PRCTICA No.

13: EFECTO DEL PH, TEMPERATURA Y PRESIN OSMTICA

SOBRE EL CRECIMIENTO BACTERIANO.

OBJETIVO. Observar cules son los efectos del crecimiento bacteriano al

someterlos a diferentes temperaturas, pH y presin osmtica.
INTRODUCCION. Los requisitos para el crecimiento microbiano incluyen factores
fsicos y qumicos. Entre los factores fsicos tenemos la temperatura, el pH y la
presin osmtica. Los factores qumicos necesarios para el crecimiento bacteriano
son diversos elementos constitutivos de las clulas.
Requisitos Fsicos
Temperatura
El patrn de crecimiento bacteriano se ve profundamente influenciado por la
temperatura. La temperatura a crecimiento ptimo permite el crecimiento ms
rpido de las bacterias durante un periodo de tiempo, usualmente entre 12 y 14
horas. La temperatura mnima de crecimiento es aquella temperatura menor a la
cual la especie puede crecer. La temperatura de crecimiento mximo es la
temperatura mayor en la cual el crecimiento es posible. Los microorganismos se
dividen en 3 grandes grupos en base a su preferencia de rango de temperatura.
Sicrfilos son capaces de crecer a 0C o menos, pero crecen mejor a una
temperatura mayor. Estas bacterias son capaces de crecer a 0C, pero tienen una
temperatura ptima de 15C o menos y una mxima de aproximadamente 20C.
Los sicrfilos estrictos mueren si se exponen a la temperatura de saln. Un
ejemplo de sicrfilos estrictos son las bacterias que crecen en la Antrtica. An a
una temperatura ptima estas bacterias se tardan en crecer de 2 a 3 semanas.
Los sicrfilos facultativos son aquellos organismos que pueden crecer a 0C, pero
crecen mejor a una temperatura de entre 20 a 30 C. Los mesfilos crecen mejor a
temperaturas que fluctan de entre 25 a 40C. Aqu encontramos los patgenos de
humanos y animales de sangre caliente, estos crecen mejor a 37C. Los termfilos
son bacterias que crecen a una temperatura ptima sobre los 45C. La regin de
crecimiento de muchos termfilos se extiende a la regin de los mesfilos. Estas
se conocen como termfilos facultativos. La temperatura ptima de crecimiento
para estos ltimos microorganismos es entre 50 a 60C. Los termfilos extremos
crecen a una temperatura mayor de 90C.
Es muy importante sealar que una bacteria no manifiesta las mismas
caractersticas de cultivo cuando se crece a diferentes temperaturas, un ejemplo lo
observamos en Serratia marcescens, esta bacteria produce un pigmento rojo
solamente a cierta temperatura de cultivo.

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pH
En la mayora de las bacterias el crecimiento ptimo es entre 6.5 y 7.5. Muy pocas
bacterias crecen a un pH menor de 4.0. Sin embargo, las bacterias clasificadas
como acidfilos son tolerantes a la acidez, un ejemplo es Thiobacillus thiodans
que crece a un pH ptimo entre 2.0 a 3.5.
Presin osmtica
Los microorganismos requieren agua para su crecimiento, adems para obtener
nutrientes de sta. Una presin osmtica alta causa perdida de agua y plasmlisis
de la clula, por lo que se utiliza este fenmeno para conservar los alimentos ya
sea aadiendo sal o azcar, lo que previene el crecimiento bacterial. Sin embargo,
algunas bacterias se han adaptado a altas concentraciones de sal, a stas se les
conoce como halfilos extremos.
Por otro lado, los halfilos facultativos no requieren una alta concentracin de sal,
pero pueden crecer hasta una concentracin de 2%. Otras bacterias pueden
tolerar hasta un 15% de sal.

MATERIAL Y EQUIPO:

MATERIAL

14 tubos de ensayo.
Potencimetro.
2 matraces Erlenmeyer de 250 ml.
6 vasos de precipitado.
Asa de siembra.
Mechero.
Pipetas de 5 ml
Probeta de 500 ml.

EQUIPO
Balanza Granataria

REACTIVOS

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Agar papa-dextrosa (PDA).

Soluciones buffer.
Hidrxido de sodio.
Azcar.
cido clorhdrico.
Solucin salina

PROCEDIMIENTO:
1. Se prepararon 180 ml de medio PDA. El agar se pes con ayuda de una
balanza Granataria.
2. Los tubos de ensaye, los vasos de precipitados y las pipetas fueron
empaquetadas y esterilizadas junto con el medio PDA.
3. Una vez esterilizados se dejaron enfriar por unos minutos en una mesa
limpia.
4. Se llenaron los tubos de ensayo con aproximadamente 3 ml de medio PDA.
5. En dos vasos de precipitados diferentes fueron ajustados a pH diverso: 3, 5,
7, 9 y 11. En uno de los vasos se alcaliniz el medio con hidrxido de sodio;
en el otro se acidifico con cido clorhdrico. El pH fue medido con ayuda de
un potencimetro.
6. El medio con los diferentes niveles de pH fue vertido en 5 tubos en forma
de pico de flauta y se dejaron enfriar hasta su solidificacin.
7. En otros vasos de precipitados se ajust la presin osmtica al agregarle
azcar (sacarosa) al medio PDA. Las presiones ajustadas fueron las
siguientes: 0, 5, 10, 20 y 50%.
8. El medio con diferentes presiones osmticas fue vertido en 5 tubos en
forma de pico de flauta y se dejaron enfriar para su solidificacin.
9. En otros tres tubos de ensaye se verti medio PDA, sin modificar, en forma
de pico de flauta y se dej enfriar hasta su solidificacin.
10. Una vez que los tubos con el medio solidificado estuvieron listos, se
inoculan con Sacaromyses cerevisiae con ayuda de un asa bacteriolgica
por estra.
11. Los tubos con las diferentes presiones osmticas y los diferentes niveles de
pH ya inoculados se almacenaron a temperatura ambiente.
12. De los dos tubos restantes 1 se guard en el refrigerador, 1 en la
incubadora (45) y el otro a temperatura ambiente, igual que los primeros
10.

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13. Despus de 48 horas, el crecimiento del microorganismo Sacharomyces

cerviseae pudo ser observado en los diferentes escenarios.

RESULTADOS Y DISCUSIN.
Las condiciones en el ambiente del medio de cultivo que se realiza son muy
importantes por el efecto que tienen sobre el crecimiento de los microorganismos
de estudio. El efecto que surge de un aspecto del ambiente, cuando este es
abusivo o excesivo, tiene un efecto que generalmente se basa en un fenmeno:
desnaturalizacin.
Ejemplo de lo mencionado con anterioridad es el aumento de la temperatura del
medio, pues lo que le ocurre a los microorganismos es que sus enzimas,
principalmente, se desnaturalizan al perder parte de sus enlaces y modificar su
estructura original (Los tubos con el crecimiento del microorganismo a diferentes
temperaturas se pueden apreciar en las Ilustraciones en la seccin del Anexo de
fotografas).
Tambin el pH inflige dao de una manera muy similar sobre las molculas de
aminocidos que constituyen las enzimas, pues modifica los enlaces de unin
entre los tomos, como los puentes disulfuro, descomponiendo as la estructura
natural de la enzima, y por ende el mal funcionamiento del microorganismo (Ver
Ilustraciones en la seccin de Anexo de fotografas).
Algo que se debe resaltar, es que en el caso de la temperatura baja y la escases
de agua, el microorganismo no muere; su crecimiento solo es detenido pues su
maquinaria se queda paralizada, de modo que un aumento de la temperatura
promueve que el microorganismo reanude su funcionamiento, siempre y cuando la
temperatura sea adecuada para su crecimiento.
Sobre el medio de cultivo empleado, el agar slido es bastante inapropiado, pues
se tiene que mantener en estado lquido para poder adecuarlo a las condiciones
que son requeridas, como lo es el ajuste de pH y la presin osmtica (puesto que
el azcar se debe disolver para integrarse al medio de cultivo). Adems de que
dificulta cualquier intento de anlisis turbidimtrico.

CONCLUSIN:
En la presente practica se concluye que todos y cada uno de los factores qumicos
manipulados en los medios empleados para la realizacin de la presente,
desempean un papel importante en el desarrollo y crecimiento de
microorganismos debido a que dificultan o facilitan a que el mismo se adapte al

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medio y alent o agilice el tiempo de generacin o de crecimiento de dicho

microorganismo.

Bibliografa:
httpp://bc.inter.edu/facultad/yserrano/Crecimiento%20Microbiano.htm
httpp://es.wikipedia.org/wiki/Cloro_sosa
Hudson B. T. and L. Sherwood. 1997. Exploration in Microbiology. Prentice Hall.
New Jersey. USA
Herrera, T., Ulloa, M.1990 El reino de los hongos. Micologa Bsica y Aplicada.
Fondo de cultura econmica, UNAM Mxico.
Prescott, L. M., Hardley, J. P., Klein, D. A. 1999. Microbiologa. Cuarta edicin.
McGraw Hill Interamericana Mxico.

ANEXOS:
ANEXO I: FOTOGRAFAS.

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Ilustracin 2: Tubos con medio PDA
slido inoculados con
Sacharomyces cerviseae.

Ilustracin 1: Tubos con medio PDA

solidificado.

Ilustracin 3: Tubos con crecimiento de S. cerviseae a diferentes niveles de pH. El

crecimiento fue normal a un pH de 7 (3.b), creci bastante bien en pH de 5 (3.a) y de 9
(3.c), pero tuvo problemas en 3 y 11 (3.d).

~6~
Ilustracin 4: Crecimiento de S. cerviseae a diferentes
temperaturas. A temperatura ambiente (4.a) tuvo un
crecimiento mucho mejor que a la temperatura del
refrigerador (4.b). El crecimiento a 45C tambin fue muy
bueno.

Ilustracin 5: Crecimiento de S. cerviseae a diferentes

presiones osmticas. Se observa que el crecimiento del
microorganismo es muy similar a las concentraciones de 0
(5.a), 10 (5.b), 15, 20 y 50%.

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