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m.
Primera Edicin
First Edition
ALIMENTOS.
PLACA POR
CDU: 614.31:579.67:579.84
ICS: 07.100.30
Norma Tcnica
Ecuatoriana
Opcional
CIIU: 9320
AL 01.05-310
NTE INEN
1 529-11:98
1998-01
Instituto Ecuatoriano de Normalizacin, INEN Casilla 17-01-3999 Baquerizo Moreno E8-29 y Almagro Quito-Ecuador Prohibida la reproduccin
1. OBJETO
1.1 Esta norma describe el mtodo de recuento en placa por siembra en profundidad para
determinar el nmero de clulas viables de Enterobacteriaceae presentes en un gramo o
centmetro cbico de muestra.
2. ALCANCE
2.1 Este mtodo es indicado para productos que contengan una alta carga de Enterobacteriaceae.
3. DEFINICIONES
3.1 Enterobacteriaceae. Familia de microorganismos, cuyos miembros son bacilos Gram negativos
mviles por flagelos peritricos o inmviles, capsulados o no, no esporulados, aerobios y
anaerobios facultativos; fermentan la glucosa generalmente con produccin de gas, reducen los nitratos a
nitritos; son catalasa positivos, excepto un serotipo de shiguela; son oxidasa negativos,
comensales, saprofitos, o patgenos intestinales.
3.2 Recuento de Enterobacteriaceae. Es la determinacin del nmero de colonias tpicas de
3
Enterobacteriaceae que se desarrollan a partir de un gramo cm de muestra, utilizando medios
selectivos.
4. RESUMEN
4.1 Este mtodo se basa en la capacidad de las Enterobacteriaceae, de producir cidos a partir de
la glucosa, y utiliza la tcnica del recuento en placa por siembra en profundidad, en agar
5.1 Materiales. La vidriera debe resistir esterilizaciones repetidas y todo el material debe estar
perfectamente limpio y estril.
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(Contina)
DESCRIPTORES: Productos alimenticios, anlisis microbiolgico, contaje, enterobacteriaceae
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5.1.7 Frascos de boca ancha de 250, 500 y 1000 cm con tapas de rosca autoclavables.
5.1.8 pH-metro
5.1.9 Erlenmeyer de 500 y 1000 cm
6.1 Preparar la muestra segn uno de los procedimientos indicados en la NTE INEN 1 529-2. Toma y preparacin
de muestras.
7. PROCEDIMIENTO
7.1 Revitalizacin de las Enterobacteriaceae. Agitando de vez en cuando, mantener los tubos de las
diluciones decimales a temperatura del laboratorio (20 a 25 C), por dos horas. Esta etapa aplicar a
alimentos que han sufrido tratamientos de conservacin (qumicos o fsicos).
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7.1.1 Realizar las diluciones en caldo soya triptona a partir de la suspensin madre (10 ); utilizar una nueva
pipeta estril para cada dilucin.
7.2 Siembra. Utilizando una pipeta estril, de cada una de las diluciones decimales pipetear, por
3
duplicado, alcuotas de 1 cm en placas Petri adecuadamente identificadas. Iniciar por la dilucin de
menor concentracin.
3
7.2.1 Inmediatamente, verter en cada una de las placas inoculadas aproximadamente 20 cm de agar
(Continua)
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7.2.3 Una vez solidificado el agar, invertir las placas e incubarlas a 37 C por 16 a 18 horas.
(Continua)
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8. CALCULOS
N=
C
V (n1 + 0,1n 2 )d
En donde:
C = suma de las colonias de enterobacterias contadas o calculadas en todas las placas elegidas;
n1
Ejemplo:
Volumen sembrado
= 1 cm
Dilucin 10
-2
Dilucin 10
-3
= 33 y 28 colonias
Nmero
160 + 140 + 33 + 28
1 (2 + 0,1 x2) 10 -2
361
0,022
8.3 Redondeo de nmeros. El valor obtenido redondear a dos cifras significativas, de la siguiente
manera (NTE INEN 52):
8.3.1 Si el tercer dgito, empezando por la izquierda es menos de cinco, mantener inalterado el
segundo dgito y reemplazar por ceros los restantes. Por ejemplo, si el valor calculado fuere 16
4
409, redondearlo a 16 000 y expresar como 1,6 x 10 . Si el tercer dgito, empezando por la
izquierda es superior a cinco, aadir una unidad al segundo dgito. Por ejemplo, si el valor obtenido
4
fuere 16 900, redondearlo a 17 000 y expresar como 1,7 x 10 .
(Contina)
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8.3.2 Si el tercer dgito empezando por la izquierda es igual a cinco y es seguido de por lo menos, un dgito,
aadir una unidad al segundo dgito y reemplazar por ceros los restantes. Por ejemplo, si el valor
4
obtenido fue 16 540, redondearlo a 17 000 y expresar como 1,7 x 10 . Si el tercer dgito es igual a cinco y no
le sigue otro (s) dgito (s), lo es solo por ceros, aadir una unidad al segundo dgito, si ste es
2
impar; si es par cero, conservarlo inalterado. Ejemplo, 175 redondear a 180 y expresar como 1,8 x 10 ; 16
4
500 redondear a 16 000 y expresar como 1,6 x 10 .
8.4.4 Si las placas sembradas con la dilucin menos concentrada (productos slidos o lquidos)
presentan ms de 150 colonias, expresar el resultado de la siguiente manera:
3
(Continua)
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10.1 En el Informe del ensayo Indicar la norma de referencia, la temperatura de incubacin, los
resultados obtenidos, todas las condiciones operativas no especificadas en esta norma o aquellas
consideradas como opcionales y los incidentes que puedan haber influenciado en el resultado.
Adems, se debe Incluir toda la informacin necesaria para la completa Identificacin de la muestra.
(Continua)
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APNDICE Z
Animal Feeding Stuffs. Enumeration of microorganisms. Colony count technique at 30 C. British Standards
Institution. London, 1991.
Norma Britnica BS 5763: Part 10: 1986 (ISO 7402 - 1985). Mic r obiologic al Examination of Food and
Animal Feeding stuffs. Enumeration of Enterobacteriaceae. British Standards Institution. London, 1986.
Norma Britnica BS 4285: Section 2.1: 1984 Microbiological Examination for Dairy Purposes. Section 2.1
Enumeration of microorganisms by poured plate technique for colony count. British Standards Institution.
London, 1984.
Norma Internacional ISO 5552: 1979. Meat and meat products. Detection and Enumeration of
Enterobacteriaceae (Reference methods). International Organization for Standardization. Switzerland, 1979.
Mossel, D.A.A., Moreno Garca B. "Microbiologa de los Alimentos',1ra. Edicin Espaola. Acribia, Zaragoza
- Espaa, 1982.
Centro Nacional de Alimentacin y Nutricin. "Mtodos de Examen Microbiolgico para Alimentos y Bebidas",
Normas recomendadas. Manual Prctico, Madrid 1976.
Mossel D.A.A, Quevedo F. "Control Microbiolgico de los Alimentos". Universidad Nacional Mayor de San
Marcos. Lima, Per.
ICMSF. "Microbiologa de los Alimentos 1 - Tcnicas del Anlisis Microbiolgico". Acribia Zaragoza Espaa.
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INFORMACIN COMPLEMENTARIA
Documento:
Fecha de aprobacin:1994-05-31
NOMBRES:
INSTITUCIN REPRESENTADA:
SUBDIRECTOR TECNICO
DIRECCION DE CERTIFICACION Y CONTROL
DE CALIDAD
DIRECCION DE PROTECCION AL
CONSUMIDOR
DIRECCION DE ENSAYOS QUIMICOS,
MICROBIOLOGICOS Y BROMATOLOGICOS
DIRECCION DE PROTECCION AL
CONSUMIDOR Y DIRECCION DE
NORMALIZACION
DIRECCION DE ENSAYOS QUIMICOS,
MICROBIOLOGICOS Y BROMATOLOGICOS
Otros trmites:
El Consejo Directivo del INEN aprob este proyecto de norma en sesin de 1995-01-10
Oficializada como: OPCIONAL
Registro Oficial No. 229 de 1998-01-06