Tema 6b.

El metabolismo
- Ciclo de Krebs
- Transporte electrnico y fosforilacin oxidativa

Ciclo de Krebs, del cido ctrico o

de los cidos tricarboxlicos

Metabolismo energtico y mitocondrias

Formacin del acetil-CoA: el Complejo Piruvato Deshidrogenasa
Reacciones del Ciclo de Krebs
Balance energtico
Regulacin del Ciclo de Krebs
Naturaleza anfiblica del ciclo: conexiones con rutas biosintticas
y reacciones anaplerticas

El metabolismo energtico tiene lugar en las mitocondrias

Membrana
interna
mitocondrial

En el metabolismo, el acetil-CoA es una encrucijada

y la piruvato deshidrogenasa una vlvula metablica
Glucosa

Protenas
Piruvato

Enlace tioster de
alta energa
G0 = - 32,2 kJ/mol

Aminocidos

Piruvato
Deshidrogenasa
Acetil-CoA

Lpidos

Ciclo de
Krebs

energa

Acidos grasos

La descarboxilacin oxidativa del piruvato a acetil-CoA es un proceso irreversible.

El acetil-CoA se dirige bien hacia la obtencin de energa por oxidacin en el ciclo de
Krebs o bien hacia el metabolismo lipdico, sin vuelta atrs metablica posible.
Por tanto, la Piruvato Deshidrogenasa es una vlvula metablica y un enzima clave
en el metabolismo celular.

Complejo Piruvato Deshidrogenasa

En realidad, la descarboxilacin
oxidativa del piruvato a acetil-CoA est
catalizada no por un enzima, sino por el

Complejo multienzimtico Piruvato

Deshidrogenasa (CPdH).

El CPdH est en la matriz mitocondrial, a donde el piruvato entra gracias a un

transportador especfico que lo intercambia por OH-.
Est formado por tres enzimas y cinco coenzimas. Es un prototipo de otros
dos complejos: -cetoglutarato deshidrogenasa (del Ciclo de Krebs) y -cetocido
deshidrogenasa (de la degradacin de aminocidos).
Enzimas

Coenzimas

E1 : piruvato deshidrogenasa (TPP)

TPP: tiamina pirofosfato

E2 : dihidrolipoil transacetilasa (lipoamida, CoA)

Lipoato
Coenzima A

E3 : dihidrolipoil deshidrogenasa (FAD, NAD+)

cido lipoico

FAD: flavn adenn dinucletido

NAD+: nicotinamida adenn dinucletido

Reacciones del Complejo Piruvato Deshidrogenasa

3
La piruvato deshidrogenasa es un
ejemplo claro de canalizacin de
sustratos, ya que los intermedios
de la reaccin nunca abandonan la
superficie del complejo enzimtico

El Ciclo de Krebs, del cido ctrico

o de los cidos tricarboxlicos, es
clave en la produccin de energa
Es la va final comn para la oxidacin de las
molculas orgnicas: aminocidos, cidos
grasos y carbohidratos.
Tras ser metabolizadas, entran al ciclo como
acetil-CoA, que es la unidad bsica de
combustible para la oxidacin aerbica.
El ciclo tiene lugar en la matriz mitocondrial,
e incluye una serie de reacciones redox que
conducen a la oxidacin de un grupo acetilo
hasta dos molculas de CO2.
La funcin del ciclo es obtener electrones de
alta energa a partir del combustible acetil-CoA.
Estos electrones son transportados por los
coenzimas NADH y FADH2, que luego los ceden
a la cadena respiratoria. Ello permite la sntesis
de ATP por fosforilacin oxidativa.
El Ciclo de Krebs, junto con la cadena
respiratoria y la fosforilacin oxidativa, aportan la
mayor parte de la energa utilizada por las
clulas aerobias (en torno al 90-95%).

Visin y reaccin global del ciclo de Krebs

Hay una primera condensacin de un grupo acetilo del acetil-CoA
con el oxalacetato para dar citrato.
Este es convertido en isocitrato, que sufre
dos descarboxilaciones oxidativas.
Luego hay una fosforilacin a nivel de
sustrato y dos oxidaciones ms.
Adems hay procesos
de hidratacin y
deshidratacin.

A nivel energtico, por cada

acetil-CoA oxidado se obtienen
4 pares de electrones y un
enlace fosfato de alta energa.

Acetil-CoA + 3 NAD+ + FAD + GDP + Pi + 2 H2O

2 CO2 + 3 NADH + FADH2 + GTP + 2 H+ + CoA-SH

Reacciones del
Ciclo de Krebs

Similar al CPdH
Membrana
interna
mitocondrial

Los dos C que salen

en forma de CO2 no
son los que entraron
como acetil-CoA

Reacciones del ciclo de Krebs

El O2 no interviene en el ciclo.
Sin embargo, el ciclo solo funciona en condiciones aerbicas,
ya que en la mitocondria slo se puede regenerar el NAD+ y el
FAD mediante la transferencia de electrones al O2.

Regulacin de la Piruvato Deshidrogenasa y el Ciclo de Krebs

El Complejo Piruvato Deshidrogenasa es regulado
de forma integrada por interacciones alostricas y por
modificacin covalente, que a su vez est regulada por
los niveles de metabolitos.

En el ciclo de Krebs, la regulacin se hace sobre la

citrato sintasa, isocitrato deshidrogenasa y cetoglutarato deshidrogenasa.
El efecto regulador sobre ellas de los niveles de los
metabolitos clave hace que el flujo a travs del ciclo
se ajuste a una velocidad que permita mantener
concentraciones ptimas de ATP y NADH.
En condiciones normales, las velocidades de la
glucolisis y el ciclo de Krebs estn integradas.
La adaptacin de la velocidad de la glucolisis se
hace no slo a travs de ATP y NADH, sino tambin
del citrato, que inhibe la PFK-1.

Naturaleza anfiblica del Ciclo de Krebs: implicacin en

el anabolismo y reacciones anaplerticas o de relleno
Varios internediarios del
ciclo son precursores
anablicos, es decir, que
pueden ser usados para
rutas biosintticas.
Por ello debe haber
sistemas para generarlos
con rapidez si baja su nivel,
para que el ciclo siga
funcionando normalmente.
As, hay cuatro posibles
reacciones anaplerticas
que los reponen a partir de
piruvato o de PEP.

Metabolismo glucdico. Puntos de conexin y metabolitos clave

1. Hexoquinasa
2. Fosfoglucomutasa
3. Fosfoglucosa isomerasa
4. Ruta de las Pentosas fosfato
5. Lactato deshidrogenasa
6. Alanina aminotransferasa
7. Glucolisis
8. Gluconeognesis
9. Piruvato Deshidrogenasa
10. Ciclo de Krebs
11. Biosntesis de cidos grasos
12. Biosntesis de esteroides
Cuerpos
cetnicos

Cadena de transporte electrnico

Conversin del flujo de electrones en energa qumica
Coenzimas y grupos transportadores de electrones
Cadena de transporte electrnico mitocondrial
Generacin del gradiente de protones
Fuerza protn-motriz y fosforilacin del ADP
Transporte a travs de la membrana interna mitocondrial y
lanzaderas de sustrato
Regulacin de la cadena y la fosforilacin
Balance energtico

Mediante el transporte electrnico, las reacciones redox biolgicas

permiten generar enlaces de alta energa en el ATP

Los electrones fluyen desde los pares redox con potencial de reduccin E
ms negativo a aqullos con E ms positivo. El valor del potencial de
reduccin viene dado por:
Ecuacin
de Nernst
La relacin del potencial de reduccin E con la variacin de energa libre G,
y por tanto con la energa aprovechable metablicamente, viene dada por:

Potenciales de reduccin estndar E de algunas

semireacciones de importancia biolgica

Muchos movimientos electrnicos entre

pares redox biolgicos tiene lugar mediante
pares de electrones

Sistemas transportadores de electrones

Coenzimas principales
Son hidrosolubles, e intervienen en muchas reacciones redox metablicas:
NAD+ y NADP+: cofactores mviles, se trasladan de un enzima a otro.
FAD y FMN: son grupos prostticos de flavoprotenas, a las que estn
fuertemente unidas.
Otros sistemas
Algunos son protenas de membrana, de los tipos protenas ferrosulfuradas
(o protenas Fe-S) y citocromos.
Tambin est la quinona liposoluble Ubiquinona o Coenzima Q, presente en
todos los organismos con metabolismo respiratorio. Hay distintas formas, en
funcin del nmero de unidades de isopreno de su cola. La ms abundante en
humanos es la CoQ10, que tiene 10 unidades (E0 = - 0,045 V).
Gracias a su carcter liposoluble, la CoQ est por todas las membranas
celulares, desarrollando distintas funciones gracias a su capacidad redox.

ribitol

E0 = - 0,22 V (para FAD)

E0 = - 0,3 V (para FMN)

Coenzimas principales
del transporte de e- en
las reacciones redox
biolgicas

Estn unidos covalentemente

a sus enzimas: son grupos
prostticos
FMN: flavn mononucletido
FAD: flavn adenn dinucletido

Son solubles y transportan

electrones entre molculas

NAD(P)+: nicotinamida adenn

dinucletido (fosfato)

E0 = - 0,32 V (para NAD+ y NADP+)

Nucletidos de nicotinamida en el catabolismo y la biosntesis

El NAD+ es el cofactor de la mayora de las enzimas que actan en la direccin de oxidacin

de los sustratos (deshidrogenasas), mientras que el NADPH suele actuar como cofactor para
las reductasas, que son enzimas que catalizan la reduccin del sustrato.
El NAD+ se regenera principalmente en el proceso de transporte electrnico.
El NADPH se genera a partir del NADP+ en la Ruta de las pentosas fosfato, o bien a partir
del NADH mediante la accin de la transhidrogenasa mitocondrial.
El NADP+ se sintetiza a partir del NAD+ por un reaccin de una quinasa dependiente de ATP.
La [NAD+ + NADH] est en torno a 10-5 M, y la de [NADP+ + NADPH] es 10 veces menor.

Grupos prostticos de los citocromos

Hemo A
Citocromos A

Ferro-protoporfirina IX
Citocromos B

Protena

Hemo C
Citocromos C

Estructura de los centros Fe-S

Fe

Fe2S2

Fe4S4

Tanto los citocromos como las protenas Fe-S intervienen en

la cadena respiratoria, pero tambin en muchos otros procesos
y reacciones, en los que los grupos hemo y Fe-S actan como
cofactores redox.

Ferredoxina Fe2S2
de Anabaena

Componentes de la cadena de
transporte electrnico mitocondrial

FADH2

La CoQ capta los electrones de los Complejos I y II, y

se los cede al Complejo III.
El Citocromo c no es parte de un complejo enzimtico.
Se mueve por el lado exterior de la membrana entre los
Complejos III y IV como una protena libremente soluble.

Transportadores electrnicos de la
cadena respiratoria y sus potenciales
de reduccin estndar

lado intermembranal

lado de
la matriz

Energa producida en la cadena de transporte electrnico

Potencial de
reduccin, E

O2 + 2 H+ + 2 e- H2O

0,816 v

NAD+ + H+ + 2 e- NADH

- 0,320 v

G = - n F E
G = - 2 x 96.480 x 1,136 = 219.202 julios/mol = 219,2 kJ/mol de NADH

Hay tres saltos energticos asociados al paso de los electrones del NADH por
los complejos I, III y IV de la cadena respiratoria.
Estos saltos energticos se utilizan como fuente energtica para la extrusin de
protones de la matriz mitocondrial en contra de su gradiente de concentracin.

El transporte de electrones genera un gradiente de protones

El paso de e- por
los Complejos I, III y
IV se acopla a la
extrusin de H+ de
la matriz al espacio
intermembranoso

Salida de H+ de la matriz mitocondrial debida al flujo por la cadena

respiratoria de 2 e- cedidos por el NADH (10 H+) o el FADH2 (6 H+)

El coenzima Q es paso obligado de los electrones

procedentes de varias vas
Lanzadera del
glicerol-3-fosfato

NADH
Deshidrogenasas

Complejo I

ETF: flavoprotena
de transferencia de
electrones

Ciclo de
Krebs

-oxidacin de
los cidos grasos

Fuerza protn-motriz

Espacio
intermembranal

Matriz

El flujo de electrones a travs de la cadena

respiratoria provoca la formacin de un gradiente
de H+ a travs de la membrana interna, con mayor
[H+] en el espacio intramembranal que en la matriz
y un potencial de membrana negativo en el interior.
Ello genera un potencial electroqumico
llamado p, que desarrolla una fuerza protnmotriz que impulsa la vuelta de los H+ a la matriz.

La vuelta se realiza
a travs del poro de la
FoF1 ATP sintasa, que
usa la fuerza protnmotriz para fosforilar
ADP y obtener ATP.

La FoF1 ATP sintasa es una ATPasa de tipo F

Matriz

371 kDa
8,5 x 10 nm

Espacio
intermembranoso

La FoF1 ATP sintasa de la membrana interna mitocondrial est formada por unas
25 subunidades y tiene un tamao de 450 kDa. Tambin se llama Complejo V.
En la subunidad o dominio F1, el ADP y el Pi se unen y el ATP se forma
fcilmente, quedando unido al enzima: el gasto energtico es para su liberacin.
El flujo de H+ provoca el giro de la unidad mvil formada por el anillo c10 de Fo
y el tallo de F1, y las s.u. van cambiando entre tres conformaciones a medida
que la s.u. interacciona con ellas, permitiendo en la tercera la liberacin del ATP.

La energa del gradiente de protones p se

usa para distintos objetivos en las clulas

En los sistemas biolgicos, los gradientes de protones constituyen la

principal divisa interconvertible de energa libre. La fuerza protn-motriz es
una forma sencilla y eficaz de almacenar energa libre porque slo requiere
una membrana lipdica cerrada que separe dos fases acuosas. Es la fuerza
clave de la la Teora quimiosmtica descrita por Peter Mitchell en los aos 70.

Los transportadores de la
membrana interna mitocondrial
permiten el transporte de
metabolitos relacionados con la
obtencin de ATP

H+

Las lanzaderas de sustrato de la membrana interna transportan

pares de electrones del NADH desde el citosol a un componente
de la cadena respiratoria o al interior de la mitocondria
El NADH obtenido en el citosol (de la
glucolisis y otras rutas) no puede atravesar
la membrana interna mitocondrial
Lanzadera del glicerol-3-fosfato (cerebro, msculo)
1,5 ATP por cada 2 e- del NADH + H+
Glicerol 3P dH

Lanzadera del malato-aspartato (hgado, rion, msculo cardaco)

2,5 ATP por cada 2 e- del NADH + H+

Malato
deshidrogenasa

Malato
deshidrogenasa
KG: -cetoglutarato

Regulacin de la fosforilacin oxidativa

La velocidad de la cadena respiratoria est ntimamente ligada a la fosforilacin
oxidativa, de manera que los electrones no fluyen hasta el O2 a menos que el
ADP sea fosforilado simultneamente a ATP. Es decir, a nivel de regulacin
funcionan como una unidad.

La velocidad de la fosforilacin oxidativa est controlada por la relacin

NADH/NAD+, el Pi, la pO2 y el H+, pero sobre todo por el nivel de ADP, que se
denomina control respiratorio o control por aceptor (del Pi). Este sistema de
control puede llegar a acelerar 10 veces el consumo de O2.
Este control se extiende hasta el ciclo de Krebs, a travs del consumo de
NADH y FADH2, y desde el ciclo a la glucolisis. Los electrones no fluyen desde
los combustibles hasta el O2 a menos que se necesite sintetizar ATP.

Produccin de ATP mediante la oxidacin

completa de la glucosa a CO2 y H2O
Las estequiometras del bombeo de H+, consumo de O2 y
sntesis de ATP se hacen en base a estimaciones, por la naturaleza
difusa de la energa quimiosmtica.
Se estima que se sintetizan 2,5 ATP por cada 2 e- transferidos
por el NADH (bombeo de 10 H+), y 1,5 ATP si lo son por el FADH2
(bombeo de 6 H+). Eso supone un aprovechamiento energtico
sobre la G de reduccin en torno al 35% en condiciones estndar.

En conjunto, se producen 30 32 molculas de ATP por

molcula de glucosa, lo que comparado con la energa de
oxidacin de la glucosa supone una eficiencia termodinmica
en torno al 33% en condiciones estndar.
En la clula la eficiencia aumenta hasta el 65-70%.