AguilarMoscoso L.desbloqueado

Biblioteca Digital.
Oficina de Sistemas e Informatica - UNT
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE MEDICINA
IN
FO
R
MA
TI
CA
ESCUELA DE MEDICINA
TE
MA
S
COMPARACIN DEL EFECTO INHIBITORIO IN VITRO DEL EXTRACTO

ETANLICO CON EL ACEITE ESENCIAL DE CYMBOP HIERBA LUISA SOBRE
UNA CEPA DE CANDIDA ALBICANS
SI
S
TESIS PARA OPTAR EL GRADO DE
AUTOR:
DE
BACHILLER EN MEDICINA
OF
IC
IN
AGUILAR MOSCOSO, LUCERO AGUSTINA
ASESOR:
MEJA DELGADO, ELVA
TRUJILLO PER
2013
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Per.
Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/
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CA
AGRADECIMIENTOS
A Dios por ser mi Padre, amparo y refugio, que en su infinita bondad inspir en m la
MA
TI
vocacin de servicio.
FO
R
A mis padres Justiniano y Vilma por su amor, dedicacin y empeo.
A mis hermanos Laura, Jos y Omar por su cario, apoyo y comprensin.
MA
S
brindado de forma incondicional.
IN
A mi asesora la Dra. Elva Meja Delgado por la confianza y ayuda que me ha
A todos mis profesores que guiaron mis pasos a lo largo de toda la carrera y me
OF
IC
IN
DE
SI
S
TE
dieron con su ejemplo valiosas enseanzas.
INDICE
I.
INTRODUCCIN...5
CA
1.1 Antecedentes..5
MA
TI
1.2 Justificacin.....11
1.3 Enunciado del problema......11
FO
R
1.4 Hiptesis......12
1.5 Objetivos......12
MATERIALES Y MTODOS..13
IN
II.
MA
S
2.1 Material de estudio...13

2.2 Mtodos y tcnicas...14
TE
2.3 Definicin de variables operacionales.....15
SI
S
2.4 Diseo procedimental......16

2.5 Anlisis estadstico..........23
DE
2.6 tica.........23
DISCUSIN......35
OF
IC
IV.
RESULTADOS.....26
IN
III.
2.7 Diseo experimental.....24
V.
CONCLUSIONES.........39
VI.
RECOMENDACIONES40
VII.
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS..41
2
RESUMEN
El objetivo del presente estudio fue comparar el efecto inhibitorio in vitro del extracto
CA
etanlico con el aceite esencial de Cymbopogon citratus sobre una cepa de Candida
MA
TI
albicans ensayando 13 repeticiones por cada concentracin al 5% (44mg/ml), 25%

(222mg/ml), 50% (443mg/ml), 75% (665mg/ml) y 100% (886mg/ml) de aceite
FO
R
esencial y 5% (50mg/ml), 25% (250mg/ml), 50% (500mg/ml), 75% (750mg/ml) y

100% (1000mg/ml) de extracto etanlico. Mediante la Prueba de Difusin en Discos
IN
o Kirby y Bauer se obtuvo con las cinco concentraciones del aceite esencial y slo al
100% del extracto etanlico un efecto mximo (40mm); mientras que las otras
MA
S
concentraciones del extracto etanlico presentaron menores halos inhibitorios pero

con incremento conforme al aumento de la concentracin; encontrndose diferencia
TE
significativa en este grupo. Con respecto a la Concentracin Inhibitoria Mnima
SI
S
(CIM), se encontr disminucin de las Unidades Formadoras de Colonias (UFC)

conforme aumenta la concentracin. En el aceite esencial, a partir del 50% no se
DE
contabiliz UFC; mientras que el extracto etanlico inhibi a Candida albicans a la

concentracin de 100%. Se concluye, que el extracto etanlico tiene menor efecto
IN
inhibitorio in vitro sobre Candida albicans que el aceite esencial; y que la CIM del
IC
aceite es 50% (443mg/ml) y el extracto etanlico inhibe a Candida albicans slo al
OF
100% (1000mg/ml)
Palabras clave: Cymbopogon citratus, Hierba luisa, Candida albicans, Halo de
inhibicin, Concentracin Mnima Inhibitoria, Unidades Formadoras de Colonia
ABSTRACT
The aim of this study was to compare the in vitro inhibitory effect of the ethanol
CA
extract with the essential oil of Cymbopogon citratus on a strain of Candida albicans
MA
TI
tested 13 replicates for each concentration to 5 % ( 44mg/mL ), 25 % (222mg/ml) ,

50% (443mg/ml), 75% (665mg/ml) and 100% (886mg/ml) essential oil and 5%
FO
R
(50mg/ml), 25% (250mg/ml), 50% (500mg/ml), 75% (750mg/ml) and 100%

(1000mg/ml) ethanol extract. By Disk Diffusion o Kirby and Bauer test was obtained
IN
with the five concentrations of the essential oil and only 100% of the ethanol extract
maximum effect (40mm), while the other concentrations of ethanol extract halos
MA
S
showed lower growth inhibitory but under increased concentration; significant

difference was found in this group. Regarding the Minimum Inhibitory Concentration
TE
(MIC) found decreased colony forming units (CFU) with increasing concentration. In
SI
S
the essential oil, from 50% was not accounted UFC, while the ethanol extract
inhibited Candida albicans at a concentration of 100%.
It
is
DE
concluded that the ethanol extract has lower inhibitory effect on Candida albicans in
vitro essential oil, and that oil CIM is 50% (443mg/ml) and ethanol extract inhibits
OF
IC
IN
Candida albicans only 100% (1000 mg / ml)
Keywords: Cymbopogon citratus, lemongrass, Candida albicans, Halo of inhibition,
Minimum Inhibitory Concentration (MIC), Colony Forming Units (CFU)
I. INTRODUCCIN
1.1 Antecedentes:
CA
Las infecciones oportunistas continan siendo una causa mayor de morbilidad y
MA
TI
mortalidad en el mundo, presentndose con mayor frecuencia y gravedad en las

inmunodeficiencias, siendo la ms prevalente actualmente el VIH- SIDA. Al inicio de
FO
R
la epidemia, la incidencia global de stas era muy alta, pero con la instauracin de la
Terapia Antirretroviral fue disminuyendo en gran manera; sin embargo, en pases
baja cobertura del programa, stos continan
IN
con deficiencias econmicas y
MA
S
provocando problemas para su manejo.(1,2)
As mismo, existen otras condiciones que favorecen el desarrollo de estas infecciones
TE
como alteracin en la fagocitosis (lupus eritematoso sistmico, diabetes mellitus),
SI
S
granulocitopenia (citotxicos, radioterapia), inmunodepresin consecutiva al uso de

glucocorticoides, antibioticoterapia sistmica y quimioterapia, en especial en
IN
mieloma).(3,4)
DE
receptores de trasplantes; adems de anomalas en la inmunidad humoral (leucemia,
IC
Se conoce que las infecciones oportunistas son procesos infecciosos invasivos
OF
producidos por grmenes habitualmente no patgenos que se manifiestan en estados

de baja inmunidad; siendo los ms frecuentes Pneumocystis jiroveci, Aspergillus spp,
Candida spp. Este ltimo, es la causa ms comn de infecciones fngicas en
pacientes inmunodeficientes, provocando infecciones que van desde trastornos
5
mucocutneos
hasta
enfermedades
invasivas.
Es
frecuente
tambin
en
inmunocompetentes en edades extremas de la vida como lactantes y ancianos, adems
MA
TI
CA
de gestantes. (2,3,4)
La candidiasis es producida por hongos del gnero Candida la cual incluye ms de
FO
R
150 especies, de las cuales, slo algunas son patgenas para los seres humanos como
C.albicans, C.krusei, C.parapsilosis, C. tropicalis, C. glabrata; destacando la primera
IN
por ser la ms frecuente. Estos microorganismos generalmente se encuentran en

objetos inanimados, alimentos, animales y como comensales en humanos, ya que
MA
S
forman parte de la flora normal, habitando en el tubo digestivo, aparato reproductor

femenino (mucosa vaginal) y piel periorificial. Normalmente conviven en equilibrio
SI
S
local o sistmica.(3,4,5,6,7)
TE
con otros microorganismos, pero se torna patgena al perderse ste y causa afeccin
DE
El tratamiento convencional de la candidiasis se basa en uso de agentes antifngicos

sistmicos y tpicos, siendo de eleccin los azoles por su efectividad; stos actan
inhibiendo la desmetilasa de 14-alfa-esterol, enzima del citocromo P450; impidiendo
IN
la conversin del lanosterol a ergosterol, un componente vital de la membrana celular
OF
IC
de los hongos.(6,7,8,9,10)
A pesar de su eficacia, en los ltimos aos, se ha aislado con mayor frecuencia, cepas
de levaduras con susceptibilidad disminuida o resistente a los antifngicos. La

6
resistencia puede ser clnica o in vitro, siendo la primera, consecuencia fundamental

del bajo nivel del frmaco en el tejido y/o sangre, debido a una interaccin entre
CA
frmacos o al severo grado de inmunodepresin del paciente. La resistencia in vitro
MA
TI
puede ser primaria, donde la levadura es naturalmente resistente o tambin puede ser
secundaria, donde cepas susceptibles se transforman en organismos resistentes debido
FO
R
al contacto previo con el antimictico. En s, la resistencia antifngica depende de la

interaccin entre frmaco, hongo y paciente; siendo ms relevante ste ltimo.
IN
Los mecanismos de resistencia a los azoles propuestos son: disminucin de la

permeabilidad de membrana citoplasmtica, sobreexpresin de enzimas y mutaciones
MA
S
de compensacin.(11,12,13,14,15)
TE
Adems de la resistencia, las interacciones y la toxicidad, especialmente heptica

estn ocasionando fallas en la teraputica antimictica, lo que est fomentado la
SI
S
bsqueda de nuevas alternativas entre productos naturales; habiendo los ltimos aos
DE
un considerable inters en el uso de extractos alcohlicos y aceites esenciales de
IN
plantas aromticas por su potente actividad antimicrobiana y antifngica.(15,16,17)
IC
Una planta muy estudiada es Cymbopogon citratus (C. citratus) conocida en nuestro
OF
pas como hierba luisa; sta pertenece a la familia Poaceae, considerada hierba
perenne con hojas aromticas que alcanzan de 1 a 2 m de alto, originaria de la India,
pero adaptable a regiones tropicales como nuestro pas. Es reconocida como una
planta medicinal, siendo la infusin hecha de sus hojas popularmente utilizada como
CA
antiespasmdico, antinflamatorio y analgsico.(18,19)
MA
TI
Esta planta posee como metablico secundario el aceite esencial, el cual le sirve de
defensa contra animales herbvoros y en particular contra plagas de insectos y hongos
FO
R
patgenos. La cantidad y calidad del aceite esencial estn en relacin con la calidad
de su cultivo determinada por factores genticos y ambientales. En C. citratus, el
IN
momento de la cosecha ejerce una considerable influencia; conocindose que las
hojas nuevas, tiernas y cosechadas prematuramente dan un contenido bajo y fuera de
MA
S
lo normal de monoterpenos y poca solubilidad. En diversos estudios se ha evaluado

las condiciones adecuadas para obtener un buen rendimiento del aceite esencial
TE
llegndose a la conclusin de que cosechar cuatro veces en el ao da un mayor
SI
S
rendimiento en masa vegetal con buenos contenidos de aceite esencial y de alta

calidad, siendo el rendimiento promedio del aceite esencial de 0.4 a 4% por cada
DE
100g de materia vegetal fresca.(19,20,21,22)
IN
La calidad del aceite est en relacin tambin a su composicin, destacando los
IC
monoterpenos oxigenados, siendo citral el de mayor cantidad (65-85%); a stos se les
OF
atribuye el efecto antibacteriano y antifngico contra dermatofitos y levaduras, el que

ha sido estudiado por diversos investigadores.
Tangarife y col (2011), estudiaron la actividad contra C. albicans del aceite esencial y
extracto de plantas en Colombia, evaluando inhibicin de formacin de tubos
CA
germinales en comparacin a azoles; adems de citotoxicidad. La mayor actividad se
MA
TI
obtuvo con aceites de Piper bredemeyeri y el extracto de Morinda royoc; el

C.citratus fue efectivo, pero en menor proporcin a los anteriores. Se concluy que
FO
R
las muestras activas inhibieron a C. albicans y no fueron citotxica.(23)
IN
Da Silva y col (2008) evaluaron el efecto in vitro del aceite esencial del C. citratus y
citral, sobre hongos filamentosos no dermatofitos y levaduras usando discos de
difusin, demostrndose la potente accin del aceite contra levaduras especialmente
TE
MA
S
sobre C. albicans (dimetro del halo>40mm con 8ul de aceite esencial). (24)
Hammer col (1999) estudiaron a 52 plantas extrayendo aceites esenciales y extractos
SI
S
y evaluando su actividad contra bacterias y hongos entre ellas aeromonas y C.
DE
albicans, utilizando mtodo de microdilucin; determinando que el aceite esencial de

C. citratus, organo y laurel inhiban a todos los organismos siendo stos los ms
IC
IN
efectivos. Para C.albicans, el C. citratus presenta un 0.06% en CIM.(25)
OF
Tyasi y Malik (2010) compararon la actividad del aceite esencial de C. citratus en

fase lquida y vapor contra C. albicans determinando que la CIM de aceite esencial en
fase lquida (288 mg/l) fue mayor que en fase vapor (32,7 mg/l) y que exposicin de
4h es suficiente para causar 100% prdida en viabilidad de clulas de C. albicans.(26)
9
Guerra y col (2004) evaluaron la actividad inhibitoria in vitro del aceite esencial y
una crema de C. citratus sobre C.albicans, siendo la CIM del aceite de 0.16mg/ml y
CA
la crema, 2.5mg/ml, concluyendo que el aceite tiene una notable actividad
MA
TI
antifngica.(27)
FO
R
Alzamora y col (2001) investigaron la actividad antimicrobiana de aceites esenciales

de plantas de Medicina Tradicional en Per, entre ellas C.citratus, y se evalu su
eficacia frente a bacterias y hongos como C.abicans; hallando similar efecto entre
MA
S
IN
nistatina y C. citratus.(28)
Con respecto al extracto etanlico de C. citratus, hay estudios que demuestran su
TE
actividad antiinflamatoria, por inhibicin en la produccin de citoquinas; en especial

est relacionado con el factor de transcripcin NF-B. Tambin se le atribuye una gran
SI
S
capacidad como antioxidante pues tiene un alto contenido de fenoles, entre los que
DE
destaca isoorientina, swertiajaponina e isoorientina 2-V-ramnsido. (29,30,31,32)
IN
Se conoce que los fenoles son compuestos simples que contienen un anillo fenlico
IC
sustituido y actan inhibiendo enzimticamente compuestos oxidados, mediante
OF
reacciones de grupos sulfihidrilos o por interaccin con protenas. Adems, stos

tienen propiedades antispticas, por lo que se ha planteado una actividad
antibacteriana y antifngica. (33)
10
1.2 Justificacin:
La aparicin de especies patgenas con resistencia clnica e in vitro, las interacciones
CA
farmacolgicas significativas, biodisponibilidad insuficiente y toxicidad de los
MA
TI
antifngicos tradicionales, sobre todo en inmunodeprimidos con SIDA, quienes

reciben numerosos frmacos, ha fomentado la bsqueda de nuevos alternativas entre
FO
R
productos naturales contra los patgenos oportunistas como C. albicans; y siendo

nuestro pas uno de los ms ricos en biodiversidad, es nuestro desafo vincular y
IN
convertir el conocimiento de los recursos biolgicos en compuestos o productos tiles
MA
S
en beneficio de nuestra sociedad.
Existen numerosas plantas utilizadas en la medicina alternativa pero no todas son
TE
avaladas cientficamente, por ello se propone determinar el efecto inhibidor de C.
SI
S
citratus hierba luisa para sobre una cepa de C. albicans comparando el aceite
esencial y el extracto etanlico, y conocer si este ltimo tiene efecto inhibitorio
DE
similar al aceite esencial, considerando que su obtencin es ms sencilla, econmica
Enunciado del problema:
IC
1.3
IN
y rpida que del aceite esencial.
OF
Tiene efecto inhibitorio in vitro el extracto etanlico de forma similar al efecto del
aceite esencial de Cymbopogon citratus hierba luisa sobre una cepa de Candida
albicans?
11
1.4
Hiptesis:
El extracto etanlico tiene efecto inhibitorio in vitro similar al aceite esencial de
Objetivos:
FO
R
1.5
MA
TI
CA
Cymbopogon citratus hierba luisa sobre una cepa de Candida albicans
1.5.1 Objetivos Generales:
IN
Comparar el efecto inhibitorio in vitro del extracto etanlico con el aceite esencial del
MA
S
Cymbopogon citratus hierba luisa sobre una cepa de Candida albicans
1.5.2 Objetivos Especficos:
TE
- Determinar la concentracin inhibitoria mnima del aceite esencial de Cymbopogon
SI
S
citratus hierba luisa utilizando concentraciones al 5%, 25%, 50%, 75%, 100% sobre
una cepa de Candida albicans
DE
- Determinar la concentracin inhibitoria mnima del extracto etanlico de Cymbopogon
citratus hierba luisa utilizando concentraciones al 5%, 25%, 50%, 75%, 100% sobre
IN
una cepa de Candida albicans
IC
- Determinar el efecto inhibitorio del aceite esencial de Cymbopogon citratus hierba
OF
luisa utilizando el mtodo de difusin en disco sobre una cepa de Candida albicans
- Determinar el efecto inhibitorio del extracto etanlico de Cymbopogon citratus hierba

luisa utilizando el mtodo de difusin en disco sobre una cepa de Candida albicans.
12
II. MATERIAL Y MTODOS

Material de estudio:
CA
2.1
MA
TI
1.1. Material biolgico:
Cepa de Candida albicans ATCC 10231 obtenida del laboratorio MediMark R
FO
R
Europe que fue enviada al laboratorio de Microbiologa de la Facultad de Medicina
IN
de la Universidad Nacional de Trujillo
MA
S
1.2. Material botnico:
Hojas frescas de Cymbopogon citratus (hierba luisa), recolectada por la maana del
TE
distrito de Usquil (1500 m.s.n.m.), provincia de Otuzco y departamento de La

Libertad, durante el mes de mayo; y recibidas en el laboratorio de Farmacognosia
SI
S
de la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad Nacional de Trujillo
DE
donde se realiz la extraccin del aceite esencial y la obtencin del extracto etanlico.
Un ejemplar completo de la planta se llev al Herbarium Truxillense (HUT) de la
Nacional de Trujillo para su identificacin y posterior verificacin
Universidad
IC
IN
taxonmica, donde se encuentra registrado como Cymbopogon citratus (hierba luisa)
OF
con nmero de depsito 0054392.
13
2.2
Mtodos y tcnicas:
Tipo de Investigacin:
MA
TI
azar con una observacin por bloque en cada tratamiento
CA
El presente trabajo presenta un Diseo experimental en bloques completamente al
FO
R
Muestra:
quedando constituida por 260 placas Petri.
IN
Fue creada de acuerdo a los parmetros microbiolgicos experimentales revisados,
(Z /2 + Z )2 2S2
(x1 x2)2
SI
S
TE
MA
S
Clculo para el nmero de ensayos se har con la siguiente frmula:
Siendo n= el nmero de repeticiones a efectuar en cada investigacin
DE
Z /2 = 1.96 para = 0.05
Z = 0.84 para = 0.20
IC
IN
S = 0.9 (x1 x2) valor asumido por no haber estudios previos
OF
Se determin una muestra de 13 observaciones para cada concentracin.
14
2.3
Definicin de variables operacionales:

Variable
Indicador
Tipo
esencial
MA
TI
Aceite
CA
Variable independiente
de Concentraciones al 5%, 25%, Cuantitativa
Cymbopogon citratus
de Concentraciones al 5%, 25%,
Cymbopogon citratus
50%,
75%,
100%
del Cuantitativa
Ordinal
halo
de Cuantitativa
Ordinal
formadoras
de Cuantitativa
Ordinal
IN
extracto etanlico
Dimetro
del
in inhibicin
MA
S
inhibitorio
Variable dependiente
Efecto
FO
R
etanlico
Ordinal
50%, 75%, 100% del aceite

esencial
Extracto
Escala
vitro sobre una cepa de
Unidades
TE
Candida albicans
SI
S
colonias (UFC)
DE
Definiciones operacionales:
Aceite esencial de C. citratus: lquido de color amarillo plido, con olor intenso a
IN
limn, similar apariencia y consistencia de aceites grasos, voltil, no deja huella ni
OF
IC
mancha grasosa, que se obtiene de la destilacin por arrastre de vapor de las hojas.
Extracto etanlico de C. citratus: lquido con olor caracterstico a limn, obtenido
por percolacin en contacto con etanol, seguida de la eliminacin de dicho solvente

por procedimiento fsico.
15
Efecto inhibitorio in vitro: Capacidad para detener la reproduccin del hongo en

condiciones experimentales. Resultado de medir el crecimiento del hongo mediante la
CA
longitud del dimetro del halo de inhibicin (dimetro de disco = 6mm) en cada Placa
MA
TI
Petri.
Unidades Formadoras de Colonias (UFC): Crecimiento del hongo en forma de
FO
R
colonias, las que se encuentran esparcidas por toda la superficie de la placa.

Concentracin inhibitoria mnima: menor concentracin en la cual no se observaron
Diseo procedimental:
MA
S
2.4
IN
UFC.
SI
S
Lavado de la muestra:
TE
Preparacin de la muestra de Cymbopogon citratus (hierba luisa)
Luego de la seleccin, se procedi a lavar las hojas con agua corriente, seguido de
DE
una desinfeccin utilizando hipoclorito de sodio a una concentracin de 200ppm

durante 5 minutos. Posteriormente se realiz un enjuague con agua destilada para
IN
retirar residuos de hipoclorito.(34,35,36)
IC
Conservacin de la muestra:
aproximada de 21oC, en
OF
Las hojas se conservaron bajo sombra a una temperatura
los ambientes del laboratorio de Farmacognosia de la Facultad de Farmacia y

Bioqumica de la Universidad Nacional de Trujillo, durante 1 da, luego se fraccion
trozos pequeos y se conserv en bolsas de papel kraft.(34,35,36)
16
Obtencin del aceite esencial:
CA
Se realiz por el mtodo de destilacin por arrastre de vapor de agua
MA
TI
(convencional). El aceite esencial fue extrado a partir de los trozos pequeos que se
colocaron en un baln de fondo plano y se sometieron a una corriente de vapor de
FO
R
agua sobrecalentada; de esta manera se arrastr la esencia que posteriormente por

accin del refrigerante de bolas, fue condensada. El destilado se separ tomando en
IN
cuenta sus propiedades de inmiscibilidad y diferencia de densidades entre el agua y el

aceite esencial, utilizando una pera de separacin de vidrio, se deshidrat las
MA
S
impurezas de agua en el aceite esencial con sulfato de sodio anhidro, se filtr y luego
se guard en un frasco de vidrio color mbar (evita la descomposicin por la luz) y
TE
bajo refrigeracin a una temperatura de 4 oC.(34,35,36)
DE
SI
S
Determinacin del rendimiento de aceite esencial:
La determinacin del porcentaje de rendimiento de aceite esencial (%RAE), se
realiz a escala laboratorio por el mtodo de arrastre por vapor de agua en un equipo
IC
IN
de destilacin de vidrio. A partir de 100 g de hojas de Cymbopogon citratus (hierba
OF
luisa), se obtuvo un determinado volumen que fue medido con una probeta florentino.
Por el mtodo gravimetra-volumtrico se determin el %RAE, aplicando la siguiente
frmula:(34,35,36)
17
%RAE = Vol. AE (mL)/ P.muestra (g) x 100
P.muestra: Peso de la muestra a destilar en gramos.
FO
R
%RAE = Vol. AE (mL)/ P.muestra (g) x 100
MA
TI
Vol. AE : Volumen del aceite esencial obtenido en mililitros.
CA
Donde:
%RAE =0.0048 / 0.60 x 100 %RAE= 0.8
IN
El rendimiento del aceite esencial es de 0.8% por cada 100g de hojas de C.citratus.
MA
S
Diluciones del aceite esencial:
TE
Se obtuvo finalmente 2.6ml de aceite esencial, con una densidad de 0.8861 g/ml. Para
SI
S
la prueba de difusin en discos, se prepararon 5 diluciones utilizando etanol de

96oG.L. como diluyente, obtenindose, concentraciones de 5% (44mg/ml), 25%
DE
(222mg/ml), 50% (443mg/ml), 75% (665mg/ml) y 100% (886mg/ml).
IC
IN
Preparacin del extracto etanlico:
OF
Se prepar el extracto etanlico mediante el mtodo de percolacin. Se pes 250 g de

las hojas previamente secadas y cortadas en pequeos trozos de C.citratus y se separ
en porciones equivalentes a 125 g, 75 g y 50 g de la muestra. Se coloc la porcin de
125g previamente humectada en el percolador y se macer con alcohol de 70GL por
18
48 horas. Se prosigui a percolar y se recogi 50 ml del extracto, los cuales se

separaron y se guardaron en un frasco de vidrio de color mbar. Se continu
CA
recibiendo 5 porciones sucesivas del percolado de 75 mL cada una enumerada segn
MA
TI
el orden que se recibe. Se coloc la segunda porcin equivalente a 75 g de la

muestra en el percolador y se macer con las porciones de 75 mL del lote anterior
FO
R
por 48 horas. Se percol hasta obtener 75 mL y se guard en el frasco de vidrio de

color mbar. Se prosigui percolando 5 porciones de 50 mL de extracto, cada uno
IN
enumerado segn el orden que se recibe. Se coloc la tercera porcin equivalente a

50 g y se macer por 48 horas con las porciones de extracto del lote anterior. Luego
MA
S
se procedi a percolar hasta obtener 125 ml de extracto, los cuales se pasaron al

frasco de vidrio de color mbar. La cantidad final de extracto etanlico fue de 250 ml
TE
Este extracto se llev a secar en una cmara de secado al vaci a una presin
reducida y a una temperatura de 30 C; luego se pes el residuo seco y se guard en
DE
SI
S
refrigeracin a 4 C en frasco de vidrio de color mbar estril.
Diluciones del extracto etanlico:
IC
IN
A partir de este residuo seco, se prepararon las concentraciones disueltas en etanol de
OF
70 G.L, de 5%, 25%, 50%, 75% y 100%.

Para la preparacin de la concentracin del 5% se aadi el residuo seco en una
proporcin de 5 g de residuo seco en 100 ml de etanol, determinando una
concentracin de 50 mg/ml, para la concentracin del 25 % se aadi 25 g de residuo
19
seco en 100 ml de etanol determinando una concentracin de 250 mg/ml, de 50%,
CA
500 mg/ml de 75%, 750mg/ml y 100%, 1000 mg/ml.(34,35)
MA
TI
Preparacin de cepa de Candida albicans:
FO
R
La cepa se cultiv en tubos de ensayo con tapa rosca en medio agar Sabouraud
IN
dextrosa 4% a 25C por 24 horas.
MA
S
Sembrado:
Con un hisopo estril, el cual fue embebido en el tubo del cultivo preparado y a una
TE
distancia de 10cm de la llama de un mechero, se sembr en placas Petri contenido

agar Sabouraud hisopando uniformemente sobre toda la superficie del agar y girando
DE
SI
S
cada placa 30C por 10 veces aproximadamente. (37,38,39)
Determinar el efecto inhibitorio (prueba de susceptibilidad):
IC
IN
Luego de realizar el sembrado de la cepa de C. albicans ATCC 10231 en placas Petri
OF
se realiz la prueba de susceptibilidad utilizando el mtodo de Kirby Bauer, difusin

en discos, para lo cual se prepar discos de papel filtro estriles (dimetro 6mm) y se
les sumergi dentro de cada una de las concentraciones de aceite esencial y extracto
etanlico; y despus, con aguja estril fueron colocados sobre los cultivos de
20
C.albicans cepa ATCC 10231 en placas Petri, preparados previamente. Hubo dos
grupos controles, un control positivo con Clotrimazol solucin 1% y un control
CA
negativo con solucin salina. Posteriormente las placas se incubaron a 35C durante
MA
TI
24h. La siembra del microorganismo fue para cada concentracin de ambos grupos y
los controles. Finalmente la lectura se llev a cabo a las 24 horas; y se midi los halos
FO
R
de inhibicin de cada una de las concentraciones incluyendo el rea del disco de

papel de filtro con una regla milimetrada procedindose de igual manera con ambos
IN
controles.(37,38,39)
MA
S
Determinar la Concentracin Inhibitoria Mnima (CIM):
TE
La determinacin de la CIM se realiz por el mtodo de diluciones en tubos en donde

se utiliza 10 tubos de ensayo para cada concentracin numerndose del 1 al 10. En el
SI
S
nmero 1 se coloca la primera concentracin a trabajar, en el tubo N2, 0.2ml de la
DE
concentracin y 0.2ml de solucin salina; en tubo N3, 0.2ml de la dilucin anterior y

0.2 ml solucin salina y as sucesivamente hasta el tubo 10. Luego se coloca 0.2ml
de la dilucin de la cepa (semejante al tubo N05 de Mac Farland que corresponde a
IC
IN
108 bacterias/m2) en cada uno de los 10 tubos, agitndolos para uniformizarlos.
OF
Luego, los tubos son colocados en la estufa a 37C por 24 horas. Posteriormente, se
siembra 0.1ml de solucin de cada uno de los tubos en 13 placas con agar Sabouraud
(repeticiones) utilizando el asa de Driglasky para dispersar la muestra, realizndose
dentro del dimetro de 10cm de la llama de un mechero. Las placas se colocan en la
21
estufa por 24 horas a 37C y luego se realiza el conteo de Unidades Formadoras de

Colonias (UFC), considerndose como CIM a la menor concentracin en la cual no se
Para el conteo, se emplea la siguiente frmula:
FO
R
UFC= N/4 x A x D
MA
TI
CA
observaron UFC.
Donde
IN
N= nmero de colonias
A=rea
MA
S
D= dilucin
Todo este procedimiento se debe realizar con cada una de las concentraciones de
TE
ambos grupos, tanto aceite esencial como extracto etanlico, adems del control
positivo con Clotrimazol solucin 1% y negativo con solucin salina. Sin embargo,
SI
S
antes de realizar este procedimiento se consider utilizar primero el mtodo de
DE
dilucin en tubos abreviado, con el cual se obtenga la menor concentracin que

inhiba el crecimiento del hongo, y con sta, realizar el mtodo descrito al inicio, con
las 13 repeticiones para hallar la CIM. Para el mtodo de dilucin en tubos abreviado
IC
IN
se utiliz12 tubos de ensayo, 5 para cada concentracin del aceite esencial y 5 para el
OF
extracto etanlico; se aadi 0.8 ml de cada concentracin (5%, 25%, 50%, 75%,
100%), luego se realiz la inoculacin de 0,2 ml del cultivo de C.albicans (en
concentracin semejante al tubo 0.5 de la escala de Mac Farland que corresponde a
108 bacterias/m2) en cada uno de los tubos correspondientes; el undcimo tubo

22
correspondi al control con Clotrimazol solucin al 1% aadindose 0.8 ml de este

frmaco y 0.2 ml del hongo; en el duodcimo tubo se realiz el control colocando
CA
1ml de cultivo de C.albicans sin tratamiento. Los tubos fueron colocados en la estufa
MA
TI
a 37C por 24 horas. Posteriormente, se determinaron las cuentas viables sembrando

0.1ml de solucin de cada uno de los tubos en 13 placas con agar Sabouraud por cada
FO
R
concentracin y grupos controles, utilizando el asa de Driglasky para dispersar la

muestra. Las placas se colocaron en la estufa por 24 horas a 37C y luego se
IN
contabiliz las UFC, considerndose como CIM a la menor concentracin en la cual
Anlisis estadstico e interpretacin de la informacin:
TE
2.5
MA
S
no se observaron UFC.
Los datos obtenidos fueron procesados de manera automatizada con el soporte del
SI
S
paquete estadstico SPSS 15.0 y para analizar la informacin se construy tablas de
DE
frecuencias de entrada con sus valores absolutos. Para determinar el efecto inhibitorio
de cada tipo de solucin se hizo un anlisis de varianza de un diseo completamente
aleatorizado, y a partir de este, se determin la conveniencia del uso de la prueba de
IC
IN
Duncan para comparaciones mltiples, ambos con un nivel de significancia del 95%.
OF
2.6 tica:
La investigacin se realiz considerando los principios de bioseguridad, prestando

atencin adecuada a factores que puedan daar el medio ambiente y se consider los
principios de la Declaracin de Helsinki en investigaciones in vitro.(40)
23
2.7
Diseo experimental
44mg/ml
5%
UFC
MA
TI
n=13
Halo de
inhibicin
25%
FO
R
222mg/ml
CA
ACEITE ESENCIAL
UFC
IN
n=13
50%
MA
S
443mg/ml
Halo de
inhibicin
75%
DE
665mg/ml
SI
S
TE
UFC
100%
OF
IC
IN
886mg/ml
10mg/ml
Clotrimazol 1%
n=13
Halo de
inhibicin
UFC
n=13
Halo de
inhibicin
UFC
n=13
Halo de
inhibicin
UFC
n=13
Halo de
24
inhibicin
EXTRACTO ETANLICO
UFC
5%
CA
50mg/ml
MA
TI
n=13
Halo de
inhibicin
250mg/ml
FO
R
25%
UFC
IN
n=13
500mg/ml
Halo de
inhibicin
MA
S
50%
UFC
TE
100
%
OF
IC
IN
1000mg/m
l
DE
75%
SI
S
750mg/ml
n=13
Solucin salina
Halo de
inhibicin
UFC
n=13
Halo de
inhibicin
UFC
n=13
Halo de
inhibicin
UFC
n=13
25
Halo de
inhibicin
III. RESULTADOS
CA
Al analizar el efecto inhibitorio in vitro del aceite esencial y extracto etanlico del
MA
TI
Cymbopogon citratus sobre Candida albicans, se presentan en la Tabla N1 los

halos inhibitorios registrados en 13 repeticiones por cada una de las cinco
FO
R
concentraciones del extracto etanlico y el aceite esencial de C.citratus.
IN
En la Tabla N2 se muestra el anlisis de varianza de ambos grupos y se obtuvo

significativa del
como resultado que existe una diferencia estadstica altamente
MA
S
dimetro del halo de inhibicin del crecimiento del C. albicans a las concentraciones
TE
del extracto etanlico y aceite esencial de C. citratus aplicado.
SI
S
En la Tabla N 3, se presenta los promedios del dimetro de halo de inhibicin de

crecimiento de C. albicans despus de la aplicacin de discos con extracto etanlico
DE
y aceite esencial de C.citratus a diferentes concentraciones, se realiz la Prueba de

significancia de Duncan, que compar cada uno de los promedios de los halos,
IN
demostrando que no existe diferencia significativa entre los dimetros promedios de
IC
los halos inhibitorios del extracto etanlico al 5 %, 25%, 50% y 75%; pero si existe
OF
diferencia significativa entre los dimetros promedios de los halos inhibitorios al

5%,25%, 50% y 75% con 100%. En el grupo del aceite esencial no se encuentra
diferencia estadstica significativa entre las concentraciones al 5%, 25%, 50%, 75% y
26
100%; encontrndose a su vez que no hay diferencia estadstica significativa con el
CA
extracto etanlico al 100%. (p=0.05).
MA
TI
En la Tabla N 4 se muestra las UFC registradas en las 13 repeticiones por cada

concentracin de extracto etanlico y aceite esencial de C. citratus y el promedio de
FO
R
estas por concentracin.
IN
En la Tabla N 5, se presenta el anlisis de varianza, el cual determina que existe una

diferencia estadstica altamente significativa en el crecimiento de UFC de C. albicans
MA
S
con el extracto etanlico y aceite esencial de C.citratus de acuerdo a la concentracin
TE
aplicada. (p = 0.00).
En la Tabla N 6, se muestra los promedios del nmero de UFC de C. albicans
SI
S
despus de la aplicacin del extracto etanlico y aceite esencial de C.citratus a cinco
DE
concentraciones cada uno; se realiz la Prueba de significancia de Duncan, que

determin la existencia de grupos estadsticamente diferentes en cuanto a la actividad
IC
IN
inhibitoria del crecimiento de C. albicans: (p=0.05).
OF
Existe diferencia significativa en el crecimiento de UFC de C. albicans del extracto

etanlico de C.citratus al 100% con el crecimiento de UFC del extracto etanlico a
5%, 25%, 50% y 75% de concentracin.
27
Existe diferencia significativa en el crecimiento de UFC de C. albicans del aceite

esencial de C. citratus al 100%, 75% y 50% con el crecimiento de UFC del aceite
MA
TI
CA
esencial al 25% y 5% de concentracin.
No hay diferencia estadstica significativa en el crecimiento de UFC de C. albicans
FO
R
del extracto etanlico de C. citratus al 100% de concentracin con el crecimiento de
OF
IC
IN
DE
SI
S
TE
MA
S
IN
UFC del aceite esencial de C. citratus al 100%, 75% y 50%.
28
TABLA N 1: Dimetro de halo de inhibicin del aceite esencial y extracto

etanlico de Cymbopogon citratus hierba luisa sobre una cepa de
CA
Candida albicans
DIMETRO DEL HALO DE INHIBICIN (mm)
CONCENTRACIONES DE
EXTRACTO ETANLICO DE
ACEITE ESENCIAL DE
Cymbopogon citratus
Cymbopogon citratus
40
40
40
40
40
10
40
40
40
40
40
40
10
40
40
40
40
40
40
10
40
40
40
40
40
40
10
40
40
40
40
40
40
40
40
40
40
40
40
10
40
40
40
40
40
40
10
40
40
40
40
40
40
10
40
40
40
40
40
40
10
10
40
40
40
40
40
40
11
12
13
10
40
40
40
40
40
40
40
40
40
40
40
40
10
40
40
40
40
40
40
7.31
8.31
9.77
40*
40
40
40
40
40
IN
IC
6.15
50% 75% 100% control
OF
(mm.)
Prom
50% 75% 100%
FO
R
40
MA
S
25%
IN
25%
TE
5%
SI
S
5%
DE
N/C
MA
TI
CONCENTRACIONES DE
* Alcanza nivel mximo en la evaluacin de todas las repeticiones.

Fuente: Datos obtenidos por la investigadora, ao 2013
N: nmero de repeticiones C: Cepa Candida albicans Control: alcohol 70 (etanol)

29
TABLA N 2: Anlisis de Varianza para evaluar los bloques (dimetros de halos

inhibitorios) y los tratamientos (actividad inhibitoria del extracto etanlico y
las
Suma de
de
de los
MA
TI
CA
aceite esencial de Cymbopogon citratus)
crtico
variaciones
cuadrados
libertad
cuadrados
Probabilidad
para F
Tratamiento
32271.38
3585.71
45110.54
1.96
Error
9.54
120
0.08
Total
32280.92
129
Promedio
Valor
IN
FO
R
Grados
MA
S
Origen de
OF
IC
IN
DE
SI
S
TE
30
TABLA N 3: Prueba de Duncan de comparacin del dimetro del halo de

inhibicin (mm) segn concentracin del extracto etanlico y del aceite esencial
Concentraciones
ni
Grupos alfa = 0.05
13
6.15
E25%
13
7.31
E50%
13
E75%
13
A50%
8.31
MA
S
9.77
13
40
13
40
TE
DE
A75%
SI
S
A25%
13
40
13
40
13
40
13
40
IN
A100%
IN
E5%
A5%
FO
R
E100%
MA
TI
CA
de Cymbopogon citratus hierba luisa
OF
IC
31
TABLA N 4: Efecto inhibitorio in vitro en UFC del extracto etanlico y del

aceite esencial de Cymbopogon citratus hierba luisa sobre
MA
TI
CA
una cepa de Candida albicans.
UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS DE Candida albicans

CONCENTRACIONES DE
EXTRACTO ETANLICO DE
ACEITE ESENCIAL DE
Cymbopogon citratus
Cymbopogon citratus
5%
25%
50%
75%
100%
16
10
14
12
12
12
10
15
10
10
10
10
11
16
14
14
10
10
18
14
10
15
18
10
12
11
11
12
14
5%
25%
50%
75%
100%
IN
N/C
MA
S
0
0
10
11
10
10
DE
10
12
10
17
10
16
10
10
12
12.08
11.08
9.46
0.92
IC
IN
SI
S
TE
16
18
OF
13
FO
R
CONCENTRACIONES DE
Prom
UFC
13.54

32
TABLA N 5: Anlisis de Varianza para evaluar los bloques (UFC) y los

tratamientos (efecto inhibitorio in vitro del extracto etanlico y aceite esencial de
Origen de
Grados
Promedio
MA
TI
CA
Cymbopogon citratus hierba luisa sobre una cepa de Candida albicans)
Valor
Suma de
de
de los
variaciones
cuadrados
libertad
cuadrados
Probabilidad
para F
Tratamiento
4056.96
450.77
144.93
0.00
1.96
Error
373.23
120
3.11
Total
4430.19
129
crtico
MA
S
IN
FO
R
las
OF
IC
IN
DE
SI
S
TE
33
TABLA N 6: Prueba de Duncan de comparacin del efecto inhibitorio in vitro

en UFC segn concentracin del extracto etanlico y del aceite esencial de
ni
Grupos alfa = 0.05
MA
TI
Concentraciones
CA
Cymbopogon citratus hierba luisa sobre una cepa de Candida albicans.
E50%
13
E75%
13
E100%
13
A5%
13
0.92
0
A75%
13
A100%
13
DE
SI
S
11.1
9.5
13
13
A50%
12.1
TE
A25%
FO
R
13
13.5
IN
E25%
13
MA
S
E5%
OF
IC
IN
34
IV. DISCUSION
El
tratamiento
para
la
candidiasis
constituye
un
reto
en
pacientes
inmunodeprimidos pues ha surgido resistencia a los azoles de manera gradual
CA
durante terapias prolongadas y en la poblacin general, por el uso indiscriminado
MA
TI
de los conocidos trifarmacos en cuyo composicin se encuentra antimicticos;

siendo los mecanismos demostrados, cambios en la lanosterol demetilasa y en la
FO
R
D5-6 esterol desaturasa. Adems de la resistencia, la toxicidad heptica, las

interacciones farmacolgicas de antifngicos tradicionales, as como uso de
IN
drogas esteroides, cirugas y trasplantes que generan estados inmunodeficientes;
est ocasionando fallas en la teraputica antimictica a diversos compuestos como
MA
S
ketoconazol, fluconazol e incluso anfotericina B, lo que est fomentando la
TE
bsqueda de nuevas alternativas entre productos naturales.(8,13,15)
SI
S
Considerando que el Per presenta una gran variedad de plantas medicinales y

cuyo uso con fines curativos es una prctica ancestral, se ha motivado a
DE
profundizar en el estudio y conocimiento de las especies vegetales que tienen
propiedades medicinales y desarrollar su experiencia en el empleo de las
IN
sustancias que se extraen de ellas. La presente investigacin demostr el efecto
IC
inhibitorio in vitro del aceite esencial y extracto etanlico del Cymbopogon
OF
citratus frente a una cepa de Candida albicans .
El aceite esencial de C. citratus gracias a su alta volatilidad y lipofilia puede

penetrar fcilmente y ejercer su efecto biolgico a nivel de la membrana celular,
donde altera su estructura provocando fugas y
muerte celular,
bloqueando
35
tambin la sntesis de membrana, inhibiendo la germinacin de esporas y la

respiracin celular. Existen varias investigaciones que avalan su eficacia como el
realizado por Irkin y col (2009) que utilizando el mtodo de difusin en disco
CA
encontraron que 1ul/ml del aceite esencial de C. citratus tiene un halo de
MA
TI
inhibicin de 15+ 2.1 mm para C. albicans.(18,19,36)
FO
R
Taweechaisupapong y col (2012), investigaron el efecto antifngico in vitro del

aceite esencial de C.citratus contra C. albicans y C. krusei tanto en forma
IN
planctnica y biofilm, encontrando que posee actividad anti biopelcula, como
MA
S
probable modulador de la colonizacin por cndida,(37)
Al realizar la prueba de susceptibilidad con Difusin en discos se determin un
TE
promedio de halo inhibicin de 40mm a las cinco concentraciones de aceite

esencial utilizados, similar efecto report Da Silva y col (2008) cuando analizaron
SI
S
el efecto del aceite esencial en C.albicans. El efecto del aceite puede explicarse
DE
sobre la base de la composicin qumica que presenta, pues en l se encuentran

altos niveles de monoterpenos oxigenados (78,2%) constituidos a su vez por
IN
geranial (-citral) y neral (-citral). La accin del citral, mezcla de geranial y neral
IC
fueron estudiados por Moleyar y Narasimhan (1986) quienes encontraron una
OF
buena actividad sobre Aspergillus niger, Fusarium oxysporum y Penicillium

digitatum. As tambin se determin que en la composicin de C.citratus hay
monoterpenos hidrocarburos (7.9%) como canfeno (1,5%) y limoneno (4,2%) que
poseen accin antimictica y se sugiere que lo hacen por difusin en la membrana
celular.(24,45,46,47)
36
Al evaluar la sensibilidad con el extracto etanlico de C. citratus se hall un

promedio del halo de inhibicin de 14.31mm, menor al del aceite; sin embargo,
conforme aumenta la concentracin, los halos de inhibicin son mayores, llegando
CA
a tener efecto mximo al 100%, siendo segn esta prueba, la concentracin
MA
TI
indicada para inhibir el crecimiento de C. albicans.
FO
R
Orrego y Leyva (2008), Alvin (2012) y Montoya (2003) estudiaron al extracto

etanlico de C. citratus encontrando que los compuestos fenlicos mayoritarios y
IN
responsables de su actividad biolgica son: isoorientina, swertiajaponina e

isoorientina 2-V-ramnsido. Los fenoles se caracterizan por su actividad biocida
MA
S
ya que inducen una alteracin de la permeabilidad en la membrana citoplasmtica,

produciendo una progresiva salida de constituyentes intracelulares y con un
TE
aumento de su concentracin, provocan la lisis y destruccin microbiana.(31,32,44)
SI
S
Todas las concentraciones de aceite esencial utilizadas en el presente estudio
DE
tuvieron buen efecto inhibitorio pues creci menos de 30 UFC, siendo la actividad
mayor a partir de la concentracin 50%; a partir del cual no se evidenci
IN
crecimiento de UFC, considerndosele como la CIM. Adems, se determin que
IC
existe diferencia estadstica significativa entre la concentracin de 50% con las del
OF
5 % y 25%; demostrndose que el efecto inhibitorio vara de acuerdo a la

concentracin aplicada. Con respecto al extracto etanlico, la concentracin
efectiva fue al 100% (1000mg/ml) mientras que las dems concentraciones, si
evidenciaron crecimiento del hongo, aunque disminuyen conforme aumenta la
37
concentracin. Adems todas estas presentaron diferencia estadstica significativa

entre ellas y con el extracto al 100%.
CA
Considerando ambas pruebas, se demuestra que tanto aceite esencial como
MA
TI
extracto etanlico son activos frente a C. albicans, siendo ms efectivo el aceite

esencial, el cual desde una concentracin de 50% presenta buena actividad
FO
R
mientras que para el extracto etanlico se requiere usar una concentracin al
IN
100%.
Los resultados obtenidos abre nuevas posibilidades en el campo de la
MA
S
investigacin clnica como farmacolgica, constituyendo as una alternativa

natural, eficiente y de bajo costo para el tratamiento de infecciones oportunistas
TE
sobre todo en pacientes inmunodeficientes, considerndose la utilizacin del

extracto etanlico como una buena alternativa a utilizar como antimictico tpico
SI
S
en forma de solucin para infecciones mucocutneas en dermatologa, as como su
DE
uso por va oral, debindose demostrar su seguridad en seres humanos en
OF
IC
IN
posteriores estudios.
38
V. CONCLUSIONES
Al analizar el efecto inhibitorio in vitro del extracto etanlico y aceite esencial de
CA
Cymbopogon citratus se concluye que:

La concentracin inhibitoria mnima del aceite esencial de Cymbopogon citratus
MA
TI
hierba luisa sobre Candida albicans es de 50% (443mg/ml)
FO
R
A 100% (1000mg/ml) de concentracin del extracto etanlico de Cymbopogon
IN
citratus hierba luisa se inhibe el crecimiento de Candida albicans.
El aceite esencial de Cymbopogon citratus hierba luisa tiene efecto inhibitorio in
MA
S
vitro sobre Candida albicans, el cual es mayor cuando incrementa su
TE
concentracin.
SI
S
El extracto etanlico tiene menor efecto inhibitorio in vitro que el aceite esencial
OF
IC
IN
DE
de Cymbopogon citratus hierba luisa sobre Candida albicans.
39
VI. RECOMENDACIONES
Realizar estudios in vivo para valorar la efectividad y la toxicidad que puedan

proporcionar los componentes activos del aceite esencial y el extracto etanlico de
MA
TI
CA
Cymbopogon citratus, as como la dosis teraputica para la poblacin humana.
Realizar otros estudios para ampliar el espectro de actividad antifngica y
FO
R
antibacteriana de Cymbopogon citratus tanto del aceite esencial como extracto
Realizar estudios in vitro e in vivo con el extracto acuoso de Cymbopogon citratus
IN
etanlico.
OF
IC
IN
DE
SI
S
TE
MA
S
para determinar su espectro de actividad, ya que es popularmente utilizado.
40
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

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Gonzlez C Juan, Blanco P Francisco. Episodios oportunistas en pacientes

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47
FO
R
MA
TI
CA
OF
IC
IN
DE
SI
S
TE
MA
S
IN
ANEXOS
48
CA
Preparacin de la muestra de Cymbopogon citratus (hierba luisa)
DE
SI
S
TE
MA
S
IN
FO
R
MA
TI
Seleccin y lavado de hojas

con agua corriente
OF
IC
IN
Se fraccion en trozos pequeos y se

conserv en bolsas de papel kraft
49
IC
IN
DE
SI
S
TE
MA
S
IN
FO
R
MA
TI
CA
Obtencin del
aceite esencial:
Destilacin por
arrastre de vapor
de agua
OF
Obtencin del extracto etanlico

Percolacin
50
Preparacin de cepa
CA
de Candida albicans
OF
IC
IN
DE
SI
S
TE
MA
S
IN
FO
R
MA
TI
Agar Sabouraud
Sembrado en Placas Petri

51
IN
FO
R
MA
TI
CA
Determinacin del efecto inhibitorio (Prueba de Susceptibilidad por mtodo

de Difusin en Discos)
OF
IC
IN
DE
SI
S
TE
MA
S
Embeber discos con cada concentracin
Colocar con aguja estril sobre cultivos de C.albicans en placas Petri
52
IN
FO
R
MA
TI
CA
Comparacin de halos de inhibicin del crecimiento de C. albicans con

extracto etanlico y aceite esencial
OF
IC
IN
DE
SI
S
TE
MA
S
Extracto etanlico 5% - Aceite esencial 5%
Extracto etanlico 100% - Aceite esencial 100%
53
MA
S
IN
FO
R
MA
TI
CA
Determinacin de Concentracin inhibitoria Mnima (CIM)
OF
IC
IN
DE
SI
S
TE
Prueba de Dilucin en tubos
Sembrar 0.1ml de solucin en cada uno de tubos en placas Petri
54
Placas Petri con 0 UFC de C. albicans con extracto etanlico al 100% y
MA
S
IN
FO
R
MA
TI
CA
aceite esencial al 50%
OF
IC
IN
DE
SI
S
TE
Extracto etanlico 100%

UFC = 0
Aceite esencial 50%

UFC= 0
55
ANEXO N1:
HOJA DE RECOLECCIN DE DATOS
Ttulo: Comparacin del efecto inhibitorio in vitro del extracto etanlico con el
CA
albicans
MA
TI
Cepa: Candida albicans ATCC 10231

Medio de cultivo: Agar Sabouraud
IN
FO
R
Aceite esencial / Extracto etanlico de Cymbopogon citratus
CONCENTRACIN
Medida 1 (mm)
75%
100%
DE
SI
S
Medida 3 (mm)
Medida 5 (mm)
50%
TE
Medida 2 (mm)
Medida 4 (mm)
25%
MA
S
5%
Medida 6 (mm)
Medida 7(mm)
IN
Medida 8 (mm)
IC
Medida 9 (mm)
OF
Medida 10(mm)
Medida 11 (mm)
Medida 12 (mm)
Medida 13(mm)
56
HOJA DE RECOLECCIN DE DATOS

Ttulo: Comparacin del efecto inhibitorio in vitro del extracto etanlico con el
CA
albicans
MA
TI
Cepa: Candida albicans ATCC 10231

Medio de cultivo: Agar Sabouraud
FO
R
Aceite esencial /Extracto etanlico de Cymbopogon citratus
Medida 2 (UFC)
75%
100%
TE
Medida 3 (UFC)
DE
SI
S
Medida 4 (UFC)
Medida 6 (UFC)
50%
MA
S
Medida 1 (UFC)
Medida 5 (UFC)
25%
5%
IN
CONCENTRACIN
Medida 7(UFC)
Medida 8 (UFC)
IN
Medida 9 (UFC)
IC
Medida 10(UFC)
OF
Medida 11 (UFC)
Medida 12 (UFC)
Medida 13(UFC)
57
ANEXO N2
TABLA N7 Comparacin de los promedios de halos de inhibicin del
aceite esencial y el extracto etanlico de Cymbopogon citratus hierba
FO
R
MA
TI
sobre una cepa de Candida albicans.
CA
luisa, con el grupo control Clotrimazol solucin al 1%
Grupo control
luisa,
positivo
IN
Cymbopogon citratus hierba
Esencial*
Media (mm)
solucin1%*
14.31
40.00
40.00
0.00
0.00
Desv.
Estndar
Clotrimazol
TE
MA
S
etanlico
Aceite
Extracto
DE
SI
S
15.82
*: Alcanza nivel mximo en la evaluacin de todas las repeticiones.

p< 0.01
IC
IN
F = 151.3
OF
58
ANEXO N3
TABLA N8: Comparacin del efecto inhibitorio in vitro en UFC del
extracto etanlico y del aceite esencial de Cymbopogon citratus hierba luisa,
MA
TI
FO
R
Candida albicans.
CA
con el grupo control Clotrimazol solucin al 1% sobre una cepa de
Grupo control
luisa,
positivo
IN
Cymbopogon citratus hierba
Extracto
Media
9.23
5.38
0.31
0.23
0.73
0.44
35.25
p > 0.05
IN
F=
DE
SI
S
Estndar
Clotrimazol sol. 1%*
TE
Desv.
Esencial*
MA
S
etanlico
Aceite
OF
IC
59
ANEXO N4
EVALUACION DE LA TESIS
Consignar las observaciones y objeciones pertinentes relacionados a los
MA
TI
a.
CA
El Jurado deber:
Anotar el calificativo final
c.
Firmar los tres miembros del jurado
IN
b.
FO
R
siguientes items
TESIS:.......................................................................................................................
DE LAS GENERALIDADES :
TE
1.
MA
S
....................................................................................................................................
SI
S
El Ttulo:...................................................................................................................
DEL PLAN DE INVESTIGACIN :
IN
2.
DE
Tipo de Investigacin:..............................................................................................
OF
IC
Antecedentes:............................................................................................................
Justificacin:.............................................................................................................
Problema:..................................................................................................................
Objetivos:..................................................................................................................
60
Hiptesis:...................................................................................................................
Diseo de Contrastacin:........................................................................................
CA
Tamao Muestral:...................................................................................................
MA
TI
Anlisis Estadstico:................................................................................................
3. RESULTADOS:...................................................................................................
FO
R
4. DISCUSIN: ......................................................................................................
IN
5. CONCLUSIONES: ............................................................................................
MA
S
6. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:............................................................
7. RESUMEN:.........................................................................................................
TE
8. RELEVANCIA DE LA INVESTIGACIN: ..
SI
S
9. ORIGINALIDAD: ...............................................................................................
DE
10. SUSTENTACION
10.1Formalidad:
IN
.................................................................................................................
OF
IC
10.2Exposicin:
.................................................................................................................
10.3Conocimiento del Tema

: ...............................................................................................................
61
CA
CALIFICACIN:
Nombre
Cdigo del docente
FO
R
JURADO:
MA
TI
(Promedio de las 03 notas del Jurado)
Dr......................................................... ...
Presidente:
IN
Firma
TE
MA
S
Grado Acadmico: ..
Dr...................................................... ...
SI
S
Secretario:
DE
Grado Acadmico: .
Dr. ....................................................
IC
IN
Miembro:
OF
Grado Acadmico: .
62
ANEXO N5
RESPUESTAS DE TESISTAS A OBSERVACIONES DEL JURADO
CA
El Tesista deber responder en forma concreta a las observaciones del jurado a
MA
TI
manuscrito en el espacio correspondiente:

Fundamentando su discrepancia
b.
Si est de acuerdo con la observacin tambin registrarla.
c.
Firmar
IN
FO
R
a.
TESIS:......................................................................................................................
DE LAS GENERALIDADES :
TE
3.
MA
S
....................................................................................................................................
SI
S
El Ttulo:..................................................................................................................
DEL PLAN DE INVESTIGACIN :
4.
DE
Tipo de Investigacin:..............................................................................................
IN
Antecedentes:...........................................................................................................
OF
IC
Justificacin:............................................................................................................
Problema:.................................................................................................................
Objetivos:................................................................................................................
Hiptesis:..................................................................................................................
63
Diseo de Contrastacin:.......................................................................................
Tamao Muestral:...................................................................................................
CA
Anlisis Estadstico:................................................................................................
MA
TI
3. RESULTADOS:...................................................................................................
4. DISCUSIN: ......................................................................................................
FO
R
5. CONCLUSIONES: ............................................................................................
IN
6. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:............................................................
MA
S
7. RESUMEN:..........................................................................................................
8. RELEVANCIA DE LA INVESTIGACIN: .........................................
SI
S
10. SUSTENTACION
TE
9. ORIGINALIDAD: ..............................................................................................
DE
10.1 Formalidad............................................................................................
10.2 Exposicin:.............................................................................................
OF
IC
IN
10.3 Conocimiento del Tema:......................................................................
.......................................................
Nombre
Firma
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TESIS PARA OPTAR EL GRADO DE

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A mis padres Justiniano y Vilma por su amor, dedicacin y empeo.

A mis hermanos Laura, Jos y Omar por su cario, apoyo y comprensin.

brindado de forma incondicional.

A mi asesora la Dra. Elva Meja Delgado por la confianza y ayuda que me ha

dieron con su ejemplo valiosas enseanzas.

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2.1 Material de estudio...13

2.3 Definicin de variables operacionales.....15

2.4 Diseo procedimental......16

2.7 Diseo experimental.....24

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albicans ensayando 13 repeticiones por cada concentracin al 5% (44mg/ml), 25%

esencial y 5% (50mg/ml), 25% (250mg/ml), 50% (500mg/ml), 75% (750mg/ml) y

concentraciones del extracto etanlico presentaron menores halos inhibitorios pero

significativa en este grupo. Con respecto a la Concentracin Inhibitoria Mnima

(CIM), se encontr disminucin de las Unidades Formadoras de Colonias (UFC)

contabiliz UFC; mientras que el extracto etanlico inhibi a Candida albicans a la

aceite es 50% (443mg/ml) y el extracto etanlico inhibe a Candida albicans slo al

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tested 13 replicates for each concentration to 5 % ( 44mg/mL ), 25 % (222mg/ml) ,

(50mg/ml), 25% (250mg/ml), 50% (500mg/ml), 75% (750mg/ml) and 100%

showed lower growth inhibitory but under increased concentration; significant

Candida albicans only 100% (1000 mg / ml)

Keywords: Cymbopogon citratus, lemongrass, Candida albicans, Halo of inhibition,

Minimum Inhibitory Concentration (MIC), Colony Forming Units (CFU)

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Las infecciones oportunistas continan siendo una causa mayor de morbilidad y

mortalidad en el mundo, presentndose con mayor frecuencia y gravedad en las

con deficiencias econmicas y

provocando problemas para su manejo.(1,2)

As mismo, existen otras condiciones que favorecen el desarrollo de estas infecciones

como alteracin en la fagocitosis (lupus eritematoso sistmico, diabetes mellitus),

granulocitopenia (citotxicos, radioterapia), inmunodepresin consecutiva al uso de

receptores de trasplantes; adems de anomalas en la inmunidad humoral (leucemia,

Se conoce que las infecciones oportunistas son procesos infecciosos invasivos

producidos por grmenes habitualmente no patgenos que se manifiestan en estados

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inmunocompetentes en edades extremas de la vida como lactantes y ancianos, adems

La candidiasis es producida por hongos del gnero Candida la cual incluye ms de

por ser la ms frecuente. Estos microorganismos generalmente se encuentran en

forman parte de la flora normal, habitando en el tubo digestivo, aparato reproductor

El tratamiento convencional de la candidiasis se basa en uso de agentes antifngicos

inhibiendo la desmetilasa de 14-alfa-esterol, enzima del citocromo P450; impidiendo

la conversin del lanosterol a ergosterol, un componente vital de la membrana celular

de levaduras con susceptibilidad disminuida o resistente a los antifngicos. La

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resistencia puede ser clnica o in vitro, siendo la primera, consecuencia fundamental

frmacos o al severo grado de inmunodepresin del paciente. La resistencia in vitro

al contacto previo con el antimictico. En s, la resistencia antifngica depende de la

Los mecanismos de resistencia a los azoles propuestos son: disminucin de la