CENTRO DE BACHILLERATO

TECNOLOGICO INDUSTRIAL Y DE
SERVICIOS N 93
Alumno:
Cecilia Guadalupe Garcia Rodrguez

Trabajo:
Manual De Tinciones

Materia:
Submodulo III: Cuantifica microorganismo con base a normas.

Profesor:
Julin Reyes Meja

Especialidad:
Laboratorista Qumico

Grado: 4
Turno:
Fecha:

Grupo: A
Vespertino

26 De Mayo De 2015

Introduccin
En su mayor parte los microorganismos son demasiado pequeos
para
observarse
a
simple
vista: protozoos,
algas, hongos, bacterias y virus.
Estos microorganismos difieren en caractersticas tales como forma
de nutricin, estructura, tamao, composicin entre otros aspectos; es
por ello que se emplea el estudio microscpico el facilita notablemente
la observacin; principalmente en las bacterias se facilita al tratarlas
con colorantes o tintes los cuales facilitan tambin la observacin de
ciertas estructuras celulares.
Las tinciones en microbiologa son las primeras herramientas que se
utilizan en el laboratorio para el diagnstico de las enfermedades
infecciosas. Desde hace ms de un siglo han ayudado a resolver
problemas de etiologa microbiana. Hay una gran variedad de
tinciones, que se han ido desarrollando para la deteccin de los
diferentes agentes infecciosos en los que se incluyen bacterias,
parsitos y hongos. En este manual veremos algunas de ellas y se
explicara para que sirven.
Es el proceso por el cual las molculas de un colorante se adsorben a
una superficie. El uso de colorantes permite cambiar el color de las
clulas de los microorganismos y poder realizar la observacin en
microscopio ptico. Dado que las bacterias son casi incoloras, no
presentan contraste con el medio en el cual se encuentran
suspendidas y no pueden observarse claramente sin algn tratamiento
previo.
En microbiologa el microscopio se utiliza de formarutinaria, ya que
proporciona importante informacin para la identificacin temprana y
definitiva de los microorganismos.En la valoracin de las muestras, es
trascendente el poder de resolucin del microscopio, el cual se define
como la capacidad que posee un objetivo para distinguir la distancia
mnima entre dos puntos del objeto para que se puedan visualizar
como dos puntos separados. El poder de resolucin de un objetivo es
el responsable de la calidad, claridad, nitidez y fineza detallada de la
imagen, y depende de la longitud de onda () del haz de luz utilizado y

de la apertura numrica del objetivo empleado. El mximo poder de

resolucin en un microscopio de luz emitida es de 0.2 m, por lo que
se requiere de una amplificacin entre 1000-1400x, mientras que el
poder de resolucin del ojo humano es de aproximadamente 0.2 mm.
Para aprovechar esta ventaja de los microscopios, se han desarrollado
tcnicas tintoriales que destacan las caractersticas morfolgicas de
los microorganismos.
Existe una gran variedad de tinciones que pueden ser
aplicadas dentro del campo de la microbiologa.
De acuerdo a la reaccin que ocurre, existen diferentes tipos de
tincin:
Una tincin o coloracin es una tcnica auxiliar utilizada en
microscopa para mejorar el contraste en la imagen vista al
microscopio. Los colorantes y tinturas son sustancias que usualmente
se utilizan en biologa y medicina para resaltar estructuras en tejidos
biolgicos que van a ser observados con la ayuda de diferentes tipos
de microscopios. Los diferentes colorantes pueden ser utilizados para
aumentar la definicin y examinar grandes cortes de tejido (resaltando
por ejemplo fibras musculares o tejido conectivo), poblaciones
celulares (por ejemplo clasificando diferentes clulas sanguneas) o
incluso para resaltar organelas dentro de clulas individuales. En
bioqumica, esto implica agregar un colorante especfico (esto significa
que se una de manera selectiva ya sea a ADN, protenas, lpidos,
carbohidratos, etc.) a un sustrato para cualificar o cuantificar la
presencia de un determinado compuesto. Tanto la tincin como el
marcado fluorescente pueden servir para los mismos propsitos.
Diferentes tipos de tinciones biolgicas son utilizadas tambin para
marcar clulas en citometra de flujo y para marcar protenas cidos
nucleicos en electroforesis en gel. Las tinciones no estn limitadas a
su uso en materiales biolgicos, tambin pueden ser utilizadas para
estudiar la morfologa de otros materiales (por ejemplo, las estructuras
lamelares de polmeros semicristalinos de las estructuras de dominio
de bloques de copolmeros).

Qu es tincin?
Se denomina tincin al proceso y el resultado de teir (otorgar un color a una
cosa). El concepto deriva del vocablo latino tincto.
Una tincin o coloracin es una tcnica auxiliar utilizada en microscopa para
mejorar el contraste en la imagen vista al microscopio. Los colorantes y tinturas
son sustancias que usualmente se utilizan en biologa y medicina para resaltar
estructuras en tejidos biolgicos que van a ser observados con la ayuda de
diferentes tipos de microscopios. Los diferentes colorantes pueden ser utilizados
para aumentar la definicin y examinar grandes cortes de tejido (resaltando por
ejemplo fibras musculares o tejido conectivo), poblaciones celulares (por ejemplo
clasificando
diferentes clulas
sanguneas)
o
incluso
para
resaltar organelas dentro de clulas individuales. Con la tincin, es posible mejorar
la definicin de grupos de clulas o de fragmentos de tejido. Tambin, mediante
tinturas especiales, se puede medir la presencia de ciertas sustancias o elementos
en
un
compuesto.
En microbiologa el microscopio se utiliza de forma rutinaria, ya que proporciona
importante informacin para la identificacin temprana y definitiva de los
microorganismos. En la valoracin de las muestras, es trascendente el poder de
resolucin del microscopio, el cual se define como la capacidad que posee un
objetivo para distinguir la distancia mnima entre dos puntos del objeto para que se
puedan visualizar como dos puntos separados. El poder de resolucin de un
objetivo es el responsable de la calidad, claridad, nitidez y fineza detallada de la
imagen, y depende de la longitud de onda () del haz de luz utilizado y de la
apertura numrica del objetivo empleado. El mximo poder de resolucin en un
microscopio de luz emitida es de 0.2 m, por lo que se requiere de una
amplificacin entre 1000-1400x, mientras que el poder de resolucin del ojo
humano es de aproximadamente 0.2 mm. Para aprovechar esta ventaja de los
microscopios, se han desarrollado tcnicas tintoriales que destacan las
caractersticas morfolgicas de los microorganismos.Existe una gran variedad de
tinciones que pueden ser aplicadas dentro del campo de la microbiologa.
Un colorante se define como una sustancia capaz de dar color a clulas, tejidos,
fibras, etctera. De acuerdo con su origen, se pueden dividir en: colorantes

naturales, los cuales son extrados de plantas o animales, y colorantes artificiales,

que son aquellos de minerales procesados y manipulados en el laboratorio.
Qumicamente, el colorante est constituido de un componente cromforo y un
auxcromo. El cromforo es todo grupo aislado, covalente e insaturado, que tiene
una absorcin caracterstica en la regin ultravioleta o visible; dicho de otra forma,
es la capacidad que tiene la molcula para que sus electrones absorban energa o
luz visible, se exciten y emitan diversos colores de acuerdo con la longitud de
emitida como resultado del cambio en el nivel energtico. Cabe mencionar que
esta longitud de onda corresponde al rango de espectro visible. Los cromforos se
pueden presentar en dos formas fundamentales: en sistemas conjugados o
complejos metlicos. Los cromforos son principalmente grupos funcionales con
dobles y triples enlaces carbono-carbono, anillos aromticos, grupos carbonilos,
imino, diazo, nitro y enlaces entre carbono-y (y es un tomo con pares libres).Los
auxcromos son grupos funcionales o radicales que constituyen una molcula y
poseen carga parcial positiva; tienen la funcin de intensificar la formacin de color
mediante la accin de grupos de tomos no saturados; su funcin es desplazar a
los cromforos hacia longitudes de ondas largas para aumentar la intensidad. Los
siguientes grupos funcionales son considerados auxcromos: grupo metilo,
halgenos. Aunque los microorganismos vivos se pueden observar directamente
en fresco al microscopio ptico, la mayora de las veces es necesario teirlos para
que por medio del uso de colorantes, sea mucho ms fcil su identificacin;
adems, la presencia de ciertas estructuras, as como su reaccin a determinadas
tcnicas, nos permite clasificar a las bacterias. As pues, los colorantes tienen las
siguientes funciones:
1. Permiten hacer visibles a los objetos microscpicos y transparentes.
2. . Revelan su forma y tamao.
3 Muestran la presencia de estructuras internas y externas.
4. Producen .reacciones qumicas especficas. Las tinciones se pueden
clasificar como simples cuando toda la muestra se tie del mismo color y se
utiliza un slo colorante (azul de lactofenol o tinta china); tincin diferencial,
cuando se visualiza ms de un color porque se utiliza ms de un colorante
(Gram o Ziehl-Neelsen); tincin especfica, cuando se utilizan anticuerpos
marcados con una molcula fluorescente para identificar una estructura
celular en particular (inmunocitoqumico).
El control de calidad de los mtodos tintoriales es importante, ya que as se
asegura que la preparacin de la muestra haya sido adecuada, por lo que
se recomienda realizar al mismo tiempo de la evaluacin de la muestra
clnica, la tincin de un agente infeccioso ya identificado mediante esa
tincin, el cual funcionar como un control positivo. Algunas tcnicas
tintoriales como Gram o ZiehlNeelsen requieren antes de su proceso la
fijacin de las muestras, con la finalidad de preservar la arquitectura
estructural y qumica de las clulas. Existen dos tipos de fijadores: fsicos y
qumicos. Entre los procesos de fijacin fsicos se tienen los siguientes:

desecacin, calor seco, calor hmedo, ultrasonido y microondas, mientras

que los procesos de fijacin qumicos se pueden clasificar como oxidantes y
reductores, de acuerdo con sus propiedades qumicas. Entre los agentes
qumicos oxidantes se encuentran: xido crmico, cido actico, cido
pcrico, acetona, dicromato de potasio. Los agentes qumicos reductores
son: formaldehdo, glutaraldehdo, etanol, metanol, paraldehdo, etctera.8
Quiz el mtodo fsico con mayor utilizacin en microbiologa es el calor
seco, que consiste en exponer directamente la laminilla a la flama del
mechero, con esto se logra detener los procesos vitales de las clulas y los
microorganismos. Sin embargo, la sobreexposicin, o la exposicin en una
zona incorrecta de la fl ama (zona fra, zona caliente y zona de fusin)
repercutir en el efecto deseado; es muy comn provocar alteraciones
morfolgicas y destruccin celular. Este mtodo preserva el extendido por
poco tiempo, por lo que se recomienda utilizar un mtodo qumico, que
precipite protenas, antes de teir. Los mtodos qumicos ofrecen mejores
resultados para la fijacin, ya que son lquidos con potencial alto de difusin
intracelular y detienen procesos enzimticos que provocan autolisis. Los
reactivos poseen la capacidad de interactuar con biomolculas como
protenas,
glicoprotenas,
peptidoglicanos,
lpidos,
glicolpidos,
lipoprotenas, pigmentos, cidos ppticos y nucleicos. El metanol es el
reactivo que se encuentra al alcance de todos los laboratorios; es un
reactivo reductor, deshidratador, y es clasificado como fijador coagulante,
de tal manera, coagula protenas y las hace insolubles, pero sin
desnaturalizarlas. Se preserva la arquitectura de la pared celular y evita la
sobrecoloracin. El metanol tiene un potencial reductor mayor que el etanol.
La concentracin ideal es 99%. El metanol preserva la integridad de los
cidos nucleicos, por lo que tambin es ideal para inmunohistoqumica e
hibridacin in situ.3,8,9 A continuacin se mencionarn las principales
tcnicas de tincin utilizadas en microbiologa, as como su fundamento e
interpretacin para realizar la correcta identificacin de los
microorganismos.

Colorantes histolgicos ms comunes

Los diferentes colorantes reaccionan o se concentran en diferentes partes de las clulas o
tejidos, y estas propiedades son utilizadas como una ventaja para revelar partes o reas
especficas. Algunos de los colorantes biolgicos ms comunes se listan ms abajo. A
menos que se indique lo contrario la mayora de estos colorantes se utilizan con clulas y
tejidos fijados. Las tinciones vitales (que pueden ser utilizadas con organismos vivos) se
encuentran destacadas.

Azul brillante de Coomassie

Azul de Coomassie (tambin conocido como Coomassie blue) es un colorante que tie en
forma no especfica a todas las protenas con un fuerte color azul. Se utiliza
frecuentemente para teir las corridas de protenas en las electroforesis en gel.

Azul de metileno
El azul de metileno se utiliza para teir clulas animales, para hacer ms visibles sus
ncleos. Es tambin utilizado para teir los extendidos de sangre para ser utilizados en
citologa y como colorante vital en el recuento de reticulocitos.

Azul Nilo
El Nile Blue o Nile blue A, es decir, azul Nilo, tie los ncleos de color azul. Tambin
puede ser utilizado para teir clulas vivas.

Bismarck brown
Bismarck brown (Marrn Bismarck, tambin conocido como Bismarck brown Y o
Manchester brown) imparte un color amarillo a las mucinas cidas. Se puede utilizar con
clulas vivas.

Bromuro de etidio
El bromuro de etidio (BE) se intercala en el ADN y le otorga un color rojo naranja
fluorescente. A pesar de que no es capaz de teir clulas vivas ya que no atraviesa las
membranas intactas, puede ser utilizado para identificar clulas que se encuentran en las
etapas finales de la apoptosis, ya que tales clulas poseen unas membranas mucho ms
permeables. Por el mismo motivo, el bromuro de etidio es utilizado como un marcador de

apoptosis en poblaciones celulares y para localizar las bandas de ADN en una corrida en
electroforesis en gel. Este colorante puede ser utilizado en combinacin con naranja de
acridina (NA) en el conteo de clulas viables. Esta tincin combinada BE/NA le otorga a
las clulas vivas un color verde fluorescente mientras que las clulas apoptticas
aparecen con la distintiva fluorescencia rojo-naranja.

Carmn
El carmn es un colorante de un intenso color rojo que puede ser utilizado como sal de litio
para teir glicgeno, mientras que las sales de alumbre-carmn son colorantes que se
adhieren al ncleo. Las tinciones con carmn requieren del uso de un mordiente, que
usualmente es aluminio o alumbre.

Cristal violeta
El cristal violeta, al ser combinado con un mordiente adecuado, tie las paredes celulares
de color prpura. El cristal violeta es un componente importante en la coloracin de Gram.

DAPI
El DAPI es un colorante nuclear (tie el ncleo) fosforescente, se excita con luz
ultravioleta para producir una fuerte fluorescencia azul cuando se encuentra unido al ADN.
El DAPI se une a las regiones de alta repeticin A=T en los cromosomas. Adems no es
visible cuando se utiliza con un microscopio de transmisin corriente. Puede ser utilizado
en clulas vivas o fijadas. La tcnica de tincin con DAPI es especialmente adecuada
para el recuento celular.[6]

Eosina
La eosina se utiliza ms frecuentemente como contracoloracin de la hematoxilina,
impartiendo un color que va del rosado al rojo al material citoplasmtico, membrana
celular, y algunas estructuras extracelulares. Adems imparte un fuerte color rojo a los
eritrocitos. La eosina puede ser utilizada tambin en algunas variantes de la coloracin de
Gram, y en muchos otros protocolos de tincin. De hecho existen dos compuestos muy
estrechamente relacionados (aunque no iguales) conocidos como eosina. El ms
frecuentemente utilizado es la eosina Y (tambin conocida como eosina amarillenta) ya
que posee una tonalidad amarillenta muy suave. El otro compuesto conocido como eosina
es la eosina B, tambin conocida como eosina azulada o rojo imperial, la cual posee una
suave tonalidad azul. Los dos colorantes son intercambiables, y el la utilizacin de uno u
otro es ms una cuestin de preferencia y tradicin.

Fucsina cida

La fucsina cida puede ser utilizada para colorear colgeno, msculo liso o mitocondrias.
Forma parte de la coloracin tricrmica de Mallory donde se utiliza para colorear ncleo y
citoplasma. En la tincin de Van Gieson (picrofucsina), la fucsina es la responsable de dar
el color rojo a las fibras de colgeno. Tambin es una coloracin tradicional para colorear
mitocondrias (mtodo de Altmann).

Hematoxilina
La hematoxilina es un colorante nuclear. Utilizado con un mordiente, la hematoxilina tie
los ncleos celulares de color azul violeta a negro. Con gran frecuencia se utiliza en
combinacin con eosina en la coloracin H&E (hematoxilina y eosina), una de las ms
comunes utilizadas en histologa.

Hoechst
Hoechst es un compuesto derivado bis-benzimidazol que se une al surco menor del ADN.
Se utiliza con frecuencia en microscopa de fluorescencia para colorear el ADN. Hoechst
tiene color amarillo cuando se encuentra disuelto en agua, y emite luz azul cuando recibe
luz ultravioleta. Hay dos tipos principales de colorantes Hoechst. Hoechst 33258 y
Hoechst 33342. Ambos compuestos son funcionalmente similares, aunque poseen
pequeas diferencias en su estructura. El Hoechst 33258 contiene un hidroxilo terminal, y
por lo tanto es ms soluble en solventes acuosos, aunque esta caracterstica disminuye
su habilidad para penetrar la membrana plasmtica. El Hoechst 33342 contiene un grupo
etilo en sustitucin del grupo hidroxilo terminal (un grupo etileter), lo que lo hace ms
hidrofbico, y con mejor penetracin en la membrana plasmtica.

Lugol
El yodo se utiliza en qumica analtica como indicador para el almidn. Cuando se mezcla
almidn con una solucin de yodo, se desarrolla un color intensamente azul,
representando la formacin del complejo de inclusin yodo/almidn. El almidn es una
sustancia muy comn en la mayor parte de las clulas vegetales, de modo que una
solucin diluida de yodo puede colorear el almidn presente en las clulas. El yodo
tambin es componente de la coloracin de Gram utilizada en microbiologa. La solucin
de Lugol o Lugol yoduro (IKI) es una solucin de color marrn que se torna negra en
presencia de almidones y puede ser utilizada para colorear clulas, haciendo ms visible
el ncleo. En la coloracin de gram el yoduro se utiliza como mordiente, aumentando la
capacidad del colorante para entrar en las clulas a travs de los poros presentes en la
membrana o pared celular.

Naranja de acridina
El naranja de acridina es un colorante fluorescente, catinico y selectivo para cidos
nucleicos til para demostraciones sobre el ciclo celular. Es capaz de atravesar la

membrana celular e interacta con el ADN y el ARN por intercalacin o interacciones

electrostticas. Cuando se une al ADN presenta un espectro muy similar al de la
fluorescena. Al igual que la fluorescena, se puede utilizar tambin como una tincin
inespecfica para dar un trasfondo fluorescente (contraste) a tinciones convencionales en
la superficie de muestras slidas de tejidos (coloracin de contraste fluorescente).[7]

Plata
Una tincin argntica es el uso de plata para colorear preparados histolgicos. Este tipo
de coloracin es especialmente importante para demostrar protenas (por ejemplo el
colgeno tipo III) y ADN. Se utiliza para facilitar la visualizacin de ambas sustancias tanto
dentro como fuera de las clulas. Tambin se utiliza la tincin argntica en la
electroforesis en gel en gradiente de temperatura.

Algunas clulas argentafines reducen las soluciones de plata a plata metlica, luego de la
fijacin con formalina. Este mtodo fue descubierto por el fisilogo italiano Camillo Golgi,
utilizando una reaccin entre el nitrato de plata y el dicromato de potasio, para precipitar
cromato de plata en algunas clulas (mtodo de Golgi). Otras clulas son argiroflicas:
reducen la plata a su forma metlica luego de ser expuestas a una tincin que contiene un
agente reductor como la hidroxiquinona o formalina.

Rodamina
La rodamina es una tincin fluorescente especfica para protenas utilizada comnmente
en microscopa fluorescente.

Rojo neutro
El rojo neutro (toluylene red) colorea de rojo a la substancia de Nissl. Con frecuencia se
utiliza como contracoloracin en otras tcnicas de tincin.

Rojo Nilo
El Rojo Nilo (tambin conocido como oxazona del azul nilo) se produce hirviendo el Azul
Nilo con cido sulfrico. Este tratamiento produce una mezcla de Rojo y Azul Nilo. El Rojo
Nilo es una coloracin lipoflica, y se acumula en los glbulos lipdicos en el interior de las
clulas, y los colorea de rojo. El Rojo Nilo puede utilizarse con clulas vivas. Fluoresce
fuertemente cuando se encuentra particionado en lpidos, pero prcticamente no presenta
fluorescencia en soluciones acuosas.

Safranina
La safranina (o safranina O) es un colorante nuclear. Colorea los ncleos celulares de
rojo, y se utiliza principalmente como contracoloracin. Tambin puede ser utilizada para
darle una coloracin amarilla al colgeno.

Sudan
La coloracin de Sudn se utiliza para destacar sustancias "sudanoflicas", por lo comn,
lpidos. Tambin se utiliza para determinar los niveles de grasa en materia fecal para
diagnosticar esteatorrea. Hay varios colorantes de la familia sudan, por ejemplo: Sudan III,
Sudan IV, Oil Red O, y Sudan Black B.

Tetrxido de osmio
El tetrxido de osmio se utiliza en microscopa ptica para colorear lpidos. Se disuelve
con facilidad en las grasas y se reduce a osmio metlico al interactuar con material
orgnico, dejando un color marrn o negro caracterstico.

Verde de metilo
El verde de metilo se utiliza frecuentemente en microscopia de campo claro, para teir la
cromatina de las clulas y facilitar as su visualizacin.

Verde malaquita
El verde malaquita (conocido tambin como diamond green B o victoria green B) puede
ser utilizado como contracoloracin azul-verdosa en combinacin con la safranina un
ejemplo es la coloracin de Gimenez para bacterias. Tambin se puede utilizar
directamente para colorear endosporas.

En microscopa electrnica

Al igual que en la microscopa ptica, se puede hacer uso de sustancias que aumentan el
contraste en la microscopa de transmisin electrnica. Por lo general se utilizan
sustancias electrondensas, o metales pesados.

cido fosfotngstico

El cido fosfotngstico es un colorante negativo comn utilizado para resaltar virus,

nervios, polisacridos, y otros tejidos y materiales biolgicos.

Tetrxido de osmio
El tetrxido de osmio se utiliza en microscopa ptica para teir lpidos. Se disuelve en
grasas y se reduce por la presencia de materiales orgnicos a osmio metlico, dejando un
residuo negro fcilmente visible. Debido a que es un metal pesado, que absorbe los
electrones, es quiz la coloracin ms comn para resaltar morfologas en la microscopa
electrnica. Tambin se utiliza para la tincin de varios polmeros para el estudio de los
mismos por TEM. El OsO4 es muy voltil y extremadamente txico. Es un agente oxidante
fuerte, ya que en l el osmio tiene un estado de oxidacin +8. Oxida agresivamente
muchos materiales, dejando un depsito de osmio no voltil en un estado de oxidacin
bajo.

Tetrxido de rutenio
El tetrxido de rutenio es igualmente voltil e incluso ms agresivo que el tetrxido de
osmio, lo que permite colorear materiales que se resisten a la coloracin con osmio. Por
ejemplo el polietileno.

Otros
Otros compuestos qumicos utilizados en microscopa electrnica: molibdato de amonio,
yoduro de cadmio, carbohidrzida, cloruro frrico, hexamina tricloruro de indio, nitrato de
lantano, acetato de plomo (II), citrato de plomo, nitrato de plomo (II), cido perydico,
cido fosfomolbdico, ferricianuro de potasio, ferrocianuro de potasio, rojo de rutenio,
nitrato de plata, proteinato de plata, cloroaurato de sodio, nitrato de talio,
tiosemicarbzida, acetato de uranilo, nitrato de uranilo y sulfato de vanadilo.[

Tincin de Gram.
La tincin de Gram es uno de los mtodos de tincin ms importantes en el
laboratorio bacteriolgico y con el que el estudiante debe estar
perfectamente familiarizado. Su utilidad prctica es indiscutible y en el
trabajo microscpico de rutina del Laboratorio de Microbiologa las
referencias a la morfologa celular bacteriana (cocos, bacilos, positivos,
negativos, etc.) se basan justamente en la tincin de GRAM Descripta en
forma breve, la secuencia de la tincin es la siguiente: el Frotis fijado con
calor se tie 1 min con Violeta Cristal, se lava con agua, se cubre con

solucin Yodada durante 1 min y se lava de nuevo con agua, decolorar con
mezcla alcohol etlico/acetona. Escurrir y cubrir con Safranina (color de
contraste) durante 20 seg. Lavar y secar. Esta tincin se denominada as
por el bacterilogo dans Christian Gram, quien la desarroll en 1844.
Sobre la base de su reaccin a la tincin de Gram, las bacterias pueden
dividirse en dos grupos, grampositivas y gramnegativas (en este caso,
los trminos positivo y negativo no tiene nada que ver con carga elctrico,
sino simplemente designan dos grupos morfolgicos distintos de bacterias).
Las bacterias gram-positivas y gram-negativas tien de forma distinta
debido a las diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes
celulares. La pared de la clula bacteriana sirve para dar su tamao y forma
al organismo as como para prevenir la lisis osmtica. El material de la
pared celular bacteriana que confiere rigidez es el peptidoglicano. La pared
de la clula gram-positiva es gruesa y consiste en varias capas
interconectandas de peptidoglicano as como algo de cido teicoico.
Generalmente, 80%- 90% de la pared de la clula gram-positiva es
peptidoglicano. La pared de la clula gramnegativa, por otro lado, contiene
una capa mucho ms delgada, nicamente de peptidoglicano y est
rodeada por una membrana exterior compuesta de fosfolpidos,
lipopolisacridos, y lipoprotenas. Slo 10% - 20% de la pared de la clula
gram-negativa es peptidoglicano. Debido a su importancia en taxonoma
bacteriana y a que indica diferencias fundamentales de la pared celular de
las distintas bacterias, describiremos aqu con algn detalle la tincin de
Gram y las interpretaciones que actualmente se hacen sobre el porqu de
su funcionamiento. Las clulas fijadas al calor sobre un portaobjetos se
tien, primero con una solucin de cristal violeta (otros colorantes bsicos
no son tan efectivos) y son lavadas despus para quitar el exceso de
colorante. En este estado, todas las clulas, tanto las grampositivas como
las gramnegativas, estn teidas de azul. El portaobjetos se cubre entonces
con una solucin de yodo-yoduro potsico. El ingrediente activo es aqu el
I2 ; el KI simplemente hace soluble el I2 en agua. El I2 entra en las clulas y
forma un complejo insoluble en agua con el cristal violeta. De nuevo tanto
las clulas grampositivas como las gramnegativas se encuentran en la
misma situacin. Se lleva a cabo despus la decoloracin, usando una
mezcla de alcohol-acetona, sustancias en las que es soluble el complejo I2
-cristal violeta. Algunos organismos (grampositivos) no se decoloran,
mientras que otros (gramnegativos) lo hacen. La diferencia esencial entre
esos dos tipos de clulas est por tanto en su resistencia a la decoloracin;
esta resistencia se debe probablemente al hecho de que en el caso de
bacterias gram-negativas, la mezcla de alcohol/acetona es un solvente
lipdico y disuelve la membrana exterior de la pared de la clula (y tambin
puede daar la membrana citoplsmica a la que se une peptidoglicano). La
delgada capa de peptidoglicano es incapaz de retener el de complejo cristal

violeta-yodo y la clula se decolora. Las clulas grampositivas, a causa de

sus paredes celulares ms espesas (tienen ms peptidoglicano y menos
lpido), no son permeables al disolvente ya que ste deshidrata la pared
celular y cierra los poros, disminuyendo as el espacio entre las molculas y
provocando que el de complejo cristal violeta-yodo quede atrapado dentro
de la pared celular. Despus de la decoloracin las clulas grampositivas
son todava azules, pero las gramnegativas son incoloras. Para poner de
manifiesto las clulas gramnegativas se utiliza una coloracin de contraste.
Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina
bsica. Despus de la coloracin de contraste las clulas gramnegativas
son rojas, mientras que las grampositivas permanecen azules. Deben
destacarse algunos aspectos cruciales de la tincin de Gram: 1) El
tratamiento con cristal violeta debe preceder al tratamiento con yodo. El
yodo por s solo tiene poca afinidad con las clulas. 2) La decoloracin
debe realizarse con poca agua para evitar que pierdan la tincin las clulas
grampositivas. EI proceso de decoloracin debe ser corto y es esencial un
clculo preciso del tiempo para obtener resultados satisfactorios. 3) Cultivos
ms viejo de 24 horas pueden perder su habilidad de retener el complejo
cristal violeta - yodo. El carcter de grampositivo no es siempre un
fenmeno del todo o nada. Algunos organismos son ms grampositivos que
otros y algunos son gram-variables, es decir, unas veces grampositivos y
otras gramnegativos.

Tincin De Esporas (Wirtz-Conklin)

Algunos gneros bacterianos, entre los que destacan Clostridium y Bacillus,
producen en su interior formas de resistencia denominadas endosporas. Se
producen cuando las condiciones ambientales son desfavorables (agotamiento de
los nutrientes, temperaturas extremas, radiaciones, compuestos txicos, etc.)
formndose una espora por cada forma vegetativa. Al finalizar el proceso de
esporognesis, la clula vegetativa se lisa y libera la espora al exterior. Cuando el
ambiente es favorable, la espora germina generando una nueva forma vegetativa.
La capacidad de germinar perdura durante aos. Algunas de las bacterias
productoras de endosporas son patgenas para el hombre, por lo que su estudio y
observacin son de enorme inters.
Objetivos: Observar las endosporas y su disposicin en las formas vegetativas,
Comparar las distintas morfologas y disposiciones que adoptan las endosporas en
las especies empleadas.
Las endosporas poseen unas cubiertas exclusivas que las hacen resistentes a los
factores ambientales adversos. Adems, estas cubiertas hacen que las esporas
aparezcan en el microscopio ptico como estructuras refringentes y de difcil

tincin. La tincin especfica de esporas requiere dos

colorantes: 1.- Verde malaquita: capaz de teir las
esporas en caliente. 2.- Safranina: colorante de
contraste que tie las formas vegetativas. Las
endosporas, tras la primera tincin, no perdern el
colorante en el lavado con agua, y s lo harn las
formas vegetativas, que quedarn teidas con el
segundo colorante.

Tincin de flagelos o Leifson

Es una tincin para lograr observar flagelos de bacterias, Los flagelos, largos y
finos apndices de las clulas bacterianas que les permiten moverse, son tan
delgados que resultan invisibles al microscopio ptico, si no se realiza una tcnica
especial para su tincin. Los distintos mtodos de tincin utilizan combinaciones
de mordientes y metales para engrosar los flagelos, as como colorantes para
teirlos. Es usada en laboratorios, pero no de rutina. Los pasos que sigue son el
de usar rosanilina sirve como tincin principal, y cido tnico es agregado a la
solucin como mordiente.
Los Reactivos correspondientes para esta tincin son:
Fucsina bsica en Alcohol etlico.
cido tnico en agua destilada.
Cloruro de sodio en agua destilada.
Mtodo de Kodaka
Flagelos
rganos de locomocin.
Filamentos simples qumicamente compuestos de protena conocida como
flagelina.
Tienen su origen en el protoplasma de la clula bacteriana y su espesor es
alrededor de 0.01 micrones. Algunos Tipos de flagelos son: monotricas, lofotricas,
anfitricas y peritricas.
Para preparar la solucin de uso, se mezclan cantidades iguales de las soluciones
A, B, y C y se guarda en frasco cerrado hermticamente en la nevera donde es
estable durante varias semanas.
Hacer un crculo en un portaobjetos perfectamente limpio para lo cual previamente
fue sumergido en mezcla crmica durante 24 horas, lavado
posteriormente con agua destilada, enjuagado con alcohol y secado con un
trozo de tela limpio. Desengrasarlo pasando por una flama varias veces.

Colocar dentro del crculo con pipeta Pasteur, una gotita de la suspensin
bacteriana e inclinar el portaobjetos de uno y otro lado para extender la
muestra, luego Fijar la preparacin al aire ya que si esta operacin se hace
usando la flama del mechero se pueden destruir los flagelos.
Humedecer la preparacin con el Colorante de Leifson y dejarla en reposo a
temperatura ambiente durante 10 minutos en tiempo caluroso o en la incubadora
en tiempo fro, por ultimo lavar con agua destilada & observar resultados
Visin al microscopio de una tincin de flagelos, se observan bacilos curvos,
algunos prcticamente en forma de media luna.
La punta de flecha muestra la insercin de los flagelos.

Tincin azul de metileno de Loeffler

El azul de metileno se utiliza para teir clulas animales, para hacer ms visibles
sus ncleos. Es tambin utilizado para teir los extendidos de sangre para ser
utilizados en citologa y como colorante vital en el recuento de reticulocitos. El azul
de metileno, cuyo nombre cientfico es cloruro de metiltionina, es un colorante
orgnico que se usa para tratar una enfermedad llamada metahemoglobinemia.
Es un compuesto qumico heterocclico aromtico, La empresa
farmacutica TauRx Therapeutics ha comprobado que el uso del azul de metileno
retrasa el deterioro de las funciones cognitivas de los enfermos de Alzheimer. De
cualquier manera, la formulacin empleada en los ensayos clnicos no es la
utilizada para teir las clulas y, por tanto, no debe utilizarse.

Tincin de Ziehl-Neelsen
La tincin de Ziehl-Neelsen es una tcnica de tincin diferencial rpida y
econmica, usada para la identificacin de bacterias cido-alcohol resistentes
(BAAR) , como M. tuberculosis o el gnero Api complexa (coccidios intestinales)
entre otros. Fue descrita por primera vez por dos mdicos alemanes: Franz Ziehl,
un bacterilogo, y Friedrich Neelsen, un patlogo. La tincin de Ziehl-Neelsen es
una tcnica de tincin diferencial rpida y econmica, usada para la identificacin
de bacterias cido-alcohol resistentes (BAAR) , como M. tuberculosis o el gnero
Apicomplexa (coccidios intestinales) entre otros. Fue descrita por primera vez por
dos mdicos alemanes: Franz Ziehl, un bacterilogo, y Friedrich Neelsen, un
patlogo. Las paredes celulares de ciertas bacterias contienen cidos grasos
(cidos miclicos) de cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren

la propiedad de resistir la decoloracn con alcohol-cido, despus de la tincin

con colorantes bsicos. Por esto se denominan cido-alcohol resistentes. Las
micobacterias como Mycobacterium tuberculosis y M. marinum se caracterizan por
sus propiedades de cido-alcohol resistencia. La coloracin clsica de ZiehlNeelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared
bacteriana que contiene ceras. Al suspender el calentamiento y enfriar con agua,
provoca una nueva solidificacin de lo cidos grasos de modo que el colorante ya
no puede salir de las bacterias. Por otro lado, el calentamiento aumenta la energa
cintica de las molculas del colorante lo cual tambin facilita su entrada a las
bacterias. Las bacterias que resisten la decoloracin son de color rojo y las que
no, se ven de color azul ya que se utiliza azul de metileno como tincin de
contraste.
Esta tcnica puede realizarse tanto en muestras histolgicas como citolgicas.
Resultados: BAAR: rojo. Amarillo, Ncleos: azul semiamarillo.

Usando la tincin de Ziehl-Neelsen.

Fundamento
Las paredes celulares de ciertas bacterias contienen cidos grasos (cidos
miclicos) de cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren la
propiedad de resistir la decoloracn con alcohol-cido, despus de la tincin con
colorantes bsicos. Por esto se denominan cido-alcohol resistentes. Las
micobacterias como Mycobacterium tuberculosis y M. marinum se caracterizan por
sus propiedades de cido-alcohol resistencia. La coloracin clsica de ZiehlNeelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared
bacteriana que contiene ceras. Al suspender el calentamiento y enfriar con agua,
provoca una nueva solidificacin de lo cidos grasos de modo que el colorante ya
no puede salir de las bacterias. Por otro lado, el calentamiento aumenta la energa
cintica de las molculas del colorante lo cual tambin facilita su entrada a las
bacterias. Las bacterias que resisten la decoloracin son de color rojo y las que
no, se ven de color azul ya que se utiliza azul de metileno como tincin de
contraste.

Tcnica
Esta tcnica puede realizarse tanto en muestras histolgicas como citolgicas.
Variante histolgica
Para demostrar la presencia de BAAR en cortes de tejido en parafina.Los
reactivos necesarios para su realizacin son los siguientes:
1. cido perydico 58%
2. carbol fucsina de Ziehl culina(fucsina fenicada). Preparar mezclando en el
orden dado:
1. 0,5 g fucsina bsica
2. 50 ml agua destilada
3. 5 ml etanol absoluto
4. 28,5 g cristales de fenol derretidos
3. hematoxilina
4. alcohol cido 1%:
1. alcohol de 35
2. cido clorhdrico
El procedimiento es el siguiente:
1. desparafinar e hidratar los cortes
2. cido peridico 5%, 10 min
3. lavar con agua destilada
4. fucsina fenicada, 15 min
5. decolorar en alcohol cido al 50%
6. lavar con agua destilada
7. hematoxilina, 10 min
8. azulidificar con, por ejemplo, carbonato de litio
9. deshidratar, aclarar y montar preparaciones
Resultados
BAAR: rojo.amarillo
Ncleos: azul semiamarillo.

Variante clsica o "en caliente"=

1. Hacer un frotis de la muestra.
1. La fijacin al calor asegurar de que el frotis quede adherido al
portaobjetos. Un frotis muy delgado puede darle resultados
falsamente negativos y un frotis muy grueso puede desprenderse
del portaobjetos durante la tincin.
2. Utilizando pinzas, coloque los portaobjetos en una gradilla de tincin
con los extendidos hacia arriba.
2. Dejar el frotis sobre el puente de tincin.
3. Aplicar fucsina-fenicada.
1. Deje que el colorante permanezca sobre los portaobjetos durante 5
minutos. Mantenga el calor durante este perodo,
4. Calentar con un mechero hasta la emisin de vapores (3-5 minutos).
1. Se requiere el tiempo adecuado para que la fucsina fenicada penetre
y tia la pared celular de la bacteria. No deje que hierva o se seque
el colorante.
2. Lave suavemente el colorante de cada portaobjetos con agua
corriente fra hasta que toda la tincin libre quede lavada. Lave
suavemente de manera que el extendido no se barra del
portaobjetos. Retire el exceso de agua.
5. Decolorar con alcohol-cido.
1. Cubra cada portaobjetos con la solucin decolorante, tal como
alcohol cido y mantngalo sobre el portaobjetos durante 7 minutos.
Si no se decolora suficientemente, el contenido del esputo que no
son bacilos TBC puede permanecer teido. Enjuague con agua una
vez ms los portaobjetos y quite el exceso de agua. Si los
portaobjetos an estn rosa, aplique una cantidad adicional de la
solucin decolorante de 1 a 3 minutos.
6. Aplicar azul de metileno (1 minuto).
1. Aplique la solucin de contraste, azul de metileno, durante 1 minuto.
7. Enjuagar con agua
1. Vuelva a enjuagar con un leve chorro de agua e incline cada
portaobjetos hasta drenar el exceso de agua. Finalmente, coloque
cada portaobjetos en una gradilla a que sequen al aire.

8. Ahora coloquele una pequeita gota de aceite de inmersin y haga la

observacin al microscopio con 100 x 100
o en "fro" (Tincin de Kinyoun)
1. Hacer un frotis.
2. Dejarlo en el puente de tincin.
3. Aplicar fucsina-fenicada (solucin con fenol y mayor concentracin de
fucsina).
4. Dejar en vasos coplin durante 20 minutos.
5. Decolorar con alcohol cido.
6. Lavar con agua del grifo.
7. Contrastar con azul de metileno
Algunos microorganismos cido-alcohol resistentes

Mycobacterium: fuertemente cido-alcohol resistentes.

Nocardia y Actinomices: dbilmente cido-alcohol resistentes.

Parsitos coccdeos (Cryptosporidium) de muestras [fecales].

Tincion Masson o Azul de Anilina

La tincin tricrmica de Masson, al igual que otras tinciones tricrmicas, es una
tcnica de coloracin especial que permite visualizar claramente las fibras
de colgeno tipo I que forman fibras gruesas o haces, diseados para dar
resistencia; tambin evidencia, aunque en menor intensidad, las fibras reticulares.
Se emplean tres colorantes para diferenciar el ncleo celular, el citoplasma y
las fibras de colgeno. En primer lugar, se tien las secciones con
un tinte cido tal como escarlata de Biebrich. Todos los elementos acidfilos
del tejido tales como el citoplasma, el msculo y el colgeno se unirn a los tintes
cidos.
Las
secciones
entonces
se
tratan
con cido
fosfotngstico y/o fosfomolbdico. Ya que el citoplasma es mucho menos
permeable que el colgeno, los cidos fosfotngsticos y fosfomolbdicos permiten
que la escarlata de Biebrich difunda del colgeno pero no del citoplasma. Los
cidos fosfotngsticos y fosfomolbdicos tienen numerosos grupos cidos que
probablemente acten como medio de unin entre el colgeno y el azul de
la anilina, que es el tinte del colgeno. Probablemente, el pH de la solucin

fosfotngstico/fosfomolbdico tambin aumente la coloracin y ayude al colgeno

en la difusin o el retiro de los colorantes.
Anlisis de resultados
Fibras de colgeno = Azul, Por tanto, el tejido conjuntivo se teir de dicho color.
Estructuras oxidadas + Citoplasma = Rojo. Se teirn de rojo la queratina,
los glbulos rojos y el tejido muscular. Ncleo celular = Lila, marrn.

Naranja De Acridina
El fluorocromo naranja de acridina se une al cido nucleico ya sea en su forma
nativa o desnaturalizada. En algunas preparaciones de naranja de acridina, el
color de la fluorescencia puede variar, dependiendo del pH y de la concentracin.
El naranja de acridina ha sido empleado como colorante vital, que da una
fluorescencia verde si el microorganismo est vivo y roja si est muerto. De todos
modos, como el colorante se intercala en el cido nucleico, el germen viable se
inactivar poco tiempo despus de la tincin. El uso de naranja de acridina para
detectar la presencia de bacterias en los hemocultivos ha sido ampliamente
aceptado. De hecho, una gran cantidad de estudios han demostrado que la tincin
de hemocultivos con naranja de acridina es tan sensible como el subcultivo ciego
para la deteccin inicial de hemocultivos positivos. Es capaz de atravesar la
membrana celular e interacta con el ADN y el ARN por intercalacin o
interacciones electrostticas. Cuando se une al ADN presenta un espectro muy
similar al de la fluorescena. Al igual que la fluorescena, se puede utilizar tambin
como una tincin inespecfica para dar un trasfondo fluorescente (contraste) a
tinciones convencionales en la superficie de muestras slidas de tejidos
(coloracin de contraste fluorescente

Tincin Negativa o Tinta China

Tincin negativa es una tcnica de microscopa que

permite contrastar las muestras mediante una
sustancia opaca a los fotones (microscopa ptica) o a
los electrones (microscopa electrnica). En el primer
caso, se emplea nigrosina o tinta china; para el caso
de bacterias que esporulan, esta tcnica permite
visualizar las esporas como entes refringentes sobre
un campo de fondo oscuro.1 En caso de microscopa
electrnica de transmisin, se emplean sustancias de
alto nmero atmico que, por tanto, resultan opacas a
los electrones transmitidos. Tpicamente, estas sustancias son acetato de
uranilo, citrato de plomo molibdato de amonio. Al electrnico, esta tcnica permite
visualizar virus, flagelos, bacterias y otros entes de escaso tamao.

Tincin de Giemsa
La tincin de Giemsa (pr. gumsa), ideada por el alemn Gustav Giemsa, es un
mtodo habitual para el examen de frotis sanguneos, cortes histolgicos y otro
tipo de muestras biolgicas. Este mtodo tiene utilidad sobre todo para poner de
manifiesto las rickettsias localizadas dentro de las clulas huspedes. La
coloracin de Giemsa se emplea tambin para teir frotis de sangre en el examen
para protozoos. Se pueden emplear, como variaciones, otras coloraciones como
es la tcnica de citoconcentracin para parsitos sanguneos, la cual tiene un bajo
coste y ofrece la posibilidad de aislar e identificar en el mismo sedimento el
parsito principal, con excepcin de los trofozoitos jvenes y el Plasmodium
falciparum; tambin se emplea la tincin de Wright. Este mtodo de tincin permite
tambin la tincin diferencial de zonas con un alto contenido de ADN, y
concretamente de uniones A-T. Esto permite distinguir perfectamente en
microscopio ptico el ncleo celular, los cromosomas durante la mitosis, y en
algunos casos, incluso el ADN mitocondrial (kinetoplasto de algunos protozoos,
como Trypanosoma). Los cromosomas pueden ser tratados con varios
compuestos qumicos que producen la alternancia de bandas claras y oscuras a lo
largo de los cromosomas. Cada cromosoma tiene un patrn de bandas
caracterstico, permitiendo que aberraciones estructurales como borrados,
duplicaciones o sutiles translocaciones sean detectadas, al igual que permite la
identificacin de cromosomas marcadores. Estos poliorganismos adquieren una
coloracin diferencial y se ven dentro del citoplasma de la clula husped. La
tcnica de Giemsa est formada por varios colorantes: los tintes neutros utilizados
combinan el azul de metileno, Azure A y Azure B como tintes bsicos, y
la eosina como tinte cido, lo que da una amplia gama de colores. El azul de
metileno y el Azure son colorantes metacromtico, de ah que muchas estructuras

se tian de prpura y no de azul. El pH de la solucin de coloracin es crtico y se

debe ajustar idealmente segn diversos fijadores. La gama del pH debe estar
entre 6.4 y 6.9. Para muestras histolgicas, los mejores resultados se obtienen en
muestras fijadas con formol, incluidas en parafina y cortadas entre 3 y 6 micras.
Los trminos colorante metacromtico y su propiedad denominada metacromasia
se refieren a un colorante que al entrar en contacto con la muestra a teir cambia
su propio color original; los ejemplos clsicos de esta caracterstica son el azul de
metileno -como bien dice la bibliografa- y el azul de tolouidina. Su aspecto en el
corte histolgico da un prpura-rojizo. Es usado, adems de los extendidos de
sangre, en los cortes de cartlago hialino debido a la gran carga de
glucosaminoglucanos cidos.
1. Se aplica giemsa en la muestra y encima bufer(solucin amortiguadora) Por
30 minutos, luego secar.
Resultados:
1. Citoplasma: morado
2. Ncleos: azul
3. Eritrocitos: rosa - naranja
4. Grnulos de las clulas cebadas: prpura
5. Bacterias: azul
6. Parsitos: azul

Tincion de Blanco De Calcoflor

Las paredes celulares de los hongos fijan el colorante blanco de calcoflor
aumentando considerablemente su visibilidad en los tejidos y otras muestras.
Segn fue descrito por Hageage y Harrington, este colorante se emplea en
lugar de KOH al 10% para el examen inicial de los materiales clnicos. Tambin
se emplea para aumentar la visualizacin de los elementos morfolgicos de
los cultivos puros de los hongos. En algunos laboratoros ha suplantado al azul
de lactofenol en muchas aplicaciones. Los organismos fluorescen con luz
blanco-azulada o verde manzana, segn la fuente luminosa que se utilice.

Tincin hematoxilina- eosina

La tincin hematoxilina-eosina corresponde a la mezcla de hematoxilina y eosina.
La tincin hematoxilina y eosina es el mtodo de tincin de rutina utilizado
en histologa y medicina diagnstica.
El mtodo supone la aplicacin de la tincin de hematoxilina, que por ser catinica
o bsica, tie estructuras cidas (basfilas) en tonos azul yprpura,como por
ejemplo los ncleos celulares; y el uso de eosina que tie componentes bsicos
(acidfilos) en tonos de color rosa, gracias a su naturaleza aninica o cida, como
el citoplasma.

Procedimiento: Sumergir los preparados histolgicos en xilol para eliminar

los excesos de parafina. El xilol es un alcohol txico pero existen reactivos
(como el Hemo-D) que ejercen la misma funcin aclarante de parafina sin la
toxicidad del xilol.

Luego pasan por una serie de alcoholes en concentracin decreciente para

rehidratar la muestra (100, 95 y 70).

Se lava en agua para eliminar exceso de alcohol

Se sumerge en hematoxilina por 10 minutos, luego se lava en agua para
eliminar excesos y se pasa rpidamente por alcohol cido.

Se lava nuevamente

Se sumerge 30 segundos en eosina.

Se pasa por otra serie de alcoholes, esta vez en

orden creciente (70, 95 y 100) para deshidratar la
muestra y que se pueda realizar el montaje con un
pegamento no soluble en agua.

Finalmente se deja remojar 10 minutos en xilol, antes de realizar el montaje

final.
Resultados:

Ncleo celular: violeta

Citoplasma: Rosa

Musculatura: Rojo , rosa o fucsia

Glbulos rojos: Rojo, anaranjado

Fibrina: Rosa

Tincin De Rodamina-Auramina
Los cidos miclicos de las paredes celulares de las micobacterias poseen
afinidad para los fluorocromos auramina y rodamina. Estos colorantes se fijan a
las bacterias, que aparecen de color amarillo o naranja brillante contra un fondo
verdoso. El permanganato de potasio, empleado como contraste, evita la
fluorescencia inespecfica. Todos los microorganismos cido-alcohol resistentes,
incluyendo los esporozoarios parsitos, se tien con estos colorantes. Un aspecto
importante de la coloracin rodamina-auramiria es que luego los frotis pueden ser
reteidos con la coloracin de Ziehl-Neelsen o Kinyoun directamente sobre la
tincin con el fluorocromo, si se elimina antes el aceite de inmersin. De esta
forma, los resultados positivos pueden ser confirmados con las coloraciones
tradicionales, que adems permiten la diferenciacin morfolgica.

Tincin de Albert
Una mezcla acidificada de colorantes azul de toluidina y verde de metilo en
solucin hidroalcoholica, en donde el azul de toluidina tie los granulos
metacromaticos y el verde de metilo tie preferencialmente el citoplasma, luego el
colorante se fija con una solucin de yodo/yoduro (Lugol). Esto facilita diferenciar
el bacilo diftrico por su contenido de granulos de Polimeta-fosfato, compuesto
que se colorea metacromaticamente con el colorante de Albert, quedando los
grnulos de color azul oscuro y el cuerpo del bacilo de color verde claro.

Tincin de Abbott
La preparacin se cubre con azul de metileno, se calienta a ebullicin y se lava
con agua y alcohol con 0.2 a 3% de cido clorhdrico. Se lava nuevamente con
agua y se tien durante 8 a 10 segundos con una solucin de anilina-fucsina. Las
esporas se tien de azul y las bacterias de rojo.

Tincin de Gromori

La tincin de Gromori es utilizada para la demostracin de enzimas,

especialmente fosfatasas y lipasas. Tambin evidencia fibras de tejido conjuntivo y
grnulos de secrecin. En un paso es un mtodo idneo para teir fibrina, tejido
muscular y citoplasmas, donde destaca esencialmente el condrioma como un fino
granulado rojizo. Sin embargo, por su pH cido, que se encuentra entre 2.5 y 2.7
(ligeramente por encima del ptimo para la tincin del colgeno), se presenta
como una tincin incompleta y difusa del componente fibrilar ms fino (membrana
basal y finas fibras reticulares). Esta tcnica combina un colorante plasmtico
(cromotropo 2R) y un colorante de fibras conectivas (verde luz/azul de anilina) en
una solucin de cido fosfotngstico y cido actico glacial. El tratamiento previo
de las secciones con solucin de Bouin caliente intensifica la tincin. El cido
fosfotngstico favorece la coloracin roja de msculo y citoplasmas. Las fibras
de colgeno toman los iones detungstato formando un complejo al que se une el
verde luz. El bao de cido actico hace los colores ms trasparentes pero no
altera el balance de color.

Tincin de Grocott
La plata metanamina de Grocott es un mtodo de tincin especial ms empleado
para hongos. La reaccin tintorial est basada en que, en presencia de cido
perydico,
los polisacridos de
la pared
celular de
los
hongos
son oxidados a aldehdos; stos, a su vez, reducen el complejo nitratoplata metanamina (o metenamina) produciendo una coloracin de caf a negra,
debido al depsito de platareducida en los lugares de localizacin de los
aldehdos.
Tambin se utiliza para la identificacin de la melanina. Este pigmento es
producido en la piel por los melanocitos. En los humanos la melanina se encuentra
en piel, cabello, en el recubrimiento de laretina. Aunque los seres humanos
generalmente poseen una concentracin similar de melanocitos en su piel, estos
expresan en algunos individuos y en algunas etnias ms frecuentemente
el genproductor de melanina, por lo que se confiere una mayor concentracin de
melanina en la piel.

Tincin de Lee
Azul de metileno y fucsina bsica. Se utiliza a menudo como una tincin general,
siendo mejor que la H&E para los tejidos musculares. Los ncleos tien de azul,
las mitocondrias, los cilios y algunos grnulos tien de rojo o rosa. Los cartlagos y
la mayor parte de las inclusiones celulares tien de azul a prpura.

Tincin de Loeffler
Es (para bacilos del muermo, en cortes). Se tien los cortes de parafina durante
20 min en la solucin de azul de metileno de Lffler o en partes iguales de una
solucin de Koch al 1:10.000 y violeta de genciana; se colocan durante 5 min en
10 ml de agua destilada que contenga 2 gotas de cido sulfrico concentrado y 1
gota de cido oxlico al5 %. 11 (para flagelos). Colocacin de la preparacin
durante 1 min en una solucin recientemente filtrada de 10 9 de cido tnico en 50
ml de agua, 2,5 ml de solucin fra saturada de sulfato ferroso y 0,5 ml de solucin
acuosa o alcohlica de fucsina o violeta de genciana. Se calienta 1 min en el
portaobjeto sin hervir; se lava la preparacin y se tie con una solucin
recientemente preparada y filtrada de violeta de genciana o fucsina-anilina.

Tincin de Mallory
Una tcnica para el estudio del tejido conjuntico. Los cortes se tien con fucsina
cida, solucin de azul-naranja G de anilina y cido fosfotungstico. Las fibras de
colgeno aparecen en azul, la fibroglia, neuroglia y fibras musculares aparecen en
rojo y las fibrillas de elastina en naranja. Tambin llamada tincin tricrmica de
Mallory. Es utilizada para el estudio del tejido conectivo, glndulas, hongos, piel,
lengua, etc. Desarrollada por Frank B. Mallory est constituida por tres colorantes:
1. Fucsina cida.
2. Orange G
3. Azul de anilina.

Tincin de May- Grunwald Giemsa

La tincin de May Grnwald-Giemsa (MGG) es una tcnica de tincin derivada
del mtodo de Romanowsky que se utiliza principalmente para el coloreo de
muestras de frotis sanguneos o extendidos de mdula sea. Como el resto de las
coloraciones basadas en la tcnica de Romanowsky, la tcnica MGG permite
diferenciar cualitativa y cuantitativamente los principales elementos formes de la
sangre.
En los laboratorios clnicos de hematologa resulta especialmente til para la
demostracin de alteraciones en el nmero, proporcin y morfologa de las clulas
sanguneas. Tambin puede ser adaptada para su utilizacin como una tcnica de
tincin clsica para cortes histolgicos.
Como su nombre lo indica, la tcnica combina las tcnicas de coloracin
desarrolladas por May-Grnwald y Giemsa. Estas tcnicas a su vez se basan en el
empleo de dos soluciones colorantes:

La solucin de May-Grnwald, que contiene el colorante ninico eosina y

el colorante catinico azul de metileno ambos disueltos en metanol

La solucin de Giemsa, que contiene eosina, azul de metileno y una serie

de productos de la oxidacin de este ltimo tales como el azur A, el azur B,
el violeta de metilo y el azul de metilo.

Todos estos colorantes se encuentran en estado no ionizado mientras se

mantienen en solucin de alcohol metlico, pero al aadir agua se ionizan y se
unen selectivamente a los constituyentes celulares precipitando como sales
insolubles.
Los componentes celulares de naturaleza aninica (cida) se unen selectivamente
a los tintes catinicos tindose en variados tonos de azul. Estos componentes
son llamados basfilos: (ADN,mitocondrias, ribosomas y citoplasma de clulas
ricas en ARN).
Los componentes celulares de naturaleza catinica (bsicos) se unen
selectivamente al tinte cido eosina, tindose en variados tonos de naranja y
rojo. A estos elementos se los denomina acidfilos o eosinfilos. Este es el caso
de la hemoglobina, y de las protenas contenidas en las granulaciones de
los granulocitos eosinfilos.
Los componentes celulares que tienen afinidad por ambos tipos de colorantes se
denominan neutrfilos y se tien en variados tonos de violeta.
Cabe destacar que las coloraciones finales obtenidas son muy dependientes del
pH de las soluciones de tincin y de las soluciones de lavado, por lo que los tonos
pueden variar bastante, teniendo un aspecto ms verdoso cuando el pH final
obtenido es cercano a 5 y un tono rojizo cuando el pH final es cercano a 9. Para
evitar estos efectos se suelen utilizar soluciones amortiguadoras de pH neutro
para preparar las soluciones de tincin y las soluciones de lavado.

Tincin de Nissl
La tincin de Nissl es una tincin usada comnmente en secciones de tejido
nervioso, aunque puede usarse para teir cido nucleicos en cualquier tejido. El
colorante en el que se basa la tincin es normalmente el azul de toluidina o el
violeta de cresilo. El ms usado es el violeta de cresilo, que es el que se describe
ms abajo. En el citoplasma de las neuronas aparecen unas estructuras
fuertemente teidas con esta tincin. Se denominan cuerpos de Nissl y se
corresponden con cmulos de retculo endoplsmico rugoso. Este orgnulo celular
se tie con los colorantes bsicos puesto que contiene una gran concentracin de

ribosomas y por tanto de ARNr y ARNm en proceso de traduccin, siendo ambas

molculas cidos nucleicos. La calidad de la tincin depende del tiempo de
diferenciacin durante la deshidratacin final, luego los tiempos en estos alcoholes
afectarn al resultado final.
Si se quiere que las gotas de lpidos o la mielina no interfieran con la tincin de los
cuerpos celulares se pueden deshidratar en etanol creciente y volver a hidratar
para eliminar tales lpidos.

Tincin de Romanowsky
La tincin de Romanowsky es una tcnica de tincin prototpica que fue
predecesora de varios mtodos distintos la preparacin de calienta a 110C
durante 30 min o ms y tien con una mezcla recin preparada de azul de
metileno saturada (una parte) y de eosina al 1% (dos partes) en un vidrio de reloj.
Los parsitos se tien de azul y los ncleos de violeta. Las clulas sanguneas se
tien de rojo. Se utiliza para identificar plasmodios. Esta basado en principios
similares entre los que se incluyen las tinciones de Giemsa, Jenner, Wright, Field,
y Leishman, las cuales son utilizadas para diferenciar diferentes tipos
de clulas en especmenes patolgicos. Para este propsito Paul Ehrlich en 1879
haba comenzado utilizando una mezcla de colorantes cidos y bsicos, por
ejemplo fucsina (colorante cido) y azul de metileno (colorante bsico).2 En 1891
Ernst Malachowski3 4 5 y Dmitry Leonidovich Romanowsky6 7 8 desarrollaron de
manera independiente sendas tcnicas haciendo uso de una mezcla
de Eosina y azul
de
metileno modificado
que
produjo
un
sorprendente tono imposible de atribuir a ninguno de los componentes de tincin:
un hermoso, distintivo color prpura9 10 Los requerimientos para que ocurra el
efecto Malachowski-Romanowsky-Giemsa son:
1. Un colorante catinico: el mejor colorante es el Azur B y, a pesar de que el
colorante Azur A es el responsable del color prpura del ncleo, el azul que
confiere al citoplasma es inferior. Ningn otro colorante catinico que no
sea el azul de metileno resulta adecuado.
2. Un colorante aninico: El ms comnmente utilizado es la Eosina Y.11
Debido a que las soluciones acuosas de colorantes eran inestables, se
introdujo metanol como un disolvente, y William Boog Leishman12 y James Homer
Wright13abogaron tambin por el uso de metanol como fijador antes de la
tincin. Gustav Giemsa mejor esta tcnica mediante la estandarizacin de las
soluciones de colorantes y la adicin de glicerol para aumentar su

estabilidad.14La demetilacin del azul de metileno en solucin acuosa utilizando

calor y un lcali produce una mezcla de Azur A, Azur B, violeta de metileno y azul
de metileno. Luego se aade Eosina Y para producir un colorante "neutro". El
precipitado formado se disuelve despus en una mezcla de glicerol y metanol,
para formar una solucin de almacenaje (de stock); luego esta solucin de stock
se disuelve con agua o una solucin acuosa tamponada para formar la solucin
de trabajo que es utilizada para teir las muestras patolgicas. La solucin de
trabajo es estable por tres horas.15Los procedimientos de captura
inmunocromatogrfica (malaria antigen detection test) son una alternativa de
diagnstico no microscpico para aquellos laboratorios que no pueden disponer de
un microscopista experto.

Tincin de Perls
Esta tincin es utilizada para identificar en los extendidos del material aspiro de
mdula sea la presencia de hemosiderina.
Para realizar la tincin es necesario ferrocianuro de potasio al 4%, cido
clorhdrico al 4%, colorante rojo rpido nuclear y formol.
La tcnica de tincin es la siguiente:
1. Preparacin solucin de Perls: colocar en un vaso de precipitado: 25 ml de
ferrocianuro de potasio y 25ml de HCl al 4% (debe prepararse la solucin al
momento de usar, es una solucin muy txica, venenosa)
2. Fijar los frotis con formol por 5 minutos (aproximadamente de 6 a 8 gotas) o
metanol.
3. Dejar secar al aire.
4. Vaciar la mezcla de Perls precalentada a 56 C en un vaso de Copplin,
inmediatamente colocar los frotis (previamente fijados) y tapar.
5. Incubar por 30 minutos.
6. Lavar con agua de la canilla.
7. Dejar secar al aire.
8. Contrateir con solucin de rojo rpido nuclear por 5 minutos. Tambin se
puede contrateir con hematoxilina-eosina.
9. Lavar con agua de la canilla.
10. Secar al aire.

11. Cubrir con resina sinttica y un cubreobjetos.

Los depsitos de hemosiderina se observarn teidos de tono azulado, hay que
cuidarlo de no confundirlos con los granulocitos eosinfilos.

Tincin de Pappenheim:
Para la diferenciacin entre las granulaciones basfilas de los hematis y los
fragmentos nucleares:

Colorante I: cido fnico: 0.35 ml; verde de metilo: 1 g; agua destilada: 100
ml

Colorante II: cido fnico: 0.25 ml; pironina: 1 ml; agua destilada; 100 ml.

Se mezclan 15 ml de I con 35 ml. de II y se filtra. La preparacin se sangre se fija

por calor y se tie con el filtrado. Los granos basfilos tien de rojo y los
fragmentos nucleares de azul oscuro

Tincin de Pfeiffer:
La preparacin se sumerge durante 30 min en solucin de Ziehl; se traslada a
alcohol absoluto acidificado con actico. Tan pronto como el corte se tie de rojo,
se aclara con xilol y se monta en blsamo

Tincin de Unna-Pappenheim
Un medio de contraste a base de verde de metileno-pironina, utilizada para
identificar clulas plasmticas cuyo citoplasma es teido de rojo por su alto
contenido en RNA. La preparacin se fija durante 3 minutos en May-Grnwald, se
diluye con agua destilada y se tie durante 3 minutos y se tie nuevamente con
Giemsa durante 15-20 minutos.

Tincion de Van Gieson

La Tincin de Van Gieson corresponde a la mezcla de cido pcrico-fucsina
cida y hematoxilina frrica de Weigert.
Es el mtodo ms simple mediante tincin para diferenciar colgeno de otros
tejidos conectivos. Esta tcnica fue desarrollada por el neuropsiquiatra y
patlogo Ira Van Gieson.

Un mtodo de tincin del tejido conjuntivo. No se utiliza tan a menudo como la

tincin de Mallory porque se difumina con el tiempo. El colgeno tie de rojo y el
msculo y el citoplasma de amarillo. En combinacin con la tincin de Verhoeff es
una las tinciones ms interesantes para el estudio de los vasos sanguneos

Tcnica de tincin: Los preparados histolgicos son sumergidos en agua

por unos 5 minutos.

Se sumergen 5 minutos en hematoxilina frrica de Weigert.

Se lavan en agua corriente (hasta que no suelte mas colorante).

Se lavan en agua destilada.

Se sumerge en cido pcrico-fucsina cida por 5 minutos.

se sumerge en alcohol al 95 por 10 minutos

Se sumerge en alcohol al 100 por 5 minutos

Se sumerge dos veces diferentes frascos de xilol 5 minutos en cada

ocasin.
Resultados:

Ncleos celulares: Color marrn a negro.

Colgeno (tejido conectivo fibroso): Color rosa o rojo.

Msculo y Citoplasma: Color amarillo.

Tincion de Verhoeff

La tincin de Verhoeff o tambin de Verhoeff-Van Gieson (VVG) es una

tcnica1 utilizada en histologa. Fue desarrollada por el cirujano, oftalmlogo y
patlogo estadounidense Frederick Verhoeff en 1908.2 3 Se utiliza para evidenciar
las fibras elsticas en un tejido biolgico y en especial las enfermedades que lo
afectan.4

Forma enlaces catinicos, aninicos y no inicos con la elastina, el constituyente

principal del tejido elstico fibroso. 2 La elastina tiene una afinidad fuerte por el
complejo hierro-hematoxilina formado por los reactivos en la tincin y por lo tanto
la retendr mucho ms tiempo que otros componentes del tejido, por lo que
aparecer teida, mientras los otros elementos aparecen poco coloreados. El uso
de tiosulfato de sodio remueve el exceso de iodo y se utiliza una contratincin
(mayoritariamente tincin de Van Gieson) para dar contraste a la tincin principal.
Las fibras elsticas y los ncleos celulares se tien de negro, las fibras
de colgeno de rojo y otros elementos del tejido incluyendo el citoplasma se tien
de amarillo.
La tincin de Verhoeff es una combinacin de los siguientes reactivos:

Hematoxilina

Cloruro de hierro (III)

Lugol

tincin de Van Gieson

Fucsina cida

cido pcrico

tiosulfato de sodio

Tincion de Weigert
La hematoxilina (del griedo haimatus: sangre y xilon: madera) es un
componente natural obtenido de una planta leguminosa (Haematoxylum
campechianum). La hematoxilina tiene que ser oxidada a hematena antes de
ser usada como colorante y combinada con un metal quel actuar como
mordiente. La oxidacin puede ser qumica o por el oxgeno mediane el
envejecimiento de la solucin. Es el producto oxidado de la hematoxilina, la
hematena, la que realmente se adhiere a las sustancias cidas del tejido.
Fundamentalmente tie el ncleo. La hematoxilina, la hematena como
colorante, es un componente de la tincin hematoxilina y eosina,
probablemente la tincin general ms usada en tinciones histolgicas, pero
tambin de otras tinciones como las tricrmicas donde se precisa teir ncleos.

Hematoxilina de Weigert o hematoxilina frrica; se utiliza para la tincin de

ncleos cuando se usa a continuacin una sustancia cida. La hematoxilina se
aplica junto con un mordiente que contiene aluminio potsico o aluminio
amnico y por ello no se elimina en la solucin cida posterior. La hematoxilina
y el mordiente se almacenan por separado y se aplican al tejido conjuntamente.
El color resultante es negro o prpura muy oscuro. Se emplea en soluciones
tricrmicas como el van Gieson.

Tincion de Wright
La tincin de Wright es un tipo de tincin usada en histologa para facilitar la
diferenciacin de los tipos de clulas de la sangre. Se usa principalmente para
teir frotis de sangre y punciones medulares, para ser examinadas al microscopio.
En citogentica se usa para teir cromosomas, para facilitar el diagnstico
de sndromes y enfermedades.
Lleva el nombre James Homer Wright, su inventor, que la obtuvo modificando
la tincin de Romanowsky, en 1902.
Debido a que ayuda a distinguir fcilmente las clulas de la sangre se convirti en
una tcnica muy usada para el conteo de los glbulos blancos, una tcnica
rutinaria usada cuando hay sospecha deinfecciones.
La tincin de Wright es una tincin de tipo Romanowsky. Una tincin de
Romanowsky consiste en azul de metileno y sus productos de oxidacin, as
como eosina Y o eosina B.
La accin combinada de estos colorantes produce el efecto Romanowsky que da
una coloracin prpura a los ncleos de los leucocitos y a los grnulos
neutroflicos y da color rosado a los eritrocitos. Los componentes de este efecto
son el azul B y la eosina Y.
Las propiedades de tincin de Romanowsky dependen del enlace de los
colorantes a las estructuras qumicas y de las interacciones del azul B y la eosina
Y. Los agrupamientos de cidos nucleicos, las protenas de los ncleos celulares y
el citoplasma inmaduro reactivo, fijan el azul B, colorante bsico. La tincin de
Wright cuyo colorante est compuesto de azul de metileno (que tie de color azul
las partes cidas de las clulas) y eosina (que tie las partes alcalinas) disueltos
en metanol (que permite la fijacin de las clulas), adicionando a la preparacin

buffer de fosfatos (que rehidrata a las clulas despus de la exposicin con

metanol)
La eosina Y, colorante cido, se fija a los agrupamientos bsicos de
las molculas de hemoglobina y a las protenas bsicas.

Tincion de Sudan Black B

El sistema de tincin Sudan Black B de Sigma-Aldrich se utiliza en la
demostracin histoqumica de grnulos neutrfilos en frotis de sangre o mdula
sea. El sistema de tincin Sudan Black B es para uso diagnstico in vitro. Varios
lpidos, incluyendo los fosfolpidos, las grasas neutras y los esteroles, se tien
intensamente con Sudan Black B. La reaccin de los grnulos neutrfilos con el
tinte fue descrita por Sheehan y Storey en 19471. Generalmente, el patrn de
tincin leucocitaria de Sudan Black B es parecido al de la mieloperoxidasa2. Las
clulas que se encuentran a lo largo de las vas linfticas muestran una tincin
negativa, mientras que las formas mieloides y monocitoides muestran las
reacciones positivas caractersticas. Por lo tanto,
Sudan Black B est considerado como un auxiliar til en la identificacin de las
leucemias mielocticas y mielomonocticas2.Los mtodos antiguos utilizaban una
fijacin de vapor de formaldehdo en los frotis de sangre2, tcnica que puede dar
como resultado una prdida celular y artefactos de tincin. El procedimiento de
Sigma-Aldrich utiliza un fijador de glutaraldehdo tamponado y un tiempo de
incubacin ms corto, lo que da como resultado una excelente tincin sin prdida
celular ni distorsin.

Tincion de Sudan III

La tcnica del sudn III es un mtodo utilizado generalmente para demostrar la
presencia de grasas mediante tincin de triglicridos, aunque tambin tie
otros lpidos. Pertenece al grupo de colorantes indiferentes, que son aquellos que
no tienen afinidad por estructuras cidas o bsicas. Son insolubles en el agua y
tien aquellas sustancias que tienen un poder de disolucin superior al del lquido
empleado para preparar la solucin colorante. Los colorantes para grasas son ms
solubles en las propias grasas que en el medio en el que van disueltos. As, al
baar la grasa con la solucin del colorante, ste tiende a disolverse en la grasa
que se va cargando del colorante. Por regla general estos colorantes siempre van
en solucin alcohlica o bien en una mezcla de alcohol/acetona o alcohol/agua.
El tejido diana para esta tcnica es el tejido adiposo y lpidos en general. El fijador
ideal es el formol 10%, y el grosor ptimo de corte es de 4 a 6 micras.

Tincion de Sudan IV
Las tcnicas de coloracin para la identificacin de lpidos sirven para determinar
principalmente lpidos homofsicos. El Sudn IV, llamado Escarlata R, se basa en
que el colorante es ms soluble en lpidos que en el propio disolvente en el que va
contenido. Se consideran lpidos todas aquellas sustancias orgnicas insolubles
en agua total o parcialmente, pero solubles en acetona, alcohol, cloroformo, ter,
etc... y que en general son untuosas al tacto.
Los colorantes para grasas son ms solubles en las propias grasas que en el
medio en el que van disueltos. As, al baar la grasa con la solucin del colorante
ste tiende a disolverse en la grasa que se va cargando del colorante. Por regla
general estos colorantes siempre van en solucin alcohlica o bien en una mezcla
de alcohol/acetona o alcohol/agua.
El Sudn IV es una coloracin progresiva, es decir, que a ms tiempo de
exposicin al colorante mayor es la intensidad de tincin.
La inestabilidad de las soluciones colorantes es el principal problema de esta
tcnica, pues la evaporacin de parte del disolvente provoca la precipitacin del
colorante sobre el tejido e induce a error de interpretacin (falsos positivos). Para
evitar estos falsos positivos deben seguirse los siguientes consejos:
1. Almacenar el reactivo en un lugar fresco y en recipientes cerrados
hermticamente.
2. Emplear, si es posible, soluciones diluidas filtradas, aunque estas
soluciones no pueden emplearse en muchas tcnicas que requieren
soluciones saturadas de colorante.
3. Teir los cortes flotantes antes de rescatarlos del agua, lo cual no es difcil
porque su espesor oscila entre 15 y 20 micras.
4. No prolongar la tincin ms de 10 minutos.
5. Agitar con cierta frecuencia durante la coloracin.
Los resultados sern en los lpidos un color rojo intenso y en los ncleos un color
azul.

Tincion Argentica

La tincin argntica es el uso de plata (en latn, Argentum) para modificar

selectivamente el color o la apariencia de un objeto. Es una tcnica frecuente de
tincin en histologa donde se utiliza para revelar detalles extremadamente finos.
Es utilizada para teir cortes histolgicos. Este tipo de tincin es importante
especialmente para revelar la ubicacin de protenas (por ejemplo colgeno tipo
III) y ADN. Es utilizada para demostrar ambos tipos de sustancia tanto dentro
como fuera de las clulas. La tincin argntica es utilizada tambin en
las electroforesis en gel con gradiente de temperatura en geles de poliacrilamida.
Algunas clulas son argentafines. Estas reducen las soluciones del catin plata
(Ag+) a plata metlica luego de ser fijadas con formalina. Otras clulas
sonargiroflicas. Estas reducen las soluciones del catin plata a plata metlica
luego de ser expuestas a un colorante que contengan un agente reductor, por
ejemplohidroquinona o formalina. El nitrato de plata forma fosfato de plata
insoluble en presencia de iones fosfato; este mtodo es conocido como tincin de
Von Kossa. Cuando se somete a un agente reductor, por lo general hidroquinona,
se forma plata elemental de color negro. Este mtodo se utiliza para el estudio de
la formacin de partculas defosfato de calcio durante el crecimiento seo. La
tincin argntica se utiliza en microscopa ptica. Las partculas de plata metlica
se depositan en las fibras de reticulina sensibilizadas y son fcilmente observables
en los preparados microscpicos. La tincin argntica tiene utilidad ayudando a
revelar las fibras reticulares. La tincin argntica es adems utilizada en el anlisis
de cariotipo. El nitrato de plata tie la Regin organizadora nucleolar (NOR por sus
siglas en ingls) asociada a protenas. Esto provoca una regin oscura donde la
plata se deposita, denotando la actividad de los genes de ARNr dentro de la NOR.
Los cromosomas 13, 14, 15, 21, y 22 poseen NORs. Adems, las NORs aumentan
la actividad de la tincin argntica ms de 50 veces. Esta protena fue descubierta
por Watson y Crick.

Tincin Rojo Congo

Rojo Congo es una sal de sodio, Es un secundario del Azoderivado. El Rojo
Congo es soluble en agua, conformando una solucin roja coloidal; su solubilidad
es mucho mejor en solventes orgnicos como el etanol.Tiene una gran afinidad,
aunque aparentemente, por las fibras de celulosa. Sin embargo, el uso de rojo
congo en la industria de la celulosa(algodn textil, pulpa de rbol y papel) ha
desaparecido, en parte por su tendencia a cambiar de color una vez que se toca
con los dedos manchados de sudor, al correr, y por su toxicidad.

En bioqumica e histologa, el rojo congo se usa para teir preparaciones

microscpicas, especialmente en tinciones para el citoplasma y loseritrocitos.
Verde manzana por birrefringencia de tinciones de rojo congo bajo luz
polarizada es indicativo de presencia de fibras amiloides.2Adems, el rojo congo
se usa en bacteriologa para determinar rpidamente la presencia del serotipo 2a
de Shigella flexneri, donde el colorante se une a una estructura
tipo lipopolisacrido (LPS)
nica
en
este
tipo
de
bacteria.

Tincion de Bromuro de etidio

El bromuro de etidio (BE) se intercala en el ADN y le otorga un color rojo
naranja fluorescente. A pesar de que no es capaz de teir clulas vivas ya que no
atraviesa las membranas intactas, puede ser utilizado para identificar clulas que
se encuentran en las etapas finales de la apoptosis, ya que tales clulas poseen
unas membranas mucho ms permeables. Por el mismo motivo, el bromuro de
etidio es utilizado como un marcador de apoptosis en poblaciones celulares y para
localizar las bandas de ADN en una corrida en electroforesis en gel. Este colorante
puede ser utilizado en combinacin connaranja de acridina (NA) en el conteo de
clulas viables. Esta tincin combinada BE/NA le otorga a las clulas vivas un
color verde fluorescente mientras que las clulas apoptticas aparecen con la
distintiva fluorescencia rojo-naranja.

Tincion con Carmn

El carmn es un colorante de un intenso color rojo que puede ser utilizado como
sal de litio para teir glicgeno, mientras que las sales de alumbre-carmn son
colorantes que se adhieren al ncleo. Las tinciones con carmn requieren del uso
de un mordiente, que usualmente es aluminio o alumbre.

Tincion de DAPI
El DAPI es un colorante nuclear (tie el ncleo) fosforescente, se excita con luz
ultravioleta para producir una fuerte fluorescencia azul cuando se encuentra unido
al ADN. El DAPI se une a las regiones de alta repeticin A=T en los cromosomas.
Adems no es visible cuando se utiliza con un microscopio de transmisin
corriente. Puede ser utilizado en clulas vivas o fijadas. La tcnica de tincin con
DAPI es especialmente adecuada para el recuento celular.

Tincion de Eosina
La eosina se utiliza ms frecuentemente como contracoloracin de la
hematoxilina, impartiendo un color que va del rosado al rojo al material
citoplasmtico, membrana celular, y algunas estructuras extracelulares. Adems
imparte un fuerte color rojo a los eritrocitos. La eosina puede ser utilizada tambin
en algunas variantes de la coloracin de Gram, y en muchos otros protocolos de
tincin. De hecho existen dos compuestos muy estrechamente relacionados
(aunque no iguales) conocidos como eosina. El ms frecuentemente utilizado es la
eosina Y (tambin conocida como eosina amarillenta) ya que posee una tonalidad
amarillenta muy suave. El otro compuesto conocido como eosina es la eosina B,
tambin conocida como eosina azulada o rojo imperial, la cual posee una suave
tonalidad azul. Los dos colorantes son intercambiables, y el la utilizacin de uno u
otro es ms una cuestin de preferencia y tradicin.

Tincion de Papanicolaou
La tincin de Papanicolaou es un examen basado en la coloracin de smears* en
general (vaginal, cervical, prosttico) o para fludos corporales (peritoneal, pleural,
gstrico, urinario, espinal,etc)
Colorantes empleados: Existen varias soluciones de Papanicolaou, pero todas
son variantes de los siguientes colorantes
Hematoxilina de Harris (EA50, EA65,EA36)
Naranja G
Eosina
Resultado de las tinciones celulares:
Ncleos---------------------------------------en azul
clulas acidfilas--------------------------rojo a naranja
clulas basfilas---------------------------verde o azul verdoso
clulas o fragmentos
de tejido impregnados de sangre----naranja o naranja verdoso
Como prueba para la deteccin del cncer cervico-uterino, se toma una muestra
de clulas del epitelio del cuello uterino y se extienden en una lmina de vidrio que
es la que se colorea con Papanicolaou.La tincin de Papanicolaou es una prueba
fiable. Requiere de experiencia en la interpretacin de los resultados, pero en los
smears cervicales, el porcentaje de aciertos es muy elevado. Esta prueba ha

ayudado a disminuir drsticamente el nmero de mujeres que mueren por causa

de cncer cervical. En nuestro pas el Programa de deteccin de cncer cervicouterino con las pruebas citolgicas peridicas ha ayudado extraordinariamente a
reducir esta enfermedad.

Tincion de Hoechst
Hoechst es un compuesto derivado bis-benzimidazol que se une al surco menor
del ADN. Se utiliza con frecuencia en microscopa de fluorescencia para colorear
el ADN. Hoechst tiene color amarillo cuando se encuentra disuelto en agua, y
emite luz azul cuando recibe luz ultravioleta. Hay dos tipos principales de
colorantes Hoechst. Hoechst 33258 y Hoechst 33342. Ambos compuestos son
funcionalmente similares, aunque poseen pequeas diferencias en su estructura.
El Hoechst 33258 contiene un hidroxilo terminal, y por lo tanto es ms soluble en
solventes acuosos, aunque esta caracterstica disminuye su habilidad para
penetrar la membrana plasmtica. El Hoechst 33342 contiene un grupo etilo en
sustitucin del grupo hidroxilo terminal (un grupo etileter), lo que lo hace
mshidrofbico, y con mejor penetracin en la membrana plasmtica.

Tincion Lugol
El yodo se utiliza en qumica analtica como indicador para el almidn. Cuando se
mezcla almidn con una solucin de yodo, se desarrolla un color intensamente
azul, representando la formacin del complejo de inclusin yodo/almidn. El
almidn es una sustancia muy comn en la mayor parte de las clulas vegetales,
de modo que una solucin diluida de yodo puede colorear el almidn presente en
las clulas. El yodo tambin es componente de la coloracin de Gram utilizada en
microbiologa. La solucin de Lugol o Lugol yoduro (IKI) es una solucin de color
marrn que se torna negra en presencia de almidones y puede ser utilizada para
colorear clulas, haciendo ms visible el ncleo. En la coloracin de gram el
yoduro se utiliza como mordiente, aumentando la capacidad del colorante para
entrar en las clulas a travs de los poros presentes en la membrana o pared
celular.

Tincion Rojo Nilo

El Rojo Nilo (tambin conocido como oxazona del azul nilo) se produce hirviendo
el Azul Nilo con cido sulfrico. Este tratamiento produce una mezcla de Rojo y

Azul Nilo. El Rojo Nilo es una coloracin lipoflica, y se acumula en los glbulos
lipdicos en el interior de las clulas, y los colorea de rojo. El Rojo Nilo puede
utilizarse con clulas vivas. Fluoresce fuertemente cuando se encuentra
particionado en lpidos, pero prcticamente no presenta fluorescencia en
soluciones acuosas.

Tincion de Golgi
La tcnica de Golgi es un sencillo procedimiento histolgico que revela la
morfologa neuronal completa en tres dimensiones. Este mtodo se
fundamenta en la formacin de depsitos opacos intracelulares de
cromato argntico, producto de la reaccin entre el bicromato de potasio
y el nitrato de plata (reaccin negra). Camillo Golgi, su descubridor, y Santiago
Ramn y Cajal, su principal exponente, recibieron el premio nobel de Medicina y
Fisiologa en 1906por su contribucin al conocimiento de la estructura del sistema
nervioso. Gran parte de sus logros se obtuvieron a travs de la aplicacin
del mtodo de impregnacin argntica. Sin embargo, Golgi y Cajal tenan
interpretaciones diferentes sobre la estructura del tejido nervioso. Golgi era
defensor de la teora reticular, la cual propona que el sistema nervioso
estaba conformado por una red de clulas fusionadas a travs de los axones a
manera de un sin sitio. Por el contrario, la doctrina neuronal, defendida por
Cajal, sostena que las neuronas eran clulas independientes.
El descubrimiento del organelo celular conocido como aparato de Golgi. La
microscopa electrnica confirm de la doctrina neuronal, as como la existencia
del complejo de Golgi, y contribuy al resurgimiento de la tcnica de impregnacin
argntica. Aunque existen mtodos modernos de tincin intracelular que revelan
imgenes excelentes de la morfologa neuronal, la tcnica de Golgi se mantiene
vigente por ser un mtodo ms prctico y menos costoso para el estudio de la
morfologa normal y patolgica de las neuronas

Tincion de Field
La coloracin Field es una coloracin acuosa basada en la coloracin de
Romanovsky que consiste en dos soluciones (Solucin A y solucin B) y una
solucin tampn (Amortiguadora). La coloracin de Field es una coloracin rpida
para la identificacin de hemoparasitos.
El tpico color de los ncleos celulares, mayoritariamente rojo purpura, se basa en
la interaccin molecular entre eosina y un complejo Azur A- ADN. La intensidad de
la coloracin depende del contenido de Azur A y de la relacin entre Azur A y
eosina amarilla. El resultado de tincin puede ser influido por diferentes factores

como el valor de pH de la solucin y de la solucin tampn, las sustancias tampn

(amortiguadores), el tiempo de tincin y la fijacin.

Tincion Verde malaquita

El verde de malaquita es un colorante verde activo frente a una gran variedad de
parsitos externos y agentes patgenos como hongos, bacterias, etc. Su principal
aplicacin es para el tratamiento contra parsitos protozoos de agua dulce. En
comprimidos de 25 y 100 mg, como sal de oxalato, el verde de malaquita se utiliza
como tincin de esporas bacterianas. Tambin se utiliza como contratincin con
colorantes rojos.

Tincin de Feulgen
La tincin de Feulgen es una tcnica de tincin descubierta por Robert Feulgen y
usada en histologa para identificar material cromosmico o ADN en clulas.
Depende de la hidrlisis cida del ADN. El material es sometido a
una hidrlisis con cido clorhdrico 1N a 60 C, o 5N a temperatura ambiente, y
luego al reactivo de Schiff. La reaccin Feulgen es una tcnica semicuantitativa. Si
el nico aldehdo que queda en la clula son los producidos de la hidrlisis del
ADN, ah la tcnica es cuantitativa para el DNA. Es posible usar un instrumento,
conocido
como microdensitmetro o microespectrofotmetro para
medir
la
intensidad de la reaccin Feulgen para un orgnulo. Usando este proceso, se
determin que en interfase, las clulas estaban compuestas de dos grupos de
cromosomas. Uno con un grupo diploide y otro con un grupo tetraploide (dos
grupos genmicos completos). El ncleo se observaba idntico, pero uno de
ambos posea el doble de ADN. Esto dio a la divisin del periodo que conocemos
como interfase en el ciclo celular a G1, S y G2 basados en la sntesis de ADN.

Tincion de Mowry
El mtodo de Mowry es una tcnica de tincin descrita por Mowrys para la
demostracin de la presencia de mucopolisacridos. Ciertas mucinas del tejido
conjuntivo son capaces de absorber el hidrxido frrico coloidal, poniendo
el hierro de manifiesto por medio del azul de Prusia. Esta tcnica se combina en la

actualidad con el PAS. Se deben realizar secciones dobles, puesto que en

determinadas ocasiones esta tincin se ve dificultada debido a otras sustancias
diferentes como los mucopolisacridos, que se ven atrados por las partculas
metlicas, perdiendo su utilidad histoqumica.

Se utiliza extensivamente en el estudio de neoplasias epiteliales renales,

as como granulomas en la piel. El resultado o color final de los
mucopolisacaridos cidos es azul, los ncleos rojos y el citoplasma amarillo.

Tincion hematoxilina acida fosfotungstica

El mtodo de la hematoxilina cida fosfotngstica de Mallory o PTAH (siglas
inglesas
de Mallory's
phosphotungstic
acid
haematoxylin),
es
una
tcnica histolgica para la demostracin, principalmente, de la presencia
de fibrina, de estriaciones musculares y de muchas estructuras del sistema
nervioso central.
Este mtodo fue introducido por Mallory en el ao 1900 para colorear
selectivamente las estriaciones musculares y la fibrina. A pesar de la antigedad
de la tcnica an no se ha descubierto el mecanismo qumico de su
funcionamiento, del cual resulta una tincin diferencial polcroma entre las dos
estructuras.
Consiste en la reaccin entre la hematena y el cido fosfotngstico,
produciendo una solucin cida fuerte que contiene tanto iones azules (ms
estables) como rojos. La coloracin de las partculas rojas PTA, ms grandes
que las azules, estara limitada a las estructuras ms permeables, como son
las fibras de colgeno. Las menos permeables se tien con las partculas
azules.

Tincin de Mtodo De Cajal Con Oro Sublimado

El sublimado de oro es una solucin mezcla de cloruro de mercurio y cloruro
de oro que precipita sobre los gliofilamentos.
Resultado: los astrocitos y sus prolongaciones aparecen impregnados de color
negro. El fondo es habitualmente incoloro o marrn, algunas veces se observa
de color prpura.

Tincin de Mtodo De Del Ro Hortega

Empleado para astrocitos. Utiliza nitrato de plata y carbonato de litio, formando un
precipitado de carbonato de plata;
ste se reduce con formol y vira con cloruro de oro.
Resultado: los astrocitos se observan de color negro y bien delimitado, con sus
prolongaciones de color negro y fondo amarillo.
Existen adems, variantes de esta tcnica para la demostracin de
oligodendrogla y microgla (carbonato de platadbil).

Tcnica De Kluver Barrera

Utiliza dos colorantes: violeta de cresilo (bsico) y luxol fast blue (con afinidad
por
los
lpidos
de
la
vaina
de
mielina).
Resultado: se tie la mielina de azul y los ncleos y la sustancia de Nissl de
violeta.

Mtodo Del Tetrxido De Osmio

El osmio reacciona con los lpidos a nivel de sus enlaces insaturados.
Resultado: La vaina de mielina se tie de negro por su alto contenido de
lpidos insaturados.