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1. Biotecnologa
Produccin de protenas recombinantes para estudios de investigacin bsica y
para su aplicacin en diversos campos (hormonas, anticuerpos, antivirales,
vacunas, enzimas hidrolticas, polmeros)
Obtencin de organismos transgnicos (transformados) con propiedades
particulares
2. Medicina. Diagnstico de enfermedades infecciosas y genticas. Terapia gnica.
Medicina forense.
4. Ecologa microbiana. Determinacin de la biodiversidad. Deteccin de
microorganismos no cultivables. Estudio composicin y funcin de comunidades
(metagenmica)
5. Evolucin. Estudio de las relaciones filogenticas entre organismos (comparacin
de secuencias nt de genes universalmente conservados. Ej. ARNr 16S y 18S.
Anlisis de genomas.
Clonado de genes
Vectores de clonado
Deben contener ori (replicacin autnoma) y
marcador de seleccin (ej. resistencia a un
antibitico).
Los plsmidos son muy usados
Poseen secuencia con sitios de reconocimiento
para varias ER (sitio mltiple de clonado o
polylinker)
Permiten amplificar un fragmento de ADN
exgeno (inserto).
Tratamiento del vector con fosfatasa alcalina para evitar religacin del vector
Obtencin de clones
genmicos o de ADNc
por PCR
Genotecas
Coleccin de secuencias de ADN individuales que representan todo o parte del
genoma de un organismo.
- Genotecas de ADN copia (ADNc)
Incluye los genes expresados en un organismo.
No posee intrones.
Se generan a partir de ARN total.
Construccin de una
genoteca a partir de
ADN genmico.
Colonias de bacterias
recombinantes
Bacterifagos: Fago
Diseo de una sonda para detectar el gen de una protena conocida por
hibridacin
Desventajas:
- No produce muchas de las
modificaciones post-traduccionales
requeridas para la expresin de
protenas de eucariotas.
- La protena puede resultar txica
- La protena mal plegada puede
formar cuerpos de inclusin
insolubles.
Transfeccin transitoria
Durante la divisin celular los plsmidos no son segregados correctamente en las clulas
hijas y con el tiempo algunas pierden el plsmido.
Terapia gnica
Es una tcnica para reemplazar un gen
deficiente por uno normal en individuos
con enfermedades genticas
Surge de la investigacin con animales
transgnicos.