Lista de Exerccios para a P1 de EB-I 2016

Introduo
1.1.) Purificao da Eritromicina
Vocs so os engenheiros responsveis pela produo e purificao da eritromicina
Figura 1.1.

Figura 1.1. Estrutura qumica da Eritromicina.

Considerando a informao sobre a eritromicina disponibilidade pelo Merck Index,
indique quais devem ser as operaes unitrias para se proceder ao isolamento e
purificao deste antibitico?

1.2.) Purificao da Eritromicina

A difusividade de uma protena com um raio Stokes-Einstein de 2 nm em gua de 4.5 x
10-11 m2/s. Qual ser difusividade de uma outra molcula com o dobro do raio StokesEinstein no mesmo lquido mesma temperatura?

Rompimento Celular
2.1.) Rompimento de filamentos de Penicillium
Um moinho de bolas foi usado para romper filamentos de Penicillium, tendo sido
determinado a energia necessria para reduzir diferentes tamanhos da mesma massa de
material:
Mdia do raio inicial
(microns)
6

Mdia do raio final

(microns)
5,5

Energia requirida
(J)
1,8

4,5

2,7

3,5

4,3

2,5

8,0

1,5

20,0

Calcule a quantidade de energia necessria para reduzir o raio mdio do filamento de 5

microns para 1 micron para uma mesma massa de Penicillium, utilizando o mesmo
moinho de bolas.

2.2.) Rompimento celular de leveduras por Sonicao

Uma batelada de leveduras celulares foi rompida utilizando sonicao para liberar os seus
produtos intracelulares. A concentrao do produto liberado na soluo foi medida
durante o processo:
Tempo
(s)
60
120

Concentrao
(mg/mL)
3,49
4,56

Estime qual a concentrao de produto final, caso o processo de rompimento celular tenha
sido realizado durante 240 segundos.

2.3.) Rompimento celular por sonicao para a recuperao de Antibitico

Um antibitico intracelular foi recuperado por sonicao a partir de 5 litros de suspenso
celular (15 g/L). Experimentos anteriores mostraram que 50 % do antibitico pode ser
recuperado aps 40 minutos. Estime o tempo necessrio para recuperar 90% do
antibitico.

2.4.) Rompimento celular de tecido animal

Um tipo de derivado de tecido animal tem vindo a ser processado em moinho de bolas
para recuperar uma enzima farmacutica. Estimou-se que seriam necessrios 3000 J de
energia para reduzir o tamanho mdio da partcula de 1 mm para 0,5 mm. Estime a
quantidade de energia necessria para efetuar uma reduo posterior para 0,1 mm.
(Assuma que o processo de triturao segue a lei de Rittingers).

2.5.) Rompimento celular em fermentaes em regime descontnuo

Realizou-se uma srie de fermentaes em regime descontnuo, utilizando a levedura
Candida utilis para a produo de diversas protenas intracelulares. Aps o cultivo as
clulas da levedura foram rompidas em homogeneizador de alta presso. Inicialmente
aplicou-se um ciclo de rompimento (ciclo A) com o homogeneizador operando presso
de 60 MPa, tendo sido liberada 68% do total de protena intracelular. Um ciclo adicional
de rompimento (ciclo B) foi efetuado para a mesma suspenso celular em
homogeneizador presso de 90 MPa, condio na qual foi possvel recuperar 85% do
contedo proteico. De acordo com os valores de rendimento de protena obtidos
inicialmente para um processo simples, de rompimento, ou seja, com uma nica passagem
pelo homogeneizador, determine:
a)
Qual o nmero de ciclos de rompimento necessrio para a recuperao de 90%
das protenas intracelulares caso o homogeneizador seja operado a uma presso de 70
MPa?
b)
Qual a presso operacional mnima para recuperar 90% das protenas
intracelulares, aplicado o nmero de ciclos determinados anteriormente?

2.6.) Rompimento celular de clulas de Pichia pastoris

Um grupo de pesquisa da Faculdade de Cincias Farmacuticas da Universidade de So
Paulo realizou estudo objetivando determinar a curva de rompimento celular de Pichia
pastoris em moinho de bolas utilizando esferas de vidro, visando liberao a LAsparaginase intracelular. Aps o cultivo de uma cepa de Pichia pastoris GS115 com
capacidade de expressar a L-asparaginase I de Saccharomyces cerevisiae, conduzido em
incubador rotativo (24 horas a 30 C e 250 rpm), o meio foi centrifugado a 4000 g durante
10 min e o pellet celular usado para preparao dos sistemas de rompimento. Empregouse sistema laboratorial de rompimento com esferas de vidro ( 0,5mm) e agitador tipo
vrtice (Vixar BM 3000). Um volume de 1 mL da suspenso celular, na concentrao de
250 mg/mL, em tampo de lise foi adicionado em tubos tipo Eppendorf de 2 mL, os quais
foram a seguir adicionados de 750 mg de esferas de vidro e submetidos a ciclos de
agitao de 30 segundos em vrtice, na velocidade de ~3000 rpm, seguidos de ciclos de
resfriamento de 60 segundos em banho de gelo a -10C. Antes de iniciar o rompimento
celular, as amostras foram resfriadas para aproximadamente 0oC em banho de gelo

adicionado de cloreto de sdio (33% m/m) com capacidade para diminuir a temperatura
a at 21 C com objetivo de garantir que o controle da baixa temperatura de rompimento.
O esquema do banho de gelo com NaCl e a forma de utiliza-lo mostrado na Figura 2.2.
Aps cada ciclo de rompimento foram determinadas as seguintes variveis: nmero de
clulas intactas (n cl/mL x 106) na suspenso aps rompimento; concentrao de
Protenas totais (g) e atividade enzimtica da L-Asparaginase (U/gcl) no meio
clarificado aps o rompimento. No total foram realizados 12 ciclos de rompimento
celular, de 30 segundos de agitao a 3000 rpm e 60 segundos de resfriamento em banho
de gelo a -10C cada ciclo. Os valores para cada uma das variveis determinadas, em
funo do nmero de ciclos, esto apresentados na Figura 2.2.
(A)

(B)

Figura 2.1. (A) Esquema do sistema montado para rompimento de clulas com esferas
de vidro em tubo de Eppendorf; (B) Tubo de Eppendorf imerso em banho de gelo
contendo soluo de cloreto de sdio (33% w/w), utilizado para o resfriamento do
Eppendorf durante o rompimento celular. O compartimento contendo etanol utilizado
para monitorar a temperatura do banho.

Figura 2.2. Curva de rompimento de clulas de Pichia pastoris recombinante (1 mL de

suspenso celular de 250 g/L, 750 mg de esferas de vidro, pH 7,5). Cada ciclo compreende

30 segundos de agitao a 3000 rpm e 60 segundos de resfriamento em banho de gelo a 10C. () Nmero de Clulas intactas () Atividade Enzimtica e () Protenas Totais.
Com base nos resultados apresentados na Figura 2.2, responda s seguintes questes:
a) Quantos ciclos de rompimento celular devem ser realizados para romper as
clulas de Pichia pastoris? Justifique a sua resposta.
b) Indique quais procedimentos alternativos poderiam ser realizados para
aumentar a eficincia do processo de rompimento celular testado pelo grupo de pesquisa?

Clarificao Centrifugao e Sedimentao

3.1.) Separao de clulas crescidas num suporte
Clulas animais foram cultivadas na superfcie externa de grnulos de dextrana. Estes
grnulos celulares ou microcarregadores tem uma densidade () de 1,02 g/cm3 e
dimetro de 150 m. Um tanque agitado de 50 L foi utilizado para cultivar as clulas nos
microcarregadores e produzir uma vacina viral. Aps o crescimento, a agitao do tanque
foi parada, e os microcarregadores sedimentaram. Aps a sedimentao, o fluido livre de
microcarregadores (sobrenadante) foi ento retirado para isolar a vacina.
A razo altura (l) vs dimetro (d) do lquido no tanque 1,5.
O fluido livre de microcarregadores tem um de 1,00 g/cm3 e uma viscosidade () de 1,1
cP.
a) Estime qual o tempo de sedimentao necessrio, assumindo que os
microcarregadores atingem a velocidade mxima de sedimentao.
b) Estime o tempo necessrio para atingir essa velocidade mxima.

3.2.) Centrifugao de clulas de levedura

Uma centrfuga de laboratrio foi utilizada para recolher clulas aps a fermentao. Essa
centrfuga composta por um nmero de cilindros que giram perpendicularmente em
torno de um eixo de rotao. Durante a centrifugao a distncia entre a superfcie do
lquido e o eixo de rotao de 3 cm, e a distncia do fundo do cilindro ao eixo de 10
cm. As clulas de levedura podem ser assumidas como esfricas, com um dimetro de
8,0 m e uma densidade de 1,05 g/cm3. O fluido da suspenso celular tem propriedades
prximas da gua pura. A centrfuga deve ser operada a 500 rpm.
Quanto tempo tem de ser efetuada a centrifugao para que ocorra uma separao
completa das clulas de levedura?

3.3.) Centrifugao de E. coli utilizando uma centrfuga tubular

Uma centrfuga tubular foi utilizada para concentrar uma soluo de E.coli antes do
rompimento celular. O tubo tem um raio interno de 12,7 cm e comprimento de 73,0 cm.
A velocidade da centrfuga 16.000 rpm e tem uma capacidade volumtrica de 200 L/h.
a) Calcule a velocidade de sedimentao (vg) das clulas.
b) Depois do rompimento o dimetro do lisado cerca de metade do tamanho original
de cada clula e a sua viscosidade aumentou cerca de 4 vezes. Estime a capacidade
volumtrica (Q) da mesma centrfuga operando com estas novas condies.

3.4.) Centrifugao de Chlorella utilizando uma centrfuga de discos

Clulas de Chlorella foram cultivadas num lago aberto. Aps o crescimento pretendemos
destruir a biomassa passando uma corrente diluda de clulas atravs de uma centrfuga
de discos. A velocidade de sedimentao (vg) para estas clulas foi medida como 1,07 x
10-4 cm/s. A centrfuga tem 80 discos com um ngulo de 40, e um raio exterior de 15,7
cm, e um raio interior de 6 cm.
Planejando operar a centrfuga a 6000 rpm, estime qual a capacidade volumtrica (Q)
desta centrfuga.

Filtrao Convencional
4.1.) Filtrao de Streptomyces a partir de um meio fermentado de Eritromicina
Utilizando um filtro de teste, encontramos a seguinte informao exibida na Tabela
abaixo, para um meio fermentado contendo o antibitico eritromicina e auxiliares de
filtrao.
Tempo de filtrao, t
(s)
5
10
20
30

Volume de filtrado, V
(L)
0,040
0,055
0,080
0,095

O papel de filtro tem uma rea total (A) de 0,1 ft2. O filtrado tinha uma viscosidade () de
1,1 cP. A queda de presso (P) foi de 20 in de mercrio. O fluido de entrada contm
0,015 kg de torta seca por litro de meio filtrante.
Determine a resistncia especfica da torta () e a resistncia do meio (RM).
4.2.) Filtrao de Streptomyces erytheus a partir de um meio fermentado de
Eritromicina
pretendido filtrar 15.000 L/h de um meio fermentado de eritromicina utilizando um
filtro de tambor rotativo a vcuo. Nosso filtro tem um tempo de ciclo (tc) de 50 s, e uma
rea (A) de 37,2 m2. O filtro opera sob 20 in. Hg de vcuo. O meio fermentado pr-tratado
forma uma torta incompressvel com uma resistncia idntica ao exerccio 4.1:

) = (
)

Considerando que queremos obter uma torta apenas com 1% de slidos remanescentes, e
esperando uma eficincia de lavagem ser de 70%, e que um 1% de filtrado fique retido,
calcule:
a) Tempo de filtrao por ciclo (tc).
b) Tempo de lavagem (tw).

4.3.) Filtrao de meio fermentado contendo protease

Uma suspenso de Bacillus subtilis foi utilizada para fermentar uma protease. Para
separar a biomassa, ns adicionamos o equivalente a 1,3 x da concentrao de biomassa
de um auxiliar de filtrao (Celatom), obtendo um meio fermentado contendo um
rendimento final de 3,6 (m/m) % de slidos, com uma viscosidade () de 6,6 cP.
Utilizando um funil de Buchner de 5 cm de dimetro ligado a um aspirador (sob vcuo),

conseguimos filtrar 100 cm3 deste meio em 24 min. Contudo, estudos anteriores para este
tipo de meio fermentado mostraram que o mesmo tem um comportamento de torta
compressvel com um s igual a 2/3.
Agora precisamos de filtrar 3000 L deste material numa planta de instalao piloto com
um filtro de prensas. Esta prensa tem 15 placas, cada uma com uma rea de 3520 cm2. O
espao entre as placas pode ser aumentando, o que acaba por ser uma vantagem porque
podemos filtrar todo o fermentado sem encher as prensas (reduzindo o risco de
contaminao). A resistncia dos filtros muito menor que a da torta de filtrao, e a
queda de presso total que pode ser utilizada de 65 psi.
a) Quanto tempo demorar a filtrao a uma presso de 50 psi?
b) Quanto tempo ir demorar se reduzirmos esta presso para metade? Justifique se
mais ou menos vantajoso efetuar essa reduo de presso.

4.4.) Filtrao cristais de esterides incompressveis

Pretendemos filtrar um resduo de sitosterol a uma presso constante, utilizando um meio
de filtrao consttuido por uma tela de suporte montada no final de um tubo de Pirex.
Foi observado uma resistncia desprezvel neste novo meio filtrante. Alguns testes em
laboratrio com este equipamento permitiram adquirir os seguintes valores:

Massa de cristais 62 g
Presso da filtrao 15 psi
Dimetro do filtro 5,08 cm
Profundidade da torta 12,5 cm
Volume da torta 253,3 cm3
Tempo de filtrao 163 min

Considerando que a torta essencialmente incompressvel, e com base no teste de

laboratrio:
a) Determine o nmero de placas (30 in. x 30 in. x 1 in. de espessura) do filtro de prensas
necessrio para realizar essa filtrao?
b) Estime o tempo necessrio para filtrar 63 kg de uma batelada deste esteride. (P =
3,5 psi = 0,25 kg/cm2) Nestes clculos assuma que a bomba de presso induz 10 psi e que
a essa presso o filtrado pela prensa pode ser aumentado at a um equivalente de 15 ft da
entrada.

4.5.) Filtrao de suspenso inorgnica

Utilizou-se um filtro de vidro sinterizado para filtrar 50 litros de uma suspenso
inorgnica, os quais foram coletados em 30 min, com uma queda de presso de 50 kPa.
Quanto filtrado seria recolhido em 30 min a uma presso de 100 kPa, assumindo que RM
insignificante.

4.6.) Filtrao de etanol

Etanol puro foi filtrado atravs de um disco poroso com um dimetro de 2 cm, e uma
espessura de 1 mm. Quando utilizada uma queda de presso de 100 kPa para realizar a
filtrao, a taxa de filtrao alcanada foi de 10 mL/min. Se utilizssemos um filtro do
mesmo material mas com um dimetro de 5 cm e espessura de 3 mm para filtrar o etanol,
qual seria a taxa de filtrao para uma queda de presso de 150 kPa?

4.7.) Filtrao de cido ctrico a partir de um meio fermentado num filtro de tambor
rotativo a vcuo
Para se processar 3000 L/h de um meio fermentado com 6% de cido ctrico utilizou-se
um filtro de tambor rotativo a vcuo, composto por um filtro com uma rea de 18,1 m2.
Este equipamento apresenta uma RM insignificante, e tem um tempo de ciclo de 75 s,
operando com uma diferena de presso aproximadamente de 1 atm. A torta formada
apenas tem uma eficincia de lavagem de 60%, mas em contrapartida incompressvel e
permevel:

=

Se a torta reter 7% do filtrado, e sendo pretendido que a torta seja lavada at se ter apenas
10% do cido ctrico original, determine:
a) Tempo de filtrao (tf)?
b) Tempo de lavagem (tw)?

4.8.) Filtrao de clulas de levedura

Uma suspenso de clulas de levedura foi filtrada a uma taxa constante de 50 L/min. A
suspenso tem um teor de slidos de 70 kg/m3 de suspenso, com clulas de levedura com
uma densidade de 800 kg/m3. Os testes de laboratrio indicaram que a resistncia
especfica da torta de 40 m/kg, sendo a viscosidade do filtrado de 2,9 x 103 kg/m.s. O
filtro tem uma rea de 0,1 m2, sendo a resistncia do meio negligencivel.
a) Quanto tempo pode ser mantida a taxa de filtrao antes de a presso ultrapassar o
1 N/m2?
b) Quais so os volumes da torta e filtrado recolhidos durante esse tempo?
(ATENO: Notar que as equaes de filtrao so expressas em massa de slidos por
volume de filtrado e no por volume total de suspenso)

4.9.) Filtrao de clulas bacterianas e esporos

Pretende-se filtrar um meio fermentado contendo duas espcies: clulas bacterianas (d =
7 x 10-4 cm); esporos (d = 0,3 x 10-4 cm). Previamente determinou-se que a resistncia
especfica da torta para cada das espcies, respetivamente:
bactrias: = ,
esporos: = ,

Outros testes experimentais demonstraram tambm que para a cultura mista:

= ( )

Onde a frao do soluto i em todos os solutos. Se o nosso meio fermentado contm

metade da concentrao de bactrias e de esporos, determine o tempo necessrio para
filtrar 850 L do meio fermentado misto num filtro com resistncia de meio filtrante
insignificante, e um queda de presso de 105 N/m2 e 4,0 m2 de rea (tf)?

4.10.) Filtrao de cristais de aureomicina

Um teste de laboratrio mostrou que possvel filtrar cristais de aureomicina suspensos
em acetona, utilizando um filtro com uma resistncia neglegvel (Valores experimentais
presentes na tabela abaixo).
t (s)
V (L)

10
0,50

20
0,71

30
0,87

Para se obterem os dados experimentais utilizou-se um filtro com 89 cm2 de rea e uma
queda de presso de 2,6 m de H2O. Agora planejado filtrar uma concentrao muito
maior de cristais suspensos em 7300 L de solvente, utilizando-se para tal um filtro com
uma rea de 1,3 m2. Contudo, esta nova suspenso tem uma concentrao de cristais de
0,28 g/cm3 de solvente, quando na suspenso laboratorial a concentrao era de 0,34
g/100 cm3.
Quanto tempo ir demorar para filtrar a nova suspenso celular considerando a mesma
queda de presso?