Prcticas de Laboratorio N10

DETERMINACION DE MINERALES EN MUESTRAS DE HIERBAS

1.

Objetivos
Determinar el contenido de vitamina C en frutos y verduras
Caracterizar el mtodo yodomtrico para determinar vitamina C
Evaluar el contenido de vitamina C empleando el reactivo 2,6diclorofenolindofenol
Determinar el contenido de vitamina C empleando el metodo de Folin
Ciocalteu

2.

Introduccin

La vitamina C
La vitamina C, o cido ascrbico, es un compuesto hidrosoluble de 6
tomos de carbono relacionado con la glucosa. Su papel biolgico principal
parece ser el de actuar como cofactor en diversas reacciones enzimticas
que tienen lugar en el organismo. El cido ascrbico acta como coenzima
de las hidroxilasas de prolina y lisina, encargadas de hidroxilar la lisina y
prolina en el protocolgeno, modificacin necesaria para que ste pueda
formar los enlaces cruzados para formar las fibrillas de colgeno. En este
sentido, la vitamina C es importante para el mantenimiento del tejido
conjuntivo normal, para la curacin de heridas y para la formacin del
hueso, ya que el tejido seo contiene una matriz orgnica con colgeno. En
su condicin de agente reductor, el cido ascrbico posee otras propiedades
importantes, que parecen ser no enzimticas. Por ejemplo, ayuda a la
absorcin del hierro al reducirlo a su estado ferroso en el estmago; protege
la vitamina A, vitamina E y algunas vitaminas B de la oxidacin; tambin
favorece la utilizacin del cido flico ayudando a la conversin del folato en
tetrahidrofolato o mediante la formacin de derivados poliglutamato del
tetrahidrofolato. Finalmente, la vitamina C es un antioxidante biolgico que
protege al organismo del estrs oxidativo provocado por las especies
oxigeno reactivas.
La mayor parte de sntomas de la carencia de vitamina C se puede
relacionar directamente con sus papeles metablicos. Entre los sntomas de
carencias leves de vitamina C se encuentran la facilidad para producir
heridas, debido al incremento de la fragilidad de los capilares. El escorbuto
est asociado con una disminucin en la capacidad de curar heridas,
osteoporosis, hemorragias y anemia.
La vitamina C se encuentra principalmente en alimentos de origen
vegetal y puede presentarse en dos formas qumicas interconvertibles:
cido ascrbico (forma reducida) y cido dehidroascrbico (forma oxidada),
siendo ambas formas funcionales biolgicamente y mantenindose en

equilibrio fisiolgico. Si el cido dehidroascrbico es hidratado se transforma

en cido dicetogulnico, no activo biolgicamente, siendo esta
transformacin irreversible. Esta hidratacin ocurre espontneamente en
disolucin neutra o alcalina.

O
OH
HO

4
3

HO

HO

OH
5

OH

1
2

c id o d e h id r o a s c r b ic o

OH

OH

HO

CH2

OH

c id o d ic e to g u l n ic o
La vitamina C o cido ascrbico es un nutriente esencial para muchos
primates, un pequeo nmero de otros mamferos (cobayas y murcilagos
por ejemplo), unas pocas especies de pjaros y algunos peces. El hombre en
concreto, carece de la enzima que cataliza la etapa terminal de la sntesis
de cido ascrbico, la gulonolactona oxidasa, por lo que debe adquirirlo a
travs de la alimentacin, siendo esta la razn por la que en el hombre y en
otras especies el cido ascrbico adquiere el carcter de vitamina.
La vitamina C es un compuesto inestable, debido a la facilidad con la que se
oxida e hidrata. Se destruyen con facilidad en el procesamiento y
conservacin de los alimentos, por lo que es utilizada como indicador de la
prdida vitamnica de un alimento durante su procesamiento y
almacenamiento. Por otra parte, el calor y los cationes metlicos (cuidado al
cocinar en recipientes de cobre) destruyen la vitamina C. Alimentos como
los ctricos, kiwi, fresones, brcoli, lechuga, entre otros, son fuente natural
de vitamina C, y su contenido depende de la especie, rea geogrfica en las
que son cultivados, las condiciones de almacenamiento una vez recogidos y
del estado de maduracin (generalmente aumenta con la maduracin).
La vitamina C se puede reconocer mediante azul de metileno. Este
colorante cuando est oxidado es de color azul y se reduce fcilmente
formando un compuesto incoloro. Por otra parte, la cromatografa y la
titulacin volumtrica de xido-reduccin son mtodos utilizados para
cuantificar el contenido de vitamina C de un alimento. La cromatografa
lquida de alta presin (HPLC) es el mtodo ms utilizado por ofrecer una
gran precisin de los resultados. Sin embargo la tcnica de HPLC resulta
cara, por ello en esta prctica determinaremos el contenido de vitamina C
presente en la fruta, en bebidas preparadas o en complejos vitamnicos
mediante una titulacin volumtrica de xido reduccin.
Nota: las dosis recomendadas por la Organizacin Mundial de la Salud (OMS)
para la vitamina C se sitan en 90 mg diarios para hombres y 75 mg para
mujeres.

Volumetras redox
La titulacin volumtrica es un mtodo de anlisis cuantitativo en el que se
mide el volumen de una disolucin de concentracin conocida (disolucin
patrn o titulante patrn) necesario para reaccionar completamente con un
compuesto en disolucin de concentracin desconocida. Para determinar
cundo se ha llegado al final de la titulacin, en la disolucin problema se
agrega un indicador que sufre un cambio fsico apreciable, como por
ejemplo cambio de color, en el punto final de la reaccin
En esta prctica determinaremos el contenido de vitamina C mediante una
volumetra de xido-reduccin, la vitamina C tiene carcter reductor y
utilizaremos una disolucin de yodo como agente oxidante que constituye el
titulante patrn.
Para que una sustancia se oxide es necesario que otra se reduzca y al
revs (Reaccin de oxidacin-reduccin; REDOX). Por lo tanto cuando al
cido ascrbico reducido le aadimos yodo, este se reducir a yoduro a
consta de que el cido ascrbico se oxide.

Las titulaciones en las que interviene el yodo como agente oxidante se

denominan yodimetras. Dado que la reaccin entre el yodo y el cido
ascrbico presenta una estequiometra 1:1, en el punto final de la titulacin
el nmero de moles de yodo reducido es equivalente a los moles de cido
ascrbico oxidado. Es importante sealar que con este mtodo se determina
la capacidad reductora total de la disolucin, por ello, si la disolucin a
titular contiene otras sustancias reductoras adems del cido ascrbico el
volumen de la disolucin oxidante (yodo) consumida puede estar
aumentada, y por tanto, el contenido de cido ascrbico sobrestimado.
Adems hay que tener en cuenta que la vitamina C es oxidada fcilmente
por el aire, por tanto, las disoluciones que contienen vitamina C deben ser
preparadas inmediatamente antes de ser tituladas, con el fin de obtener
resultados fiables.

El almidn se utiliza como indicador para el yodo, debido a que forma un

complejo de color azul intenso con el mismo. Cuando aadimos yodo sobre
vitamina C reducida desaparecer pues pasar a yoduro (la vitamina C se
oxidar en el proceso). Cuando ya no quede vitamina C reducida el yodo no
desaparecer, se unir al almidn y aparecer el color azul indicando el fin
de la titulacin. El almidn se hidroliza con facilidad y uno de los productos
de la hidrlisis es la glucosa, la cual tiene carcter reductor, por tanto, una
disolucin de almidn parcialmente hidrolizada puede ser una fuente de
error en una titulacin redox.
NOTA: El color amarillo del zumo de naranja puede enmascarar en parte el
color azul por lo que hay que tener cuidado para observar el cambio de
color.
BIBLIOGRAFA
Ciancaglini P et al. Using a classical method of vitamin C quantification as a
tool for discussion of its role in the body. Biochem. Mol. Biol. Edu. 29: 110114, 2001.
Harris DC. Anlisis qumico cuantitativo. Editorial Revert, 2001.

3.

Materiales y reactivos y mtodos

Bureta de 50 ml
Erlenmeyer de 100 ml
Embudo
Pipeta automtica P-1000 y puntas azules
Probeta de 50 ml
Bao Mara
REACTIVOS
Disolucin de yodo 24,1 mM
Disolucin de almidn 1% (w/v) (recin preparada)
Disolver 1 g de almidn soluble en 100 ml de agua hirviendo. Homogeneizar
la suspensin. Una vez fra, filtrarla utilizando algodn.
HCl 15%
Naranja o limn y zumos comerciales
Preparado de vitamina C (comprimidos o sobres de vitamina C; 500mg/L
agua destilada)

Experiencia N 1
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Preparacin del zumo de fruta
Exprimir una naranja o limn.
Filtrarlo a travs de una gasa.
Puede utilizarse tambin zumos de fruta de venta en establecimientos
comerciales.
Para determinar el cido ascrbico de los comprimidos de vitamina C,
disolver una tableta que contenga 500 mg de cido ascrbico en un
litro de agua destilada.
Titulacin del cido ascrbico

Si se hace con zumos naturales

Poner en un Erlenmeyer de 100 ml:
10 ml de zumo
15 ml de agua destilada
0,25 ml de HCl (15% v/v)
0,25 ml de almidn (1% w/v) que acta como indicador.
Llenar la bureta con 15 ml de la disolucin de yodo.
Titular lentamente y agitando la disolucin de zumo contenida en el
Erlenmeyer, hasta que vire al azul.
Para titular el cido ascrbico de los zumos comerciales y en preparados de
vitamina C
Poner en un Erlenmeyer de 100 ml:
25 ml de la disolucin de cido ascrbico o de zumo
0,25 ml de HCl (15% v/v)
0,25 ml de almidn (1% w/v) que acta como indicador
Proceder de la misma manera que se hizo con el zumo natural.
Limpieza de la bureta
Una vez terminada la parte experimental:
Recuperar la disolucin de yodo sobrante.
Pasar agua a travs de la bureta hasta que desaparezcan todos los restos de
yodo.
Desmontar la llave de la bureta y limpiarla con papel.
Poner de nuevo la llave envuelta en papel.
3.- TRATAMIENTO Y DISCUSIN DE RESULTADOS
Calcular la cantidad de vitamina C en la muestra (zumo por ejemplo) en g/L
utilizando la siguiente frmula:

g
Volumen yodo consumido
=0,424
L
volumen de la muestra
Donde:
El volumen de yodo consumido es es el volumen aadido al erlenmeyer
desde la bureta al titular el preparado de vitamina C.
El volumen de la muestra es el volumen de zumo que hemos puesto en el
erlenmeyer con una concentracin de vitamina C desconocida.

Produccin biotecnolgica, recuperacin y purificacin

http://lanutrapedia.jimdo.com/la-nutrapedia-1-1/vitamina-c/producci%C3%B3n-biotecnol%C3%B3gica/

La produccin de vitamina C presenta dos requerimientos esenciales: que la sntesis sea quiral
debido a que slo el L-enantimero es activo biolgicamente, y que la etapa final del proceso sea
no oxidativa. (Mateos, [s.a.]).
El proceso de sntesis de Reichstein-Grssner (1934) a partir de hidratos de carbono es el mtodo
utilizado tradicionalmente, adaptado con pequeas modificaciones. Consta de varias etapas
qumicas y una conversin enzimtica.
La etapa de oxidacin desde D-sorbitol a L-sorbosa se lleva a cabo mediante Acetobacter
suboxydansen un proceso a 30-35C, con agitacin y aireacin vigorosas mediante una
concentracin inicial del 20% en una solucin nutritiva con 0,5% de extracto de levadura o lquido
de maceracin de maz y CaCO3.
El proceso de conversin tarda aproximadamente 24 horas aunque concentraciones ms altas de
sorbitol prolongan el tiempo de conversin. Se produce aproximadamente 1 kg de cido Lascrbico a partir de 2 kg de glucosa.
Se parte de la D-Glucosa cuya hidrogenacin en presencia de NIRaney conduce a la formacin de
D -Sorbitol. La oxidacin selectiva de uno de los hidroxilos del D-Sorbitol se consigue por va
enzimtica con el Acetobacter Suboxidans que proporciona L-sorbosa.

Recuperacin y Purificacin.
El producto se cristaliza y se condensa con un tratamiento de acetona. Posteriormente se oxida
a cido 2-ceto-L-gulnico (2-KLGA) como intermedio clave que finalmente es convertido a L-AA por
catlisis qumica convencional, ya sea por esterificacin o lactonizacin, preferentemente con cido
clorhdrico como catalizador.

Nuevos mtodos han sido propuestos a partir de la oxidacin de la glucosa a cido 2,5 diceto-Dglucnico (2,5-DKG), por una especie del gnero Erwinia, y una segunda etapa para la reduccin
a cido 2-ceto-L-gulnico (2-KLG) por una Corynebacterium. Finalmente, este ltimo producto es
transformado qumicamente a cido L-ascrbico con un 86% de eficacia en base a la glucosa
inicial. (Bremus, 2006).

Figura 1.5 Proceso Reichtein-Grssner para la obtencin de vitamina C

CONTENIDO DE VITAMINA C EN ALIMENTOS