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ENZIMAS
El interior de la célula es denso y, aunque los sustratos y las enzimas están en número
relativamente pequeño, se pueden encontrar y dar lugar al complejo ES porque están en
continuo movimiento. Las enzimas se mueven más lentamente que los sustratos y la
velocidad de encuentro va a depender de la concentración de sustrato presente.
El sitio activo tiene una forma determinada por el ordenamiento espacial de los - R que es
única y que es reconocida por su sustrato. Esta es la base de otra de las características
de las enzimas que es su especificidad.
En el sitio activo los grupos - R están próximos debido a los plegamientos originados por
las estructuras secundaria y terciaria, a pesar de que están alejados en la estructura
primaria de la enzima. Estos - R participan en la reacción, algunos uniendo y orientando el
sustrato y otros, formando o rompiendo enlaces.
Algunas enzimas presentan especificidad absoluta porque la topografía del sitio activo
además de ordenada es rígida lo que se ha esquematizado con el modelo de llave-
cerradura. Sin embargo, muchas enzimas presentan especificidad relativa porque pueden
catalizar el mismo tipo de reacción con más de un sustrato estructuralmente similar o
permitir la unión de un sustrato no complementario que igual permita la formación de
productos.
Material elaborado por F. Agius, O. Borsani, P. Díaz, S. Gonnet, P. Irisarri, F. Milnitsky y J. Monza. Bioquímica. Facultad de Agronomía.
modelo llave-cerradura
Las enzimas son catalizadores biológicos que tienen una configuración nativa
determinada por las fuerzas estabilizadoras de la proteína.
Cualquier factor externo que altere esas fuerzas va a modificar la actividad de la misma.
La gráfica muestra la variación de la actividad de una enzima mitocondrial (fumarasa) a
distintos pH.
Material elaborado por F. Agius, O. Borsani, P. Díaz, S. Gonnet, P. Irisarri, F. Milnitsky y J. Monza. Bioquímica. Facultad de Agronomía.
Los valores de pH o temperatura óptimos varían según la enzima pero en todos los casos
permiten que la estructura del sitio activo sea la más adecuada para la catálisis.
Todas las enzimas actúan en general de la misma manera, aún cuando el mecanismo de
acción de cada enzima es único. Los reactivos y los productos están en concentraciones
cientos o miles de veces mayores que las de la enzima en una reacción enzimática típica.
Por lo tanto, cada molécula de enzima cataliza la conversión en producto de varias
moléculas de reactivo. A los reactivos en bioquímica los llamamos sustratos y su
conversión en productos ocurre en el sitio activo de la enzima. El complejo que se forma
cuando el sustrato y la enzima se combinan se llama complejo enzima-sustrato (ES).
Entre la unión del sustrato a la enzima y la reaparición de enzima libre y productos se
producen una serie de pasos que se resumen a continuación:
E+S ES EP E + P
Cuando se miden las velocidades iniciales (vo) de una reacción enzimática con distintas
concentraciones de sustrato [S] en las mismas condiciones de pH y temperatura y
manteniendo constante la concentración de enzima [E], se obtiene una curva como se
representa a continuación:
Esta ecuación es una descripción cuantitativa de la relación entre la velocidad (vo) de una
reacción catalizada por una enzima, la concentración de sustrato [S] y dos constantes
Vmáx y Km (constante de Michaelis). Esta ecuación es una hipérbola equilátera con
coordenadas vo y [S] y donde Vmáx es la asíntota de la gráfica.
1 = Km . 1 + 1 (2)
vo Vmáx [S] Vmáx
La representación gráfica con coordenadas 1/vo y 1/[S] es una recta. El corte de la recta
con el eje de las ordenadas permite calcular Vmáx y el corte con el eje de las abscisas
permite calcular Km.
Ø Inhibición competitiva
generalmente una estructura similar a la del sustrato por lo que tiene posibilidad de formar
un complejo EIcomp que no permite formar el complejo ES. El complejo EIcomp no da
productos y disminuye el número de moléculas de E libres en condiciones de
interaccionar con el S. Por eso la cantidad de producto formado con la misma cantidad de
sustrato es menor en presencia de inhibidor competitivo.
La unión del inhibidor competitivo a la E es reversible y por eso se puede aumentar el
número de moléculas de E libre aumentando la [S].
Las sulfas que inhiben pasos metabólicos exclusivos de bacterias y el fluoruracilo que se
usa para tratar el cáncer, son ejemplos de inhibidores competitivos. A nivel de
bioregulación se puede citar como ejemplo la inhibición por producto cuando se empieza
a acumular el producto de una reacción.
En la figura se esquematizan la interacción enzima sustrato y el mecanismo de acción de
dos tipos de inhibidores.
Ø Inhibición no competitiva
La mayoría de las enzimas que catalizan reacciones sucesivas en las vías metabólicas
tienen cinética de Michaelis Menten. La regulación del conjunto de la vía está a cargo de
enzimas reguladoras o enzimas alostéricas que tienen una cinética distinta.
Las enzimas alostéricas catalizan pasos ubicados al principio de la vía o en puntos de
ramificación de la misma y su actividad está modulada por la unión de moléculas
fisiológicamente importantes que se conocen como efectores o moduladores.
Estas enzimas tienen muchas veces estructura cuaternaria y cada molécula de enzima
tiene varios sitios activos. La unión de una molécula de sustrato al primer sitio activo
produce un aumento de afinidad del segundo sitio por otra molécula de sustrato y así
sucesivamente (efecto cooperativo). Esto explica que la representación gráfica vo contra
[S] sea una curva sigmoidea y no una hipérbola como es el caso de las enzimas con
cinética de Michaelis Menten.
Además de los sitios activos, estas enzimas tienen sitios alostéricos a los que se unen
los moduladores alostéricos. La unión del modulador al sitio alostérico origina cambios
conformacionales que se trasmiten a través de la molécula de la proteína hasta el sitio
activo alterando las propiedades catalíticas de la enzima. Los que incrementan la
actividad catalítica, se conocen como moduladores positivos. Los que reducen o inhiben
la actividad catalítica son moduladores negativos.
Material elaborado por F. Agius, O. Borsani, P. Díaz, S. Gonnet, P. Irisarri, F. Milnitsky y J. Monza. Bioquímica. Facultad de Agronomía.
A B C D E F
• Modificaciones covalentes
Existen enzimas que se regulan por el pasaje de una forma activa a inactiva debido a la
formación o rotura reversible o irreversible de enlaces covalentes.
En muchos casos no es suficiente la modulación alostérica para la regulación de todas las
vías metabólicas. Por eso algunas enzimas tienen un mecanismo rápido de regulación
que permite el pasaje de una forma activa a una forma inactiva. Un ejemplo de este tipo
de regulación es la unión de un grupo fosfato a un – OH de un residuo de aminoácido de
la molécula de enzima que permite la transformación de una forma en otra. Esta es una
modificación covalente reversible.