UTESA - Recinto Mao

ASIGNATURA:
Biotecnologa

TEMAS:
EXAMEN FINAL

PRESENTADO POR:
Elvis David Pea Gonzlez 1-13-7247

PRESENTADO A:
Alberto Rodrguez

FECHA:
11 de Abril del 2016
Mao, Valverde, R.D.

Introduccin
A modo de introduccin se puede decir que la biotecnologa es un
rea multidisciplinaria, que emplea la biologa, qumica y procesos,
con gran uso en agricultura, farmacia, ciencia de los alimentos,
ciencias forestales y medicina.

La biotecnologa tiene

sus

fundamentos

en

la tecnologa que

estudia y aprovecha los mecanismos e interacciones biolgicas de

los seres vivos, en especial los unicelulares, mediante un amplio
campo multidisciplinario.

La micropropagacin es el conjunto de tcnicas y mtodos

de cultivo de tejidos utilizados para multiplicar plantas asexualmente
en

forma

rpida,

eficiente

en

grandes

cantidades. La

micropropagacin se utiliza para multiplicar o propagar plantas

nuevas,

tales

como

aquellas

creadas

por ingeniera

gentica, mutagnesis o mejoramiento gentico. Se utiliza tambin

la micropropagacion para obtener plantas libres de enfermedades
(tales como virosis) u obtener grandes cantidades de plantas que no
se propagan eficientemente.

Artculos cientficos relacionados con la biotecnologa,

micropropagacin, o cultivo de tejido
Biotecnologa
Articulo No. 1: Alimentos ms nutritivos por biotecnologa
Se los llama biofortificados por sus propiedades nutricionales
mejoradas. Aportan vitaminas y benefician la salud en poblaciones

con una alimentacin pobre en nutrientes.

Llevar

una

dieta

equilibrada

que

cubra

las necesidades

nutricionales requiere informacin y la posibilidad de acceder a una

diversidad de alimentos. Cuando esto no ocurre, y la dieta resulta
carente de nutrientes esenciales, devienen problemas de salud que
pueden ser graves. La biotecnologa, mediante la produccin de
alimentos modificados genticamente, ofrece soluciones puntuales
a casos de malnutricin severa por carencia de vitaminas. A pesar
de sus beneficios, los alimentos bio-fortificados despiertan
polmica.
Alimentos para mejorar la salud
Las tcnicas de ingeniera gentica permiten mejorar cultivos no
solo en beneficio de los agricultores, que ven aumentados sus
rendimientos, sino tambin con el fin de satisfacer directamente las
necesidades de los consumidores. Por ejemplo, se estn
desarrollando alimentos ms sanos a travs de la eliminacin o la
disminucin de los niveles de toxinas o alrgenos, y la modificacin
en la proporcin de nutrientes. Entre ellos:
gluten apto para celacos
mandioca (yuca) con menor contenido de txicos
soja menos alergnica
tomates con mayor contenido de sustancias antioxidantes
cultivos oleaginosos con mayor contenido de cidos grasos

saludables
arroz dorado rico en vitamina A
Arroz con vitamina A
El arroz dorado debe su nombre al color amarillo del grano. Esa
tonalidad se origina ya que la planta contiene mayor proporcin del
pigmento beta-caroteno, en comparacin con el arroz tradicional.
El beta-caroteno es el mismo que le da su color a la zanahoria y al
tomate, entre otros. Se trata de un tipo de arroz al que se le ha
introducido la informacin gentica para fabricar ms betacaroteno, que realza su color.
Esta modificacin no responde a un fin gastronmico, sino de
salud. El beta-caroteno es el precursor de la vitamina A, un
nutriente al que se le atribuyen propiedades beneficiosas para la
visin. El objetivo de fabricar el arroz enriquecido con vitamina A es
aportar este nutriente a las poblaciones que no lo obtienen
diariamente en la cantidad necesaria. El arroz es un alimento
bsico de muchas de las reas superpobladas de frica, Asia y
Amrica

Latina,

esenciales, explica

pero
el

es

deficitario

en

informe Alimentos

varios
y

nutrientes

tecnologa

de

modificacin gentica publicado por el Instituto Internacional de

Ciencias de la Vida.
En particular, la falta de vitamina A tiene graves consecuencias en
la poblacin infantil. Hasta 124 millones de nios tienen una dieta
deficitaria en vitamina A y, como consecuencia, en el sudeste de
Asia un cuarto de milln de nios se vuelven irreversiblemente
ciegos cada ao, detalla el documento. Adems, la deficiencia en

vitamina A exacerba la diarrea, las enfermedades respiratorias y

las enfermedades infantiles como el sarampin.
A esto se suma que la administracin oral de vitamina A es
problemtica, principalmente por la falta de una estructura de
transporte y distribucin en algunas de las regiones ms
seriamente afectadas. El desarrollo biotecnolgico del arroz
dorado, logrado en la dcada de 1990 por el investigador suizo
Ingo Potrykus, ha alcanzado fama no solo por sus beneficios a la
salud. Adems, es un ejemplo de planta transgnica obtenida con
fondos pblicos cuyo objetivo es contribuir a mejorar las
condiciones de nutricin de poblaciones necesitadas, y reducir la
incidencia de enfermedades.
Maz con vitaminas
Un grupo de investigadores de la Universidad de Lleida en Espaa,
ha desarrollado maz transgnico fortificado biolgicamente con
tres vitaminas (A, C y B9), que suelen estar ausentes en las
variedades naturales. Segn explic el cientfico responsable, Paul
Christou, a Europa Press, "Por primera vez hemos demostrado que
es posible crear de forma simultnea mltiples caractersticas
nutricionales en plantas". Los autores, que publicaron el avance en
la revista cientfica Proceedings of the National Academy of
Sciences en 2009, esperan que su mtodo ayude a aliviar la
malnutricin y las enfermedades asociadas a las deficiencias
vitamnicas.
Seguridad de los alimentos transgnicos
A pesar de los aos transcurridos desde su produccin, y de los
ensayos positivos realizados en varios pases de Asia, el arroz

dorado todava no est disponible. Una vez que esto suceda, el

paso siguiente ser lograr que llegue y se adapte a las variedades
locales de las poblaciones en riesgo, respetando las regulaciones
internacionales

nacionales

sobre

el

manejo

de

plantas

transgnicas.
Para lograrlo, el investigador Potrykus fund el Comit Humanitario
del Arroz Dorado (Golden Rice Humanitarian Board), para asesorar
y suministrar apoyo al pas receptor, y evaluar todos los detalles
sobre

seguridad

alimentaria,

valor

nutricional

seguridad

ambiental. Ante las evidencias de avances en los alimentos

transgnicos, las voces opositoras no se hicieron esperar. En
su documento El

arroz

espejismo?,

organizacin

la

dorado

transgnico:
Greenpeace

milagro
cuestiona

o
las

propiedades y los beneficios del alimento transgnico.

Ante esta oposicin y el retraso en la libre disponibilidad del
alimento, Ingo Potrykus seal que quien est en contra de los
beneficios del arroz dorado sin dar razones claras o alternativas
viables, esconde una agenda poltica oculta que, en este caso,
bajo pretexto de oponerse a una tecnologa, condena a millones de
personas Posiblemente, las dificultades para trasladar a la
sociedad las ventajas de los alimentos transgnicos se resume en
las palabras que expresara recientemente el profesor de la
Universidad Politcnica de Valencia Daniel Ramn Vidal: La
sociedad no est preparada para la ingeniera gentica porque no
se les ha informado debidamente, y el consumidor tiene derecho y
debe estar perfectamente informado sobre esta tecnologa.
En un intento por mediar en la controversia de los alimentos
transgnicos agreg: Ningn

extremo

es

bueno,

ni

la

biotecnologa va a acabar con el hambre en el mundo ni son

productos peligrosos para la salud humana. Si los cultivos
modificados genticamente no funcionaran, esta tecnologa habra
desaparecido hace muchos aos, concluy Vidal.
Articulo No. 2 Biotecnologa contra la contaminacin ambiental

La biorremediacin emplea microorganismos para limpiar el

medioambiente. Es un proceso natural y fue probado con xito en
aguas y suelos contaminados con petrleo.
El aumento de la poblacin, la urbanizacin y la actividad industrial
provocan

la

constante

persistente

contaminacin

del

medioambiente. Una de las estrategias ms novedosas para la

limpieza ambiental es utilizar bacterias que se alimentan de los
residuos txicos. Esta tcnica se ha empleado exitosamente en
casos de derrame de petrleo, en agua y suelo. Hoy, la
biotecnologa moderna puede modificar genticamente bacterias
para hacer ms eficiente este trabajo de descontaminacin.
Microbios tiles para el hombre
Las bacterias suelen tener mala prensa ya que se las asocia con
enfermedades. Sin pretender negar las evidencias que justifican
esa reputacin, an es posible reconocer que algunos microbios
pueden mostrar un perfil solidario. De hecho, el hombre ha
aprendido

aprovechar

los

procesos

naturales

de

los

microorganismos para obtener beneficios en reas tan diversas

como

la salud

humana,

la industria,

la agricultura,

el

medioambiente. En su versin tradicional, la biotecnologa

aprovecha a las bacterias para la fabricacin de productos

cotidianos, como el yogurt y los quesos. Pero, desde hace tres
dcadas, aproximadamente, los microorganismos tambin se
emplean en procesos biotecnolgicos modernos. Las nuevas
tareas

de

los

microorganismos

consisten

en

producir hormonas, plsticos biodegradables, frmacos, y aditivos

alimentarios,

entre

otros

productos.

Una

nueva

aplicacin

biotecnolgica de los seres vivos se est ensayando con

resultados interesantes: el uso de bacterias para limpiar el
ambiente, particularmente en casos de contaminacin por
hidrocarburos, como el petrleo.
Contaminacin ambiental y actividades humanas
Las actividades humanas provocan un impacto ambiental negativo
de difcil solucin. La ltima Cumbre sobre Cambio Climtico,
celebrada en Copenhague en diciembre de 2009, reflej los
conflictos que existen para lograr un acuerdo internacional que
frene este deterioro ambiental. Mientras esto ocurre, muchas
industrias continan vertiendo contaminantes al ambiente. Por
ejemplo, compuestos utilizados como refrigerantes, disolventes,
plaguicidas, metales txicos, plsticos y detergentes.
Uno de los problemas de estos residuos es que no son
biodegradables, no se descomponen naturalmente por la accin de
los microorganismos. Esto genera su acumulacin y dispersin en
el aire, el suelo y las aguas superficiales, y su filtracin hacia las
aguas subterrneas que constituyen la reserva para consumo
humano. A los residuos industriales se suma la contaminacin por
derrames de petrleo que afectan seriamente el ambiente, su

fauna y flora.
Segn explica el documento Efectos de los derrames de petrleo
sobre los hbitats marinos, publicado por el doctor Jos Celis
Hidalgo en la revista chilena Ciencia Ahora en 2009, la mayora de
los ecosistemas marinos expuestos a grandes cantidades de
petrleo requieren entre 3 y 10 aos para su recuperacin. A pesar
de esto, debido a que el petrleo es una mezcla que contiene
componentes naturales, tiene la ventaja de ser digerido por
bacterias. Es un proceso lento, pero la ciencia est haciendo
esfuerzos por mejorarlo y acelerarlo.
Biotecnologa para limpiar derrames de petrleo
En las ltimas dcadas, entre las tcnicas empleadas para
contrarrestar los efectos de los contaminantes, se avanz en el
ensayo de la biorremediacin. Se trata de una tcnica basada en
la capacidad natural de los microorganismos de alimentarse de
sustancias contaminantes, y convertirlas en compuestos ms
sencillos y menos txicos. Por ejemplo, se han encontrado en la
naturaleza bacterias que se alimentan de petrleo. Este proceso
natural se puede acelerar aportando nutrientes y oxgeno que
facilitan la multiplicacin de las bacterias, e incentivan su apetito.
El proceso de biorremediacin fue probado con xito en derrames
accidentales de petrleo, como el caso del buque Exxon Valdez
ocurrido en Alaska en 1989, y el caso del Prestige acontecido en
2002 frente a las costas de Galicia, en Espaa. La biorremediacin
fue una herramienta de limpieza suplementaria en el vertido del
Exxon Valdez, luego de eliminar el grueso del petrleo por medios
mecnicos. A pesar de todas las imperfecciones, supuso un

importante ahorro y una menor agresin al ya daado ecosistema

frente a cualquier otra tcnica que se hubiera empleado para la
remediacin a largo plazo, expres el ingeniero Jos Luis
Rodrguez Gallego de la Universidad de Oviedo en su artculo La
biorremediacin frente al vertido del Exxon Valdez.
Articulo No. 3: Micropropagacin clonal de tres variedades de
pia.
La pia (Ananas comosus L., Merr.) es uno de los frutos autctonos
que ha mantenido su aceptacin y conservado su cultivo,
compitiendo con otras frutas exticas. En el pas, la pia es el sexto
rubro vegetal en importancia despus del arroz, maz, caa de
azcar, pltano y banano. A nivel mundial, Venezuela ocupa el
puesto nmero 12 entre los principales pases productores con
363.075TM producidas en 2007 (FAO, 2009). En la regin
Amaznica venezolana, el cultivo de la pia es llevado a cabo,
principalmente, por aborgenes de la etnia Piaroa, localizada en
Betania del Topocho, Municipio tures, Estado Amazonas. Esta
actividad econmica forma parte de su cultura ancestral. El
mecanismo

reproductivo

de

la

especie

Ananas

comosus

(Bromeliaceae), es vegetativo (partenocrpico) y la tasa de

crecimiento y multiplicacin es lenta. El tiempo requerido para la
fructificacin, a partir de la siembra de propgulos, es cercano a un
ao (Roostika y Mariska, 2003). La propagacin por el mtodo
convencional (vegetativo) de las plantas de pia produce un nmero
muy limitado de propgulos, lo cual restringe la disponibilidad de
material vegetal para la plantacin a gran escala. Adems de la
limitacin del mtodo convencional, los cultivos son atacados por
insectos y hongos que producen marchitamiento, fusariosis y la
pudricin de la base del tallo, enfermedades que perjudican el

cultivo afectando negativamente la produccin comercial del fruto

(Santos y Matos, 1995; Coppens et al., 1997; Rodrguez et al.,
2002). El cultivo in vitro es una alternativa biotecnolgica que
permite la propagacin masiva de plantas de pia libres de
enfermedades y en tiempos relativamente cortos. El mtodo de
micropropagacin

ha

sido

utilizado

por

diferentes

autores,

obtenindose diversos protocolos para el establecimiento de cultivo

in vitro de la pia (Casale y De Garca, 1987; Sripaoraya et al.,
2003; Mogolln et al., 2004; De Garca et al., 2008; Saucedo et al.,
2008). Adems, permite la obtencin de plantas de novo mediante
procesos organognicos y embriognesis somtica (Sripaoraya et
al., 2003; Firoozabady y Gutterson, 2003; Roostika y Mariska, 2003;
Firoozabady y Moy, 2004; Amin et al., 2005). En el presente trabajo
se tuvo como objetivo establecer un protocolo eficiente de
multiplicacin clonal masiva de tres variedades de pia autctonas
del Amazonas venezolano, a partir del cultivo in vitro de yemas
axilares y/o apicales, aisladas de plantas provenientes de esa
regin. El material producido en esta investigacin ser entregado a
la comunidad Piaroa para su evaluacin en campo y posterior
industrializacin de los frutos.
Materiales y Mtodos
Material vegetal
El

material

vegetal

utilizado

en

el

establecimiento

de

la

micropropagacin estaba constituido por coronas e hijuelos basales

de infrutescencias de tres variedades de pia amaznicas
conocidas localmente como ERU W CAN (EC), TAB CAN
(TC) y GOBER NADOR A (GOB), provenientes de los sembrados
de pia cultivados por los Piaroa en Betania del Topocho, estado

Amazonas, Venezuela. El material vegetal fue facilitado por la

Fundacin para el Desarrollo de las Ciencias Fsicas, Matemticas y
Naturales (FUDECI).
Desinfeccin del material vegetal
A las coronas e hijuelos basales se les elimina totalmente las hojas
para exponer las yemas. Los tallos desnudos fueron lavados en
solucin jabonosa por 20min., transferidos a una solucin diluida al
20% (v/v) de cloro comercial por 10min., luego lavados tres veces
en agua destilada estril en la cmara de flujo laminar. Finalmente,
los

explantes

se

sumergieron

en

desinfectante-esterilizador

GERDEX sin diluir por 20min. El componente activo de GERDEX es

el bromuro de lauril-dimetil-bencil-amonio 10%. De seguidas se
procedi al aislamiento e inoculacin de las yemas axilares y
apicales en los medios de iniciacin, bajo un ambiente estril en la
cmara de flujo laminar. Cultivo in vitro de yemas Fase de iniciacin
(supresin de latencia e induccin de crecimiento).
Fase de multiplicacin y alargamiento de los brotes. Los brotes
obtenidos en la fase de iniciacin fueron cuidadosamente
separados y transferidos a medios de multiplicacin (MM1 y MM2) y
bajo dos condiciones fsicas: a) en constante agitacin a 137rpm, y
b) en recipiente de inmersin temporal automatizada (RITA). Este
equipo fue regulado para sumergir los brotes en el medio lquido por
un periodo de 0,5h cada 12h. Las concentraciones de tiaminaHCl y
de los reguladores de crecimiento, as como las condiciones fsicas
y el pH de los medios se presentan en la Tabla I. Se evalu el
nmero de brotes y la longitud de vstagos formados por cada una
de las variedades estudiadas, en los diferentes medios de
crecimiento. Se aplic la prueba t-Student para la comparacin por

pares de medias (P 0,05). Se aplic ANOVA de una sola va con

Tukey. Fase de enraizamiento. Los vstagos adventicios de 2cm de
longitud,

regenerados

en

medios

de

multiplicacin,

fueron

transferidos a medio MS slido sin reguladores de crecimiento

(MS0), para la induccin de formacin de races. Todos los cultivos
fueron incubados bajo luz blanca permanente a 56molm-2s-1 a
25C. Despus de las ocho semanas de crecimiento en MS0 se
evalu el nmero y longitud de las races formadas por cada una de
las tres variedades de pia estudiadas. Se aplic la prueba tStudent para la comparacin por pares de medias (P0,05). Se
aplic ANOVA de una va con Tukey. Resultados Fase de iniciacin
En la etapa de iniciacin del cultivo se observ una alta
contaminacin de los explantes por hongos y bacterias, en las
muestras colectadas en el Amazonas. La var. EC present el mayor
porcentaje de contaminacin y el menor lo present la var. GOB. El
empleo de GERDEX en la ltima fase del protocolo de desinfeccin
result favorable por la disminucin de dicha contaminacin. A las
cuatro semanas de cultivo se observ brotacin de una yema axilar
en la var. TC y de una yema apical en EC en los medios MI3 y MI4,
respectivamente. Los brotes tenan una longitud de ~4mm, y
despus de permanecer cuatro semanas adicionales en sus
respectivos medios, hubo alargamiento de las hojas en TC y
alargamiento del vstago (4cm) y formacin de races en EC (Figura
2). En los medios MI1 y MI2 no tuvo lugar la supresin de latencia
(Tabla II). Debido a la baja produccin de brotes de las vars. EC y
TC en la fase de iniciacin, se decidi trabajar con el protocolo
propuesto por Mogolln et al. (2004) para la siembra del explante
inicial de la variedad GOB. Se emplearon los medios siguientes:
MI5 slido con 1mgl-1 de BAP, y MI6 lquido con la misma

concentracin de sustancias de crecimiento, ambos con 4mgl-1 de

tiamina y pH 5,4. Se evidenci la emergencia de un brote adventicio
en MI6 a las cuatro semanas, y despus de ocho semanas de
crecimiento en el mismo medio, se observ el vstago de 5,3cm. En
el medio MI5 no ocurri supresin de la latencia
Fase de multiplicacin
El brote adventicio de TC, obtenido en la fase de iniciacin, fue
transferido al medio MM1. El mismo form ocho brotes despus de
ocho semanas en agitacin continua. El brote adventicio de EC,
obtenido en la fase de iniciacin, fue transferido al medio MM2 y
despus de ocho semanas y con agitacin constante no hubo
multiplicacin sino elongacin del vstago de EC. Este vstago
alargado se dividi longitudinalmente en dos y se coloc en MM1 y
MM2. A las ocho semanas hubo multiplicacin de EC (cuatro brotes)
en el medio MM1. Estas experiencias demostraron que el medio
MM1 induce la multiplicacin clonal de las dos variedades y el MM2,
que carece de auxina, no funciona como inductor de la
multiplicacin. Es necesaria la presencia de citocininas y auxinas en
los medios de multiplicacin para la proliferacin de brotes de las
pias amaznicas.
Artculo No. 4. Micropropagacin de teca (Tectona grandis L.f)
La teca (Tectona grandis L.f.) es una especie considerada valiosa
por la calidad de su madera. La alta demanda a nivel mundial ha
impulsado su cultivo en plantaciones comerciales. Sin embargo, la
calidad de muchas de estas plantaciones justific el inicio de
programas de mejoramiento de la especie. La introduccin de
tcnicas de micropropagacin o propagacin clonal in vitro (en
condiciones de laboratorio) en los programas de mejoramiento

gentico y para el establecimiento de plantaciones confiere grandes

ventajas a los mejoradores, les permite la multiplicacin masiva de
los rboles superiores en tiempo y espacio reducido, conservando
las caractersticas valiosas de los materiales. Adems, este tipo de
propagacin permite la comercializacin y transporte de las plantas
as producidas a lugares y pases lejanos con menores restricciones
aduaneras y menores posibilidades de prdida de materiales.
Durante este estudio se mostr la factibilidad de propagar teca
utilizando la micropropagacin, establecindose una metodologa
bsica que permiti la obtencin de altos porcentajes de xito en las
diferentes etapas del proceso.
La teca (Tectona grandis L.f.) pertenece a la familia Verbenaceae y
es originaria del sureste asitico. Su madera es altamente valorada
por sus caractersticas tecnolgicas y belleza, considerndose de
primera clase. Combina cualidades como dureza, durabilidad y
resistencia al ataque de termitas. Se utiliza para la construccin de
puentes,

marinas,

yates,

muebles,

carpintera

en

general,

enchapados y contraenchapados, madera para parquet, postes y

duela utilizados en la fabricacin de barriles (Chvez y Fonseca,
1991; Mascareas et al., 1993). Debido a que la demanda de teca a
nivel mundial es mayor que los recursos disponibles, muchos
pases se inclinaron por introducir esta especie en los programas de
reforestacin. La propagacin de teca se realiza tradicionalmente
por semilla y la siembra a gran escala se mantiene por esta va,
muchas veces sin conocer las caractersticas o procedencia del
material a plantar, lo que ha resultado en muchos casos, en
plantaciones de baja calidad. En Costa Rica, la teca es una de las
principales especies en los programas de reforestacin y de la

superficie dedicada a plantaciones forestales (165 962 ha),

alrededor de 25 600 ha son dedicadas a teca (Estado de la Nacin,
2000; Arce y Moya, 2001). Sin embargo, la calidad de las
plantaciones justifica el desarrollo de programas agresivos de
mejoramiento.

Se

han

establecido

rodales

semilleros

para

abastecer la demanda de semilla (Murillo et al., 2001), pero la

variabilidad encontrada entre los rboles propagados por esta va,
impuls el desarrollo de programas de propagacin clonal a partir
de rboles seleccionados. La propagacin vegetativa resulta en
mayores retornos por ganancias en la calidad y la uniformidad de
las plantaciones (Monteuuis et al., 1998). La inclusin de tcnicas
de micropropagacin o cultivo in vitro en los programas de
mejoramiento gentico y establecimiento de plantaciones, permite la
clonacin masiva de los rboles superiores en tiempo y espacio
reducido,

conservando

las

caractersticas

valiosas

de

los

materiales. Adems, permite la comercializacin y transporte de las

plantas as producidas a lugares y pases lejanos con menores
restricciones aduaneras y menores posibilidades de prdida de
materiales (Engelmann y Takagi, 2000).
MATERIALES Y MTODOS
Localizacin de la investigacin La investigacin de laboratorio se
realiz en el laboratorio de cultivo de tejidos del Centro de
Investigacin en Biotecnologa del Instituto Tecnolgico de Costa
Rica en Cartago, Costa Rica. Las pruebas de enraizamiento y
aclimatacin se realizaron en Cartago y en la finca de la empresa
Precious Woods of Costa Rica (MACORI) en Playa Garza,
Guanacaste,

Costa

Rica.

Material

experimental

El

material

experimental o explante a introducir al cultivo in vitro, consisti de

brotes y nudos tomados de estacas enraizadas y mantenidas en

condiciones de invernadero en el Centro de Investigacin en
Biotecnologa (CIB) del Instituto Tecnolgico de Costa Rica (estacas
de brotes tiernos) y estacas tomadas de rboles creciendo en
campo (estacas semi-leosas); todos los materiales provenientes
de rboles de la empresa MACORI. Desinfeccin de explantes Las
estacas

mantenidas

en

invernadero

fueron

asperjadas

semanalmente con una mezcla de Agrimicin y Benlate

(estreptomicina y benomil, respectivamente) 1 g/l de cada uno, para
asegurar una mayor sanidad de los materiales. Para la desinfeccin
y el establecimiento in vitro, los explantes fueron lavados con agua
y detergente con ayuda de un cepillo suave, para luego enjuagarlos
con abundante agua. Se evaluaron varias metodologas de
desinfeccin y varios desinfectantes dependiendo del tipo de
explante a introducir al cultivo asptico. Para los explantes
provenientes de estacas mantenidas en invernadero (material ms
tierno) se utiliz hipoclorito de calcio (Ca(OCl)2) (6% y 8% de
producto comercial con 67% i.a.), hipoclorito de sodio (NaOCl) (60%
de producto comercial con 4% i.a.), Agrimicin (1 a 1,5 g/l) y
Benlate (1 a 1,5 g/l). Algunos tratamientos incluyeron la incubacin
en bomba de vaco y la agitacin en un agitador orbital. Para la
desinfeccin de los explantes provenientes de rboles de campo
(semileoso) se utilizaron los desinfectantes antes mencionados y
el cloruro de mercurio ((HgCl)2) (0,5 a 1,5 g/l).

Medio de cultivo
El medio de cultivo utilizado consisti de las sales minerales y
vitaminas descritas por Murashige y Skoog (MS) (1962), con 30 g/l

de sacarosa y 2,3 g/l de Phytagel (cuando el medio fue slido). El

pH se ajust a 5,8 antes del autoclavado. Se dispens un volumen
de 20 ml en cada frasco de cultivo de 175 ml de capacidad (medio
bsico). Establecimiento in vitro durante la etapa de establecimiento
in vitro los explantes (un nudo o brote apical) fueron cultivados en el
medio de cultivo bsico enriquecido con thidiazuron (TDZ, 0, 0,5,
1,2 y 3 mg/l) o benciladenina (BA, 0, 2,5, 5, 10 y 15 mg/l), en la
oscuridad durante una semana y luego transferidos a condiciones
de luminosidad (2000 Lux).
Multiplicacin
Durante la etapa de multiplicacin, los brotes obtenidos durante la
etapa de establecimiento (sin distingo del origen del material
introducido), fueron cultivados en el medio bsico al que se le
adicion de 0 a 2 mg/l de BA, slo o en combinacin con 0,02 y 0,2
mg/l cido indolbutrico (AIA), 0,2 y 0,5 mg/l isopenteniladenina
(2ip), 0,2 mg/l cinetina (K). Para subsecuentes ciclos de
multiplicacin, los brotes desarrollados fueron subdivididos en los
entrenudos y se cultiv un explante (que consisti de un nudo,
tambin llamado microestaca) en cada frasco de cultivo en el medio
de cultivo bsico enriquecido con los reguladores de crecimiento
que indujeron la mayor tasa de multiplicacin.
Enraizamiento
Para el enraizamiento in vitro, los brotes producidos durante la
multiplicacin (brote apical ms dos nudos) fueron transferidos al
medio de cultivo bsico fresco, con la concentracin de sales
completa (MS) o reducida a la mitad (MS/2). Otros tratamientos
consistieron en la incubacin de los brotes por 48 horas en 10 ml de

medio de cultivo bsico lquido con la concentracin de sales

completa o reducida a la mitad, enriquecido con 0, 2,5 25 mg/l de
cido indolbutrico (AIB), en presencia de luz u oscuridad. La
incubacin se llev a cabo en tubos de ensayo. Pasado este
periodo, los explantes fueron cultivados en el medio bsico slido
con la concentracin de sales reducida a la mitad por 4 a 6
semanas o fueron sembrados en tierra en condiciones de
invernadero.

Posteriormente

se

evalu

la

induccin

de

enraizamiento en presencia y ausencia de soluciones enraizadoras

en el sitio permanente de siembra de las plantas, en condiciones de
casa de mallas o propagadores
Articulo No. 5: Cultivo de tejidos de rosas (Rosa sp): un
acercamiento a investigaciones recientes.
Entre las tcnicas del cultivo de tejidos ms empleadas para la
propagacin in vitro de las rosas, se encuentran el cultivo de yemas
y brotes, callos y nodos. Otros mtodos, como el cultivo de
embriones y protoplastos, presentan una mayor especificidad y
complejidad, por lo que son menos utilizados con este fin. Cultivo de
yemas y brotes. Al realizar la propagacin de plantas a partir de
yemas y brotes jvenes, las mutaciones espontneas que se
pueden presentar son mnimas, ya que estos derivan directamente
de meristemos organizados y estn sujetos a bajos niveles de
variacin (4). Se considera yema al rudimento de un vstago, que
se forma habitualmente en las axilas de las hojas y suele estar
protegida por una serie de hojas, mientras que brote es el trmino
usual con que se designa el vstago en estado de desarrollo, a
partir de la yema hasta que ha terminado su crecimiento (5).

En R. hybrida se determin el efecto de reguladores del

crecimiento, fuente de carbono y sales en el medio sobre la
proliferacin in vitro de explantes de yemas laterales, de 10
cultivares distintos. El medio finalmente adoptado, incluy las
formulaciones de sales de Quoirin y Lepoiure, 30 g.L-1 de sacarosa,
3 mg.L-1 de BA y 0.5 mgL-1 de ANA. En estas condiciones, se
obtuvo un ritmo de multiplicacin de 30.3 plntulas por explante,
luego de 180 das (6).
Cultivo de embriones y protoplastos.
El cultivo in vitro de embriones ha sido una herramienta til para la
propagacin de varias especies de rosa, que solo son viables
mediante

semillas

presentan

dificultades

para

germinar

convencionalmente. A travs del cultivo de embriones ha sido

posible, por ejemplo, superar la dormancia de las semillas e
incrementar rpidamente el nmero de especies de rosales
silvestres en la coleccin del Jardn Botnico de Montreal, Canad,
a partir de un nmero muy limitado de semillas obtenidas de
instituciones botnicas de todo el mundo (23).

Conclusin
En el transcurso de esta investigacin pude aprender que la
biotecnologa tiene aplicaciones en importantes reas industriales,
como la atencin de la salud, con el desarrollo de nuevos enfoques
para el tratamiento de enfermedades; la agricultura con el desarrollo
de cultivos y alimentos mejorados; usos no alimentarios de los
cultivos.
Por otro lado la micropropagacin, a partir de un fragmento
(explanto) de una planta seleccionada (llamada planta madre), se
obtiene una descendencia uniforme, con plantas genticamente
idnticas, denominadas clones. El explanto ms usado para los
procesos de propagacin in vitro son las yemas vegetativas de las
plantas. Los frascos que contienen las plantas se ubican en
estanteras con luz artificial dentro de la cmara de crecimiento,
donde se fija la temperatura en valores que oscilan entre los 21 y
23 C, adems de controlar la cantidad de horas de luz. Por su
parte, el medio de cultivo se compone de una mezcla de sales
minerales, vitaminas y reguladores de crecimiento, azcar, agua y
agar. La composicin del medio depende de la especie vegetal y de
la etapa del proceso de micropropagacin.

Bibliografa

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