Producido por Neogen Corp (www.neogen.com). Empresa norteamericana con acreditacin ISO 9001: 2000 .

El mismo fabricante de los kits VERATOX histamina y REVEAL histamina.

AHORA no necesita ser un experto en Laboratorio para detectar en forma muy rpida y segura Histamina en pescado y conservas.

VENTAJAS.

Combina lo mejor de la tecnologa de los mtodos producidos por Neogen Corp, para dar lugar a un mtodo de 3 pasos que da
resultados 5 minutos despus de obtener el extracto. Es el mtodo mas rpido presente en el mercado.

No hay reacciones cruzadas con otras aminas biogenicas.

Especificidad: 100% y Sensibilidad: 100%

AUSPICIOSAMENTE COMENTADO - FDA 2011

Comparison study of three rapid test kits for histamine in fish: BiooScientific MaxSignal enzymatic assay, Neogen Veratox ELISA, and
the Neogen Reveal Histamine Screening test. (FDA 2011 ). James Hungerford, , Wen-Hsin Wu- Applied Technology Center, Pacific Regional Laboratory, Northwest, FDA, 22201 23rd Dr. S.E., Bothell, WA 98021, United States

The LFIC kit Reveal was also found to be simpler and easier to use than ELISA kits, having only one critical pipetting step, requiring no
acylation, and only minimal sample manipulation. If accelerated sample removal and grinding could be implemented and validated, the
LFIC kit Reveal appears to have excellent potential for onsite testing . Reveal also showed no interference at levels of histidine, agmatine, anserine, and carnosine expected in sh sample

Todos el kit puede conservarse a temperatura ambiente.

COMPONENTES DEL KIT PARA 25 MUESTRAS

25 tiras de deteccin de histamina

25 frascos con etiqueta azul prellenados con 7 ml de Buffer diluente de muestra
25 copas que sirven para colocar el extracto de muestra ya listo para uso y la
correspondiente unidades de deteccin de histamina.

METODO DE TRABAJO
PREPARACION DE LA MUESTRA.
Peces histamnicos grandes: La seccin anterior y baja del lomo es la mas representativa ( FDA . Fish and Fishery Products Hazards and
Controls Guidance. Fourth Edition April 2011)
Atn enlatado (Conserva de pescado). AOAC937.07b: Coloque todo el contenido de la lata, tanto la carne como el lquido, en la mezcladora. Mezcle hasta que adquiera una consistencia homognea. Almacene las muestras a una temperatura de 2 a 8 C hasta su rpido
anlisis.
Nota: La norma FDA anterior indicaba tomar 3 pedazos de tejido como representativo de 1 pez
Peces histaminicos AOAC 937.07: Limpie y eviscere tres pescados. Haga tres cortes transversales de 2,5 cm (1 pulgada) de grosor: uno
detrs de las aletas pectorales, otro a la mitad del oricio de respiracin y el tercero detrs del oricio de respiracin. Retire los huesos de
las rebanadas, mezcle o muela o corte muy namente las muestras combinadas hasta que sean homogneas. Almacene las muestras a
una temperatura de 2 a 8 C hasta su rpido anlisis.
** Siempre consulte con el Inspector Sanipez que visite su planta en cuanto a la toma de muestra y el equipamiento necesario para
procesarla

METODO DE TRABAJO
1.- OBTENCION DEL EXTRACTO FILTRADO
En un frasco plstico con tapa, adicione 10 gramos de muestra representativa previamente homogenizada. Agregue 190 ml de agua
destilada.
A.
Si est evaluando 1 o pocas muestras agite manualmente el o los frascos con la mezcla en forma continua durante 2 minutos
o ms. Esperar 1-2 minutos a que aparezca sobrenadante. Filtrar solo el sobrenadante.
B.
Si est evaluando muchas muestras a la vez, use este mtodo , el cual le permite trabajar muchos frascos en forma manual:
Ponga el timer o cronometro a 5 minutos. Agitar vigorosamente por 20 segundos el primer frasco. Al termino agite vigorosamente por 20 segundos el segundo frasco y asi sucesivamente. . Si le queda tiempo espere a que se complete los 5 minutos.
Comenzar a agitar nuevamente cada uno de los frascos por 20 segundos. Esperar a que se completen los 5 minutos. Comenzar
a agitar nuevamente cada uno de los frascos por 20 segundos. Esperar hasta que observe que se ha producido sobrenadante .
Filtrar solo el sobrenadante.
C.
Si usa licuadora o un equipo
profesional de agitacin de frascos.
El tiempo total de agitacin es 1
minuto. Esperar a que aparezca sobrenadante. Filtrar solo el sobrenadante
Como filtrar? Coloque la jeringa con
ltro encima de un tubo , saque el
embolo de la jeringa y agregue solo
el sobrenadante dentro de la jeringa con ltro (si no sabe cmo fabricarlas. consulte con nosotros). Ponga el embolo y presione para
que pase algo de extracto filtrado hacia el tubo.
En el kit de extraccin se incluye frascos plsticos con tapa, jeringas con filtro y tubos con tapa para recibir extracto filtrado. Los
materiales se pueden lavar y reusar. Tambin puede ltrar usando embudo y papel de ltracin rpida.
Nota: Agua es agua destilada o Agua San luis sin gas o similar. No usar agua de cao o agua desionizada o agua destilada para batera.
Si usa el agua incorrecta tendr resultados anormalmente altos.
2. DILUCION DEL EXTRACTO FILTRADO
La cantidad de extracto ltrado que coloque en el frasco con diluente de muestra, le permitir determinar diferentes niveles de histamina.
Como pautas puedo indicarle:

Puede elegir cifras como 16 ppm si desea conocer si la materia prima es realmente fresca. Si utiliza muestras composito evale
a 16 ppm para conocer si la muestra cumple o no con el tope composito FDA de 17 ppm.

Puede elegir 50 ppm si desea determinar si la muestra ya ha producido niveles signicativos de histamina y si se ha excedido
o no sobre el tope FDA para anlisis de muestra individual
.

Nivel de histamina a detectar Dilucin de la muestra ltrada en el frasco pre-llenado con los 7 ml de diluente de
muestra.
100 ppm

Colocar 50 ul de sobrenadante el frasco etiqueta azul . Tape y agite hasta mezclar.

50 ppm

Colocar 100 l de sobrenadante en el frasco etiqueta azul. Tape y agite hasta mezclar.

25 ppm

Colocar 200 l de sobrenadante en el frasco etiqueta azul. Tape y agite hasta mezclar

16 ppm

Colocar 300 l de sobrenadante en el frasco etiqueta azul. Tape y agite hasta mezclar.

Desea determinar cifras de histamina diferentes a las indicadas Consltenos

3. LA PRUEBA EN SI
Usando 1 punta de pipeta nueva por cada muestra transera 200 ul (son 2 pipeteadas con la pipeta de 100 ul)
del frasco etiqueta azul donde mezclo el sobrenadante ltrado con el buffer , hacia la copa para extracto de
muestra que viene en el kit
Coloque la unidad de deteccin en su correspondiente copa. Observe que la tira de deteccin tiene un extremo con la imagen de 2 flechas lo que indica que esa seccin se sumerge.

La tira (unidad de deteccin ) debe permanecer exactamente 5 minutos dentro de la copa.

(En ese lapso de tiempo, notara que la tira comienza a absorber el lquido y casi hacia el nal del tiempo
observara la aparicin de la las lnea de color)
INTERPRETACION DEL RESULTADO
Al trmino del tiempo, retire la o las tiras y colquela cuidadosamente encima de un papel blanco, puesto
sobre una mesa (esto facilitara la lectura.)

La lnea Control siempre debe aparecer e indica

que la prueba es vlida.
Fjese en la intensidad de color de la lnea que se
formo en su prueba

La lnea en la seccin Prueba indica el resultado.

En este caso como la intensidad de color es igual o ms
intensa a la lnea Control, el resultado es que la muestra
est por debajo de .

La lnea en la seccin Prueba indica

el resultado.
Si la intensidad de color es menor a la
lnea Control o no hay lnea coloreada. El resultado es que la muestra est
por encima de .
Si corri la prueba a 25 ppm, entonces el
resultado es que la muestra evaluada es
mayor a 25 ppm de histamina.

Si corri la prueba a 15 ppm, entonces el resultado es que

la muestra evaluada es menor a 15 ppm de histamina.

NO HAGA LECTURAS DESPUES DE LOS 6 MINUTOS, PORQUE OBTENDRA RESULTADOS ERRADOS POR
SOBREDESARROLLO DE LA PRUEBA.
INMEDIATAMENTE DESPUES DE QUE UD OBTUVO SU RESULTADO, COLOQUE LA TIRA DENTRO DE PAPEL TOALLA O PAPEL ABSORVENTE DOBLADO VARIAS VECES Y PRESIONE HASTA ELIMINAR TODO RESTO DE LIQUIDOS QUE QUEDE DENTRO DE LA TIRA . CAMBIE EL
PAPEL Y REPITA EL PASO ANTERIOR HASTA ASEGURARSE DE QUE LA TIRA ESTE REALMENTE SECA A FIN DE QUE LOS COLORES OBTENIDOS PERSISTAN POR ALGUNOS MESES

4. REGISTRO DE RESULTADOS.
ES UNA NORMA QUE SIEMPRE DEBE QUEDAR UNA EVIDENCIA DE UNA PRUEBA REALIZADA ,
Por ello es adecuado CREAR UN CUADERNO REPORTE DE RESULTADOS . Pegue la tira previamente secada y a su costado
anote :
Da y hora en que realizo la prueba
Lote del kit REVEAL usado ( ese dato esta en la caja)
Tipo de muestra evaluada.
Persona que realizo la prueba.
Resultado obtenido ( mayor o menor de 16 ppm, etc ).

Dr. Juan Carlos Flores N.

MULTIVET SRL