya si se
cumplieron o no. Explique su respuesta
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
30
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
CONCLUSIONES
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
31

Manual Micro 2015

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ESTERILIZACION DE MATERIAL POR CALOR HUMEDO

Manejar las tcnicas bsicas de los anlisis microbiolgicos.

Operar la tcnica de esterilizacin de material por calor hmedo, como

Efecta la tcnica de esterilizacin atendiendo las indicaciones de tu

docente, el cual te indicar el orden de envoltura del material.

Maneja con cuidado el material de vidrio y la autoclave.

Especificar el material que se puede utilizar para cada tipo de

Usar cinta testigo, para verificar la eficacia de la tcnica de esterilizacin.

Seguir con precaucin cada paso,

Desarrolla innovaciones y propone soluciones a problemas a partir de

Realizar varias veces la tcnica de envoltura, con diferentes materiales.

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Nota: la cantidad de material depender, de lo disponible.

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9. Pasado el tiempo de esterilizacin apagar completamente la flama y esperar a que el manmetro

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TINCIONES DE LOS MICROORGANISMOS

Manejar las tcnicas bsicas de los anlisis microbiolgicos.

Aplicar diferentes tinciones microbiolgicas, de acuerdo a las necesidades

el cual te indicar cual es la ms conveniente.

Cuidado con los tiempos y orden de aplicacin de cada colorante.

Estimar los tiempos de aplicacin de tinciones,

Se recomienda tener preparaciones testigo, para comparacin de los

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TINCIN DE AZUL DE METILENO

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Aplicar las tcnicas de siembra en los anlisis microbiolgicos, incluyendo

Efectuar las tcnicas de siembra atendiendo las indicaciones de tu

Practicar la tcnica sobre gelatina casera.

Seguir la secuencia para la

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