Fundamentos Fisicoqumicos de las Tcnicas Instrumentales.

Curso 2010-11

TEMA 4. ESPECTROSCOPA MOLECULAR (II): espectroscopa UV-Visible

1.- Dos sustancias de importancia biolgica, el NAD+ y el NADH, tienen coeficientes de
absorcin molar iguales de 1.8 104 dm3 mol-1 cm-1, a 260 nm (la longitud de onda a la
cual los coeficientes de absorcin son iguales se conoce como punto isosbstico). A
340 nm, el NAD+ no absorbe, pero el NADH tiene un coeficiente de absorcin molar de
6.22 103 dm3 mol-1 cm-1. Una disolucin que contiene ambas sustancias presenta una
absorbancia de 0.215 a 340 nm y de 0.850 a 260 nm. Calcule la concentracin de cada
sustancia.
R.: NADH 3.46 10-5 mol/L; NAD+ 1.26 10-5 mol/L.

2.- Se obtuvieron los siguientes datos de transmitancia para disoluciones acuosas de

oxihemoglobina (66500 g/mol) a pH=7 en una cubeta de 1 cm de paso de luz:
C/(g/100 mL)

0.030

0.050

0,071

0.102

%T

53.5

35.1

22.5

12.3

Comprobar si se cumple la ley de Beer y, en su caso, determinar el coeficiente de

absorcin molar de la oxihemoglobina y la transmitancia de una disolucin de
concentracin 0,15 g/L.
R.: 59019 M-1 cm-1; 73.6 %.

3.- Se ioniza un cido HA en disolucin acuosa dando iones H+ y A-. A una longitud de
onda de 430 nm HA no absorbe luz, pero A- presenta un coeficiente de absorcin molar
de 458 dm3 cm-1 mol-1. Se observa que una disolucin del cido a concentracin 0.1 M
tiene una transmitancia de 1.47% a 430 nm con una trayectoria lumnica de 1 cm y
temperatura de 25 C. Calcule la constante de disociacin del cido HA a 25 C y G
para el proceso de disociacin.
R.: 1.668 10-4; 21.6 kJ mol-1

4.- Dos especies no coloreadas A y B reaccionan para formar un complejo coloreado AB

que absorbe a 550 nm con un coeficiente de absorcin molar de 450 L mol-1cm-1. La
constante de disociacin para este complejo es 4 10 -3 Cul sera el valor de la
absorbancia de una disolucin que se prepara mezclando volmenes iguales de
disoluciones 0.01 M de A y B?
R.: 0.945

Tema 4. Espectroscopa Molecular (II)

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5.- Determnese la Kd de un cido dbil HB a partir de los datos siguientes obtenidos al

disolver 0.3251 g de dicho cido en 250 mL de agua y diluyendo muestra de 1 mL hasta
100 mL con disolucin tampn.
pH

10

11

0.0

0.0

0.11

0.61

1.14

1.24

1.25

1.25

Determnese tambin su coeficiente de absortividad molar sabiendo que las medidas

se hicieron en celdas de 1 cm. La masa molecular es 160 g/mol.
R.: a) 9.52 10-8 M; b) 15380 L mol-1cm-1

6.- Una disolucin es analizada para determinar su contenido en Ga3+, para lo que se
aade un reactivo orgnico que forma un complejo fuertemente coloreado con el Ga 3+,
a 50 mL de la disolucin. La absorbancia medida fue de 0.656. Posteriormente se
aadieron sucesivamente 5 alcuotas de 10 mL de una disolucin estndar 10-4 M en
Ga3+ y se midieron sus absorbancias, siendo stas las indicadas en la tabla. Determinar
la concentracin de Ga3+ en la disolucin problema.
V aadido /mL

10

20

30

40

50

Absorbancias

0.591 0.544 0.509 0.481 0.459

R.: 2.5 10-4

7.- Se pipetean varias alcuotas de 10 mL de una muestra de un agua mineral en

matraces aforados en 50 mL. A cada uno se adicionan exactamente 0.00, 5.00, 10.0,
15.0 y 20.0 mL de una disolucin patrn que contiene 11.1 ppm de Fe 3+ seguido de un
exceso de ion tiocianato para dar el complejo rojo Fe(SCN)2+ y se enrasan hasta 50 mL.
Las seales del fotmetro para las cinco disoluciones fueron: 0.240, 0.437, 0.621, 0.809
y 1.009, respectivamente. Qu concentracin de Fe3+ hay en la muestra de agua?.
R.: 7.01 ppm

8.- Para valorar unos inyectables de aspirina, se tomaron 2 mL de uno de ellos y se

diluyeron a 100 mL con etanol. La absorbancia a la mxima de absorcin fue 0.350.
La disolucin patrn se prepar triturando 2.618 mg de una tableta de aspirina al 20 %
y disolvindolos en 100 mL con etanol. La absorbancia de esta disolucin result ser de
0.543. Calcular la concentracin de cido acetil saliclico en el inyectable, suponiendo
que en estas condiciones se cumple la ley de Beer y que b = 1 cm.
R.: 0.16 g/L.
Tema 4. Espectroscopa Molecular (II)

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9.- Una serie de disoluciones de cafena C8H10O2N4.H2O ( M : 212.1 g/mol) en medio

cido, dan las siguientes medidas de absorbancia a 272 nm en cubeta de 1 cm de paso
ptico:
C ( mg/ 100mL) 0.200 0.500 0.600 0.900 1.00
A 272nm

1.20 1.50

2.00

0.100 0.250 0.310 0.465 0.510 0.625 0.760 1.05

Una muestra de 2.50 g de un caf soluble comercial de determinada marca, se disolvi

en 500 mL de agua. Una parte alcuota de 25 mL se transfiri a un matraz que contena
25 mL de cido sulfrico 0.1 M, se someti a un proceso de clarificacin y
posteriormente se enras hasta un volumen de 500 mL. Una parte de esta disolucin
mostr una absorbancia de 0.415 a 272 nm. a) Determinar la absortividad molar de la
cafena en estas condiciones. b) Determinar la cantidad de cafena presente en el caf
soluble, expresada en gramos de cafena por cada kg de producto. .c) Si para una taza
de caf se utilizan 2 gramos de caf soluble, determinar la cantidad de cafena que
contiene, expresada en mg.
R.: a)1.10 104 L mol-1 cm-1 b) 32 g c) 64 mg
10.- Para determinar la concentracin de un derivado de eritromicina en un inyectable
se procedi de la siguiente manera; a cinco porciones de la muestra de 25 mL cada una
de ellas, se les aadi distintas cantidades del compuesto puro en estado slido,
midindose a continuacin las absorbancias de cada disolucin. Las lecturas, realizadas
a 233 nm fueron:
Absorbancia 0.224 0.314 0.405 0.476 0.614
mg aadidos 0
1.1
2.0
2.9
4.2
Calcular la concentracin del compuesto en el inyectable.
R.: 0.09 g/L
11.- El fsforo en orina puede ser determinado por tratamiento con molibdeno y
reduciendo a continuacin el complejo fosfomolbdico con cido aminonaftolsulfnico
para dar el azul de molibdeno. Este absorbe a 660 nm. Un paciente excret 1270 mL de
orina en 24 horas. Una alcuota de 1 mL de orina fue tratada con reactivo de molibdato
y cido aminonaftolsulfnico y diluida a un volumen de 50 mL. Una serie de estndares
de fsforo fueron tratados de la misma forma, y las absorbancias de las disoluciones a
660 nm, fueron las siguientes:
Conc.de fsforo (ppm)
Absorbancia

1
2
3
4
Muestra de orina
0.205 0.425 0.610 0.830 0.625

Calcular el nmero de gramos de fsforo excretados por da y su concentracin en la

muestra en mmoles/L. Peso atmico del fsforo 31 g/mol.
R.: 0.194 g; 4.92 mmoles/L.

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12.- Un preparado farmacutico contiene dos principios activos ( A y B ) y un excipiente

inerte. Los dos principios activos absorben en radiacin visible, mientras que el
excipiente slo absorbe radiacin UV. Se disuelven 0.7 g del preparado en 250 mL de
disolucin etanlica cida. De esta disolucin se toman 3 mL y se diluyen hasta 500 mL
con el mismo disolvente. A una alcuota de 1 mL de esta ltima disolucin se le miden
las absorbancias a 450 nm (A=0.233) y 580 nm (A=0.166).
Sabiendo que una disolucin de 1 mg de A en 250 mL de la disolucin etanlica
cida absorbe 0.860 a 450 nm y 0.068 a 580 nm, y que una disolucin de 1 mg de B en
250 mL del mismo disolvente absorbe 0.028 a 450 nm y 0.156 a 580 nm, calcule el
nmero de gramos de A y de B por cada 10 g del preparado original. Se han utilizado
cubetas con 1 cm de paso luminoso.
R.: 0.57 de A; 2.3 g de B
13.- Con objeto de determinar las concentraciones de Co(II) y Cr(III) en una mezcla, se
realizaron medidas de absorbancias de disoluciones estndares de ambos compuestos
a 510 nm y 408 nm, obtenindose los siguientes resultados:
Cr(III)/mol l-1 0.01 0.04 0.06 0.08 0.1
A510
0.049 0.180 0.300 0.420 0.510
408
A
0.151 0.603 0.910 1.196 1.500
Co(II)/mol-1
A510
A408

0.02 0.04 0.07 0.09 0.11

0.099 0.199 0.352 0.455 0.553
0.010 0.021 0.036 0.046 0.057

Calclese la concentracin de Cr(III) y Co(II) en la mezcla, sabiendo que una alcuota de

3 mL de la muestra, diluida a 10 mL con agua dio lugar a las siguientes absorbancias:
0.535 (a 510 nm) y 1.07 (a 408 nm).
R.: 0.23 M, 0.12 M
14.- Para analizar una muestra dbilmente cida, se realiz la siguiente curva de
calibracin con disoluciones patrones de dicha sustancia a pH = 8 y una longitud de
onda de 400 nm
Cx103 (g/l)
A

1
2
3
4
5
6
0.050 0.095 0.150 0.205 0.250 0.301

0.664 g de la muestra se diluyeron hasta 1 litro con agua y se tomaron de esta

disolucin porciones de 1 mL diluyndolas hasta 100 mL con disoluciones tampn de
distintos pH; dichas disoluciones dieron a 400 nm los siguientes valores de
absorbancias:
pH
A

1
0.016

2
3
4
5
6
78
0.016 0.028 0.099 0.224 0.261 0.266 0.266

Suponiendo que la forma cida no absorbe, y la cubeta usada es de 1 cm, calcular:

(a) Absortividad especfica de la sustancia. R: 50.7 l g-1cm-1

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(b) Porcentaje de pureza de la muestra.

R: 74.2%.
(c) La constante de acidez de la sustancia. R: 5x10-5
15.- La forma reducida del dinucletido de adenina y nicotinamida (NADH) es una
importante coenzima y altamente fluorescente. Tiene un mximo de absorcin a 340
nm y un mximo de emisin a 465 nm. Unas disoluciones patrn de NADH dieron las
siguientes intensidades de fluorescencia:
[NADH]/ mol L-1
0.10 0.20 0.30 0.40 0.50 0.60 0.70 0.80
Intensidad

2.24

4.74

6.59

8.98

10.93 14.01 15.49 18.02

Una disolucin problema presenta una fluorescencia de 12.16. Calcular la

concentracin de NADH.
R.: 0.541 mol / L

16.- Los siguientes volmenes de una disolucin que contena 1.10 ppm de Zn2+ se
pipetearon en embudos de decantacin que contenan, cada uno, 5.0 mL de una
disolucin de Zn2+ desconocida: 0.0; 5.0; 10.0 y 15.0 mL. Cada uno de ellos fueron
extrados con tres alcuotas de 5 mL de CCl 4 que contena un exceso de
8-hidroxiquinolina. Los extractos se diluyeron a 25.0 mL y se midi su fluorescencia con
un fluormetro. Los resultados fueron:
Volumen de Zn2+/mL

0.0

5.0

10.0

15.0

Lectura del fluormetro

6.08

11.24

15.47

20.84

Calcular la concentracin de Zn2+ en la muestra.

R.: 1.39 ppm

17.- Se propone un mtodo para determinar la concentracin de quinina en una

bebida comercial por fluorimetra. La longitud de onda de excitacin es de 350 nm y la
longitud de onda de medida de 450 nm. A partir de una disolucin A de quinina de 0.1
mg/L se hacen una serie de cinco disoluciones patrn para establecer una curva de
calibrado:
Disolucin

Volumen de A/mL

H2SO4 (0.05 M)

Fluorescencia

Patrn 1

20

182.0

Patrn 2

16

138.8

Patrn 3

12

109.2

Tema 4. Espectroscopa Molecular (II)

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Patrn 4

12

75.8

Patrn 5

16

39.5

Blanco analtico

20

0.0

A continuacin se toma 0.1 mL de la bebida a determinar y se diluye a 100 mL con

H2SO4 0.05 M. La seal obtenida para esta disolucin es 113. Calcular la concentracin
de quinina, expresada en ppm
.
R.: 62.5 ppm.

18.- El oxgeno molecular es un eficaz amortiguador de fluorescencia. La intensidad de

fluorescencia de una disolucin acuosa de un fluorforo es de 825 antes de
desoxigenar y 1026 una vez desoxigenada. Calcular la constante de amortiguacin
sabiendo que la solubilidad del oxgeno en agua es 1.275 10-3 M. El tiempo de vida del
fluorforo es de 4.3 ns.
El oxgeno es cinco veces ms soluble en etanol que en agua. En que
porcentaje se reducira la fluorescencia de este fluorforo en etanol? Suponga que los
valores de la constante de amortiguacin y el tiempo de vida del fluorforo en etanol
son los mismos que en agua.
R.: 4.4 1010 M-1 s-1; 55%

19.-En la siguiente tabla se recogen los datos de la intensidad de fluorescencia de un

fluorforo F en presencia de un amortiguador Q a 20 y 40 C.
103 Q/M

10

I (20C)

1826

1815

1803

1782

1738

1719

I (40C)

1796

1788

1780

1762

1732

1716

Calcule las constantes de amortiguacin a dichas temperaturas.

R.: 6.26 M-1 y 4.66 M-1.

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PROBLEMAS AVANZADOS
A.1.- El quelato CuA22- presenta un mximo de absorcin a 480 nm. Cuando el reactivo
quelante est presente en un exceso de al menos 10 veces el ion metlico, la
absorbancia depende solo de la concentracin analtica del Cu(II) y se cumple la ley de
Beer en un amplio intervalo de concentraciones. Una disolucin en la que la
concentracin analtica de Cu2+ es de 2.30 10-4 M y la de A2- es 8.60 10-3 M tiene una
absorbancia de 0.690 cuando se mide en una cubeta de 1 cm a 480 nm. Una disolucin
en la que las concentraciones analticas de Cu2+ y A2- son 2.30 10-4 M y 5.00 10-4 M,
respectivamente, tiene una absorbancia de 0.540 cuando se mide en las mismas
condiciones. Utilizando esta informacin, calcular la constante de formacin del
proceso: Cu2+ + 2A2- CuA22R.: 1.8 108

A.2.- Dada la siguiente tabla, calcular los datos que faltan sabiendo que 300 nm es un
punto isosbstico y el compuesto A no absorbe a 400 nm.
Disoluciones

[A]

--

2.5 10-4 M

--

[B]

2 10-4 M

7.4 10-5 M

--

A300

0.937

0.481

0.820

A400

0.814

--

0.550

A.3.- De una disolucin 8 10-5 M de una base dbil, se tomaron tres porciones de 25
mL, a las cuales se le agregaron 10 mL de NaOH 1 M, 10 mL de HCl 1 M y 20 mL de una
disolucin tampn de pH = 8, respectivamente. Una vez enrasadas a 50 mL, se midi la
absorbancia a 680 nm, con los siguientes resultados:
Disolucin

Absorbancia

cido fuerte

0.028

Base fuerte

0.596

pH = 8

0.396

Calcular: a) La constante de ionizacin de la base; b) El pH de una disolucin de la base

cuya absorbancia a 680 nm es de 0.420 en las mismas condiciones.
R.: a) 5.44 10-7; b) 8.08
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A.4.- El antineoplsico mercaptopurina (M= 152.19 g/mol) presenta carcter cidobase en disolucin acuosa. La absorbancia de una disolucin de concentracin 5 g/mL
a 323 nm, en cubeta de paso ptico de 1 cm, es de 0.550 en medio HCl 0.1 M, de 0.020
en medio 0.1 M de Na OH y de 0.196 en disolucin tampn de pH = 8. Determinar: a)
los coeficientes de extincin molar de ambas especies b) el pKa del frmaco c) la
absorbancia de la disolucin a pH = 6.5.
R.: a) 16768 M-1cm-1 610 M-1cm-1; b) 7.70; c) 0.540

A.5.- En una sntesis orgnica de un determinado principio activo se detect la

presencia de un cido dbil monoprtico de M = 200 g/mol. Para el estudio
espectrofotomtrico en cubetas de 1 cm de longitud, se disolvieron 10 mg de cido en
100 mL de HCl (pH=1). Sus absorbancias a 515 y 590 nm resultaron ser 0.50 y 0.10
respectivamente. A continuacin se disolvieron 20 mg del mismo cido en 50 mL de
una disolucin de NaOH (pH = 13), y sus absorbancias a las mismas longitudes de onda
fueron 0.30 y 1.60 respectivamente. Por otro lado se tomaron 16 mg del cido y se
disolvieron en 100 mL de una disolucin tampn de pH = 5.53, mostrando esta
disolucin absorbancias de 0.60 y 0.30 a 515 y 590 nm respectivamente. Calcular: a)
Las concentraciones de las formas cidas y su base conjugada en la ltima disolucin.
b) La constante de disociacin del cido.
R.: a) 0.565 mM; b) 1.22 10-6

A.6.- 397.4 mg de una sustancia que contiene un 63% de una amina y un 37% de otro
compuesto X, que no posee carcter cido ni bsico, se disuelven en 100 mL de agua.
Con esta disolucin se preparan otras ocho, diluyendo alcuotas de 10 mL a 50 mL en
disoluciones tampn de diversos pH. Dichas mezclas dieron los siguientes valores de
absorbancia a 590 nm al medirse en cubetas de 1 cm:
pH

10

0.231 0.231 0.277 0.534 1.157 1.405 1.450 1.450

Si la forma protonada de la amina es incolora, calcular: a) La constante K b de la amina;

b) Las absortividades especficas para la amina y el compuesto X.
R.: a) 3.16 10-8; b) 2.43 L g-1 cm-1; 0.786 L g-1 cm-1

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