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LABORATORIO DE FISIOLOGA.
PRACTICA 4:
LA PREPARACIN NEUROMUSCULAR.
Introduccin
Los msculos esquelticos estn compuestos de fibras musculares individuales
que se contraen cuando son estimuladas por una neurona motora somtica. Cada
neurona motora se ramifica para inervar varias fibras musculares. La activacin de
nmeros variables de neuronas motoras da por resultado la contraccin del
msculo. Cuando un msculo se contrae, impone presin sobre sus tendones y
huesos fijos. La tensin muscular causa movimiento de los huesos en una
articulacin, donde uno de los huesos fijos por lo general se mueve ms que el
otro. La fijacin sea ms movible del msculo, conocida como insercin, es tirada
hacia su fijacin menos movible conocida como su origen. Dependiendo del tipo de
articulacin comprendida, y de las fijaciones de los msculos, diversos
movimientos esquelticos son posibles. El principal movedor de cualquier
movimiento esqueltico se llama el msculo agonista. Los flexores y extensores
que actan sobre la misma articulacin para producir acciones opuestas son
msculos antagonistas
Cada fibra muscular recibe una terminal de axn nica proveniente de una
neurona motora somtica. La neurona motora estimula la fibra muscular para que
se contraiga al liberar acetilcolina en la unin neuromuscular. La regin
especializada del sarcolema de la fibra muscular en la unin neuromuscular se
conoce como una placa terminal motora.
El cuerpo celular de una neurona motora somtica est ubicado en el asta ventral
de la sustancia gris de la mdula espinal, y da lugar a un axn nico que surge en
la raz ventral de un nervio espinal. Sin embargo, cada axn puede producir varias
ramas colaterales para inervar un nmero igual de fibras musculares. Cada
neurona motora somtica, junto con todas las fibras musculares que inerva, se
conoce como una unidad motora.
Siempre que se activa una neurona motora somtica, estimula la contraccin de
todas las fibras musculares que inerva. Las contracciones graduadas (en las
cuales la fuerza de la contraccin es variada) de msculos enteros se producen
por variaciones del nmero de unidades motoras que se activan. Para que estas
contracciones graduadas sean uniformes y sostenidas, diferentes unidades
motoras deben activarse median te estimulacin rpida y asincrnica.
El control neural fino sobre la fuerza de la contraccin muscular es ptimo cuando
hay muchas unidades motoras pequeas involucradas La estimulacin de estas
unidades motoras da por resultado contracciones ms potentes.
Una neurona que inerva menos fibras musculares tiene un cuerpo celular de
menor tamao, y es estimulada por magnitudes menores de aferencias
excitadoras que una neurona de mayor tamao que inerva un mayor nmero de
fibras musculares.
Regulacin de la contraccin: Cuando los puentes se unen a la actina, pasan por
golpes de energa y causan contraccin muscular; por ende, para que un msculo
se relaje debe evitarse la fijacin de puentes de miosina a actina. La regulacin de
la fijacin de puentes a la actina es una funcin de dos protenas que se asocian
con la actina en los filamentos delgados.
Objetivos
Caracterizar las propiedades de la unin neuromuscular esqueltica de la rana, realizando
las siguientes maniobras:
1. Estimular al nervio citico con estmulos aislados para encontrar los estmulos
subumbral, umbral, mximo y supramximos capaces de provocar la
contraccin mnima y mxima respectivamente del msculo gastrocnemio.
2. Estimular al msculo directamente con estmulos aislados para encontrar los
estmulos subumbral, umbral, mximo y supramximo.
3. Caracterizar las contracciones musculares al estimular repetitivamente al
nervio.
4. Determinar la fatiga del msculo.
5. Observar el efecto del bloqueo farmacolgico (d-tubocurarina) de la unin
neuromuscular sobre la actividad muscular.
Mtodos.
MATERIAL Y REACTIVOS:
BIOLGICO: Rana
EQUIPO:
1) Computadora con el programa MP150 AcqKnowledge.
2) Transductor de tensin (TSD105A).
3) Amplificador Diferencial (DA100C).
4) Mdulo de Interfase Universal.
5) Unidad de Adquisicin de Datos MP150.
6) Estimulador elctrico SI-10 con el cable conector para la UIM.
7) Canalizador de pulsos con electrodos de estmulo de ganchillo y de alfiler.
8) Juego de pesas.
9) Estativo.
10) Tornillo de tensin.
11) Estuche de disecciones.
12) Disectores de vidrio.
13) Estilete.
14) Hilo fuerte
15) Jeringas de 1 y 3 ml.
16) Cmara fotogrfica.
17) Guantes.
SOLUCIONES:
Ringer rana a temperatura ambiente. Y d-Tubocurarina (1 mg/ml) (Sigma).
PROCEDIMIENTO:
Utilizando el programa MP150 (Biopac Systems Inc.), instalado en la computadora, calibre
el canal 1 utilizando el transductor de fuerza en el punto 200 g, y con una pesa adecuada
calibre la amplitud del registro a 30 g/divisin. Prepare el canal 2 y conecte el estimulador
SI-10 al canal 2 de la UIM. De esta manera se pueden establecer los voltajes aplicados
con la magnitud de las respuestas y las relaciones temporales entre los estmulos y las
respuestas: fuerza de contraccin, periodos de latencia, frecuencia de estimulacin,
duracin de los estmulos. Se supone que usted es capaz de manejar el equipo de una
manera segura. Si no es as, pida asesora al instructor o maestro responsable.
NOTA. Para calibrar los voltajes del estimulador, siga el procedimiento descrito en la
prctica de Propiedades del msculo esqueltico.
Preparacin neuromuscular. Destruya el cerebro y la mdula espinal de una rana y
colquela sobre la mesa de disecciones. Corte circularmente la piel de la porcin proximal
de uno de los muslos. Jlela hacia abajo para retirar toda la piel del muslo y de la pierna
(sale como si fuera un calcetn). Con los disectores de vidrio diseque el msculo
gastrocnemio en toda su longitud. Amarre el tendn de Aquiles (porcin distal) con un hilo
doble de unos 15 cm de longitud, deje un pequeo espacio entre el hilo y el tendn para
que el hilo no se resbale durante las maniobras experimentales. Con la solucin de Ringer
rana mantenga hmeda la preparacin a lo largo del experimento. Corte el tendn entre el
nudo del hilo y su insercin en el hueso calcneo y eleve el msculo gastrocnemio.
Coloque a la rana en decbito ventral. Utilizando los disectores de vidrio, con cuidado
diseque, a todo lo largo del muslo el nervio citico, localizado entre los msculos
semimembranoso y glteo. Antes de fijar la rana asegrese que la tabla para rana est
firmemente atornillada al estativo. Pase un hilo de camo doble cero, alrededor de la
parte proximal de la pierna (rodilla) y amrrela fuertemente, en seguida, pase el extremo
opuesto del hilo por la hendidura de la tabla para rana y enrllelo firmemente a la rondana
lateral de la mesa. Repita la maniobra para amarrar la parte distal de la pata de la rana y
fjela firmemente a la rondana lateral de la mesa. Tome el cabo suelto del hilo amarrado al
tendn y haga un asa e introdzcala en la palanca del transductor de fuerza. Inserte los
electrodos de estmulo de alfiler en los extremos distal y proximal de la masa muscular.
Con cuidado monte el nervio citico sobre los electrodos de ganchillo, teniendo cuidado
que el electrodo no toque ningn otro tejido de la rana.
Establezca la velocidad del registro a 20 seg/divisin y realice las siguientes maniobras:
NOTA: a) Pueden cambiarse la sensibilidad y la velocidad del registro segn las
caractersticas particulares del experimento, b) Asegrese de conocer las posiciones de la
palanca del canalizador de pulsos para dirigir los estmulos elctricos al nervio o al
msculo.
1) Estimulando al nervio. Determinacin de la intensidad de los estmulos;
subumbral, umbral, mximo y supramximo del nervio a travs de su efecto sobre
la contraccin muscular (sumacin espacial). Con el tornillo de tensin ajuste la
tensin del msculo y estimule el nervio con estmulos aislados de 2 mseg de
duracin y con voltaje creciente, desde cero hasta observar las respuestas mnima
(umbral) y mxima del msculo (estmulo mximo). Anote la intensidad de los
diferentes estmulos aplicados y la magnitud de las contracciones. Con los datos
llene la Tabla 1 e identifique los voltajes de los estmulos; umbral, mximo y
supramximos.
Resultados
1.
Estimular al nervio citico con estmulos aislados para encontrar los
estmulos subumbral, umbral, mximo y supramximos capaces de
provocar la contraccin mnima y mxima respectivamente del msculo
gastrocnemio.
Fuerza mxima de la contraccin de la sacudida simple: al estimular el
nervio 67.06 g
Frecuencia
Duracin
(ms)
2
Intensidad
(A)
0.05
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
Contraccin
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Fuerza de
contraccin
(gr.)
0
21.53
24.61
25.38
25.38
24.61
Estmulo.
subumbral
Umbral
Umbral
Mximo
Mximo
Supramximo
15
10
5
0
0.05
0.1
0.2
0.3
Intensidad (A)
0.4
0.5
2.
Estimular al msculo directamente con estmulos aislados para
encontrar los estmulos subumbral, umbral, mximo y supramximo.
Fuerza mxima de la contraccin de la sacudida simple:
directamente al msculo 22.18g.
Frecuencia
Duracin
(ms)
2
Intensidad
(A)
0.2
0.4
0.55
0.6
0.7
0.8
0.9
1.0
Contraccin
No
No
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Fuerza de
contraccin
(gr.)
0
0
8.46
8.46
9.23
10.76
13.84
13.84
al estimular
Estmulo.
subumbral
Subumbral
Umbral
Umbral
Umbral
Umbral
Mximo
Supramxim
o
Estimular msculos.
16
14
12
10
8
6
4
2
0
Fuerza de contraccin gr.
Intensidad (A)
3.
4.
Cuando la contraccin sostenida en un 100% disminuye un 37% de la misma se le
conoce como fatiga muscular .
Discusin
Conclusin
En este momento repasaremos los objetivos que si se cumplieron: Al inicio estimulamos
en nervio citico de la rana y se localizaron los estmulos subumbral, umbral, mximo y
supramximos, a parte se agreg el estmulo supraumbral, que tambin se puedo
observar, encontramos que la contraccin que est relacionada con dichos estmulos,
contracciones mximas y mnimas en el msculo gastronemio. En la siguiente parte que
fue la de estimular al msculo directamente se observaron los estmulos subumbral,
umbral, mximo y supramximo. Comprobando con esto que por medio de estimulos
elctricos se dan las contracciones de los msculos la liberar la Ach ya que tambin se
comprob el Ach con el uso del curare y bloqueando los canales de la misma.
Bibliografa
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Quintanar, A. Castillo, L. Espino, M. (2012). LA PREPARACIN
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