RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS

POR PRECIPITACION Y COLORACION

INTRODUCCIN
Las protenas son biopolmeros de aminocidos de alto peso molecular; en las
protenas naturales se encuentra 20 aminocidos diferentes. En cuento al tamao,
las protenas van desde un peso molecular mnimo de 6000 hasta un mximo de
varios mi8llones, en la naturaleza existen numerosas protenas que difieren entre s.
Las diferencias qumicas son, en algunos casos evidentes muy marcados, por
ejemplo, los que existen entre el conjunto de protenas de tejido muscular, las
protenas especficas o enzimas que catalizan diversas reacciones y las protenas
de bajo peso molecular que actan como hormonas especficas. Se encuentran
tanto en el reino animal como vegetal.
En la naturaleza existen ms de 300 aminocidos, en la protena solo se encuentran
20 que difieren de su tamao, forma, carga, capacidad de formar puentes de
hidrogeno, bisulfuro y reactividad qumica. Las mltiples probabilidades de
combinacin de 20 aminocidos en la cadena peptdica, permiten la gran diversidad
e las funciones proteicas. La presencia de grupos qumicos ip0nizados en los
aminocidos permite a las protenas presentar caractersticas fisicoqumicas
especficas en el medio ambiente biolgico de ah la importancia de su estudio.
Existen aminocidos denominados esenciales, los cuales no pueden ser
sintetizados en el organismo, por lo tanto deben ser ingeridos en la dieta. Los
aminocidos no esenciales son aquellas que el cuerpo humano si es capaz de
sintetizar. El catabolismo deficiente de los ami9noacidos causan la acumulacin de
estos en el plasma y su excrecin e3xcesivo por la orina, a esto se le conoce como
aminoaciduria. En el adulto normal la excrecin urinaria de aminocidos es
constante un pro0medio de 200 mg de nitrgeno alfa-aminado excretado en el
periodo de 24, horas y existen diversas condiciones en las cuales la cantidad de
aminocidos en orina esta aumenta.

RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS
POR PRECIPITACION Y COLORACION

RECONOCIMIENTO DE LAS PROTENAS

POR PRECIPITACIN Y COAGULACIN
I.

OBJETIVOS
Utilizar tcnicas analticas que permitan el reconocimiento por
precipitacin y coloracin de las protenas, aminocidos especficos y
protenas de origen biolgico.

II.

FUNDAMENTO TEORICO
Las protenas son compuestos qumicos muy complejos que se
encuentran en todas las clulas vivas: en la sangre, en la leche, en los
huevos y en toda clase de semillas y plenes. Hay ciertos elementos
qumicos que todas ellas poseen, pero los diversos tipos de protenas los
contienen en diferentes cantidades. En todas se encuentran un alto
porcentaje de nitrgeno, as como de oxgeno, hidrgeno y carbono. En la
mayor parte de ellas existe azufre, y en algunas fsforo y hierro.
Las protenas son sustancias complejas, formadas por la unin de ciertas
sustancias ms simples llamadas aminocidos, que los vegetales
sintetizan a partir de los nitratos y las sales amoniacales del suelo. Los
animales herbvoros reciben sus protenas de las plantas; el hombre
puede obtenerlas de las plantas o de los animales, pero las protenas de
origen animal son de mayor valor nutritivo que las vegetales. Esto se debe
a que, de los aminocidos que se conocen, que son veinticuatro, hay
nueve que son imprescindibles para la vida, y es en las protenas
animales donde stas se encuentran en mayor cantidad.
El valor qumico (o "puntuacin qumica") de una protena se define como
el cociente entre los miligramos del aminocido limitante existentes por
gramo de la protena en cuestin y los miligramos del mismo aminocido
por gramo de una protena de referencia. El aminocido limitante es aquel
en el que el dficit es mayor comparado con la protena de referencia, es
decir, aquel que, una vez realizado el clculo, da un valor qumico ms
bajo. Las protenas de los cereales son en general severamente
deficientes en lisina, mientras que las de las leguminosas lo son en
aminocidos azufrados (metionina y cistena). Las protenas animales
tienen en general composiciones ms prximas a la considerada ideal.
El valor qumico de una protena no tiene en cuenta otros factores, como
la digestibilidad de la protena o el hecho de que algunos aminocidos
pueden estar en formas qumicas no utilizables. Sin embargo, es el nico
fcilmente medible. Los otros parmetros utilizados para evaluar la
calidad de una protena (coeficiente de digestibilidad, valor biolgico o
utilizacin neta de protena) se obtienen a partir de experimentos
dietticos con animales o con voluntarios humanos.

RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS
POR PRECIPITACION Y COLORACION

En disolucin acuosa, los aminocidos muestran un comportamiento

anftero, es decir pueden ionizarse, dependiendo del pH, como un cido
liberando protones y quedando (-COO'), o como base, los grupos -NH2
captan protones, quedando como (-NH3+), o pueden aparecer como cido
y base a la vez. En este caso los aminocidos se ionizan doblemente,
apareciendo una forma dipolar inica llamada zwitterion.
III.

DESARROLLO EXPERIMENTAL
A. Coagulacin por calor
Algunas protenas no presentan ningn cambio de solubilidad por
debajo de 35 C todas las protenas sufren u7n fenmeno de
desnaturalizacin cuando la temperatura pasa de 35C y la alteracin
es total al llegar a 80C. La coagulacin de protenas es un proceso
irreversible debido a la desnaturalizacin cambiando de su estructura
nativa.
Procedimiento
1.
2.
3.
4.
5.

Enumerar dos tubos de ensayo.

En el tubo 1 colocar 5ml de agua destilada
En el tubo numero 2 colocar 5 ml de albumina de huevo a 25%.
Poner 5ml de solucin de albumina al 25% en un tubo de ensayo.
Someter progresivamente los tubos en bao Mara colocando un
termmetro en la solucin de albumina.

Resultado esperado
El tubo que contiene la protena de albmina ser el nico que
presenta la coagulacin de la protena.
Tubo
1

Agua
destilada
5ml

Ovoalbmina
al 25%
0

Bao
Mara
+

5ml

Observaciones
No presenta cambios
La albmina se coagula
vindose
una
solucin
blanquecina.

B. Precipitacin En Frio Con cidos Fuertes

Cuando la solucin de las protenas se acidifica adquieren una carga
neta positiva. Las protenas actan como base y pueden formar sales
con los cidos o los aniones que se les aade.

RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS
POR PRECIPITACION Y COLORACION

Procediendo Con Los cidos Minerales

1. Enumerar dos tubos de ensayo
2. En el tubo numero 1 colocar 2ml de agua destilada y agregar 5
gotas de HNO3CC. por las paredes.
3. En el tubo 2 colocar 2ml de la solucin de albmina al 2% y
agregar 5 gotas de HNO3 CC. Por las paredes.
Resultados Esperados
Observar en la inter fase del tubo del tubo con la protena un anillo de
floculacin
(El precipitado est formado por nitrato de protenas)
Tubo
1
2

Agua
Ovoalbmina HNO3CC
Observaciones
destilada
al 2%
2ml
0
5 gotas No hay cambio de coloracin
0
2ml
5 gotas Cambia la coloracin de transparente
a lechoso
Procedimiento Con cidos Orgnicos
1.
2.
3.
4.

Enumerar dos tubos de ensayo

El tubo numero 1 colocar 2ml de agua destilada.
Al tubo numero 2 colocar 2ml de solucin de albumina al 2%.
A los tubos agregar 1ml de cido trcloro actico al 10% mesclar y
observar

Tubo

Agua
Ovoalbmina
destilada
al 2%

2ml

trcloro
actico al
10%
1ml

2ml

1ml

Observaciones

No hay cambio de coloracin

La solucin se hace lechosa y
se
pueden
observar
precipitados blanquecinos

C. Precipitacin por sales de metales pesados:

Las protenas en presencia de cationes de metales pesados se forman
sales de protenas metlicas que pueden ser solubles segn su
naturaleza metal.
Cuando la solucin es vuelve alcalina, la carga neta de la protena se
hace negativa. Tambin constituye la base de la administracin de
leche o clara de huevo a individuos que hayan ingerido algn veneno
metlico como la dicloruro de mercurio (HgCl2).

RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS
POR PRECIPITACION Y COLORACION

Procedimiento
1.
2.
3.
4.
5.

Enumerar tres tubos de ensayo.

El tubo numero 1 colocar 2ml de agua destilada.
Al tubo numero 2 colocar 2ml de solucin de albumina al 2%.
Al tubo numero 3 colocar 2ml de solucin de albumina al 2%.
A los 2 tubos agregar 5 gotas de HgCl2 al 5% observar la formacin
de proteinato de mercurio.
6. Al tubo numero 3 colocar 5 gotas de (CH3COO)2Pb. Al 10%
(acetato de plomo) observar.
tubo

Agua
destilada

Ovoalbmina
al 2%

HgCl2
al 5%

(CH3COO)2Pb
al 10%

Observaciones

1
2

2ml
0

0
2ml

0
5
gotas

0
0

2ml

5 gotas

No hay cambio
Se forman precipitados
blanco casi transparente
Se forman precipitados
blancos pero en menor
cantidad que el anterior

D. Reaccin De Biuret
El sulfato alcalino de cobre reacciona con compuestos que contienen
dos o ms enlace peptdicos dando un complejo de coloracin violeta.
La intensidad del color obtenido es una medida del nmero de enlaces
peptdicos presentes en la protena.
El complejo est formado por enlaces de coordinacin, donde los
pares electrnicos proceden de los grupos amino de los aminocidos
de cade3nas polipeptdicas. El nombre de la prueba se ha tomado del
compuesto de Biuret que da una reaccin tpicamente positiva.
Procedimiento
1. Enumerar tres tubos de ensayo.
2. En el tubo nmero uno colocar 2ml de agua destilada
3. En el tubo numero dos colocar 2ml de solucin de fenilalanina al
2%
4. En el tubo nmero uno colocar 2ml de albumina de huevo al 2%.
5. Aadir a cada tubo 2ml del reactivo de Biuret.
6. Mezclar y observar.

Resultados Esperados

RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS
POR PRECIPITACION Y COLORACION

El tubo que contiene la protena albumina ser el nico que presente

Tubo

Agua
fenilalanina Ovoalbmina
destilada
al 2%
al 2%

1
2
3

2ml
0
0

Reactivo
de Biuret

Observaciones

0
0
1ml
---------------------2ml
0
1ml
---------------------0
2ml
1ml
---------------------coloracin violeta, debido a que contiene enlaces peptdicos.

E. Reaccin xantoprotica:
Los aminocidos que contienen un ncleo aromtico forman nitro
derivados de color amarillo cuando se calienta con cido ntrico
concentrado. Las sales de estos derivados son de color naranja.
Procedimiento
1.
2.
3.
4.
5.

Enumerar tres tubos de ensayo.

En el tubo nmero uno colocar 2ml de agua destilada.
En el tubo nmero dos colocar 3ml de albumina de huevo al 2%.
Aadir a cada tubo 1ml de HNO3CC.
Observar el precipitado blanco, hervir en bao Mara hasta que
tome un color amarillo.
6. Alcalinizar con 3ml de solucin de NaOH al 40%.

tubo

Agua
destilada

Ovoalbmina
al 2%

HNO3CC

Hervir

NaOH al
40%

Observaciones

2ml

1ml

3ml

3ml

1ml

3ml

No hay cambios
Luego de estar en bao
Mara la albumina se
hace amarilla entonces
se forman dos fases.
Al aadir NaOH se forma
una solucin naranja
adems la reaccin es
exotrmica.

IV.

DISCUSIN

RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS
POR PRECIPITACION Y COLORACION

A. Coagulacin por calor

La albmina al ser sometido a calor forma una solucin coloidal. Esto
se debe a que la molcula de albumina es de gran tamao.
Por lo observado se puede decir que la reaccin es irreversible.
B. Precipitacin En Frio Con cidos Fuertes
Al ser tratadas con soluciones cidos. Las albumina se desnaturaliza
debido a la destruccin de sus estructuras.
No solo con el cido trcloro actico, sino con todos los cidos las
protenas se desnaturalizan y se precipitan.
En el cido trcloro actico, los tres cloros estn halando hacia ellos los
electrones, dejando as al protn del grupo acido an ms acido; la fuerza
que toma ese acido es ms pronunciada y as aumenta su grado de
disociacin, o sea lo hace un cido ms fuerte.
C. Precipitacin Por Sales De Metales Pesados
La albmina tambin se desnaturaliza.
D. Reaccin De Biuret
No se realiz el proceso experimental por falta de reactivos.
E. reaccin xantoprotica:
Es debida a la formacin de un compuesto aromtico nitrado de color
amarillo, cuando las protenas son tratadas con cido ntrico concentrado.
La prueba da resultado positivo en aquellas protenas con aminocidos
portadores de grupos bencnicos, especialmente en presencia de tirosina.
Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un lcali vira a un color
anaranjado oscuro.
V.

CONCLUSIONES
Las protenas, debido al gran tamao de sus molculas, forman con el
agua soluciones coloidales. Estas soluciones pueden precipitar con
formacin de cogulos al ser calentadas a temperaturas superiores a los
70C o al ser tratadas con soluciones salinas, cidos, alcohol, etc.
La coagulacin de las protenas es un proceso irreversible y se debe a su
desnaturalizacin por los agentes indicados, que al actuar sobre la
protena la desordenan por la destruccin de su estructura terciaria y
cuaternaria.
La reaccin xantoprotica ayuda al reconocimiento de protenas.

RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS
POR PRECIPITACION Y COLORACION

VI.
CUESTIONARIO
1. Qu es desnaturalizacin de la protena albumina del huevo?
Se llama desnaturalizacin de las protenas a la prdida de las estructuras de orden
superior (secundaria, terciaria y cuaternaria), quedando la cadena polipeptdica
reducida a un polmero estadstico sin ninguna estructura tridimensional fija.
Cualquier factor que modifique la interaccin de la protena con el disolvente
disminuir su estabilidad en disolucin y provocar la precipitacin. As, la
desaparicin total o parcial de la envoltura acuosa, la neutralizacin de las cargas
elctricas de tipo repulsivo o la ruptura de los puentes de hidrgeno facilitarn la
agregacin intermolecular y provocar la precipitacin. La precipitacin suele ser
consecuencia del fenmeno llamado desnaturalizacin y se dice entonces que la
protena se encuentra desnaturalizada
Estado nativo

Estado
desnaturalizado

2. Especifique cuales son aminocidos esenciales

Los aminocidos son sustancias qumicas que contienen carbono, hidrgeno,
nitrgeno y oxgeno. Son las unidades estructurales de las protenas que el cuerpo
sintetiza para cumplir con diversas funciones. Muchos de estos aminocidos pueden
ser producidos por el organismo, pero otros no, y stos son los denominados
aminocidos esenciales.
Existen nueve aminocidos esenciales, cada uno de ellos tiene caractersticas
distintas y cumplen con diferentes funciones. Los nueve aminocidos esenciales
son:
Fenilalanina.
Se trata de un aminocido que tiene una cadena lateral caracterstica que
incluye un anillo bencnico, por lo tanto, pertenece al grupo de los
aminocidos esenciales aromticos. La fenilalanina forma parte de
importantes neuro-pptidos, como la hormona adrenocorticotrpica (ACTH),
la angiotensina y la vasopresina, y tambin es precursora de las
catecolaminas.

RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS
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Histidina.
Es uno de los aminocidos esenciales bsicos a pH fisiolgico, pues su grupo
imdazol est cargado positivamente. La histidina puede sufrir un proceso de
descarboxilacin para transformarse en histamina, una sustancia que
interviene en las reacciones alrgicas de las personas. La histidina tambin
es uno de los aminocidos esenciales que participan en el desarrollo y
mantenimiento de diversos tejidos, especialmente la mielina que recubre las
neuronas.
Lisina
Est en el grupo de los aminocidos esenciales que se encuentran en mayor
concentracin en alimentos de origen animal, en comparacin con los
vegetales, aunque las legumbres pueden contener una buena cantidad de
este aminocido. La lisina, como muchos aminocidos esenciales, cumple un
rol fundamental en la sntesis de todas las protenas del organismo, participa
en el proceso de absorcin el calcio, en la construccin de tejido muscular y
en
la
produccin
de
enzimas,
hormonas
y
anticuerpos.
Triptfano.
Se encuentra entre los aminocidos esenciales hidrfobos, no polares. Est
presente en gran cantidad en alimentos tales como leche, cereales integrales,
dtiles, garbanzos, chocolate y man. Las personas que no incluyen estos
alimentos en su dieta habitual podran sufrir un dficit de triptfano, como
sucede con las personas que tienen elevados niveles de estrs. Para el buen
metabolismo de los aminocidos esenciales se requiere la presencia de
ciertas vitaminas y minerales. En el caso del triptfano, la vitamina B6 y el
magnesio son necesarios para su metabolizacin. El triptfano es
fundamental para la produccin de serotonina, un importante neurotransmisor
que
favorece
el
sueo
y
reduce
la
ansiedad.
Metionina
La metionina es uno de los aminocidos esenciales que contienen azufre. Se
encuentra en las semillas de ssamo, las nueces brasileas, carnes,
pescados y otras semillas. Cumple una importante funcin manteniendo las
uas y la piel saludables. Al igual que otros aminocidos esenciales, la
metionina cumple un rol fundamental en el rendimiento muscular.
Isoleucina
Se trata de uno de los aminocidos esenciales que tienen mayor importancia
para los deportistas, pues ayudan en la recuperacin del tejido muscular y
seo. Adems, la isoleucina interviene en la formacin de la hemoglobina, en
la coagulacin de la sangre y otros procesos vitales.
Leucina

RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS
POR PRECIPITACION Y COLORACION

La leucina es uno de los aminocidos esenciales que participan activamente

en los procesos de reparacin del tejido muscular, en conjunto con la
isoleucina y la valina. Todos estos aminocidos esenciales son
recomendados para aquellas personas que han sido sometidas a cirugas
mayores, para que los tejidos se recuperen ms rpidamente.
Treonina
Es uno de los aminocidos esenciales que mantienen el hgado libre de
grasas. Tambin favorece la digestin y ayuda a que el sistema inmunolgico
funcione mejor. Hay mucha treonina en las carnes rojas y blancas, las
lentejas
y
las
semillas
de
ssamo.
Valina
Muchos aminocidos esenciales participan en la creacin de tejidos
nuevos, incluyendo la valina, que favorece la recuperacin muscular luego
de una jornada de ejercicio o trabajo intenso. Si bien es uno de los
aminocidos ms comunes en la naturaleza, el cuerpo humano es incapaz de
producirla en cantidades suficientes, por eso la valina es clasificada como
uno de los aminocidos esenciales que deben estar presentes en los
alimentos que se ingieren diariamente.
3. Qu tcnica ha permitido identificar los componentes de la protena unido
por enlaces peptdicos?
Calentando una solucin de protena con un lcali concentrado y unas gotas de
solucin diluida de CuSO4 se presenta una coloracin que depende de la
protena y que flucta entre el rosado y el violeta purpura; el color se intensifica
con el aumento de los enlaces peptdicos, pues ellos son los responsables de la
reaccin.
4. Mencione 7 importancias de las protenas en la naturaleza
a) Ser esenciales para el crecimiento. Las grasas y carbohidratos no las pueden
sustituir, por no contener nitrgeno.
b) Son materia prima para la formacin de los jugos digestivos, hormonas,
protenas plasmticas, hemoglobina, vitaminas y enzimas.
c) Funcionan como amortiguadores, ayudando a mantener la reaccin de
diversos medios como el plasma.
d) Actan como catalizadores biolgicos acelerando la velocidad de las
reacciones qumicas del metabolismo. Son las enzimas.
e) Actan como defensa, los anticuerpos son protenas de defensa natural
contra infecciones o agentes extraos.

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RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS
POR PRECIPITACION Y COLORACION

f) Actan como transporte de gases como oxgeno y dixido de carbono en

sangre. (hemoglobina).
g) Permiten el movimiento celular a travs de la miosina y actina (protenas
contrctiles musculares).
h) Resistencia. El colgeno es la principal protena integrante de los tejidos de
sostn.
i) Energticamente, estas sustancias aportan 4 Kcal por gramo de energa al
cuerpo.

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RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS
POR PRECIPITACION Y COLORACION

ANEXO
Coagulacin por calor

Precipitacin En Frio Con cidos Fuertes

Precipitacin Por Sales De Metales Pesados

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RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS
POR PRECIPITACION Y COLORACION

Reaccin xantoprotica

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