Medios de Cultivo

Nutricin y Medios de cultivo
MEDIOS DE CULTIVO
AGM - MG
Septiembre de 2014.
OBJETIVOS
Uso adecuado de la terminologa.

Relacionar los conceptos qumicos con la microbiologa.
Estudiar las diferentes clasificaciones de los medios de
cultivo.
Relacionar la composicin qumica de los medios de
cultivo con el tipo nutricional de los microorganismos.
Hacer los clculos qumicos correspondientes para la
formulacin de los medios de cultivo.
Describir los cuidados en la preparacin de los medios.
Determinar los puntos del Control de Calidad.
Aplicar los conocimientos adquiridos.
MEDIOS DE CULTIVO
Se pueden emplear para
el anlisis de:
Alimentos
Muestras clnicas
Productos farmacuticos
Zonas arqueolgicas
Muestras ambientales
(aire, suelo, agua), etc.
Mg - 2015-I
AGM
MEDIOS DE CULTIVO
Hay para el
crecimiento
de los
diversos
grupos
microbianos
y se
emplean
para
estudiarlos
en el
laboratorio.
BACTERIAS
LEVADURAS
MOHOS
ALGAS
PROTOZOOS
DEFINICIN
Los medios de cultivo son

una mezcla equilibrada
de nutrientes
(compuestos orgnicos /
inorgnicas) que
permiten el desarrollo de
los microorganismos in
vitro.
DEFINICIN
En concentraciones
adecuadas y en
condiciones fsicas
ptimas permiten un
buen crecimiento de
los microorganismos
CULTIVABLES.
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SUSTANCIAS EMPLEADAS EN LA ELABORACIN DE MEDIOS
ELEMENTO
COMPUESTO
FORMA UTILIZADA EN MEDIOS DE

CULTIVO
Almidn, Glucosa, malato, acetato,
piruvato, peptonas,
H2O, compuestos orgnicos
Carbono (C)
CO2, compuestos orgnicos
Hidrgeno (H)
H2O, compuestos orgnicos
Oxgeno (O)
H2O, O2, compuestos

orgnicos
Nitrgeno (N)
N2
NH3, NO3-, NO2-, compuestos Inorgnicos: NH4Cl, (NH4)2SO4, KNO3,
orgnicos nitrogenados
Orgnicos: aminocidos bases
nitrogenadas, etc.
Fsforo (P)
Azufre (S)
PO43H2S, S2-, SO42- compuestos

orgnicos azufrados
Potasio (K)
Magnesio (Mg)
Sodio (Na)
Calcio (Ca)
Hierro (Fe)
K+
Mg2+
Na+
Ca2+
Fe2+ o Fe3+, o FeS
H2O, O2, compuestos orgnicos
KH2PO4, Na2HPO4
Na2SO4, Na2S2O3, Na2S,
Compuestos orgnicos azufrados:
aa
KCl, KH2PO4
MgCl2, MgSO4
NaCl
CaCl2
FeCl3, FeSO4
FUNCIN DE LOS COMPONENTES DE

LOS MEDIOS DE CULTIVO
Component
Beef extract
Yeast extract
Peptone
Glucose
Agar
Water
pH
Amount Function of component

1.5 g
Source of vitamins and other
growth factors
3.0 g
Source of vitamins and other
growth factors
6.0
Source of amino acids, N, S,
and P
1.0 g
C and energy source
15.0 g
inert solidifying agent
1000ml
6.6
MEDIOS DE CULTIVO
Generalmente se presenta en forma de
polvo seco, fino o granular.
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MEDIOS DE CULTIVO
Puede presentarse tambin pre-hidratados o listos
para usarse.
CLASIFICACIN
Ej.
g
NaNO3
1.5
K2HPO4 3H2O 0.04
CaCl2 2H2O 0.075
Acido ctrico
0.006
Na2CO3
0.02
Agua destilada 1000 mL
pH final 7.4
Medio sinttico o
qumicamente
definido: La
composicin
qumica se
conoce, tanto
cualitativamente
como
cuantitativamente
.
CLASIFICACIN
Medio natural, complejo
oMmmmmmmmmmmmmmmmmmm
qumicamente
indefinido: Se prepara
con componentes
complejos, cuya
composicin nutritiva
exacta no se conoce y
no se puede controlar.
Ej. Medios con Peptonas
Ej: Agar nutritivo
Peptona de carne 5 g
Extracto de carne 3 g
Agua destilada 1000 mL

pH 7.4 0.2
C, N, P, S, .?
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SUSTANCIAS EMPLEADOS EN LA FORMULACIN DE

Peptonas:
Productos de la
digestin (con cidos o
con enzimas) de
material proteico
(carne, casena,
gelatina, etc.). De
acuerdo a la protena y
al mtodo de digestin
usado, se obtienen
diferentes tipos de
peptonas. Ej. Peptona
de casena.
SUSTANCIAS EMPLEADAS EN LA FORMULACIN DE

Extracto de carne:
Digerido acuoso de carne magra de res.
Disponible en pasta o polvo.
Contiene carbohidratos, compuestos de
nitrgeno orgnico, vitaminas y sales minerales.

Extracto de levadura:
Extracto acuoso de clulas de
levadura. Comercialmente
disponible en polvo. Una fuente
muy rica en vitaminas del
complejo B; tambin contiene
nitrgeno orgnico, vitaminas y
compuestos de carbono.
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El agar es originario de Japn, aunque el nombre
corresponde a una palabra malaya que significa
"alga marina".
Japn es el primer productor mundial de agar.

El agar es una mezcla de carbohidratos complejos, que se
obtiene a partir de diversas especies de algas rojas de los
gneros: Gelidium y Gracilaria. Estas algas se suelen recolectar en
la playa, durante la marea baja, aunque las de mejor calidad son
las que se obtienen a mayor profundidad.
AGAR
Qumicamente
es un polmero
sulfatado
compuesto por
D-galactosa,
3,6-anhidro-Lgalactosa y
cido Dglucornico.
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AGAR
Caractersticas:
No aporta ningn nutriente.
Es el agente gelificante ms empleado en
los laboratorios de microbiologa.
La mayora de los microorganismos no lo
degrada.
No tiene sabor ni aroma y carece de color.
Es un hidrocoloide completamente soluble
en agua a 100C.
Al contacto con agua fra se hincha y
puede aumentar hasta 20 veces su
volumen.
Es un gel termoreversible.
Slidifica entre 35C y 43C y se funde entre
85C y 95C.
Clasificacin
ESTADO FSICO
Lquidos
Semislidos
(agar 0.2 a 0.7 %)
Slidos
(agar 1.5 a 2.0%)
MEDIOS DE CULTIVO LQUIDOS
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MEDIOS DE CULTIVO LQUIDOS

Tambin conocidos como caldos.
Por lo general todos sus
componentes son solubles en agua.
Son tiles en:

a) la propagacin de
microorganismos,
b) activacin y
c) evaluacin de ciertas
actividades metablicas.
Desventaja
No se ven los contaminantes.
MEDIOS DE CULTIVO SEMISLIDOS

Contienen alrededor de
0.2 a 0.8 % de agar. Se
emplean para observar la
movilidad de algunos
microorganismos, as
como la determinacin
del tipo de metabolismo.
Ej. SIM, O/F

Algunos de ellos se
emplean como medio de
transporte.
Sirven para llevar los
especmenes que
contienen a los
microorganismos,
del sitio de la toma del
producto hasta el
laboratorio donde va a
efectuarse el estudio.
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Estos medios impiden que se altere la
proporcin original de la flora microbiana en
los especmenes
Ej. Stuart
MEDIOS DE CULTIVO SLIDOS

Contienen entre 1.5 y 2.0 %
de agar, la concentracin
esta en funcin de su
grado de pureza.
Esta cantidad permite que
el medio tenga una
consistencia dura.
Estos medios estn en:
cajas Petri o en
tubos (medio inclinado).
CULTIVO EN AGAR INCLINADO

(PICO DE FLAUTA)
Se emplea para conservar microorganismos.
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Los medios slidos en caja se emplean para:
a) obtener crecimiento en la superficie del medio
(colonias).

Los medios slidos en caja se emplean para:
a) obtener crecimiento en la superficie del medio
(colonias).

Se emplean para:
b) cuantificar microorganismos.
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Se emplean para hacer :
c) pruebas de sensibilidad a antibiticos,

Se emplean para hacer:
d) muestreo de superficies, entre otros.
Para que los resultados sean satisfactorios, la

dureza del gel debe estar entre 300 y 500
dinas/cm2
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Clasificacin de los medios

Por su uso:
Mnimos
Generales
Selectivos
Diferenciales
De enriquecimiento
Enriquecidos
De transporte
Perfil bioqumico
De conservacin
Medios mnimos
Contienen los nutrientes mnimo necesarios
para la multiplicacin microbiana.
Se usan para determinar necesidades
nutricionales especficas.
Ej. MM (base: NH4Cl, MgSO4, K2HPO4, agua),
variar la fuente de carbono.
Medios generales
Son aquellos que permiten el desarrollo de
los microorganismos ms comunes.
Ej. Agar nutritivo.
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Medios de cultivo selectivos

Slo permiten el crecimiento de los microorganismos
de inters e inhiben el desarrollo de los que no son de
inters para el estudio.
Ejemplos de inhibidores: Sales biliares, colorantes
(cristal violeta), alta concentracin de NaCl,
antibiticos, pH* y temperatura*
Ej.
Manitol sal agar Caldo bilis verde brillante Agar Saboraud *
Buscar en: www.dibico.com
[NaCl], 75 g/L
Ej.
Caldo Bilis Verde Brillante 2%.
Este medio est recomendado para el recuento de coliformes totales y fecales,
por la tcnica del nmero ms probable.
Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el
adecuado desarrollo bacteriano, la bilis y el verde brillante son los agentes
selectivos que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas y Gram negativas
a excepcin de coliformes, y la lactosa es el hidrato de carbono fermentable.
Es una propiedad del grupo coliforme, la fermentacin de la lactosa con
produccin de cido y gas.
Frmula (en gramos por litro)
Instrucciones
Bilis de buey deshidratada
20.0
Lactosa
Peptona
10.0
10.0
Verde brillante
0.0133
Suspender 40 g del polvo deshidratado

por litro de agua destilada. Disolver y
distribuir 10 ml por tubo con campanita de
Durham. Preparar adems, el medio a
doble concentracin.
Esterilizar en autoclave a 121C durante
15 minutos.
pH final: 7.2 0.2
Medios de cultivo diferenciales

La composicin de estos sustratos permite distinguir la
fisiologa particular de los microorganismos .
La deteccin esta basada en caractersticas de desarrollo
microbiano, apariencia en el medio o por la adicin de
reveladores.
Agar EMB
Agar almidn
Ej. Agar LD Caseina (+)
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AGM
Medio de cultivo selectivo y diferencial

Hay medios de cultivo que pueden ser selectivos y
diferenciales a la vez.
Ej.
Manitol (-)
MSA
37C
G(+)
24 h
rojo de
fenol
Manitol ( + )
Medio de cultivo selectivo y diferencial

Hay medios de cultivo que pueden ser selectivos y
diferenciales a la vez.
Ej. Agar EMB
Lac ( - )
G(-)
Lac ( + )
Medio selectivo y diferencial

Lac ( + )
Agar Mac Conkey
Lac ( - )
G(-)
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AGM
Medios de enriquecimiento
Tienen sustancias que permiten la recuperacin de

microorganismos de diversas muestras, favorecen el desarrollo de
un tipo microbiano y disminuyen la velocidad de crecimiento de
la flora acompaante.
Estos medios son tiles cuando los microorganismos estn
sometidos a condiciones de estrs (congelamiento, refrigeracin
desecacin, tratamiento qumico o fsico)
Ej
Caldo Selenito
Recuperacin de Salmonella
a partir de alimentos.
Medios de enriquecimiento
Ej
Agua alcalina para recuperar

a V. cholerae de mariscos
pH=9
Medios enriquecidos
Se utilizan para microorganismos que tienen
grandes exigencias nutricionales (fastidiosos).
Tienen un exceso de nutrientes y/o se le adiciona
un extra de suplementos (sangre [NAD y hemina],
huevo, vitaminas, entre otros.)
Agar sangre
Ej.
Agar Baird Parker
Sangre de carnero
yema de huevo
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Medio enriquecido y diferencial

Agar sangre
Enriquecido: sangre
Diferencial: hemlisis (alfa, beta y/o gamma)
Medios de transporte
Son sustratos que se emplean para trasladar las muestras sin
alterar la viabilidad y la proporcin de microorganismos. Tienen
consistencia semislida, con amortiguador de pH y estn
reducidos en nutrientes para preservar la viabilidad de los
microorganismos por varias horas.
Para pruebas bioqumicas

Son medios de cultivo con sustratos especficos para poner en
evidencia la actividad enzimtica o va metablica de un
microorganismo puro. Para visualizar su perfil bioqumico se
suele emplear reveladores y/o indicadores.
H2S
citritasa
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AGM
Para pruebas bioqumicas

Utilizados en la identificacin del fenotipo
bioqumico del microorganismo.
Medios de conservacin
Algunos medios de cultivo son empleados para la conservacin
temporal de microorganismos, como son:
Medio de agar inclinado a 4C (hasta 2 semanas), con sello de
glicerol estril a 4C (varios meses dependiendo del
microorganismo).
Medios de conservacin
Se usan viales con microorganismos y se
almacenan a temperaturas inferiores a cero grados
centgrados.
La leche descremada se emplea en la liofilizacin,
conserva a los microorganismos por mas de diez
aos.
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AGM
Necesitamos un descanso!!
FACTORES QUE INTERVIENEN

EN LA PREPARACIN
El medio est en funcin del

microorganismo (s) en estudio y de la
composicin qumica de la clula, que es
reflejo de los nutrientes que necesita.
Ver el procedimiento.
Revisar si es un medio para hidratar o para
preparar por componentes.
FACTORES QUE INTERVIENEN

EN LA PREPARACIN
Usar material de vidrio limpio y seco.

Emplear agua destilada.
Ajustar el pH.
Contar con equipo adecuado.
Distribuir el medio en recipientes adecuados
CONTROL DE CALIDAD
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PREPARACIN EN DIFERENTES AMBIENTES
DURANTE LA PREPARACIN I
Seleccionar materias primas: medios de cultivo

deshidratados, pureza de reactivos y
suplementos.
Registrar todos los detalles de la preparacin
(peso, volumen, fecha, operador, etc.)
Utilizar agua destilada de calidad apropiada.
Verificar la calidad del agua empleada (carga
bacteriana, presencia de inhibidores, etc.)
Seleccionar material adecuado: matraces,
tubos, cajas.
Usar matraces de por lo menos 2 veces ms
del volumen del medio a preparar
DURANTE LA PREPARACIN II
Leer las instrucciones del marbete.

Pesar exactamente la cantidad solicitada.
Uso de probetas adecuadas.
Hidratar antes de disolver.
Ajustar y registrar el pH (utilizar instrumental
adecuado y calibrado)
Disolver completamente el medio, aplicar
calor si contiene agar.
Agitar el medio mientras se disuelve.
Tener cuidado de no sobrecalentar el
medio.
Esterilizar ***
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AGM
CONTROL DE MATERIAS PRIMAS

El agua es la materia prima ms
importante.
Parmetros que deben controlarse:
2+
Iones Cu
Conductividad = 15 mS
pH= ligeramente cida (no menor
a 5.5)
Cajas petri (<1 mg de xido de
etileno)
Cristalera de borosilicato de sodio
Aditivos o suplementos (sangre: la
homogeneidad, la viscosidad y el
color o certificado de calidad y
esterilidad)
ACTIVIDADES INCORRECTAS
POSIBLES DEFECTOS EN LA PREPARACIN

DEFECTO
CAUSA
Agua no
Desvi de pH
neutra
cerrado
Sobrecalentamiento
Envase mal
Recipiente
Turbidez,
precipitado
Prdida
de agua por
evaporacin
Recipiente
Desviacin del color
sucio
Sobrecalentamiento
sucio
Sobrecalentamiento
Valor errneo del
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pH
AGM
SUSTANCIAS ADICIONALES
Algunos medios deben tener, adems de los
macroelementos, microelementos y agua; las
siguientes sustancias, algunas de ellas se adicionan
despus de esterilizar.
Ejms.
Agentes selectivos: cloruro de sodio en altas
concentraciones.
Factores de crecimiento: aa, vitaminas.
cidos orgnicos : cido tartarico.
Colorantes: eosina, rojo neutro.
Inhibidores: Antibiticos.
Indicadores de pH: azul de bromotimol.
Agentes reductores : tioglicolato
Indicadores de oxido-reduccin: resarzurina.
Agentes solidificantes: Agar, sangre, huevo y/o
gelatina.
[NaCl]
MICROSISTEMAS
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Sistema Petrifilm
Son medios de cultivo deshidratados sobre pelculas plsticas de tamao y
grosor similar al de una tarjeta de crdito. El medio deshidratado contiene
un componente que permite la gelificacin en frio y colorantes para la
tincion de las colonias desarrolladas,facilitando su identificacin y recuento.
La principal ventaja del metodo Petrifilm consiste en que no requiere la
preparacin previa de los medios de cultivo, lo que reduce costos y
tiempo de preparacin.
http://www.3m.com/cms/mx/es/0-253/kRecrFS/view.html
Medios cromognicos y fluorognicos
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AGM
Medios cromognicos y fluorognicos
Mezcla de nutrientes (carbohidratos, peptonas,

extracto de levadura, etc) y sustratos
cromognicos y/o fluorognicos que permiten la
deteccin rpida de microorganismos (24 a 48 h).
Los sustratos cromognicos son derivados del fenol
(ONP) o del indol (5-bromo-4 cloro-3-indoxilo).
HO
Cl
OH
Br
N
H
Los sustratos fluorognicos son derivados

de la cumarina (4-metilumbeliferona)
H3C
HO
Medios de cultivo cromognicos y

fluorognicos
Los sustratos cromognicos o fluorognicos estan unidos
a un azcar o aminocido especfico.
Cuando son hidrolizados por enzimas presentes en las
bacterias, se genera un color o fluorescencia.
OH
OH
O
O
OH
OH
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AGM
Medios de cultivo cromognicos

y fluorognicos
Aplicaciones
reas: Clnica, Alimentos, Farmacia,

Ecologa, etc.
Cuantificacin o bsqueda de
bacterias, hongos y levaduras.
Bsqueda de algunos microorganismos

patgenos.

fluorognicos
Ventajas
Sensibles (1 clula).
Especficos.
Rpidos.
No se requieren
pruebas bioqumicas
adicionales
Desventajas
Costo
Solubilidad del
compuesto
fluorescente
Utilizan poco material

Detectan varios
microorganismos en
una sola placa.

fluorognicos
Ventajas
Desventajas
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AGM
MEDIO DE CULTIVO
ESTUDIO
DE LOS
MICROORGANISMOS
Identificacin
Distribuidos en la
naturaleza
Reproduccin
Relaciones con
otros seres
Fisiologa
Efectos
benficos y/o
perjudiciales
Metabolismo
Alteraciones fsicas
y qumicas que
provocan en su
medio
BIBLIOGRAFA
**CONTROL DE CALIDAD
NORMATIVIDAD: NOM-065-SSA1-1993
AGM/ agosto /2014.
Ejercicio
Mg - 2015-I
AGM
Ejercicio
Lactosa
Peptona de gelatina
Peptona especial
Cristal violeta
sales biliares
rojo neutro
NaCl
agua
agar
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Nutricin y Medios de cultivo

Uso adecuado de la terminologa.

Nutricin y Medios de cultivo

Los medios de cultivo son

Nutricin y Medios de cultivo

SUSTANCIAS EMPLEADAS EN LA ELABORACIN DE MEDIOS

FORMA UTILIZADA EN MEDIOS DE

CO2, compuestos orgnicos

H2O, compuestos orgnicos

H2O, O2, compuestos

PO43H2S, S2-, SO42- compuestos

H2O, O2, compuestos orgnicos

FUNCIN DE LOS COMPONENTES DE

Amount Function of component

Nutricin y Medios de cultivo

Ej: Agar nutritivo

Agua destilada 1000 mL

Nutricin y Medios de cultivo

SUSTANCIAS EMPLEADOS EN LA FORMULACIN DE

SUSTANCIAS EMPLEADAS EN LA FORMULACIN DE

SUSTANCIAS EMPLEADOS EN LA FORMULACIN DE

Nutricin y Medios de cultivo

SUSTANCIAS EMPLEADOS EN LA FORMULACIN DE

SUSTANCIAS EMPLEADOS EN LA FORMULACIN DE

Nutricin y Medios de cultivo