Mycoplasma no puede ser observado con el microscopio ptico.

Para su cultivo en el laboratorio es muy exigente,

requiriendo un medio rico en esteroles y con precursores de aminocidos y nucletidos preformados, lo cual se
consigue por la adicin de suero y extracto de levadura. Cuando crece no enturbia el medio lquido y para observar
las colonias que forma en medio slido hace falta microscopio.
El diagnstico microbiolgico, en la prctica habitual, se ha basado, generalmente, enla demostracin de
anticuerpos especficos. Varios factores contribuyen a esta situacin. Enprimer lugar las tcnicas de cultivo son
caras, laboriosas, lentas y no son abordables para lamayora de laboratorios de diagnstico clnico. Adems, en los
cultivos de muestrasrespiratorias, bien sean aspirados nasofarngeos, exudados farngeos o esputos, lapresencia
de otras especies de micoplasma comensales obliga a realizar pruebas deidentificacin para M. pneumoniae. Las
tcnicas rpidas para deteccin de antgenotampoco han tenido gran aceptacin, debido a su baja sensibilidad y
especificidad.
En la actualidad, la serologa continua siendo el mtodo diagnstico ms ampliamenteaplicado para el diagnostico
de las infecciones por M. pneumoniae. Las particularesconsideraciones que merece este apartado hacen que lo
individualicemos del resto demtodos diagnsticos.
Las primeras determinaciones de la respuesta inmunolgica especfica frente a M.pneumoniae se realizaron por la
tcnica de fijacin del complemento (FC), utilizando comoantgenos, bien un extracto lipdico de M. pneumoniae,
bien una suspensin de lisadobacteriano. La complejidad antignica de este microorganismo, en comparacin con
losvirus, condiciona un mayor nmero de resultados inespecficos. Tambin se observanreacciones cruzadas con
los antgenos glucolipdicos de otros micoplasmas. La tcnica deFC determina principalmente IgM y, en menor
medida, IgG. La demostracin de unincremento en cuatro veces el ttulo entre una muestra de la fase aguda y una
de la fase deconvalecencia, o bien ttulos superiores o iguales a 1/32, proporciona una sensibilidad del90% y una
especificidad del 88%.
La complejidad y las mltiples variables a controlar con la tcnica de FC hancontribuido a que la mayora de
laboratorios busquen otras alternativas de diagnsticoserolgico. Las tcnicas de inmumofluorescencia (IF) son
relativamente fciles de realizar ypermiten un resultado cuantitativo. Sus principales limitaciones son la
subjetividad en lainterpretacin de los resultados obtenidos y la reactividad cruzada con el factor reumatoide.
Las tcnicas de aglutinacin pasiva utilizan un soporte, como el ltex o la gelatina,para una mezcla de antgenos
especficos de M. pneumoniae. Detectan conjuntamente IgGe IgM, permitiendo tambin su cuantificacin. La
aglutinacin de partculas de gelatina es demuy fcil realizacin y considerable especificidad, si bien, para

conseguir una mximasensibilidad se recomienda realizar la determinacin en dos muestras seriadas. En

unestudio comparativo con tcnicas de PCR, Templeton et al. (2003), observaron que unamuestra de suero de la
fase inicial permita detectar el 50% de las infecciones, y que lasensibilidad alcanzaba el 66%, si se dispona de
una muestra de la fase de convalecencia,siempre que se valorasen aglutinaciones a ttulos iguales o superiores a
1/320.
Las tcnicas de enzimoinmunoanlisis (EIA) se han impuesto en la mayora delaboratorios clnicos. Para la
preparacin de los reactivos necesarios se utiliza una grandiversidad de preparados antignicos (protenas
purificadas, pptidos sintticos, mezcla deantgenos crudos, glucolpidos purificados), que permiten la deteccin de
IgG o de IgM, y endiferentes presentaciones (tcnicas de captura-, microplacas, en soporte de membrana).
Las pruebas de EIA parecen muy sensibles para la deteccin de anticuerpos especficos,presentando, como
siempre, la ventaja de ser automatizables y de necesitar un volumen desuero reducido. Las presentaciones en
soporte de membrana permiten determinaciones
cualitativas de IgM, generalmente en presentaciones unitarias de fcil realizacin, y quepermiten obtener
resultados de manera muy rpida.
Tambin existen presentaciones ensoporte de membrana que permiten detectar tanto IgG como IgM, y que han
demostradobuena sensibilidad y especificidad. En cualquier caso, para alcanzar una buena sensibilidaddiagnstica
con las tcnicas de EIA, sigue siendo necesario disponer de una muestra desuero del periodo de convalecencia.
Los micoplasmas requieren esteroles para la estabilidad de su membrana plasmtica, lo cual es muy inusual en las
bacterias. Los esteroles los adquieren del entorno, por lo general como colesterol a partir de los animales que
parasita. En general, poseen un pequeo genoma de 0,58-1,38 megapares de bases, que conlleva una drstica
disminucin de su capacidad de biosntesis, lo que explica su dependencia de un hospedador. Adems utilizan un
cdigo gentico alternativo, donde el codn UGA codifica el aminocido triptfano en lugar de la habitual seal de
parada "palo".
MORFOLOGA: Esta bacteria pertenecen a la clase mollicutes (ultramicroscpicas 200nm), carece de pared
celular verdadera y
est separados del medio externo por una simple unidad de membrana que a diferencia de la de otras bacterias,
contiene esteroles. Dicha
membrana (trilaminar) otorga a los micoplasmas de una extraordinaria plasticidad y polimorfismo (pudiendo
presentar forma cocoide,
cocobacilar, filamentosa y/o estrellada); sin embargo, en lneas generales, su morfologa es predominante cocoide.
Una caracterstica, no
menos importante, en el M. Pneumoniae es que se trata de un microorganismo aerobio estricto y crece mejor con
una atmsfera
enriquecida con 5-10% de CO2.
La ausencia de pared celular rgida condiciona muchos aspectos de la biologa, fisiologa y patogenicidad de estos
microorganismos; por
ejemplo:

no se tian con Gram,

sean resistentes a los antibiticos - lactmicos

sean muy sensibles a las variaciones del pH, temperatura, presin osmtica y a los detergentes.
In vitro se observ que son microorganismos muy exigentes desde el punto de vista nutricional y requieren medios
complejos para
desarrollarse.
Los medios de cultivo deben contener colesterol (suero de caballo), ya que son incapaces de sintetizarlo. Su
incubacin debe
ser por lo menos de 7 das a una Temp. que oscile entre 35 37 C y a un pH neutro
CUADRO CLINICO:
A AFECCIONES RESPIRATORIAS:
1.- INFECCIONES RESP. INAPARENTES = (son leves y muy variadas)
2.- SNDROME GRIPAL= Indistinguible de los causados por otros microorganismos.
3.- FARINGITIS = Puede ser un hecho acompaante de la neumona o de la traqueobronquitis, o constituir la
manifestacin
predominante.
Manifestaciones Clnicas: Normalmente cursa con fiebre, cefalea, dolor de garganta, exudado farngeo y
adenopatas cervicales.
La faringitis aislada de esta etiologa es muy infrecuente por debajo de los 10 aos y, desde el punto de vista
clnico, es
indistinguible de la debida a estreptococos del grupo A, virus de Epstein-Barr u otros virus del tracto respiratorio.
4.- TRAQUEOBRONQUITIS = Representa una forma frecuente de enfermedad micoplsmica, con comienzo y
sntomas similares a
los de la neumona. Es indistinguible de las causadas por otros microorganismos.
Manifestaciones Clnicas: Tos, a veces paroxstica, dolor o sensacin de quemazn retroesternal, expectoracin
escasa y en
general no purulenta, as como sntomas sistmicos discretos.
5.- BRONQUITIS Y BRONCONEUMONA = Clnicamente indiferenciables de cuadros similares producidos por otros
microorganismos.
6.- NEUMONA PRIMARIA ATPICA = Esta denominacin se corresponde clnicamente con un cuadro de neumonitis,

generalmente de comienzo insidioso (gradual), de distribucin habitualmente no lobular, esputo por lo comn
escaso y no purulento. La afeccin se circunscribe principalmente en el lbulo medio e inferior del pulmn y tiene
un patrn de tipo intersticial. El cuadro presenta un perodo de incubacin de 3 semanas y cursa sin leucocitosis.
Manifestaciones clnicas:
Los Sntomas Predominantes (no faltan nunca) =Tos Persistente (no productiva o con produccin escasa de esputo
no purulento);Fiebre (no precedida de escalofros) que va acompaada de Malestar General y Mialgias. A estos
sntomas predominantes frecuentemente se asocianCefaleas y sntomas tpicos de rinitis, faringitis, miringitis
(inflamacin del
tmpano) o traqueobronquitis. La exploracin general del aparato respiratorio puede mostrar rinorrea, faringe
eritematosa, concamitantmente acompaada a veces de adenopatas cervicales dolorosas a la palpacin, e
hiperemia timpnica. Si existe miringitis, en este contexto, sugiere por si misma infeccin micoplsmica
Siempre debemos tener presente que la tos es el sntoma predominante y en su ausencia hay que poner en duda
el diagnstico.
Los Signos Torcicos son variables; por lo general se auscultansubcrepitancias, aunque pueden existir runcus,
sibilancias e,
incluso, crepitancias. Los signos de consolidacin lobular son raros. Radiolgicamente suele observarse un
infiltrado
heterogneo y poco denso, situado cerca del hilio, sobre todo en los lbulos inferiores (aspecto de vidrio
deslustrado); a
menudo los infiltrados afectan a varios lbulos, generalmente de ambos pulmones. Pero tambin es posible un
aumento de densidad por ocupacin del espacio areo limitado a un segmento o a un lbulo. En el 20-25% de los
casos pueden observarse pequeos derrames pleurales que acostumbran a tener poca expresin clnica.
B - AFECCIONES EXTRAPULMONARES (complicaciones):
1.- Otitis (media y externa)
2.- MENINGOENCEFALITIS
3.Sndrome
de
Guillan

Barr
4.Urticaria,
Eritema
Exudativo
Multiforme,
Exantema
5.- Anemia Hemoltica
Complicaciones (poco frecuentes), se describieron varias, algunas graves; por ejemplo insuficiencia respiratoria.
gangrena digital(en
pacientes con anemia drepanoctica). Entre las complicaciones extrapulmonares pueden producirse Eritema
Exudativo Multiforme,
Sndrome de Raynaud. y Meningoencefalitis; esta ltima es la manifestacin neurolgica ms importante
relacionada con la neumona
por M. pneumoniae. Es poco frecuente, de patogenia probablemente inmunolgica y el curso suele ser benigno,
aunque se han descrito
casos graves con secuelas significativas.
B - AFECCIONES EXTRAPULMONARES (complicaciones):
1.- Otitis (media y externa)
2.- MENINGOENCEFALITIS
3.Sndrome
de
Guillan

Barr
4.Urticaria,
Eritema
Exudativo
Multiforme,
Exantema
5.- Anemia Hemoltica
DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO: No se tien con Gram (porque esta bacteria no tiene pared celular)
- METODO DIRECTO: Debido a la dificultad que ello entraa, no se lo realiza en la actualidad
a.Tincin
de
Dienes
o
de
Romanowsky
b.Cultivo
en
medios
complejos
y
Agar
blando
c.- Incubar entre 3 20 das; termino medio 7 das
El cultivo y aislamiento de micoplasmas y ms especficamente de M. pneumoniae representa un importante reto
para el laboratorio, ya que este microorganismo posee caractersticas muy particulares, siendo exigentes desde el
punto de vista nutricional y sensible a variaciones de pH, temperatura y presin osmtica. Por lo tanto se deben
garantizar condiciones ptimas para su desarrollo en medios de cultivo para mantener o aislar cepas (7, 8, 9). El
cultivo de micoplasmas patgenos para humanos requiere de un medio de cultivo base enriquecido con peptona,
extracto de levadura y suero, todo esto suplementado con un sustrato metablico (generalmente glucosa).
Adicionalmente, se utilizan indicadores de pH como el rojo de fenol para poder detectar el crecimiento del
microorganismo, ya que usualmente no producen turbidez en medio de cultivos lquidos debido a su pequeo
tamao. Para recuperar M. pneumoniae a partir de muestras clnicas, especialmente en muestras tomadas de
sitios no estriles, adems de los componentes del cultivo antes mencionados, se requiere de antibiticos como
Penicilina G o una penicilina semi-sinttica de amplio espectro a fin de minimizar el sobrecrecimiento bacteriano.
En ocasiones tambin se emplea el acetato de talio para inhibir el crecimiento de otras bacterias ya que los
micoplasmas son resistentes a su accin a concentracin de 1:10.000 partes en el medio de cultivo, y azul de
metileno que inhibe el crecimiento de otros micoplasmas, de modo que el medio resulta selectivo para M.
pneumoniae (3, 7, 10). Entre los medios de cultivo ms utilizados se destaca el Caldo y el agar SP4 (pH 7,5) el cual
fue formulado originalmente para el cultivo de espiroplasma y es considerado el mejor medio de uso general. Otros
medios incluyen el Medio de New York City modificado, el Sistema Trifsico (Mycotrim RS, Irvine Scientific, Irvine,
Calif.), y el agar y caldo PPLO (pleuroneumonia like organism) con extracto de levadura y suero de caballo (2, 7).
Tambin se recomienda el uso de medios bifsicos, en donde los tubos contienen una fase slida de agar y una
fase lquida o caldo con una composicin similar al agar, ya que se ha observado que estos medios aumentan la
recuperacin de los micoplasmas en comparacin con los medios de cultivos slidos (3, 7, 11). En genaerl, los
medios de cultivo para M. pneumoniae deben incubarse a 37C, durante un perodo de tiempo mximo de 4
semanas, el tiempo para observar crecimiento va a depender de la cantidad de bacterias presentes en el inoculo

inicial. En el caso de los medios en caldo se considera que una turbidez macroscpica y un cambio cido o alcalino
del indicador en 1-5 das se deben a contaminacin bacteriana, por el contrario, un cambio gradual y leve del
indicador del pH en 8-15 das, sin turbidez macroscpica sugiere un cultivo verdaderamente positivo. Cuando los
cambios de color son evidentes, el caldo debe subcultivarse rpidamente en un medio apropiado con agar, ya que
a medida que se acumula ms cido los micoplasmas rpidamente se tornan no viables. Si no hay cambio de color
obvio despus de 1 y 3 semanas de incubacin en el medio bifsico, debe realizarse un subcultivo a ciegas en
medios de agar (3, 7). Debido al pequeo tamao del M. pneumoniae, sus colonias no pueden ser visualizadas en
los medios de agar a simple vista, solo mediante el uso de un microscopio estereoscpico (objetivo de 20X o 60X)
observndose redondas con superficie granulosa y sumergidas en el agar.
Es importante resaltar que el M. pneumoniae puede mostrar o no esta apariencia caracterstica y adems se debe
ser cuidadoso en diferenciar esta morfologa de artefactos tales como burbujas de aire, agua o gotas lpidos los
cuales pueden causar confusin (3, 7). Con todo lo anteriormente mencionado, se destaca la complejidad que
implica el uso de medios de cultivo para el aislamiento o crecimiento de M. pneumoniae, ms an si su
preparacin se realiza de manera casera, debido a la variedad de suplementos e inhibidores. Esto se contrapone
con el costo, el cual se incrementa si dichos suplementos son adquiridos de manera comercial. Adicional a esto, el
tiempo de crecimiento del microorganismo tambin es una desventaja, que impide realizar un diagnstico rpido o
en la fase aguda de la enfermedad. Se debe disponer adems de un personal con experiencia para la observacin
de las colonias microscpicas, por tanto, su implementacin en los laboratorios de rutina no es sencilla
Muestras de origen respiratorio
Son expectoracin espontnea o inducida, secrecin traqueal, lavado broncoalveolar (LBA), cepillado bronquial,
lavado bronquial, aspirado endotraqueal, puncin transtraqueal, tejido pulmonar.
Tincin de Gram. Contina siendo uno de los exmenes rpidos de mayor utilidad y bajo costo, ya que permite
una aproximacin diagnstica para el inicio de la terapia adecuada, considerando que Streptococcus pneumoniae
es el agente etiolgico ms frecuentes en neumonas adquiridas en la comunidad y que este agente presenta una
morfologa caracterstica en la tincin de Gram.
Se debe tener siempre presente que la muestra de expectoracin puede estar contaminada con flora bucal, por lo
que el informe de la calidad de la muestra es esencial para una adecuada interpretacin. La Tabla 1 muestra los
criterios de calidad de la muestra propuestos por Murray y Washington, quienes establecieron criterios de calidad
segn la proporcin de clulas inflamatorias (leucocitos polimorfonuclares) en relacin a las clulas epiteliales
(contaminacin por saliva). Segn estos criterios, el laboratorio debe rechazar las muestras de mala calidad, ya
que los resultados del cultivo no aportan al diagnstico. Estudios posteriores han demostrado que en el caso de
muestras de mala calidad, muy rara vez la solicitud de un nuevo especmen consigue superar la calidad del
primero, por lo que no se justifica la solicitud de una segunda muestra.
TABLA 1.
CRITERIOS DE RECHAZO PARA LAS MUESTRAS DE EXPECTORACION SEGUN MURRAY Y WASHINGTON*.

N clulas por campo de menor aumento

Grup
o

Realizar
cultivo
Clulas epiteliales
Escamosas

Leucocitos
polimorfonucleares

25

10

No

25

10-25

No

25

25

No

10-25

25

No

<10

25

* Adaptado de referencia 2
Es necesario considerar tambin que la predominancia marcada de un tipo morfolgico especial de bacterias,
permite una mejor aproximacin diagnstica: abundante cantidad de diplococos Gram positivos sugiere
fuertemente la presencia de Streptococcus pneumoniae, predominancia de cocobacilos Gram negativos sugiere
Haemophilus influenzae, diplococos Gram negativos sugiere Moraxella catarrhalis y cocceas Gram positivas en
racimo sugiere Staphylococcus.
La principal causa de error en la interpretacin de la tincin de Gram es que Streptococcus grupo Viridans, el
principal componente de la flora bucal, es una coccea Gram positiva similar a Streptococcus pneumoniae en la
tincin de Gram, de modo que si la calidad de la muestra no es ptima y la muestra no es rechazada, inducir
errneamente a sospechar una enfermedad neumoccica.
Cultivo aerbico corriente. Permite la recuperacin de bacterias aerbicas como Streptococcus pneumoniae,
Haemophilus influenzae, Moraxella catarrhalis, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae y Pseudomonas
aeruginosa.
Para la recuperacin de S. pneumoniae y H. influenzae, resulta imperioso que las muestras sean transportadas al
laboratorio antes de 2 horas. Los medios bsicos para la siembra primaria son el agar con 5% de sangre de
cordero, agar chocolate que se incuba en atmsfera con CO 2 y favorece el desarrollo de S. pneumoniae y H.
influenzae y de agar Mac Conkey selectivo para bacilos Gram negativos.
Se debe considerar que si la muestra es de buena calidad, debe existir correlacin entre la tincin de Gram y el
resultado del cultivo, a menos que ocurra alguna de las siguientes situaciones:
1.

Inicio de tratamiento antibitico emprico antes de obtener las muestras para cultivo, ya que esto
reduce fuertemente el rendimiento de los cultivos. En estos casos la tincin de Gram puede
demostrar bacterias que posteriormente no son recuperadas en los cultivos. Por lo anterior resulta
crucial realizar los estudios bacteriolgicos antes de iniciar cualquier terapia antibitica y, si esto
no es posible, se debe entregar esta informacin al laboratorio de microbiologa.

2.

Si la tincin de Gram no muestra predominancia de un tipo bacteriano, pero se observa abundante

cantidad de clulas inflamatorias, debe sospecharse la presencia de bacterias fastidiosas o de
agentes virales. Algunos laboratorios de microbiologa tienen diseados protocolos de cultivo
expandidos cuando esta situacin ocurre, incluyendo cultivos virales.

A partir de las especies bacterianas identificadas en el cultivo se realizan estudios de susceptibilidad a los
antimicrobianos en uso. En el caso de Haemophilus influenzae y Moraxella catarrhalis se puede utilizar como test
rpido la susceptibilidad a b -lactamasas mediante un test en tira. Entre un 80 a 90% de las M. catarrhalis aisladas
en los Estados Unidos son resistentes a los beta-lactmicos, por lo que pueden requerir un estudio de
susceptibilidad convencional.
Cultivo selectivo para bacterias especiales
Cultivo para Legionella pneumophila. Tiene especial utilidad en lugares geogrficos donde L. pneumophila
tiene alta prevalencia. Este bacilo Gram negativo fastidioso crece lentamente (48-72 horas hasta 7 das) en medios
de cultivo selectivos especiales para su desarrollo (BCYE: agar carbn con extracto de levadura con y sin
antimicrobianos). Su bsqueda rutinaria, incluso en U.S.A, no muestra alto rendimiento en la recuperacin. Podra
ser de mayor utilidad emplear estos medios de cultivo especiales cuando la sospecha clnica sea alta y la tincin
de Gram muestre una gran respuesta inflamatoria sin predominancia de algn tipo bacteriano. La sensibilidad del
cultivo de una muestra de expectoracin es menor del 50% y asciende a un 83-90% cuando la muestra se obtiene
por aspiracin transtraqueal.
Cultivo para Mycoplasma pneumoniae. Requiere la inoculacin de la muestra en un agar y caldo especial (SP4) suplementado con anfotericina y colistina y una incubacin a lo menos de 7-15 das. La observacin de las
colonias sospechosas debe realizarse por inmunofluorescencia u otras tcnicas de tinciones especficas con
anticuerpos marcados.
Cultivo en lneas celulares para bacterias nutricionalmente exigentes. Si bien se consideran los mtodos
de referencia para bacterias deficitarias tales como Chlamydia pneumoniae (bacteria Gram negativa intracelular
obligada), la recuperacin de esta bacteria en cultivos celulares es extremadamente baja y son altamente
laboriosas, por lo que no estn disponibles en los laboratorios de microbiologa clnica.

Cultivo anaerbico. Las bacterias anaerbicas pueden ser causa de hasta un 10% de las pleuroneumonas
adquiridas en la comunidad, sin embargo la obtencin de la muestra dificulta la confirmacin etiolgica. Se reserva
slo cuando la sospecha de neumona por aspiracin es alta y existen los medios para realizar una puncin
transtraqueal o una puncin pulmonar, ya que stas son las muestras aceptables para el cultivo anaerbico.
Recientemente la broncoscopia con cepillo protegido ha mostrado ser til para el estudio de anaerobios, sin
embargo requiere un transporte rpido al laboratorio. En el caso del lavado broncoalveolar (LBA), se considera
significativo un aislamiento 105 organismos/ml de LBA. Aproximadamente la mitad de las muestras en que se
aisla anaerobios, tienen cultivos mixtos con bacterias aerbicas. Los principales microorganismos identificados son
Peptostreptococcus sp, Bacteroides melaninogenicus y Fusobacterium nucleatum. Los hemocultivos son casi
siempre negativos y la muestra de mejor rendimiento es el lquido pleural.
Hemocultivos. Se deben solicitar cada vez que exista sospecha de neumona adquirida en la comunidad, ya que
Streptococcus pneumoniae es el principal agente etiolgico y entre un 15 a 25% de las neumonas neumoccicas
cursan con bacteremia. Adems tiene implicancias en el pronstico, dado que las neumonas con bacteremia
tienen mayor mortalidad, especialmente en pacientes ancianos.
TABLA 2.
CORRELACION ENTRE LA MORFOLOGIA BACTERIANA OBSERVADA EN LA
TINCION DE GRAM Y EL RESULTADO DEL CULTIVO*
Morfoga bacteriana

Sugiere fuertemente

Diplococos Gram (+)

Streptococcus pneumoniae

Cocobacilos Gram (-)

Haemophilus influenzae

Diplococos Gram (-)

Moraxella catarrhalis

Cocceas Gram (+) en racimo

Staphylococcus

* Slo si la calidad de la muestra es adecuada

Mtodos no microbiolgicos
Los mtodos de deteccin de anticuerpos y de antgenos, as como la amplificacin gentica, no se consideran
mtodos de referencia y, en el caso de los que emplean la biologa molecular, son de alto costo. Por esta razn
deben reservarse para el diagnstico de los agentes etiolgicos de difcil diagnstico microbiolgico: Legionella
pneumophila, Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae, virus respiratorio sincicial y virus infuenza.
Legionella pneumophila
Deteccin de antgeno urinario por enzimoinmunoanlisis (EIA). Tiene una especificidad cercana al 100% y
una sensibilidad del 80% cuando se obtiene precozmente (dentro de la primera semana de la enfermedad) y
despus disminuye progresivamente. Tiene el inconveniente que slo detecta el serogrupo 1, que es el ms
prevalente en los Estados Unidos. Se desconocen los serotipos prevalentes en Chile. Se ha descrito tambin un test
de ltex para deteccin de antgeno directamente en muestras respiratorias, pero la deteccin de antgeno urinario
por EIA es ms sensible.
Deteccin de anticuerpos en suero. Se utiliza la deteccin de IgG mediante inmunofluorescencia indirecta. La
elevacin de los ttulos en 4 diluciones se considera significativa para infeccin aguda por L. pneumophila y, como
muestra nica, se considera positiva una dilucin 1:256. La sensibilidad, con estos criterios de positividad, vara
entre 43% y 75%.
Tcnicas de biologa molecular. Se realizan en muestras de origen respiratorio y en muestras de orina. Los
mejores resultados han sido obtenidos con el uso de sondas de DNA y la reaccin en cadena de la polimerasa
(PCR). Ambos mtodos pueden detectar todos los serotipos de Legionella, por lo que seran ms tiles que la

deteccin de antgeno urinario por EIA. Dado que Legionella es un patgeno capaz de desarrollarse en agua, deben
extremarse las precauciones con las tcnicas de amplificacin, para evitar la contaminacin de las muestras.
Chlamydia pneumoniae
Deteccin de anticuerpos en suero. Los mtodos ms utilizados son la microinmunofluorescencia (MIF), que se
considera el mtodo serolgico de referencia y el enzimoinmunoanlisis. Sin embargo, tanto la deteccin de
anticuerpos IgG e IgM presentan el inconveniente que se elevan tardamente en el curso de la enfermedad (3
semanas para IgM y 6-8 semanas para IgG) por lo que la sensibilidad no es alta. Se debe considerar tambin que
los ttulos persisten elevados durante largo tiempo (6 a 12 meses para gM), lo que sumado a que un 60% de la
poblacin adulta posee ttulos detectables de IgG sin estar cursando una infeccin activa, deja a la serologa como
una herramienta de utilidad epidemiolgica ms que clnica, si bien es el mtodo ms frecuentemente
implementado en los laboratorios de microbiologa clnica. En general, se consideran positivos ttulos IgG >=1:20 y
ttulo IgM >=1:64.
Tcnicas de biologa molecular. Actualmente son los mtodos ms promisorios para el diagnstico de neumona
por C. pneumoniae. La principal dificultad para evaluar la eficacia de la amplificacin gentica por PCR es la
ausencia de un mtodo de referencia contra el cual validar esta tcnica. Adems, no existe disponibilidad de
sistemas comerciales que permiten una mejor reproducibilidad. Los estudios muestran que PCR detecta entre un
10 a 20% ms de casos que el cultivo y un 20% menos que la serologa, sin embargo si se consideran los
resultados del PCR y el cultivo en conjunto, se detectan menos casos que con serologa sola.
Mycoplasma pneumoniae
Deteccin de aglutininas fras. Los ttulos mayores de 1:64 han sido asociados con infeccin por M.
pneumoniae. Sin embargo no son especficas ni sensibles: slo un 50% de los pacientes con neumona por esta
bacteria presentan este test positivo. Se han descrito falsos positivos para enfermedades linfoproliferativas,
mononucleosis infecciosa, influenza, sfilis, infeccin por adenovirus y por Legionella pneumophila.
Deteccin de anticuerpos en suero. Se considera el principal mtodo de diagnstico utilizado por los
laboratorios clnicos. Actualmente el enzimoinmunoanlisis es el mtodo de eleccin y est disponible como test
rpido (ensayos tipo tarjeta). La sensibilidad para la deteccin de IgM es de 80% despus de la primera semana de
la infeccin, sin embargo la IgM puede persistir elevada hasta 4 aos.
Tcnicas de biologa molecular. La PCR parece ser un mtodo promisorio para el diagnstico de neumona por
Mycoplasma, especialmente en nios a partir de una muestra nasofarngea. Tendra la ventaja sobre la serologa
que es ms precoz, pero no ha mostrado mejor sensibilidad que la serologa, si bien es un mtodo altamente
especfico.