CLULA PROCARIOTA - TINCIN DE GRAM

CONCEPTO:
La tincin de Gram o coloracin de Gram es un tipo de tincin diferencial empleado en bacteriologa para la
visualizacin de bacterias, sobre todo en muestras clnicas. Debe su nombre al bacterilogo dans Christian Gram (18531938), que desarroll la tcnica en 1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfologa celular bacteriana, como
para poder realizar una primera aproximacin a la diferenciacin bacteriana, considerndose bacterias gram positivas a
las que se visualizan de color morado, y bacterias gram negativas a las que se visualizan de color rosa, rojo o grosella.

Para ello es importante el microscopio ptico compuesto en el que las muestras se visualizan gracias a las diferencias de
contraste entre ellas y el medio que las rodea.
Para observar las bacterias al microscopio ptico es preferible teirlas, porque los colorantes aumentan el contraste. Se
emplean contrastes orgnicos que estn cargados positivamente y se unen a las cargas negativas de los componentes
celulares.
La tincin de Gram es la ms utilizada en los laboratorios de microbiologa, permiten diferenciar entre dos tipos de
bacterias que se tien de distinta manera porque tienen paredes celulares diferentes. Las bacterias Gram ( - ) tienen una
membrana externa que no tienen las Gram ( + ).
La tincin de Gram consta de varios pasos:
a

Se hace un frotis con las bacterias que se va a teir con una gota de
agua en el porta objeto y sobre ella una extensin de una pequea
muestra tomada de un cultivo slido, se deja secar y se puede hacer
con ayuda del mechero, se fijan las bacterias con calor y para ello se
pasa el portaobjetos por encima de la llama con la muestra mirando
hacia arriba.
Se aade cristal violeta y dejaremos actuar el colorante durante un
minuto para que tia a todas las bacterias Gram ( + ) y Gam ( - )
Se lava suavemente con agua.

Aadiremos Lugol y dejaremos actuar durante 30 segundos, este acta como mordiente fijando el colorante.

DOC. KATTHERINE MALPARTIDA GARAY

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Se vuelve a lavar con abundante agua y se hace un tratamiento con

alcohol de 96 durante 15 segundos, para que se produzca la
decoloracin de bacterias Gram ( - ). Las bacterias Gram ( + )
permanecern teidas de color violeta.
Se vuelve a lavar con abundante agua, si se hacen varias muestras se
proceden cada una por separado ya que es crucial para la muestra
respetar el tiempo.
Aadiremos Safranina y dejamos actuar al colorante durante 1 a 2
minutos para teir las bacterias Gram ( - ).

Finalmente se lava abundantemente con agua y se deja secar la

preparacin, puede ser con ayuda del mechero.

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Se observa al microscopio ptico a 100X y con aceite de inmersin.

En la tincin de Gram finalmente las bacterias Gram ( - ) se tien de
color rosa o rojo por la SAFRANINA y las Gram ( + ) de violeta por el
CRISTAL VIOLETA.

CUESTIONARIO
1. Menciona las principales diferencias morfolgicas de entre las bacterias Gram positivas y bacterias Gram negativas?
2. Cules son las diferencias entre Staphylococcus y Streptococcus?

DOC. KATTHERINE MALPARTIDA GARAY

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