Universidad Autnoma de Nuevo

Len
Facultad de Ciencias Qumicas
Qumico Farmacutico Bilogo

OBTENCIN DE RIBOFLAVINA ( VITAMINA B2), POR PROCESO DE

FERMENTACIN SUMERGIDA EN MEDIO DE PRODUCCIN DE AGUA
DE
COCIMIENTO DE MAZ Y ACEITE DE SOYA UTILIZANDO COMO
MICROORGANISMO PRODUCTOR SACCHAROMYCES CEREVISIAE
Equipo:
Mireya Abigail Santiago Reyes
Brenda Alejandra Castillo Navarro
Brandon Efrn Caballero Morales
Jorge Isaac Ramrez Seplveda
Erik Bernardo Lin Vzquez

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Profesor: M.C Julio Silva Mendoza

OBTENCIN DE RIBOFLAVINA ( VITAMINA B2), POR PROCESO DE

FERMENTACIN SUMERGIDA EN MEDIO DE PRODUCCIN DE AGUA DE
COCIMIENTO DE MAZ Y ACEITE DE SOYA UTILIZANDO COMO
MICROORGANISMO PRODUCTOR SACCHAROMYCES CEREVISIAE

OBJETIVO GENERAL

Obtencin de riboflavina ( Vitamina B2), por el proceso de fermentacin

sumergida en medio de produccin de agua de cocimiento de maz y

aceite de soya utilizando como microorganismo productor
Saccharomyces cerevisiae.

OBJETIVOS ESPECFICOS
Recolectar de la industria alimenticia agua de cocimiento de maz y esta enriquecerla con aceite de

soya, para usarlo como medio de produccin en la obtencin de metabolitos de inters como es la
vitamina B2.
Optimizar las condiciones de la cintica de crecimiento microbiana en el proceso de fermentacin

sumergida para la obtencin de la vitamina B2. 2.

Identificar la vitamina B2 obtenida en el caldo de produccin por fluorescencia en cmara UV.
Cuantificar la vitamina B2 obtenida en el caldo por el mtodo oficial espectrofotometrico.

INTRODUCCIN

vitamina hidrosoluble

RIBOFLAVINA
B2

Es un compuesto
fluorescente de color
amarillo anaranjado, soluble
en agua, termoestable y lbil
a la accin de la luz.
Es el compuesto matriz del flavn adenn dinucletido (FAD) y el flavn mononucletido
(FMN) 2 coenzimas que desempean un papel importante en las reacciones de oxidoreduccin

CARENCIA DE RIBOFLAVINA

Genera trastornos oculares, bucales y cutneos.

Bucales: inflamacin de la comisura de la boca, labios resecos, lisos y
brillantes, inflamacin de la lengua (glositis) y dolor de garganta.
Cutneos: dermatitis seborreica o cada del cabello por enfermedad de la piel

(alopecia).Otros sntomas son la anemia, la cicatrizacin lenta y la fatiga

OBTENCIN DE RIBOFLAVINA

La riboflavina puede ser obtenida por biosntesis sometiendo medios nutritivos escogidos a fermentacin por

cultivos puros de varios microorganismos. Se conocen tres grupos de microorganismos que sintetizan riboflavina
en cantidades importantes:
Bacterias del grupo butanol-acetona, del que el representante principal es el

Clostridium acetobutylicum.
Ciertas levaduras del gnero Cndida.
Dos hongos afines a las levaduras; Eremothecium ashbyii y Ashbya
gossypii

INTRODUCCIN
En esta investigacin se realizaron una

serie de ensayos para la obtencin de

riboflavina vitamina B2 mediante un
mtodo de biosntesis alternativo, como
es la utilizacin de la biotecnologa
microbiana

Se realizo un ensayo para la obtencin de riboflavina (vitamina B2)

utilizando un mtodo de fermentacin biotecnolgico.

En la fermentacin se tomaran en cuenta las siguientes condiciones:

aireacin,

agitacin,

pH.

El medio de produccin ser; agua de cocimiento de maz,

enriquecido con aceite de soya, y como microorganismo
productor la levadura Saccharomyces cerevisiae.

MARCO TERICO
Valor nutricional del agua de maz
La realizacin de las aguas residuales derivadas del
proceso de mixtamalizacin, se basa por una parte en
que estas aguas residuales contienen sobrantes propios
del maz, as como restos de cal que fue usada durante la
coccin. Esta materia orgnica e inorgnica es una fuente
de contaminacin desde el punto de vista ambiental.

La utilizacin del agua de cocimiento de maz tiene por

objeto aprovechar una buena cantidad de sustancias
orgnicas incluyendo las protenas, carbohidratos y lpidos
liberados del grano de maz, durante el proceso de
coccin y que dan por resultado un medio orgnico rico
en nutrientes orgnicos.

La aplicacin del estudio cintico de crecimiento microbiano

permite la utilizacin de este medio para la implementacin de
un mtodo de obtencin de vitamina B2 utilizando como
microorganismo de fermentacin la levadura Saccharomyces
cerevisiae.

ELEMENTOS QUMICOS DEL AGUA DE MAZ

DISEO METODOLGICO

PROCEDIMIENTO PARA
PREPARAR EL MEDIO DE
FERMENTACIN

Recolectar el
agua de
coccin de
maz.

Regular
pH hasta
4.5

Filtrar

Agitar
hasta
disolver
slidos

Separar el
lquido por
decantacin

Agregar aceite
de soya,
peptona,glicina
y D-glucosa

Esterilizar por
autoclave : 121C
por 15 minutos a
15 libras de
presin (psi)

COMPOSICIN DEL MEDIO DE FERMENTACIN

PROCEDIMIENTO PARA
ADAPTAR LA
LEVADURA
Saccharomyces cerevisiae
AL MEDIO DE
FERMENTACIN.

Pesar 10 g de levadura
(Saccharomyces
cerevisiae)

Inocular la levadura en
100 ml de medio de
fermentacin

Agitar el medio
inoculado.

Colocar el matraz
erlenmeyer que
contiene el medio
inoculado, sobre el
aparato de agitacin.

Incubar durante 24h a

temperatura ambiente,
con agitacin constante
(proteger de la luz).

PREPARACIN DEL BIORREACTOR

Se usa como biorreactor un kitazato de 1000 ml con
tapn de caucho y varilla hueca de vidrio para
aireacin, este se lavar con agua, detergente, y se desinfectar
con alcohol isoproplico.

El biorreactor con el medio de fermentacin inoculado con el

microorganismo Saccharomyces cerevisiae se cubrir con papel
carbn para protegerlo de la luz, se crearan las condiciones de
aerobiosis y agitacin, luego se colocar el biorreactor
protegido en el hot plate.

PRODUCCIN Y DETERMINACIN DE RIBOFLAVINA

1) Preparar un Kitazato conteniendo 800ml de
medio de cultivo de fermentacin estril (agua
de coccin de maz).
2) Inocular con 100ml de inoculo preparado
segn procedimiento.
3) Agitar para obtener homogenizacin
completa.
4) Incubar en condiciones de agitacin y
aeracin a temperatura ambiente durante 8
das.
5) Retirar una muestra cada 24 horas.

DETERMINACION ANALTICA DE BIOMASA

DETERMINACION DE BIOMASA POR EL METODO PESO SECO.

Lavar cinco tubos de ensayo
de 15 ml rotular como: 0h,
24h, 48h, 72h y 144h y pesar,
secar a 105 C por 30
minutos, enfriar en
desecador.

El mtodo para medir el

crecimiento
microbiano
consiste en secar lentamente
volmenes
conocidos
de
cultivo celular hasta obtener un
peso constante. Cuando se
trata de levaduras, estas
sedimentan rpidamente.

Enfriar los tubos

en desecador
por treinta
minutos.

Pesar los tubos en

balanza analtica y
por diferencia de
peso determinar
biomasa.

Pesar los tubos

previamente tarados
en balanza analtica,
anotar peso.

Secar en estufa la masa

celular a una temperatura
de 105 C por 10 horas
hasta que el peso sea
constante.

Colocar en cada tubo

previamente pesado 10 ml
de muestra de cada tiempo
de fermentacin y
centrifugar a 4000 RPM por
15 minutos.

Decantar el
lquido
sobrenadant
e.

FLUORESCENCIA DE RIBOFLAVINA OBTENIDA EN EL MEDIO DE

PRODUCCIN.
Rotular 6 Beaker de 10 ml como sigue: 0h, 24h, 48h, 72h,
144h.
Colocar 8 ml de muestra de filtrado en el Beaker
correspondiente.
Colocar las muestra en cmara UV cerrar y encender
la lmpara.
Apagar las luces del laboratorio para observar mejor la
fluorescencia.
Observar la intensidad de fluorescencia de cada
muestra.
Llevar un blanco con agua destilada.

Muestra

RESULTADOS PROMEDIOS DE BIOMASA EN ENSAYOS 1, 2 Y 3.

La grfica muestra la generacin de

clulas microbianas promedio de los
ensayos de fermentacin 1,2 y 3. La
tendencia de la curva va en ascenso
hasta las 72 horas, donde alcanza un
valor mximo de 9.63 g/L de biomasa,
siguiendo la tendencia de la curva de
crecimiento.

RESULTADOS DE IDENTIFICACION DE VITAMINA B2 POR

FLUORESCENCIA EN CAMARA UV.
La grafica muestra el comportamiento
de la Fluorescencia en los ensayos de
fermentacin 1,2 y 3. Se observa el
aumento desde las 0 horas hasta las 72
horas, donde alcanza su mxima
intensidad y la disminucin a las 144
horas. Con esto se demuestra la
presencia de riboflavina o vitamina B en
los ensayos ya que esta tiene la
caracterstica de identificacin de ser
fluorescente.

RESULTADOS DE VELOCIDAD ESPECFICA DE CONSUMO DE SUSTRATO

DURANTE EL PROCESO DE PRODUCCIN DE VITAMINA B2.
La grafica muestra la relacin
existente entre mg de sustrato
consumido entre mg de biomasa
que se forma en un litro de medio
de fermentacin. A partir de las 24
horas es mayor la cantidad de mg
de sustrato consumido que los mg
de biomasa que se forman
obtenindose la mxima velocidad
especfica de consumo de sustrato
a las 72 horas de haber iniciado la
fermentacin.

RESULTADOS DE CONCENTRACIN DE VITAMINA B2 DURANTE EL

PROCESO DE PRODUCCIN.

La grafica muestra que a partir de las 24 a

72 horas se observa un incremento en la
concentracin de vitamina B2 alcanzando
su mximo valor a las 72 horas con una
produccin de 2.48 mg /L de medio.

CONCLUSIONES
La biomasa obtenida en el caldo de fermentacin alcanza un valor mximo de 9.63 g/L a las 72 horas, mostrando

as, el desarrollo metablico y los procesos bioqumicos de la Saccharomyces cerevisiae.

En el caldo de fermentacin los valores de pH se mantienen dentro del rango ptimo de (3.5 a 4.5 pH) en el que

la Saccharomyces cerevisiae se desarrolla funcionalmente.

CONCLUSIONES
El agua de cocimiento de maz enriquecida con aceite de soya es un medio de fermentacin adecuado para la

Saccharomyces cerevisiae, por que permite adquirir los carbohidratos necesarios que son transformados en energa
produciendo, durante la oxidacin aerbica el proceso de biosntesis con el que se alcanza su mxima produccin
de riboflavina a las 72 horas, obteniendo un valor de 2.48 mg / L.
La fluorescencia observada en los ensayos de fermentacin confirma la produccin de vitamina B2, alcanzando su

mxima intensidad a las 72 horas el cual es el tiempo de mxima produccin de riboflavina.