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Cest une mthode de mesure des rapports masse-sur-charge (m/z) de molcules individuelles et ionises
Massif isotopique
Profil isotopique
13
= 13,003355 (1,10%)
= 1,007825 (99,98%)
= 2,014100 (0,02%)
16
17
O = 16,999131 (0,04%)
= 15,994915 (99,76%)
18
O = 17,999160 (0,20%)
14
N
= 14,003074 (99,63%)
15
= 15,000108 (0,37%)
MALDI
Matrix Assisted Lazer Desorption Ionization
Ionisation base sur lutilisation dune matrice :
Les peptides sont co-cristalliss avec la matrice (en
large excs) sur une cible. Peptides sous forme solide
Les ions se forment lors de tir laser sur le dpt:
La matrice absorbe lnergie du laser puis dsorption et
ionisation par protonation des molcules.
ESI
Electrospray Source Ionization
Les peptides ou protines arrivent sous forme liquide. A
lentre de la source, un sprayeur vaporise le liquide.
Sous laction conjugue de la pression dazote et du
chauffage, les goutelettes sont vapores, puis
explosent pour crer des ions multichargs
Type dions
En mode positif
MH+
Lensemble des peptides peuvent tre vus en une seule
analyse.
Gamme de masse
En mode positif
Multichargs : (M+nH)n+
Principalement des MH2 2+ et MH3 3+
un mme peptide ou protine peut tre vu sous
diffrents tat de charge sur le mme spectre.
complexit de lanalyse ncessit de sparer la
mixture en amont : par gradient dhydrophobicit nano
HPLC
400- 2500 dalton en m/z En rsolution mono-isotopique
Ce qui correspond une masse de
800 Da pour un compos dicharg 2+
Et 4500 Da pour un compos 3 x charg 3+
Ions immonium
Ions internes
Ions satellites
A retenir
Fragmentation prfrentielle en fonction du
type dionisation
MALDI
ESI
Y, b, Y-NH2,Y-H2O,x,z,a,c,ions immoniums, d, v, w, et
fragments internes
immoniums