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LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA -

LABORATORIO N 09:

CULTIVO DE MUESTRAS CLNICAS

Alumna:
Gonzales Snchez Doris
Seccin:
Jueves de 2:45 4:15 pm.
Docente:
Max Siaden.

2015

INTRODUCCIN.

Las bacterias Gram negativos pueden presentarse como bacilos o cocos siendo los primeros los ms
abundantes tanto del hombre como de los animales. Varios de estos microorganismos pertenecen a
la flora intestinal normal y otros estn asociados a infecciones entricas y a otros procesos
infecciosos (especialmente cuando estas bacterias invaden otros rganos o sistemas)
Es posible que las infecciones procedan de un reservorio animal, de un portador sano, o de la
diseminacin endgena de la bacteria en un sujeto susceptible, pudindose ver afectados casi
cualquier rgano del cuerpo.
Esta familia, Enterobacteriaceae, incluye a varios patgenos que causan sndromes diarreicos. Un
gran nmero de ensayos han sido desarrollados de manera de identificar rpidamente al patgeno,
para que posteriormente el mdico, con base al reporte, indique el tratamiento adecuado, o para que
los epidemilogos puedan localizar la fuente de la infeccin. Dentro de los bacilos Gram negativos
las Enterobacterias son responsables del 30 al 35% de todas las septicemias, ms del 70% de todas
las infecciones del tracto urinario y muchas infecciones intestinales.
Dentro de las especies de Enterobacterias que son los agentes etiolgicos de infecciones entricas,
tenemos: Salmonella, Shigella y Escherichia coli. Estas pueden producir cuadros diarreicos e
infeccin sistmica que son procesos infecciosos que se diseminan generalmente por va sangunea
o linftica.

OBJETIVOS

Conocer los procedimientos de identificacin bioqumica de las principales bacterias Gram

negativas.
Interpretar los resultados de las pruebas bioqumicas y correlacionarlas con las diferentes
especies de bacterias Gram negativas.

MATERIALES.

Placas con EMB sembradas con cepas problema

Placas con medio de MacConkey, EMB y SS
Tubos con medio TSI, Citrato, LIA, UREA, MIO
(sin sembrar y sembrado con cepa problema)
Asas bacteriolgicas
Reactivo de Kovacs
Laminas
fijadas
con
frotis
de
Lquido
cefalorraqudeo con coloracin Gram.
Microscopio
Aceite de inmersin.
Placas de cultivo con agar chocolate.

PROCEDIMIENTO.

En este laboratorio no se realiz nada experimental, solo se hizo la interpretacin

bioqumica de los tubos de ensayo, utilizando las siguientes siglas.
TSI
Fermentacin de glucosa: en la picadura (fondo del tubo) el medio vira a amarillo. Es una
reaccin dbil.
Fermentacin de sacarosa: en todo el tubo el medio cambia a amarillo, principalmente en el
fondo, donde intensifica el calor debido a la reaccin de la glucosa.
Fermentacin de lactosa: en la superficie el medio vira a amarillo.
Debido a la fermentacin puede haber produccin de gas, lo que se manifiesta por la presencia
de burbujas en el medio.
Produccin de cido sulfhdrico (H2S): por degradacin enzimtica de aminocidos que contienen
azufre, originan un precipitado de color negro. La produccin de SH2 tiene lugar en ambiente
cido, de ah que el precipitado negro se concentre en el fondo del tubo, donde se generan
cidos a partir de la glucosa. As, un fondo negro indica que existe acidez en el fondo del tubo,
aunque el color amarillo se haya enmascarado con el precipitado negro.
LIA
Descarboxilacin de la lisina: el medio se alcaliniza y se observa lila o ligeramente morado en la
superficie.
Fermentacin de la glucosa: en el fondo del tubo el medio vira a amarillo.
Desaminacin de la lisina: vira a color rojizo en la superficie del medio. Es caracterstico en
Proteus y Providencia.
Produccin de H2S: precipitado de color negro (por el mecanismo citado anteriormente).

CITRATO DE SIMMONS
Utilizacin del citrato como fuente de carbono: el medio vira a color azul.
UREA
Los microorganismos que hidrolizan la urea hacen que el medio de cultivo tome color fucsia,
debido a la alcalinizacin del mismo por produccin de amonio a partir de la urea, que se pone de
manifiesto por un viraje del indicador de pH (rojo de fenol)..

MIO
Motilidad: La baja concentracin de agar de este medio permite que las bacterias se desplacen si
son mviles. Por ello, observando si el crecimiento est slo en la picadura o se extiende a los
lados de ella, se puede determinar si el microorganismo es inmvil o mvil.
Indol: La aparicin, transcurridos unos segundos, de un anillo de color rojo en la interface entre el
reactivo y el cultivo indica la presencia de Indol y, por tanto, la prueba se considera positiva. El
indol es capaz de reaccionar con el grupo aldehdo del reactivo originando un complejo de color
rojo.
Produccin de H2S: precipitado de color negro (por el mecanismo citado anteriormente).

1. TSI

1. (K/A) +H2S

2. K/K

3. K/K

4.K/A

2. Lectura de produccin de INDOL.

+
3. CITRATO DE SIMONS.

5. A/A + GAS

POSITIVO

4. MIO
Medio semisolido contiene: ornitina,
triptfano, y glucosa.

DISCUSION.
Se observa la motilidad en el primer
tubo, tiene la apariencia de un torbellino,
en el cual se observa la movilidad de las
bacterias

+
5. LIA.

1. K/A
2. CONTROL
3. LCD, NO
H2S,
productora de
Gas.
4. K/K

6. LACTOSA (+) Y (-)

DISCUSION.
Se observa que no hay
fermentacin de lactosa

DISCUSION.
Se observa que hay
fermentacin de lactosa

CONCLUSIONES.
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En esta prctica se logr hacer la identificacin bioqumica de las bacterias gran negativas,
cmo reaccionan en diferentes medios semislidos y slidos, y las coloraciones que estas

producen.
Se interpret los resultados de las pruebas bioqumicas y correlacionarlas con las diferentes
especies de bacterias gran negativas.

REFERENCIAS
BIBLIOGRFICAS
Linkografia.

http://facultad.bayamon.inter.edu/iferrer/Clase%205%202012.pdf

http://www.scielo.org.ar/scielo.php?pid=S0325-29572008000100002&script=sci_arttext

Bibliografia.
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Koneman, Diagnostico bacteriolgico, texto y atlas a color, 6ed, Panamericana, Argentina,

2006.

MacFadin, Pruebas bioqumicas para la identificacin de bacterias de importancia

clnica, 3ed, Panarmericana, Argentina, 2003.

Bailey y Scott, Diagnostico bacteriolgico, 12ed Panamericana, Argentina, 2007

Microbiologa Mdica de Jawetz, Melnick y Adelberg / Geo F. Brooks, Stephen A. Morse,

Janet S. Butel. 17a edicin.Informacin de publicacion: Mxico: El manual moderno, 2002-

Microbiologia medica: Murray, Patrick R.4 edicion. publicacion : madrid: el sevier Science
2002.