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MINISATLITES. Estos marcadores fueron los primeros VNTR estudiados, en ellos el motivo
repetido no siempre es idntico y su uso fue inicialmente para pruebas de paternidad por
DNA fingerprint. Esta es una metodologa multilocus, es decir se detectan muchos loci que
poseen el minisatlite a la vez, pero no se sabe en qu regin del genoma en que se
encuentran. La muestra de DNA genmico de cada individuo es digerida con enzimas de
restriccin, nuevamente los fragmentos son separados por tamao en una electroforesis,
transferidos a una membrana e hibridados con sondas que en este caso corresponden al
motivo del minisatlite (southern blot). El producto final del DNA fingerprint es un patrn de
bandas que es especfico de un individuo (normalmente entre el 15 al 20% de las bandas son
compartidas por dos individuos debido al azar). Las bandas reveladas por esta tcnica tienen
un patrn de herencia mendeliana, pues en promedio la mitad de las bandas son derivadas de
cada progenitor. Al igual que el RFLP los MINISATLITES han perdido popularidad respecto
de los MICROSATLITES debido a las dificultades tcnicas en desarrollarlos.
MICROSATLITES. Este tipo de marcadores son ms polimrficos que los minisatlites y
poseen la ventaja que pueden ser analizados por PCR. En la amplificacin por PCR de los
microsatelites, los partidores utilizados se ubican en las regiones genmicas que rodean el
microsatlite propiamente dicho. Por lo tanto, estos marcadores son especie especficos
puesto que las secuencias flanqueantes varan de una especie a otra. La metodologa
consiste en utilizar partidores especficos (obtenidos de otros estudios o desarrollados por uno
mismo) para amplificar el microsatlite por PCR, hacer electroforesis en geles de
poliacrilamida de las muestras amplificadas y teir los fragmentos con una tcnica con
plata. Actualmente, el anlisis de los microsatlies se puede realizar en un secuenciador
automtico marcado uno de los partidores con un fluorforo que emite una coloracin
especfica que permite identificar los alelo del microsatlite con presicin. Los marcadores
microsatlites muestran un patrn de herencia codominante, es decir siempre se puede
identificar los individuos heterocigotos.
PCR-RFLP. Esta metodologa combina la amplificacin por PCR de una secuencia conocida
de DNA (un locus) usando partidores especficos, seguido de la digestin del amplificado con
enzimas de restriccin que permiten cortar el fragmento amplificado en algunos individuos y
no en otros, detectando el polimorfismo. ste revelado en electroforesis en gel de agarosa al
ser teido con bromuro de etidio.
RAPD (Amplificacin Aleatoria de Fragmentos Polimrficos de DNA). En un ensayo de
RAPD se utiliza un slo partidor de secuencia arbitraria (tpicamente de 10 bases o 10-mer)
para realizar un PCR (en un PCR ordinario se usan dos partidores). Los partidores son
diseados para contener un porcentaje de G+C de 50 a 70%. Estos partidores se unen a
sitios complementarios presentes en el DNA genmico bajo estudio, si dos partidores se unen
en sitios presentes en hebras opuestas, dentro de una distancia amplificable (normalmente de
2500 bases) se amplifica un fragmento discreto. El nmero de fragmentos amplificados vara
entre 1 y 10 por partidor, cada fragmento corresponde a un locus donde en algunos individuos
hay amplificacin y en otros no la hay, no se puede distinguir el homocigoto del heterocigoto
por lo tanto se detectan como marcadores dominantes.
En esta Tabla se muestra un resumen de los principales marcadores polimrficos de DNA y sus
caractersticas ms importantes. (Tomado de Cushwa y Medrano, Animal Biotechnology 7(1):11-31, 1996)
Caractersticas
RFLP
Minisatelites
RFLP-PCR
Microsatelites
RAPD
Principio
Tipo de
polimorfismo
Cambios de bases
en sitios de
restriccin,
inserciones y
deleciones
Cambios de bases,
inserciones y
deleciones
Diferencias en
longitud debido a
nmero de unidades
repetidas
Cambios de bases
en sitios de
restriccin,
inserciones y
deleciones
Cambios de bases
en sitios de unin del
partidor al templado
inserciones y
deleciones
Polimorfismo
Moderado
Bajo
Alto
Moderado
Moderado a Bajo
N loci detectados
1a3
Muchos
1 a 10
Dominancia
Codominante
Dominante
Codominante
Codominate
Dominante
Conocimiento del
genoma estudiado
Ninguno
Ninguno
Si
Si
No
Dificultad
tcnica
Intermedia
Intermedia
Baja
Baja
Intermedia
Costo de
desarrollo
Intermedio
Intermedio
Alto
Alto
Bajo