ACCION DE LOS MICROORGANISMOS SOBRE DIVERSOS

SUSTRATOS

DEGRADACION DE CARBOHIDRATOS
La degradacin de los nutrientes: Las protenas, los lpidos y los carbohidratos
son degradados mediante reacciones enzimticas que ocurren una despus de
la otra. Este proceso de degradacin est dividido en tres etapas que a grandes
rasgos son las siguientes:
La primera consiste en la conversin de molculas complejas a molculas ms
simples; esto quiere decir que una protena, que no es ms que una cadena de
aminocidos, tiene que ser convertida de nuevo en sus constituyentes, que son
los aminocidos, para que stos puedan ser debidamente aprovechados en la
segunda etapa de degradacin. Estos procesos degradativos no requieren de
energa y ocurren en el interior del microorganismo.
La segunda etapa consiste en la conversin de estas molculas, ya bastante
simples, en una an ms simple y comn, independientemente del origen de
las molculas. Es decir, que tanto los carbohidratos como las protenas o los
lpidos son convertidos en una molcula mucho ms simple llamada "acetil
coenzima A".
Es a partir de esta molcula que la tercera etapa del metabolismo se lleva a
cabo y consiste en generar la energa que necesita la clula para realizar
procesos vitales, como desplazarse o dividirse, entre otros. En esta etapa
ocurre uno de los ciclos metablicos ms importantes de la biologa: el ciclo de
los cidos tricarboxlicos o ciclo de Krebs. As pues, todas las molculas que
sirven a un organismo como fuente de subsistencia son llevadas, por medio de
diversos caminos de degradacin, a un camino metablico comn. Esta va
metablica comn degrada una sola molcula en una serie de pasos y como
resultado se obtiene energa principalmente en forma de ATP. Los caminos
metablicos estn finamente controlados. Estos mecanismos de control
consisten en que los niveles de algunos productos regulan la actividad de
algunas enzimas, de tal forma que su actividad se incrementa o disminuye
dependiendo de los niveles del producto.
Por otra parte, las concentraciones de ATP, que como ya vimos es una
molcula muy importante en el metabolismo de la clula, regulan tambin la
actividad de ciertas enzimas y esto lo hacen por medio de la unin del ATP a
las enzimas susceptibles de ser reguladas por esta molcula. La regulacin del

metabolismo es vital, y de sta depende que un organismo produzca solamente

la cantidad necesaria de cada una de las molculas que requiere para subsistir
y por lo tanto que el desperdicio de energa sea mnimo.
Tanto las bacterias como las clulas de los seres superiores generan la energa
necesaria durante el catabolismo y la almacenan en forma de ATP. As, stas
pueden realizar funciones vitales como el movimiento, el transporte de
nutrientes a su interior y la sntesis de las molculas que forman parte de su
estructura o que tienen funciones especficas y deben ser sintetizadas en el
interior. La sntesis de las molculas es continua e implica un recambio
constante entre las molculas que se degradan y las que se sintetizan. De
hecho, los procesos de degradacin se conocen, aunque las seales que los
gobiernan son an tema de intensas investigaciones.
El estudio del metabolismo se ha apoyado en el uso de microorganismos a los
cuales se les induce un cambio gentico o mutacin. Este tipo de enfoque ha
permitido entender la mayora de las vas metablicas. As, por ejemplo, el
hongo Neurospora crassa puede crecer en un medio simple que contenga
glucosa como nica fuente de carbono y amoniaco como fuente de nitrgeno.
Sin embargo, si se expone este hongo a rayos X, se obtiene una neurospora
que ya no crece en el medio simple. Esta mutante solamente puede crecer en
un medio de cultivo al cual se le ha aadido el compuesto que ya no sintetiza
dicho microorganismo. Un ejemplo de esto son las mutantes del hongo que ya
no crecen a menos que se aada al medio un aminocido conocido como
arginina (como todos los aminocidos contiene nitrgeno). Lo cual quiere decir
que la sntesis de este aminocido est alterada y el hongo, por lo tanto, no
puede utilizar el nitrgeno del medio para sintetizarlo. Esta mutante no crecer
a menos que se le adicione dicho aminocido en el medio de cultivo. Existen
toda otra serie de mutantes similares que difieren en los pasos en que el
metabolismo se encuentra alterado; as se han podido conocer las diferentes
etapas que forman parte de una va metablica.

I.

HIDRLISIS ACIDA Y ENZIMATICA DEL ALMIDON

Polisacridos
Se necesitan ms de 10 unidades de azcar y a veces hasta miles de unidades para
formar los polisacridos. El almidn es la principal reserva de energa de
las hortalizas de raz y los cereales. Est formado por largas cadenas de glucosa en
forma de grnulos, cuyo tamao y forma varan segn el vegetal del que forma
parte.Los polisacridos
sin almidn son los principales componentes
de la fibra
alimenticia. Entre ellos estn: la celulosa, las hemicelulosas, las pectinas y las
gomas. La celulosa es el componente principal de las paredes celulares vegetales y
est formada por miles de unidades.
1. Homopolisacridos
Un mismo constituyente en toda la cadena. Ej. Almidn, glucgeno, celulosa, inulina.
2. Heteropolisacridos
Diferentes componentes en la cadena .ej. Heparina, cido hialurnico, condroitinas.

ALMIDN
Probablemente
no
existe
otro
compuesto
orgnico
tan
ampliamente
distribuidoen los vegetales como el almidn. Es el producto de asimilacin msimportan
te
de la fotosntesis y constituye la principal
sustancia de
reserva delos
vegetales.Qumicamente el almidn o fcula es un polisacrido homogneo que estfor
mado por una mezcla de dos polisacridos estructuralmente diferentes:
amilosa y amilopectina
.
Amilosa
Es una molcula lineal compuesta por 250 a 300 unidades de -D-glucopiranosa
enlazadas por uniones 1-4.
Amilopectina
Es ramificada, constituida por 1.000 a 3.000 unidades de glucosa conectadas por
uniones 1-4 y 1-6 en los puntos de ramificacin. El almidn se encuentra en abundancia
en:- Gramneas (cereales): trigo (Triticum sativum); arroz (Oryza sativa); maz (Zea
mays;);
avena
(Avena
sativa);
centeno
(Secale
cereale);
cebada
(Hordeumvulgare).- Leguminosas (legumbres): porotos (Phaseolusvulgaris);
arvejas (Pisumsativum); lentejas (Lens sculenta), etc.- Solanceas: papas (Solanum
tuberosum). Industrialmente se le obtiene por va hmeda a partir de ellos.

Caracterstica y propiedades
Se
presenta
como polvo blanco fino,
inspido,
constituido por granos
caractersticos microscpicamente para cada especie. Para su caracterizacin se toma
en cuenta: tamao (aprox. 2-150 u), forma, hilio o ncleo, estratificaciones;
granos simples o compuestos y aspectos a la luz polarizada. El almidn es insoluble en
agua fra; en agua caliente se hincha formando engrudo; se tie de azul a azul violeta
con sol. R lugol; da glucosa como producto final de la hidrlisis total.

ALFA AMILASA
El nombre de diastasas corresponde a un sinnimo de las amilasas, aunque se usa
principalmente para designar el alfa-amilasa, que se extrae de cereales.
Origen de alfa-amilasa: Fngico (Aspergillus oryzae), bacteriano (B.stearothermophilus ,
B. subtilis), de cereales y del pncreas. La enzima alfa-amilasa se encuentra en poca
cantidad en el trigo y abunda ms en aquel que ha sido parcialmente germinado. La
beta-amilasa, por el contrario, se encuentra en gran cantidad en este cereal.
Acciones:
Como es sabido, el almidn est formado por la fraccin amilosa de cadena recta de
molculas
de
glucosa
unidas
por
enlaces
glucosdicos
alfa1,4;en tanto que la fraccin amilopectina, adems
de la cadena recta, presenta
ramificaciones
con
enlaces
glucosdicos
1,6.La alfaamilasa cataliza la hidrlisis de la cadena lineal (amilosa) y laramificada (amilopectina) d
el almidn, rompiendo enlaces 1,4 interiores(endoamilasa) para formar una mezcla de
dextrinas; Por ello se la conoce como enzima dextrinognica (mezcla de amilodextrina,
eritrodextrina, acrodextrina y maltodextrina) con poca produccin de maltosa.
Por su accin, la alfa-amilasa provee de fragmentos menores que pueden ser utilizados
por la enzima beta-amilasa. La enzima alfa-amilasa requiere de un activador como, por
ej., cloruro de sodio. Es sensible a una acidez elevada y se vuelve inactiva a pH 3,3 o a
pH menor a 0C por 15 min. El pH ptimo de accin est dentro del rango 5-7, siendo
de 6,5 para la alfa-amilasa bacteriana y pancretica. La enzima es resistente al calor,
pues a 70C conserva un 70%de su actividad. Acta sobre almidones crudos y
gelatinizados.

- La hidrlisis cida por accin del HCl a 100C produce una hidrlisis total del
almidn y forma glucosa, maltosa, e isomaltosa.

- La hidrlisis enzimtica por accin de la enzima alfa amilasa produce una hidrlisis
parcial produciendo maltosa, glucosa y dextrina lmite que es una cadena ramificada y
para poder romperla se necesita de -1-6 glucosidasa.

Mtodo de fermentacin de azucares

La fermentacin es un proceso metablico de oxido-reduccin que ocurre en un medio
ambiente anaerobio y, en lugar de oxgeno, un sustrato orgnico sirve como el aceptor
final de hidrgeno (electrones). En los sistemas de prueba bacteriolgicos, este
proceso se detecta observando cambios de color en indicadores de pH a medida que
se forman productos cidos.

Las bacterias que fermentan un hidrato de carbono son por lo general anaerobios
facultativos. Por medio del proceso de fermentacin un hidrato de carbono es
degradado y descompuesto en dos molculas de carbono (triosas) que son
nuevamente degradadas en un nmero de compuestos de 1,
2, 3 y 4 carbonos. Los productos finales varan con cada especie bacteriana y
depende del sistema enzimtico existente en la especie y las condiciones
del medio ambiente.

El ms importante ciclo fermentativo de la degradacin de la glucosa es el ciclo

de
Embden - Meyerhof aun cuando ste tambin puede producirse por la
derivacin de pentosa o el ciclo de Entner - Duodoroff. Pueden utilizarse diversos
hidratos de carbono. La bacteria usada depende de las dificultades que se presenten
para identificar un organismo determinado.
Utilizando un indicador de pH con un determinado hidrato de carbono
puede
determinarse
si
una
bacteria
ha degradado el mismo en varios productos
terminales, observando un cambio de color visible en el medio.

Consistencia del medio: Lquido

Inoculacin :Por difusin, inculo denso

Condiciones de incubacin: Tiempo: 24 - 48 horas

Temperatura : 35 a 37C

Resultados:

Medio no inoculado

negativo

Positivo

Interpretacin

Positiva = Color amarillo (cido)

Negativa = Color rosa - rojizo (alcalina)

Color naranja

Microorganismos fermentadores de carbohidratos:

Fermentadores de glucosa: Todos los miembros de las Enterobacteriaceae.

Fermentadores de glucosa y lactosa:Escherichia coli, Klebsiella y grupos
Enterobacter.
Fermentadores de manitol: Staphylococcus aureus
Fermentadores de inositol: Proteus rettgeri
Fermentadores de lactosa: Neisseria lactamica
Fermentadores de adonitol: Providencia alcaligenes.
Fermentadores de inulina: Streptococcus salivarius y Streptococcus sanguis.
Fermentadores de sacarosa: Yersinia enterocolitica.
Fermentadores de salicina: Listeria monocytogenes.

II.

REACCION DE VOGUES PROSKAUER

Medio de cultivo: Medio de Clark y Lubs (caldo RM/VP)

Composicin:
a) Polipeptona
b) Dextrosa
c) Fosfato de potasio
d) Agua destilada

Fundamento

Determina la capacidad de algunos organismos de producir un producto final

neutro, la acetona a partir de la fermentacin de glucosa.

La reaccin de VP se basa en la deteccin de acetona como producto final neutro

derivado del metabolismo de la glucosa. sta es metabolizada en cido pirvico,
intermediario clave en la gluclisis. A partir del cido pirvico,
una
bacteria puede seguir muchas vas. La produccin de acetona (precursor de
la produccin de 2,3- butanediol) que es uno de los ciclos para la degradacin de
la glucosa en las bacterias. La formacin de acetona y butilenglicol es una
va alternativa del metabolismo del cido pirvico. Las bacterias que utilizan esta
va producen solo pequeas cantidades de cidos mixtos que son insuficientes para
disminuir el pH del medio de rojo de metilo, lo bastante como para producir
un cambio de color. Por este motivo muchas de las especies de Enterobacterias
son VP positivas, con pocas excepciones son RM negativas y viceversa.

El primer reactivo agregado a una alcuota incubada es el catalizador alfanaftol porque ste acta como intensificador del color, lo que aumenta la
sensibilidad de la reaccin sin prdida de su especificidad. El segundo
reactivo es el KOH que cuando se agrega al medio de VP contribuye a la
absorcin de CO2. No debe excederse de un volumen exacto. El KOH
reaccionar con la peptona dando un color rosado salmn y con el agregado
posterior de alfa- naftol no habr alteracin del color.

Consistencia del medio: Lquido

Inoculacin: Difusin
Condiciones de incubacin Tiempo: 24 horas
Temperatura: 35-37 C
Reactivos adicionales
a) Alfa naftol al 5%, intensificador del color
b) Hidrxido de potasio 40%, agente oxidante

Agregar directamente los reactivos al tubo despus de la incubacin en el

siguiente orden:
1) 0.6ml de alfa naftol
2) 0.2ml de KOH
3) Agitar el tubo suavemente, dejar reposar de 10 a 15 minutos antes de la
interpretacin.

Precauciones
El orden de adicin de los reactivos es importante, ya que la inversin de
incorporacin dar como resultado un dbil positivo o falso negativo.
No debe excederse un volumen exacto de KOH ya que el exceso puede ocultar una
reaccin VP dbilmente positiva.
Resultados

Medio inoculado

positivo

negativo

Interpretacin
Positivo: Rojo rosado en la superficie del medio (presencia de acetona).
Negativo: Amarillo. Puede formarse un color cobrizo pero an as la
reaccin es negativa.

III.

ACCIN SOBRE LAS PROTENAS Y OTRAS

SUSTANCIAS NITROGENADAS

Medio de cultivo: Medio SIM

Composicin:
a) Extracto de carne
b) Peptona
c) Hierro peptonizado (indicador de SH2) d) Tiosulfato
de sodio (indicador de SH2) e) Agar
f) Agua destilada
g) pH = 7.3

Fundamento

Determinar si un organismo es mvil o inmvil, si es capaz de liberar cido

sulfhdrico por accin enzimtica de los aminocidos que contienen azufre
produciendo una reaccin visible de color negro y por ltimo la
capacidad de desdoblar el indol de la molcula triptfano, adems que la
consistencia del medio permite la observacin de la movilidad de
algunas bacterias.

1. Produccin de hidrogeno sulfurado

2. Produccin de indol

1. Prueba de cido sulfhdrico

La protelisis de las protenas en aminocidos (aa.) individuales, algunas

especies bacterianas son capaces de liberar azufre enzimticamente de
los diferentes aa. Que las contienen, produciendo el gas acido sulfhdrico
(SH2). La peptona, cistena y tiosulfato, todos son fuentes de azufre, pero las
diferentes especies utilizan distintos compuestos o aa. Que contienen azufre
para producir SH2. La enzima responsable de sta actividad es la cisteinasa.

Primera etapa
La bacteria reacciona con el tiosulfato de sodio por medio de una reaccin
de reduccin que da un sulfito y un sulfato. Este es un proceso de
respiracin anaerbica donde el tomo de azufre sirve como aceptor de
electrones para la oxidacin de los sustratos orgnicos. El tiosulfato
reemplaza al sulfato como aceptor de electrones y es una fuente de
azufre para el organismo.
Segunda etapa
El gas incoloro SH2 reacciona con una sal pesada, citrato frrico de amonio
para producir un precipitado negro insoluble, sulfuro ferroso.

Bacteria (medio cido)

SH2

tiosulfato de sodio

gas SH2

iones frricos sulfuro ferroso (pp. negro)

Medios para la deteccin de H2S

Agar sulfito de bismuto

Agar citrato sulfuro
Agar desoxicolato - citrato
Medio LIA
Medio TSI
Agar acetato de plomo
Agar S-S
Agar XLD
Medio SIM

AGAR TRIPLE AZUCAR HIERRO: TSI

Medio de cultivo: Agar hierro triple azcar (agar hierro de Kligler, AHK)

Composicin:
f) Extracto de carne
g) Extracto de levadura
h) Peptona
i) Proteasa
j) Lactosa
k) Dextrosa
l) Sulfato ferroso m) Cloruro
de sodio
n) Tiosulfato de sodio
o) Agar
p) Agua destilada
q) Indicador: Rojo de fenol
cido: amarillo
Alcalino: rojo
Medio no inoculado: naranja rojizo (pH =7.4)

Fundamento
Determina la capacidad de un organismo de atacar un hidrato de carbono
especfico incorporado en un medio de crecimiento bsico, con produccin
o no de gases, junto con la determinacin de posible cido sulfhdrico.

El agar AHK es un medio diferencial que determina tanto la fermentacin de

los hidratos de carbono y la produccin de cido sulfhdrico. Las bacterias
pueden utilizar cualquiera de los sustratos incorporados en el medio y ser
metabolizados, caractersticas que son utilizadas para la diferenciacin de
stas, principalmente para las Enterobacterias.

Este medio contiene lactosa con una concentracin de 1% y glucosa

0.1%, lo cual permite la observacin de la fermentacin de uno o de
ambos carbohidratos por parte de las bacterias, adems de la produccin de
gas y de cido sulfhdrico.

El medio TSI contiene una cantidad limitante de glucosa y una

concentracin 10 veces mayor de lactosa. Las Enterobacterias y los
fermentadores de glucosa comienzan metabolizando este azcar, ya que
las enzimas que utilizan la glucosa estn presentes como constituyentes
de las bacterias, y stas pueden obtener mayor energa por utilizacin del
azcar ms simple.

Todos los otros carbohidratos deben ser convertidos en glucosa para

entrar en el ciclo de Embden-Meyerhof. La utilizacin de la glucosa se
realiza en forma aerobia sobre la estra, donde el oxgeno presente
acta como aceptor terminal de electrones y en la parte terminal de la
columna en condiciones de anaerobiosis. Una vez que una bacteria
fermentadora de glucosa ha reducido toda la glucosa disponible a
piruvato, comenzar a metabolizar el piruvato a travs del ciclo aerbico de
Krebs (sobre la estra), formando productos finales cidos. El cido en
el medio hace virar el amarillo del indicador de pH, rojo de fenol.
Entonces, luego de6 horas de incubacin, la zona de la estra y el fondo
del tubo inoculado con un fermentador de glucosa tendrn un color
amarillo. Si el microorganismo no fermenta la glucosa, el fondo
permanecer rojo (indicando que no hay variacin del pH) o se
alcalinizar (lo que puede visualizarse por un color rojo algo ms
intenso que del medio original), demostrando que la bacteria no es
miembro de la familia Enterobacteriaceae.

Despus de haber agotado la cantidad limitada de glucosa, una bacteria

con capacidad para utilizar la lactosa o sacarosa comenzar a degradarlas.
Como el medio contiene 10 veces ms lactosa que glucosa, las bacterias
encontrarn sustrato suficiente para continuar la formacin de productos
finales cidos. Luego 18 24 horas de incubacin todo el medio TSI
permanecer de color amarillo. Esta reaccin se denomina cido sobre cido
(A/A) y el organismo se identifica como un fermentador de lactosa. La
produccin de gas provocar la ruptura de la columna de agar o la
empujar hacia la parte superior, de modo que un fermentador de lactosa
que produce gas dar una reaccin A/A ms gas.

Si el organismo en estudio no es capaz de usar la lactosa del medio, debe

producir energa en forma menos eficiente al utilizar las protenas y
aminocidos del medio como fuentes nutritivas.
El metabolismo proteico se produce en la superficie de la zona
inclinada donde el oxgeno es abundante. Los productos de la degradacin
de la peptona (como el amoniaco) son alcalinos y provocan el viraje del
indicador rojo de fenol a su color rojo original. Un TSI inoculado con una
bacteria que no fermenta la lactosa al cabo de 18-24 horas de incubacin
presentar la zona inclinada roja y el fondo del agar permanecer amarillo
debido al metabolismo anaerobio de la glucosa durante la primera etapa. Esta
reaccin se denomina alcalina sobre cido (K/A).

Las bacterias que fermentan la glucosa tambin pueden formar

productos alcalinos a partir de la utilizacin de la peptona, sobre la zona
inclinada. Estas reacciones sern K/K.

Consistencia del medio: Slido en pico de flauta

Inoculacin: Picadura y estra en pico de flauta
Condiciones de incubacin Tiempo: 18 - 24 horas
Temperatura: 35 37C

Reacciones de TSI

Pico de flauta alcalino / profundidad alcalina (K/K). No fermentacin de

hidratos de carbono. Caracterstico de bacterias no fermentadoras como
Pseudomonas aeruginosa.

Pico de flauta alcalino / profundidad cida (K/A). Glucosa fermentada, lactosa no

fermentada. Caracterstico de bacterias no fermentadoras de lactosa como especies
de Shigella.

Pico de flauta alcalino / profundidad cida (negra) (K/A/H2S). Glucosa

fermentada, lactosa no fermentada; produccin de H2S. Caracterstico de bacterias
no fermentadoras de lactosa y productoras de H2S como: Salmonella, Arizona,
Citrobacter y algunas especies de Proteus.

Pico de flauta cido / profundidad cida (A/A). Glucosa y

lactosa fermentadas. Caracterstico de coliformes que fermentan lactosa como:
E. coli y grupo Klebsiella- Enterobacter.

2.

Prueba de la produccin de Indol

El triptfano es un aminocido que puede ser oxidado por ciertas bacterias para
formar tres metabolitos principales: indol, escatol e indolactico. Diversas enzimas
intracelulares que intervienen en ste proceso reciben el nombre de triptofanasa,
lo que implica el sistema completo de enzimas vinculadas con la produccin
del indol. El principal intermediario en la degradacin del triptfano es el cido
indol pirvico.
La degradacin del triptfano libera indol, cido pirvico, amoniaco y energa. El cido
pirvico puede ser nuevamente metabolizado por medio del ciclo glucoltico o entrar en
el ciclo de Krebs para liberar CO2 y H2O y una gran produccin de energa. El NH3
puede ser utilizado para sintetizar nuevos aminocidos empleando la energa que se
encuentra para la reaccin anablica.

La prueba de indol se bas en la formacin de un complejo de color rojo cuando el

indol reacciona con el grupo aldehdo de p-dimetilaminobenzaldehdo (sustancia
activa del reactivo de Kovacs).
La formacin de indol se produce solamente en aquellos organismos capaces de
fermentar los hidratos de carbono. La elevada acidez producida por la fermentacin
de la glucosa puede impedir el crecimiento del organismo o inhibir la enzima. El
agregado de triptfano estimula la produccin de indol mientras que la glucosa la
inhibe.
Prueba de indol
Reactivo de Kovacs

Adicionar 5 gotas y agitar suavemente el tubo

Interpretar inmediatamente.

Conservacin: Los reactivos debern guardarse en el refrigerador (4 C) mientras

no se usan, su estabilidad es variable, por lo tanto se har todas las semanas un
control de calidad, desechndolos si muestran una reaccin dbil o negativa con un
organismo positivo conocido.

Reporte resultados

PRUEBA
Sulfuro
Indol

POSITIVO
+
+

NEGATIVO
-

Resultados

Medio sin inocular

Indol positivo

Indol negativo

Interpretacin
1. cido sulfhdrico
Positivo: Ennegrecimiento del medio
Negativo: Sin ennegrecimiento
2. Indol
Positivo: Anillo rojo en la superficie del medio. Negativa: No se produce color
Negativa: Color naranja en la superficie del medio. Indica desarrollo de escatol, un
compuesto metilado que puede ser el precursor de la formacin de indol.
La reaccin positiva despus de 24 horas indica una prueba completa.
Si el cultivo de 24 horas es negativo deber incubarse otras
24 horas y repetirse la prueba.

IV.

HIDRLISIS DE LA UREA

Medio de cultivo: Agar urea de Christensen

Composicin:
a) Peptona
b) Cloruro de sodio
c) Fosfato monopotsico c) Glucosa
d) Urea e)
Agar
f) Agua destilada
g) Indicador de pH: Rojo de fenol
cido: Amarillo (pH = 6.8)
Alcalino: Rojo rosado (pH = 8.4)
Medio no inoculado: Amarillo (pH = 6.8)
Fundamento
Determina la capacidad de un organismo de desdoblar la urea formando dos
molculas de amoniaco por la accin de la enzima ureasa produciendo un cambio de
color rojo en el medio.
La hidrlisis de la urea es catalizada por la ureasa, para dar dos molculas de
amoniaco. La ureasa es una importante enzima microbiana vinculada con la
descomposicin de los compuestos orgnicos.

Consistencia del medio: solido en pico de flauta

Inoculacin : estra en pico de flauta
Condiciones de incubacin : tiempo 18-24 horas
Temperatura 35 a 37C

Resultados

Medio no inoculado

negativo

Positivo

Positivo

Interpretacin

Positivo: Rojo rosado intenso en el pico de flauta

Negativo: Amarillo

Reporte de resultados
Positivo (+) Negativo (-)

V.

ASIMILACION DEL CITRATO

Medio de cultivo: Citrato de Simmons

Composicin:
a) Sulfato de magnesio
b) Monofosfato de amonio
c) Fosfato dipotsico
d) Citrato de sodio
e) Cloruro de sodio
f) Agar
g) Agua destilada
h) Indicador de pH: Azul de bromotimol (pH= 6) Alcalino: color azul de
Prusia intenso (pH = 7.6) Medio no inoculado: Color verde (pH =
6.9)

Fundamento

Determina si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como nica fuente de

carbono para el metabolismo y crecimiento, provocando alcalinidad.
El medio incluye citrato de sodio, un anin como nica fuente de carbono y
fosfato de amonio como nica fuente de nitrgeno.

Citrato

Oxalacetato

Piruvato

Los
productos
obtenidos
dependen del pH del medio:

del

+ acetato

CO2

metabolismo

del

pH bsico

Citrato

CO2

+ cido frmico + 2 cido actico

pH acido
2 Piruvato

acetato + CO2 + lactato

2 Piruvato

acetona

+ 2CO2

citrato

Consistencia del medio: solido inclinado (pico de flauta )

Inoculacin: Se toma una colonia bien aislada de la superficie del medio de
aislamiento primario y se inocula como una estra nica en la superficie del
pico de flauta.
Incubacin Tiempo = 24 - 48 horas Temperatura = 35 - 37 C

Normalmente el metabolismo del citrato comprende una condensacin de

acetilo con la coenzima A y oxalacetato para entrar en el ci cl o de
kreb s. El desdoblamiento del citrato comprende un sistema enzimtico sin la
intervencin de la coenzima A. Esta enzima se denomina citritasa o citrato
desmolasa.

Resultados

Medio no inoculado

Positivo

negativo

Positivo

Interpretacin

Positivo: Crecimiento aunque no exista cambio de color.

Crecimiento y el medio de color azul intenso en
pico de flauta.

Negativo: No se observa crecimiento y medio de color verde.

Si se utiliza carbono a partir de citrato de sodio, tambin se extrae nitrgeno del

fosfato de amonio contenido en el medio, liberndose amoniaco. En ocasiones se
detecta un crecimiento visible a lo largo de la lnea de siembra antes de la
aparicin de color. Este crecimiento visible tambin indica resultado positivo.

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