FMU

Faculdade de Cincias Farmacuticas

Disciplina de Imunologia Clnica - 2010
Testes de Aglutinao:
Interao Ag-Ac em que um dos componentes (ag ou Ac) est adsorvido (ou ligado naturalmente) a partculas ou clulas,
formando um aglutinado visvel a olho nu. O aglutinado formado pela agregao das partculas ou clulas.
Aglutinao Direta: o antgeno faz parte naturalmente da clula, como por exemplo, antgenos eritrocitrios em hemcias
humanas.
Aglutinao indireta: a tecnologia permite sensibilizar micropartculas de poliestireno (ltex) ou hemcias com antgenos
ou anticorpos, de modo que a partcula apenas um suporte inerte na interao Ag-Ac. As partculas de ltex so esfricas,
0,81 de dimetro, com cargas negativas que facilitam a adsoro estvel de protenas (de antgenos ou de Imunoglobulinas).
Exemplo de teste de Aglutinao Indireta para pesquisa de anticorpos ( esquerda) e para pesquisa de antgenos ( direita)

a) Aglutinao indireta: PESQUISA DE ANTICORPOS ANTI- ESTREPTOLISINA O (ASLO)

Streptococcus pyogenes, -hemoltico do grupo A constituem o assunto de maior interesse clnico em relao aos
outros estreptococos, devido serem precursores de seqelas ps-estreptoccicas que afetam jovens adultos na idade
reprodutiva.
Algumas toxinas bacterianas podem ser consideradas como superantgenos, ligando-se a molculas de classe II
na regio externa, fora do stio de interao com o peptdeo. Assim, no precisam ser processadas e conseguem estimular
um grande nmero de clulas T CD4+, levando produo exagerada de citocinas e anormalidades clnicas severas.
Produtos extracelulares liberados pelo S. pyogenes exercem atividade biolgica, como: a estreptolisina O (SLO), que
antignica, utilizada no imunodiagnstico, e a estreptolisina S, no-antignica.
As formas clnicas ps-estreptoccicas mais importantes so: escarlatina, FRA, GNDA, angina estreptoccica,
erisipela e febre puerperal. A FRA pode ser considerada a seqela de maior gravidade, devido freqentemente resultar em
leses do miocrdio e vlvulas cardacas.
O anticorpo formado contra estreptolosina O (presente em quase todas as cepas de St. Pyogenes) tem se tornado o
indicador de infeces estreptoccicas e suas implicaes, tais como glomerulonefrite aguda e a febre reumtica. A
concentrao de anticorpos anti-estreptolisina O aumenta ao final da primeira semana aps a infeco estreptococcica e
atinge o seu valor mximo entre 3a e 5a semana, retornando ao nvel normal do segundo ao quarto ms.
OBSERVAES:
1- Deixar os reativos e as amostras atingirem temperatura ambiente.
2- Homogeneizar cuidadosamente os reagentes.
3- No congelar os reagentes, armazen-los de 2o a 8o C.
4- No utilizar plasma, soro hemolisado ou lipmico, pois, pode produzir aglutinao inespecfica.
5- Deve ser prtica rotineira do laboratrio clnico o controle interno de qualidade com o uso de soro controle para checar a
preciso e exatido das dosagens realizadas.
REAGENTE: Suspenso de ltex sensibilizada com estreptolisina O, purificadas e estabilizadas, especialmente tratada para
evitar aglutinaes inespecficas. A aglutinao visvel em amostras com concentrao igual ou superior a 200 UI/mL.
Tcnica:
1. Em dois crculos da placa de fundo escuro, colocar 25L do ltex sensibilizado com estreptolisina.
2. No crculo 1 adicionar 25 L do controle negativo. Homogeneizar com o basto, abrindo o raio de visualizao.
3. No crculo 2 adicionar 25 L do controle positivo. Homogeneizar com o basto, abrindo o raio de viso.
4. Agitar a placa com movimentos circulares vagarosos por 3 min.

Leitura:

Verificar a presena de aglutinao. Aglutinao positiva indica a presena de anti-estreptolisina O em uma concentrao
igual ou superior a 200 UI/mL, neste caso realizar a prova semi-quantitativa.

reagente

no reagente

PROVA SEMI-QUANTITATIVA (no ser realizada):

As amostras reativas so diludas em salina a partir da amostra inicial at o ttulo final, sucessivamente, na razo 2
(1:2, 1:4, 1:8, 1:16, etc.).
Resultados:
POSITIVO: ntida aglutinao
Resultados podem sero emitidos em UI/mL de ASLO
Para obter o ttulo em UI/mL: inverso da ltima diluio X 200
NEGATIVO: suspenso homognea
Reportar como amostra analisada no reagente ou ASO inferior a 200 UI/mL (sensibilidade do kit).
Questes para serem entregues:
1- Esquematize uma reao positiva e negativa.
2- Quais os constituintes do ltex?
3- Quais so as aplicaes do teste para pesquisa de anticorpos anti-ltex?