Tesis 129

PRODUCCION Y EVALUACION DE UN INOCULANTE MICROBIANO CON
CAPACIDAD AMILOLITICA A PARTIR DE UN PROCESO DE

COMPOSTAJE DE RESIDUOS DE LECHUGA
Laura Carolina Barrera Beltrn

Natalia Charry Uribe
TRABAJO DE GRADO
Presentado como requisito parcial
Para optar al ttulo de
MICROBIOLOGO INDUSTRIAL
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA

FACULTAD DE CIENCIAS
CARRERA DE MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL
Bogot, D.C.
Febrero de 2008
NOTA DE ADVERTENCIA
Artculo 23 de la resolucin No. 13 de julio de 1946
La Universidad no se hace responsable por los conceptos emitidos por sus alumnos en
sus trabajos de tesis. Solo velar porque no se publique nada contrario al dogma y la
moral catlica y porque la tesis no contenga ataques personales contra persona alguna,
antes bien se vea en ellas el anhelo por buscar verdad y justicia.


APROBADO
_______________________________
Mara Mercedes Martnez
Microbiloga M. Sc
Directora
____________________________
Jaime Augusto Casas
Qumico
Codirector
_______________________________
Edna Viviana Gutirrez
Microbiloga Industrial
Asesora
_______________________________
Ivonne Gutirrez
Jurado
_____________________________
Jacinto Rodrguez
Jurado


APROBADO
______________________________
Dra. ngela Umaa Muoz
Decana Acadmica
Facultad de Ciencias
_____________________________
Dra. Janeth Arias
Bacteriloga M. Sc
Directora de Carrera
DEDICATORIA
Agradezco a Dios por permitirme llegar a este punto de mi vida,

especialmente a mis padres por su esfuerzo para educarme, por su
apoyo incondicional e incluso por su participacin en este trabajo,
a mi hermano por su apoyo incondicional y por creer en mi.
A mi familia y amigos por su confianza y apoyo, pero sobre todo
por estar ah siempre en los momentos difciles.
Laura Barrera
TABLA DE CONTENIDO
Nmero
Ttulo
Pgina
Lista de tablas
ndice de figuras
Lista de anexos
Resumen
1
Introduccin
Marco terico
2.1
Lechuga (Lactuca sativa)
2.1.2 Ciclo de cultivo
2.1.3 Requerimientos Fisicoqumicos
2.1.4 Variedades
2.1.5 Aportes Nutricionales
2.2
Compost
2.2.1 Factores determinantes del compostaje
2.2.2 Caractersticas fisicoqumicas
12
2.2.3 Calidad del compost
13
2.3.1 Materia orgnica
14
2.3.2 Enzimas en procesos de compost
16
Justificacin
18
Objetivos
19
4.1
Objetivo General
19
4.2
Objetivos especficos
19
Metodologa
20
5.1
Recoleccin de las muestras
20
5.1.1 Sitio de muestreo
20
5.1.2 Recoleccin de muestras
20
5.2
20
Procesamiento de muestras
5.2.1 Fase I: Caracterizacin del proceso de compostaje
20
5.2.1.1 Temperatura y pH
21
5.2.1.2 Actividad enzimtica del compost
21
5.2.1.3 Evaluacin de dos mtodos para extraccin de amilasas
21
5.2.1.4 Cuantificacin de azcares reductores mediante la tcnica de

i
Somogyi- Nelson
22
5.2.1.5 Cuantificacin de la biomasa microbiana presente en el compost 23

5.2.1.6 Determinacin de materia orgnica
23
5.2.2 Produccin del inoculante mixto
24
5.2.2.1 Aislamiento primario de cepas amilolticas
24
5.2.2.2 Aislamiento secundario y seleccin
25
5.2.3 Conservacin de cepas
25
5.2.4 Seleccin de cepas por antagonismo
26
5.2.5 Curvas de crecimiento
27
5.2.5.1 Elaboracin de pre- inculo
27
5.2.5.2 Fermentacin discontinua
28
5.2.6 Curva de crecimiento del inoculante mixto
28
5.2.7 Produccin del inoculante mixto
29
5.3
29
Evaluacin del inoculante mixto en campo
5.3.1 Variables evaluadas
29
5.3.1.1 Determinacin de materia orgnica
30
5.3.1.2 Caracterizacin microbiolgica del compost
31
5.4
Anlisis de la informacin
31
Resultados y discusin
34
6.1
Caracterizacin del proceso de compostaje
34
6.1.1 Temperatura y pH
34
6.1.2 Seguimiento de la actividad amiloltica y biomasa de

Microorganismos amilolticos en la pila 2
36
6.1.3 Cuantificacin de MOT y COT
39
6.2
40
Fase I: Produccin del inoculante mixto
6.2.1 Aislamiento de microorganismos amilolticos termfilos
40
6.2.2 Seleccin de las cepas por antagonismo
44
6.2.3 Curvas de crecimiento
44
6.2.4 Curva de crecimiento del inoculante mixto
47
6.2.5 Fase II: Evaluacin del inoculante mixto en campo
48
6.2.5.1 Comparacin entre los dos mtodos de extraccin de amilasas
49
6.2.5.2 Cuantificacin de la actividad amiloltica de las pilas tratamiento y

Control
52
6.2.5.3 Cuantificacin de la biomasa amiloltica en las pilas tratamiento y

ii
Control
54
6.2.5.4 Cuantificacin de los porcentajes de MOT y COT
55
6.2.5.5 Anlisis de la temperatura y el pH
58
6.2.5.6 Caractersticas Fisicoqumicas obtenidas en los tratamientos
60
6.2.5.7 Calidad microbiolgica del compost obtenido
62
Conclusiones
65
Recomendaciones
66
Bibliografa
67
iii
NDICE DE TABLAS
Nmero
Ttulo
Pgina
Composicin nutritiva de la lechuga
(100 g porcin comestible)

2
Composicin qumica de la cascarilla de arroz
Parmetros a caracterizar en el abono segn NTC 5167/04
12
Parmetros que permiten determinar la calidad del compost
13
Caractersticas morfolgicas de las cepas con actividad amiloltica

obtenidas durante el asilamiento primario
Determinacin semicuantitativa de la actividad amiloltica de

las cepas aisladas y purificadas.
44
Resultados %MOT al cabo del segundo da de compostaje

por va hmeda y seca.
10
43
Resultados de las pruebas de antagonismo realizadas

con las 5 cepas aisladas
41
56
Caractersticas fisicoqumicas del compost obtenido durante

la fase II
62
Caracterizacin microbiolgica del compost
63
iv
NDICE DE FIGURAS
Nmero
Ttulo
Pgina
Comportamiento de la temperatura en las Pilas de

compostaje 1 y 2
35
Comportamiento del pH de las Pilas de compost 1 y 2
35
Actividad amiloltica y biomasa amiloltica de la pila de

compost 2
37
Determinacin de la materia orgnica presente en la Pila de

Compost 2
39
Microscopa de la cepa AA5
42
Microorganismos amilolticos aislados de muestras de

Compost
43
Cuantificacin individual de la actividad amiloltica de los

microorganismos aislados
45
Curva de Crecimiento de los microorganismos aislados, en medio

Almidn 1% (p/v)
46
Cuantificacin de la Actividad Amiloltica y la biomasa del

Inoculante mixto
10
47
Cuantificacin de la Actividad Amiloltica presente en la

Pila con Inoculante luego de utilizar dos mtodos de extraccin
de amilasas
11
49
Comparacin de los mtodos de extraccin enzimtica para

cada uno de los tratamientos
12
50
Cuantificacin de la Actividad Amiloltica presente en la Pila

Control luego de emplear dos mtodos de extraccin de
amilasas
13
51
Comparacin estadstica de las actividades amilolticas entre pilas

tratamiento y control
14
53
Recuento de biomasa amiloltica en las Pilas Control y con

Inoculante
15
54
Comportamiento la materia orgnica (% m/m) en las pilas

v
tratamiento y control
16
56
Carbono Orgnico Total presente en las pilas tratamiento

y control
17
18
58
Temperaturas alcanzadas por las pilas tratamiento y control

durante la Fase
59
Comportamiento del pH en las pilas Control y con Inoculante
60
vi
ANEXOS
Nmero
Ttulo
Pgina
Composicin de buffers Sorensen y Citrato- Fosfato
79
Composicin de agar almidn 1%, sal ferrosa y agua- melaza
80
Curva de calibracin para Somogyi- Nelson
81
Actividad enzimtica
82
Correlacin entre la biomasa y UA
84
Comparacin de MOT entre tratamientos
85
Comparacin del pH y la temperatura en los tratamientos

evaluados
88
vii
RESUMEN
La Lactuca sativa o lechuga es una hortaliza que se siembra en regiones templadas,

ocupa poco espacio y posee un ciclo de crecimiento muy corto. Acorde con el ltimo
estudio realizado por el DANE en el ao 2003 se produjeron 9968,4 toneladas de
lechuga en Cundinamarca, des las cuales 647,9 toneladas fueron consideradas como
material residual.
Por medio del compostaje se busca disminuir el impacto ambiental que tienen los
residuos agrcolas, dentro de los desechos provenientes del cultivo de lechuga. El objeto
del estudio fue producir y evaluar u inoculante microbiano con capacidad amiloltica a
partir de un procesos de compostaje de residuos de lechuga.
Se llev a cabo el aislamiento de cinco cepas amilolticas termoflicas (AA1, AA2,

AA3, AA4 y AA5) que fueron aisladas a partir de las materias primas y que
evidenciaron una alta actividad amiloltica (entre 25000 y 41509 UA). Con dichas cepas
se produjo un inoculante mixto, que fue aplicado a la pila tratamiento.
Se evalu el proceso de degradacin de la materia orgnica presente en las pilas de

compost tratamiento y control, a partir de parmetros como temperatura, pH, actividad
amiloltica, recuento en placa de biomasa amiloltica termoflica, cuantificacin de
materia orgnica y caractersticas fisicoqumicas.
Para determinar la actividad amiloltica presente en las pilas, se evaluaron dos mtodos
de extraccin de amilasas, observndose que el mtodo que logr extraer mayor
cantidad de dichas enzimas fue el que emplea buffer citrato con valor de p< 0.001.
Al comparar el proceso de degradacin de los dos tratamientos, se encontr que no hubo
diferencias estadsticamente significativas al final del proceso, con valores de p > 0.79
para el contenido de materia orgnica, de p > 0.254 para la actividad amiloltica, de p>
0.92 para pH y p> 0.79 para temperatura.
Al final de los procesos tratamiento y control, se obtuvo un compost con presencia de

Salmonella (< 0.59 NMP/ 4g para el control y 1,01 NMP/ 4g para el tratamiento) y
Escherichia coli (>2400 NMP/g para el control y 480 NMP/ g para el tratamiento); y
con caractersticas fisicoqumicas aceptadas por la NTC 5167 de 2004, como C/N 12 y
11 para control y tratamiento respectivamente y nitrgeno, fosforo y potasio > 1% en
los dos casos.
1. INTRODUCCIN
La lechuga Lactuca sativa es una hortaliza que se puede sembrar en las regiones templadas,
ocupa poco espacio y el ciclo de crecimiento es muy corto. Aporta a la dieta minerales como el
calcio, hierro, potasio, magnesio, sodio, azufre, aluminio, cobre, cobalto, silicio, selenio, circonio
y estroncio, vitaminas A, C, E, B1, B2 y B3, betacaroteno, fibra, aminocidos como alanina,
cistina, histidina, glicina, isoleucina, leucina, lisina, serina, tirosina y valina, lactucina, pectinasas
y cidos como el ascrbico, ctrico, asprtico, glutmico, linolico, oleico, mlico, oxlico,
palmtico, esterico y alfa- linolico. Su alto porcentaje de humedad (95%) la hace un alimento
fcil de digerir.
Segn el ltimo estudio realizado por el DANE en el ao 2003, en Colombia se produjeron
14.261 toneladas de lechuga al ao, de las cuales el 69,9% fueron cultivadas en Cundinamarca
(9968,4 toneladas); de este 69,9% se distribuyeron 9320,4 toneladas, originando una prdida de
647,9 toneladas (DANE, 2003; Velsquez et al., 2003).
Los residuos agrcolas provenientes de cultivos de lechuga, son generalmente considerados
basura, la cual puede ser quemada, llevada a los rellenos sanitarios de las ciudades o apilada. Sin
embargo por sus caractersticas nutricionales podra ser empleada para la produccin de abono
por medio del proceso conocido como compostaje, el cual se basa en el tratamiento de los
residuos orgnicos, a travs de un proceso de transformacin que permite convertirla en un
producto de caractersticas fsicas y qumicas estables y limpio desde el punto de vista higinico
y sanitario.
La importancia agrcola del compost no radica en su contenido de nutrientes (0.65% de
nitrgeno, 0.3% de P2O5 y 0.25% de K2O sobre materia hmeda), sino en su alto contenido en
materia orgnica activa, que oscila alrededor del 28%, y sus sustancias hmicas, as como su
importante aporte de oligoelementos, tales como el cobalto, cobre, magnesio, zinc, boro,
molibdeno, cuya influencia en el desarrollo de los cultivos se pone cada vez ms de manifiesto,
ya que son componentes indispensables de la mayora de las enzimas (Lpez, 2002).
1
Este producto mejora las condiciones fisicoqumicas del suelo y tambin aporta poblaciones
microbianas que por medio de sus sistemas enzimticos, degradan materia orgnica y la
mineralizan de manera que se generan productos inorgnicos solubles, los cuales tambin son
aprovechados por las plantas, mejorando la calidad de los cultivos. Al agregar compost al suelo,
se estimulan considerablemente las poblaciones microbianas, especialmente bacterias y hongos,
lo cual es muy importante ya que se acelera el proceso (Lee et al., 2003; Saebo y Ferrini., 2006;
Granados et al., 2003; Pez et al., 2000).
Para poder determinar la eficiencia de la degradacin de la materia orgnica por parte de los
microorganismos, se toman como referencia las enzimas extracelulares producidas durante el
proceso de degradacin de materia orgnica como amilasas, celulasas, proteasas, lipasas, entre
otras; igualmente, concentracin de materia orgnica y carbono orgnico oxidable. Por esta
razn, hacer un seguimiento de la actividad enzimtica en el compost y del proceso de
humificacin resultan tiles indicadores para evaluar algunos parmetros de la calidad del
proceso de degradacin.
2. MARCO TEORICO
2.1. Lechuga (Lactuca sativa)

La lechuga pertenece a la familia de las compuestas, originaria de la cuenca del Mar
Mediterrneo. Algunos reportes histricos indican que esta hortaliza era utilizada por los
egipcios 3000 aos A.C., para extraer aceites de la semilla y tambin como alimento diario.
Es una planta herbcea anual, tolerante a las heladas (excepto cuando est prxima a la cosecha),
que prefiere las temperaturas frescas (15 20 C), prcticamente sin tallo, de consistencia
carnosa, que segn las variedades va a formar, o no, una cabeza de repollo en la parte central, de
colores de hoja variable (verde en distintas tonalidades, rojos, morados), tambin de aspecto de
hoja variable (lisa, mantecosa, rizada, crespa). Las races son densas y superficiales, alcanzando
una profundidad mxima de 60 cm, teniendo capacidad de regeneracin de nuevas races,
aspecto importante pues hace posible el transplante (<Romeo, 2005 online >).
2.1.2. Ciclo de cultivo

En el ciclo de crecimiento se distinguen 3 fases, plntula, roseta y formacin de la cabeza.
Plntula: desde la emergencia de la semilla hasta que la planta tiene 4 hojas. Esta fase
dura entre 30 y 40 das.
Roseta: desde que tiene 4 hojas hasta que tiene 12 hojas. Esta fase dura 20 das.
Formacin de la cabeza: despus de 12 hojas hasta cabeza bien formada. Esta fase dura
20 das.
La siembra se hace en semillero o por siembra directa. En el primer caso, se hace luego de 20
das de la germinacin, cuando la planta cuenta con 8 cm de altura. La distancia de plantacin
oscila entre 20 y 30 cm entre las filas, y otro tanto entre las plantas de la misma fila, dependiendo
del tamao propio de la variedad (Block, 1998).
Antes de realizar la siembra, se adeca el terreno removiendo parcial o totalmente el material

residual proveniente de la cosecha anterior. En el invernadero, se remueve totalmente la materia
orgnica (incluyendo races), mientras que en el terreno no cubierto slo se remueven las hojas
residuales de lechuga. Luego de limpiar las camas, se aplica una capa de abono orgnico
proveniente de un proceso de compostaje de flores, adems de una delgada capa de cascarilla de
arroz.
Debido a que la lechuga requiere una gran cantidad de agua, los cultivos deben regarse una vez
al da, sin embargo, en poca de sequa o cuando la temperatura asciende demasiado, se hace
necesario hacer el riego dos veces (Block, 1998). En el caso de las lechugas conservadas en
invernadero, se cuenta tambin con riego por goteo, a travs del cual se suministra agua varias
veces al da.
2.1. 3. Requerimientos fisicoqumicos

El agua es uno de los factores de crecimiento ms importante de la lechuga ya que constituye el
95% de su peso, para un crecimiento continuo se debe proporcionar un contenido uniforme y alto
de humedad en el suelo durante todo el ciclo. Cuando se alcancen temperaturas altas, la
frecuencia de riego debe ser mayor (diaria) que el resto del ao (una vez a la semana). La
deficiencia de humedad en el suelo, genera una detencin en el crecimiento de la planta,
aumentando el contenido de fibras de las hojas, producindose plantas duras y de colores verde
oscuro (Romeo, 2005 <online >).
La produccin de lechuga puede realizarse sobre una gran variedad de suelos, siendo preferidos
aquellos frtiles y ricos en nitrgeno, ligeros, con buen drenaje (que no presente
encharcamientos), con pH ideal entre 6.5 y 7.5 (Romeo, 2005 <online >).
2.1. 4. Variedades
Las variedades de la lechuga se pueden clasificar en diferentes grupos botnicos (Block, 1998).
Romanas: No forman un verdadero cogollo, las hojas son alargadas, con bordes enteros
y nervio central ancho.
1. Romana: incluye la verde lisa, verde crespa, morada crespa y morada lisa; estas
variedades se siembran en el cultivo del cual se obtendrn los residuos para
realizar el compostaje. Tambin se emplearn residuos de rgula, romanesco,
colchina o col de bruselas, aunque en menores proporciones, debido a que la
cantidad producida de estos otros no es tan alta como la de lechuga.
2. Baby: en su inicio el tallo tiene forma de disco del que surgen las hojas formando
rosetas que posteriormente se acogollan. Esta variedad en especial forma cogollos
muy compactos. Su temperatura ptima de cultivo est entre los 15 y 25 C. Su
ciclo de desarrollo dura 45 das; su estado ptimo de recoleccin es cuando el
cogollo est bien formado y compacto, si no se realiza el corte a tiempo tiende a
espigarse (Romeo, 2005 <online >).
Acogolladas: Estas lechugas forman un cogollo apretado de hojas

1. Batavia
2. Mantecosa o Trocadero
3. Iceberg
(Romeo, 2005 <online >).
2.1. 5. Aportes nutricionales

La lechuga es un alimento que aporta muy pocas caloras, alto porcentaje de agua (90-95%),
folatos, vitaminas (cantidades apreciables de vitamina C), provitamina A o beta-caroteno (estas
dos ltimas con accin antioxidante, relacionadas con la prevencin de enfermedades
cardiovasculares e incluso ciertos tipos de cncer), minerales (potasio, magnesio) y fibra
(necesaria para el buen funcionamiento intestinal) (tabla 1). Las hojas externas de color ms
oscuro son ms nutritivas que las blanquecinas del interior. La lechuga romana cultivada al aire
libre es la ms rica en vitaminas (Woldford, 2003).
5
Tabla 1. Composicin nutritiva de la lechuga (100g porcin comestible).

Kcal
14
H2O
Carbohidratos Fibra
Potasio
Magnesio Carotenos Vit C Folatos
(g)
(g)
(mg)
(mg)
(mg)
(mg)
(mg)
1.4
1.5
240
12
59.17
12
34
Fuente: Block, 1998.

Su riqueza en minerales, especialmente potasio, que es necesario para mantener un nivel
adecuado de lquidos en el cuerpo, junto con el calcio y el fsforo la hace especialmente
adecuada para el correcto bienestar de los huesos. Presenta adems una serie de oligoelementos
como el selenio, un antioxidante que tiene un papel fundamental en la prevencin de cierto tipo
de cnceres, como el de colon, prstata o pulmones (Woldford, 2003).
Contiene muchos aminocidos necesarios para la formacin de las protenas, algunas, como la
alanina, a veces necesarias para la construccin del tejido muscular y nervioso, otras, como la
glicina, para el correcto funcionamiento del sistema inmunolgico. Posee vitaminas C y E, pero
sobre todo, es rica en betacaroteno, que el hgado trasforma en vitamina A (Drotleff, 2006)
2.2. Compost
El compostaje es un mtodo utilizado para transformar los desechos biodegradables, incluyendo
plsticos biodegradables, residuos slidos urbanos, alimentos para animales y residuos agrcolas
e industriales, en productos tiles para mejorar el suelo. El compostaje acelera la degradacin de
materia orgnica heterognea por la accin de diferentes poblaciones microbianas que trabajan
en conjunto y que se encuentran bajo condiciones controladas (Gangjyal et al., 2007).
Dentro del proceso de compostaje, los microorganismos primarios que intervienen son bacterias,
hongos y actinomycetes produciendo enzimas extracelulares, como amilasas, lipasas y proteasas
que en pequeas cantidades promueven actividad qumica catalizando la descomposicin de
materia orgnica. No obstante, existen ciertos factores que pueden afectar el proceso de
compostaje como los factores ambientales, los microorganismos involucrados, el tipo de residuos
y su manejo (Dvila et al., 2002).
6
La materia orgnica junto con el abono mineral son necesarios, adems de complementarlo. Por
ello, se recomienda la mezcla del compost con el abono qumico. El abono proporciona al suelo
del cultivo la fertilidad qumica y el compost la estructura fsica y biolgica, necesaria para que
se consigan las condiciones idneas para el crecimiento de las plantas (Lpez, 2002).
Los factores ms importantes que afectan el xito de la aplicacin del compost para los
propsitos de la agricultura son el grado de estabilidad y la madurez. La aplicacin de un
compost inestable o inmaduro puede inhibir la germinacin de las semillas, reducir el
crecimiento de la planta, causar daos en los cultivos como fitotoxicidad en las plantas, o una
competencia por el oxgeno (Wu et al., 2000).
La biodegradacin de materia orgnica es el principal proceso que envuelve la bioestabilizacin
de los residuos orgnicos, y es usualmente expresada en funcin de la biodisponibilidad de
materia orgnica; se define en trminos de tasa o grado de descomposicin de materia orgnica,
estando fuertemente relacionada con la tasa de actividad microbiana en el proceso de compostaje
(Said-Pullicino et al., 2007). Autores como Iannotti et al., (1994) y Lasardi et al., (1998) han
reportado que existe una fuerte relacin entre la estabilidad del compost y la concentracin de
carbono orgnico disuelto. Durante el compostaje, procesos tales como la solubilizacin llevada
a cabo por la degradacin microbiana de la materia orgnica, sntesis bioqumica de compuestos
de bajo peso molecular son los responsables de los cambios en la concentracin y composicin
qumica de la materia orgnica disuelta (Said-Pullicino et al., 2007).
2.2.1 Factores determinantes del compostaje

Los factores que influyen en un proceso de compostaje son muchos y de gran importancia ya que
si no se manejan adecuadamente, se genera un desequilibrio que puede afectar drsticamente el
proceso, lo que tiene graves consecuencias en la obtencin del producto deseado. Dichos factores
incluyen temperatura, pH y relacin C/N, entre otros.
Relacin Carbono Nitrgeno (C/N)
El carbono y el nitrgeno son nutrientes muy importantes para los microorganismos en el

proceso de compostaje. En primer lugar, el carbono provee energa y el nitrgeno es usado para
la reproduccin y la sntesis de protenas. En general cerca de 25 veces ms de carbono es
necesitado por un organismo comparado con la necesidad de nitrgeno por lo cual es necesario
tener una proporcin adecuada de ambos elementos (25:1 30:1) (Sherman., 1999).
Las prdidas de nitrgeno por volatilizacin durante el compostaje reducen el valor del abono
orgnico y constituye una importante perdida econmica. La disponibilidad de carbono, el
tamao de la partcula, el contenido de humedad y la aireacin son factores que afectan la
volatilizacin del nitrgeno en el compost, ya que una alteracin en estas variables puede
impedir que el nitrgeno se inmovilice en las clulas microbianas (Barrington et al., 2001).
Estudios realizados por Beuning et al., (2007) demuestran que el pH es un factor determinante en
la volatilizacin del nitrgeno en el compost, ya que afecta la denitrificacin de la cual se
obtienen gases (amonio y amoniaco) que sern liberados a la atmsfera, aunque esto tambin
est ligado a la presencia de oxgeno, ya que condiciones anaerbicas favorecen la produccin de
dichos gases. Por otra parte, segn Van Der Selt et al., (2006) la temperatura tambin interviene
en la volatilizacin del nitrgeno ya que a medida que esta aumenta, tambin aumenta la prdida
del elemento (Van Der Selt et al., 2006).
El carbono es el elemento que define a la materia orgnica ya que es su principal componente,
aunque tambin contiene nitrgeno en menor proporcin. La relacin C/N considerada como
ptima al principio del proceso es de 20 a 30; y a medida que la materia orgnica es atacada y
descompuesta por los microorganismos va descendiendo la relacin C/N hasta acercarse al valor
del humus de alrededor de 10:1 (Zhu, 2006).
Teniendo en cuenta que la lechuga y en general los residuos vegetales poseen una baja cantidad
de carbono (la lechuga tiene 44% p/p de carbono), es necesario nivelar la relacin C/N. Para ello
es posible realizar mezclas con materiales como la cascarilla de arroz, paja, aserrn, hojas secas,
entre otros (Foru, 2003) que permiten mejorar la del material a compostar.
8
La cascarilla de arroz no presenta propiedades nutritivas significativas, contiene un alto

porcentaje de dixido de silicio (SiO2) y su humedad es del 10% debido a su carcter hidrofbico
(tabla 2). (Salgado, 1999).
Tabla 2. Composicin qumica de la cascarilla de arroz

Componente
Valor (% m/m)
SiO2
42.16
K2O
0.472
MgO
0.053
CaO
0.127
Fuente: Trevio y Gmez, 2003.
Temperatura
Debido a que todas las reacciones que se llevan a cabo dentro del proceso de compostaje son
exotrmicas la temperatura es un buen indicador del proceso. La temperatura aumenta
rpidamente luego de la formacin de las pilas, disminuyendo gradualmente a la vez que el
proceso de descomposicin va terminando. El amplio rango de temperaturas que se manejan
hace que se encuentren diferentes grupos de microorganismos lo que facilita y aumenta el
proceso de descomposicin. El compostaje ha mostrado ser factible cuando la temperatura
ambiente oscila entre los 20 y 30C (Marguesin et al., 2006)
La temperatura durante el proceso de compostaje aumenta conforme los microorganismos
realizan las actividades metablicas para degradar la materia orgnica. Las altas temperaturas
son necesarias para lograr un compostaje efectivo ya que contribuyen sustancialmente a los altos
ndices de degradacin alcanzados en el proceso, pero temperaturas por debajo de los 20C, han
demostrado que causan la inhibicin del proceso. Por otra parte, cuando la temperatura excede
los 60C se reduce la actividad de las poblaciones microbianas, es por esta razn que se
recomienda que la temperatura mxima se encuentre entre los 52 y los 60C (Liang et al., 2002)
Las altas temperaturas alcanzadas durante el proceso de compostaje (especialmente durante la

fase termoflica), as como del proceso, son factores que causan la muerte de los patgenos
aerobios ms comunes como Salmonella sp. y Escherichia coli (Turner et al., 2004). Por otra
parte, estudios realizados por Boulter Bitzer et al 2005, mostraron que en las pilas de compost
que alcanzaron temperaturas mayores a los 55 C, los fitopatgenos murieron.
La fase termoflica durante la cual se alcanzan estas altas temperaturas, es fundamental para
lograr la estabilidad y madurez del compost el cual ser utilizado para aumentar la actividad
microbiana en el suelo (Boulter Bitzer et al., 2005).
Oxgeno
El compostaje aerbico es el proceso de degradacin que ocurre en presencia de oxgeno; es la

forma ms rpida para producir un compost de buena calidad. El compostaje aerbico es
ampliamente aceptado como va para lograr la estabilizacin de la materia orgnica proveniente
de los residuos agrcolas y convertirla en un producto que pueda ser usado como abono para el
suelo (Liang et al., 2002). Los mecanismos empleados para llevar a cabo la aireacin del
compost pueden ser manuales, utilizando una pala para mover toda la pila de compost, o
mecnicos, utilizando un tractor que realice la homogenizacin.
Humedad
El contenido de humedad es una variable ambiental de suma importancia en el compost, teniendo

en cuenta que es el agua la que provee el medio requerido para llevar a cabo el transporte y la
degradacin de los nutrientes por parte de los microorganismos para que puedan realizar sus
actividades metablicas y fisiolgicas (Liang et al., 2002). Cuando el porcentaje de humedad
presenta valores muy bajos puede indicar la deshidratacin del compost lo que tiene como
consecuencia la disminucin de las actividades biolgicas y la obtencin de un compost inestable
(Bertoldi et al., 1985). Por otra parte, porcentajes de humedad muy altos (mayores al 65%)
pueden generar condiciones anaerbicas lo cual disminuye la eficiencia del proceso, adems de
producir malos olores (Tiquia et al, 1996).
10
La humedad ptima del compostaje se puede situar alrededor del 30 a 55% aunque vara
dependiendo del estado fsico y tamao de las partculas, as como del sistema empleado para
realizar el compostaje. El contenido de humedad ideal para el compostaje debe considerar una
adecuada humedad para las necesidades fisiolgicas de los microorganismos y un adecuado flujo
de oxgeno para mantener las condiciones aerbicas (Avendao., 2003).
Cuando el porcentaje de humedad en el compost es muy alta, es porque no hay un equilibrio
entre los materiales hmedos (como los vegetales) y el material llenante o seco (como la paja)
(Foru, 2003). En un estudio realizado por Hanajima et al, 2005 donde la humedad del compost
hecho con gallinaza, residuos de championes, salvado de arroz y residuos de pollo crudo era del
84%, se agreg cascarilla de arroz para obtener una humedad entre el 50 y 60 %.
pH
Esta variable es de gran importancia durante el compostaje, ya que est estrechamente

relacionada con las variaciones de la temperatura en el proceso, se ha encontrado que el cambio
de condiciones mesoflicas a termoflicas durante la fase inicial del compostaje, coincide con el
cambio de pH, de cido (4.5 5.1) a alcalino (8 9), esto se debe a que cuando la temperatura se
encuentra por debajo de los 40 C ( fase mesoflica), se producen cidos orgnicos como el
lactato y acetato que inicialmente disminuyen el pH del medio. Estos cidos a su vez son
consumidos por los microorganismos durante la fase termoflica, generando un aumento en el pH
del compost. Para que el desarrollo del compost sea exitoso es necesario que el valor del pH se
encuentre entre 8 y 9 (Sundberg et al, 2004). Aunque segn la NTC 5167 de 2004 el valor del
pH para los abonos orgnicos puede estar entre 4 y 9 (ICONTEC, 2004).
Un pH bajo (4.5 5.1) durante el proceso de compostaje puede resultar en corrosin, malos
olores, baja descomposicin, mala calidad del compost y dificultad para alcanzar altas
temperaturas, apropiadas y requeridas para la sanitizacin (Sundberg y Jonsson, 2007).
11
Tamao de la partcula
La actividad microbiana est relacionada con la facilidad de acceso al sustrato. Las partculas
pequeas tienen una mayor superficie especfica, lo cual facilita el acceso al sustrato. Sin
embargo, las partculas demasiado finas crean poros pequeos restringiendo el paso del oxgeno
y por ende causando condiciones de anaerobiosis (Cooperband, 2000).
2.2.2
Caractersticas fisicoqumicas del compost
De acuerdo a la Norma Tcnica Colombiana ICONTEC 5167 de 2004, el producto obtenido a

partir del proceso del compostaje de residuos de lechuga y cascarilla de arroz ser un abono
orgnico, ya que como es definido en la norma, se trata de un producto slido obtenido a partir
de la estabilizacin de residuos de vegetales que contiene porcentajes mnimos de materia
orgnica. Los parmetros a caracterizar en el abono orgnico como producto final de acuerdo a la
legislacin colombiana se muestran en la tabla 3.
Tabla 3. Parmetros a caracterizar en el abono segn la NTC 5167 de 2004

PARMETRO A CARACTERIZAR
VALOR PERMITIDO
Contenido de cenizas
Mximo 60 %
Contenido de humedad
Mximo 35%
Contenido de carbono orgnico oxidable total
Mnimo 15%
Nitrgeno, P2O5 y K2O
Se declaran si cada uno es mayor al 1%
Relacin carbono /nitrgeno
Reportar
Capacidad de retencin de humedad
Mnimo su propio peso
Capacidad de intercambio catinico
Mnimo 30 cmol(+) Kg-1 (meq/100g)
pH
Mayor a 4 y menor a 9
Densidad
Mximo 0.6 g/cm 3
Materia prima del que procede
Lechuga y cascarilla de arroz
Fuente: INCONTEC, 2004.
12
2.2.3
Calidad del compost
La calidad del compost est relacionada con su valor agronmico y comercial como un
acondicionador orgnico del suelo (Kapanen et al., 2001). En la tabla 4 se muestran algunos de
los parmetros que permiten determinar la calidad del compost.
Tabla 4. Parmetros que permiten determinar la calidad del compost.

Parmetro
Estabilidad
Rango
Puede determinarse por la tasa de toma de oxgeno, tasa
de produccin de CO2, o por la liberacin de calor como
resultado de la actividad de los microorganismos.
Porcentaje de materia orgnica entre el 35 y 40%,
temperatura estable (10 a 20 C), color marrn oscuro
negro, olor a tierra (no desagradable), relacin C/N
menor a 20, DQO menor a 7mg/g de peso seco, cantidad
de polisacridos menor a 30 50 mg glcidos/g de peso
seco, reduccin de azcares del 35%, ausencia de
nemtodos y un incremento en la actividad de las
enzimas hidrosolubles hasta observar la estabilidad
(Bioagro, 2007 <online>).
Fitotoxicidad y compuestos inhibidores
La lechuga es empleada como indicador biolgico, de la

presencia de compuestos txicos o inhibidores del
crecimiento de las plantas.
Conductividad y contenido de nutrientes
La conductividad debe ser monitoreada. Niveles

inferiores a 3.5 mS/cm son necesarios en el compost
aplicado.
La relacin C/N debe estar entre 15 25.
pH
Debe estar entre 5.5 y 8.0, un pH mayor puede indicar un

alto contenido de calcio.
Tamao de la partcula
Depende del uso
Contenido de contaminantes
El contenido de metales pesados o contaminantes

orgnicos son regulados por normas nacionales
Fuente: Saebo et al, 2006.
13
2.2.3.1 Materia orgnica

La materia orgnica del suelo es el conjunto de residuos vegetales y animales de todas las clases,
ms o menos descompuestos y transformados por la accin de los microorganismos. (Schjonning
et al., 2007):
La evolucin de la materia orgnica en el suelo depende de factores tales como el clima
(temperatura y humedad), el tipo de suelo (textura, estructura, roca madre), la clase de residuos
ms o menos fciles de degradar y el tipo de microorganismos que intervienen en su
transformacin (Schjonning et al., 2007).
En los suelos agrcolas, la materia orgnica procede prcticamente de los residuos de las
cosechas, aportes de estircol o abonos orgnicos. La mayor parte de estos aportes (60-70%)
desaparece en una fase de mineralizacin activa que puede durar 2 aos. El resto queda como
humus el cual se mineraliza lentamente en proporciones que varan segn las condiciones del
clima y suelo (Schjonning et al., 2007).
Aumentando el contenido de carbono orgnico en el suelo, se realza la calidad del suelo, se
reduce la erosin, se mejora la calidad del agua, se aumenta la biomasa y la productividad
agronmica, adems de mejorar la calidad ambiental por la adsorcin de contaminantes de los
cuerpos de agua y se reduce la concentracin atmosfrica de dixido de carbono (Pedra et al.,
2006). Tambin, al aadir materia orgnica al suelo se estimula la poblacin microbiana presente
y su actividad biolgica (Brady & Weil, 1999).
Las sustancias hmicas que se encuentran en el medio natural son provenientes de residuos
orgnicos en degradacin, unidos a los productos generados por los microorganismos propios de
la materia orgnica (Ayuso, 1995). Esta composicin no es estable, por el contrario es bastante
dinmica, por lo que se habla ms de un estado de la materia orgnica, en vez de referirse a
compuestos estables.
14
Para realizar un seguimiento del proceso de humificacin, es indispensable la extraccin de

sustancias hmicas formadas a partir de la degradacin de la materia orgnica, ya sea en el suelo
o en compost. Con este objetivo, se han desarrollando mtodos qumicos que permiten extraer
una fraccin de las sustancias hmicas haciendo uso de
reactivos alcalinos, utilizando
preferiblemente la extraccin directa con NaOH 0,1M, para luego realizar una cromatografa
fraccionada (Qualls et al., 2003).
Otras tcnicas analticas ms modernas para la deteccin de cidos hmicos y flvicos (presentes
en el humus), se fundamentan en una extraccin inicial de dichas sustancias para su posterior
deteccin con polivinilo (Olk et al., 2000).
Existen otros mtodos ms sencillos como el de espectrofotometra de fluorescencia que logra
hacer la determinacin de las mismas sustancias en solucin acuosa, al igual que las
evaluaciones colorimtricas que hacen uso de diferentes reactivos. (Olk et al., 2000)
Tambin se conocen metodologas ms especficas que se realizan para determinar la
composicin qumica de las sustancias hmicas. Para ello se emplean anlisis cromatogrficos,
espectroscopa infrarroja y densidad ptica, el RMN 13C, la resonancia del espn electrnico, la
pirlisis-espectrofotometra de masas y la extraccin de gases sper crtica (Schnitzer et al.,
1995).
El mtodo ms utilizado y el que se emplear en el estudio, para la determinacin de materia
orgnica total es el propuesto por Walkley y Black (1934) que se fundamenta en la oxidacin de
la materia orgnica por el contacto con un oxidante fuerte como el dicromato (Cr2O7) en
presencia de cido sulfrico (H2SO4). El exceso del oxidante se cuantifica empleando una
solucin de sal de Mohr (Sal ferrosa FeSO4 7H2O), y se emplean dos indicadores, la difenilamina
y el cido fosfrico (H3PO4) que favorecen la unin del agente oxidante con la materia orgnica,
permitiendo determinar la cantidad de materia orgnica presente.
15
2.2.3.2. Enzimas en procesos de compost

Las enzimas son protenas que funcionan como catalizadores biolgicos que aumentan la
velocidad o rapidez de una reaccin qumica, sin que ella cambie su estructura en el proceso
global. La sustancia sobre la cual acta una enzima se denomina sustrato (Mathews et al., 2002).
Las enzimas pueden ser excretadas de la clula (extracelulares), que son liberadas por el
metabolismo o incluso por muerte celular, o pueden estar a nivel intracelular (Kalil et al., 2007).
Las amilasas tienen como sitio de accin los enlaces glicosdicos 1-4 y 1-6 del almidn.
Durante la degradacin del almidn actan diferentes enzimas como la -amilasa que hidroliza
los enlaces 1-4 de la amilosa. Las amilasas, por su parte, actan sobre los extremos no
reductores de la amilosa y la amilopectina, hidrolizando los enlaces glicosdicos alternantes. La
pululanasa o isoamilasa hidroliza los enlaces -1-6 glicosdicos, liberando las ramificaciones de
la amilopectina. Durante el proceso de degradacin del almidn se generan molculas de
maltosa, que son hidrolizadas por la maltasa generando glucosa (Alexander, 1980)
En el compost se puede encontrar una gran variedad de enzimas, dependiendo del material que se
composte. En un estudio realizado por Cayuela et al., 2007 se encontr que en pilas de compost
elaboradas a partir de los lodos residuales de la extraccin del aceite de oliva enzimas como la glucosidasa, fosfatasa alcalina, ureasa, fosfatasa cida y arilsulfatasa. Por otra parte, en un
estudio realizado por Mayende et al., 2006 se obtuvieron celulasas y polifenol oxidasas
producidas por Bacillus spp. encontrado en un compost elaborado con desechos de jardn; y
Pelez et al., se encontraron fosfatasas, invertasas, amilasas, proteasas y deshidrogensas en un
compost a base de aserrn y gallinaza.
La actividad enzimtica de un inoculante para compost, es usualmente determinada por tcnicas
colorimtricas, que miden la cantidad de azcares reductores presente en una matriz. Dentro de
dichas tcnicas la ms empleada es la del cido dinitrosalislico (DNS), sin embargo, Deng y
Tabatabai (1994), afirman que este mtodo no es lo suficientemente especfico ni sensible, luego
de haberlo comparado con otros mtodos colorimtricos como Azul de Prusia y SomogyiNelson.
16
Si bien los tres mtodos son especficos para determinar azcares reductores, Deng y Tabatabai
(1994), encontraron que las tcnicas de Azul de Prusia y de Somogyi- Nelson, resultaron ser la
ms sensibles, logrando detectar 1g y 5 g, respectivamente, de azcares reductores presentes
en la matriz de estudio. Sin embargo, tambin determinaron que el mtodo de Somogyi- Nelson
era menos susceptible a los interferentes presentes en una matriz como suelo o compost, por lo
cual este mtodo resulta ser el ms apropiado dentro las tcnicas colorimtricas, para determinar
la actividad enzimtica presente en suelo o compost.
17
3. JUSTIFICACIN
La lechuga es un vegetal que aporta una gran variedad de minerales, aminocidos y cidos
orgnicos, adems, su alto porcentaje de humedad la convierte en un alimento de pocas caloras,
por lo que cada da aumenta considerablemente la cantidad de consumidores. Por estas razones,
es necesario mantener la demanda de dicho alimento en el mercado, pero esto conlleva un
aumento de los residuos generados en los cultivos, puesto que no todas las lechugas se
desarrollan adecuadamente y no cumplen los estndares de calidad necesarios para ser vendidas.
En los cultivos comerciales de lechuga, los residuos generados contienen un alto porcentaje de
humedad (95%) que hace necesario someterlos a un manejo adecuado para evitar malos olores y
la produccin de lixiviados. Una solucin a este problema, es utilizar los residuos para realizar
un proceso de compostaje, en el cual por medio de reacciones bioqumicas microbianas en
condiciones controladas, se obtiene abono orgnico que puede ser agregado al suelo y as
mejorar su estructura y propiedades tanto fisicoqumicas como microbiolgicas.
Por todo lo anterior, el presente trabajo es de gran importancia ya que se implementar un
sistema de compostaje a partir de residuos de lechuga y adems se desarrollar un inoculante
microbiano que aumente la velocidad de dicho proceso, permitiendo que en el cultivo siempre se
pueda disponer de abono de buena calidad. De esta forma los residuos representarn una
ganancia econmica para el cultivo y para el medio ambiente.
De igual manera el proceso de compostaje se seguir desde la actividad enzimtica (amiloltica),
y del proceso de humificacin de la materia orgnica presente en el compost, que servirn como
indicadores no directos de la eficiencia del proceso de compostaje.
18
4. OBJETIVOS
4.1. Objetivo general

Producir y evaluar un inoculante microbiano con capacidad amiloltica, acelerador del
proceso de compostaje, a partir de residuos de lechuga.
4.2. Objetivos especficos

Aislar y caracterizar microorganismos con actividad amiloltica, a partir del compostaje
de residuos de lechuga.
Determinar
cualitativa
cuantitativamente
la
actividad
amiloltica
de
los
microorganismos aislados, y producir un inoculante mixto acelerador del proceso de

compostaje.
Preparar pilas de compostaje utilizando cascarilla de arroz como material llenante y poda
de pasto kikuyo para incrementar la relacin C/N.
Evaluar dos mtodos de extraccin de amilasas a partir de muestras de compost.
Realizar seguimiento del proceso mediante la cuantificacin de la actividad amiloltica y
materia orgnica.
19
5. METODOLOGIA
El estudio se realiz en el laboratorio de Microbiologa Ambiental y de Suelos de la Pontificia
Universidad Javeriana, y en su fase de campo en la Hacienda Villa Amparo, Funza
Cundinamarca.
5.1.Recoleccin de las muestras
5.1.1. Sitio de Muestreo

El sitio de estudio comprendi la zona de compostaje de la Hacienda Villa Amparo, ubicada en
Funza- Cundinamarca, que cuenta con un rea de 150 m2 y una capacidad para diez pilas de
compostaje.
5.1.2. Recoleccin de las muestras

De tres pilas de compost de 2 m de largo por 1.2 m de ancho y 1.2 m de alto, con una
temperatura promedio de 41C, se tomaron 5 muestras compuestas de 150 g por cada pila. Para
realizar el muestreo aleatorio simple, las pilas fueron divididas transversalmente en tres partes
(anterior, media y posterior) y las muestras fueron tomadas desde el interior de las pilas en cada
una de las secciones mencionadas. Las muestras se depositaron en bolsas de papel y estas a su
vez en bolsas plsticas autosellables rotuladas previamente, para su posterior transporte al
Laboratorio de Microbiologa Ambiental y Suelos, en donde fueron procesadas.
5.2. Procesamiento de muestras
5.2.1. Fase I: Caracterizacin del proceso de compostaje

Durante esta fase, se le hizo seguimiento a dos pilas de compost, a las que se les evaluaron
parmetros como temperatura con ayuda de un termmetro de punzn, pH y tiempo de duracin
20
del proceso. Las pilas fueron identificadas como pilas 1 y 2, diferan en los tipos de lechuga que
posean y tambin en el contenido de poda, puesto que la 2 no fue cubierta con esta.
Adicionalmente, a la pila 2 se le evaluaron otros parmetros como contenido de materia
orgnica, actividad amiloltica y biomasa de microorganismos amilolticos en el Laboratorio de
Microbiologa Ambiental y de Suelos; todo esto con el fin de caracterizar el proceso de
degradacin que sufren las materias primas en dicho proceso. Para esta primera fase, los
muestreos se realizaron una vez por semana, hasta que la temperatura descendi a condicin
ambiental. Posteriormente se realizaron anlisis fisicoqumicos de la pila 2, que incluyeron % de
humedad, pH, C/N y composicin nutricional. Se tomaron muestras en tiempo cero y al terminar
el proceso de degradacin, que fueron analizadas en los laboratorios Agrilab y CIAA.
5.2.1.1.Temperatura y pH
La temperatura fue tomada una vez a la semana en cinco puntos diferentes de la pila, empleando
un termmetro de punzn. Se introdujo el termmetro en la pila hasta lograr que la punta
quedara en la parte central de la misma y se hizo la lectura una vez la aguja del termmetro
permaneca en el mismo valor (Coyne et al., 1999)
Para la medicin de pH, se tomaron 25 g de muestra y se mezclaron con 25 mL de agua
desionizada. Se dejaron en reposo por una hora y luego se emple un pHmetro para hacer la
medicin (ICONTEC, 2004).
5.2.1.2. Actividad amiloltica del compost
5.2.1.3. Evaluacin de dos mtodos para la extraccin de amilasas

Se evaluaron dos mtodos de extraccin de amilasas, uno con buffer citrato fosfato (Badiane et
al., 2007) y otro con el buffer Sorensen (Sharada y Sanjat, 2004). En los dos casos, inicialmente
se tomaron tres muestras de compost de las partes anterior, media y posterior de las pilas, para
21
as completar un total de nueve muestras por pila y a cada una de ellas se les realiz extraccin
enzimtica y posterior cuantificacin de azcares reductores por el mtodo de Somogyi- Nelson.
Para el primer mtodo, se tomaron 1.5 g de compost que fueron depositados en un tubo plstico
de centrifuga de 50 mL, posteriormente se le aadieron 3 mL de tolueno, 3 mL de buffer
Sorensen (Anexo 1) y 3 mL de solucin almidn al 1% (p/v). Esta mezcla fue incubada por 24
horas a 55 C (Sharada y Sanjat, 2004).
Para el segundo mtodo se tomaron 0.3 g de compost en un tubo plstico de centrfuga de 50 mL
y se le agregaron 2.5 mL de buffer Citrato- Fosfato (Anexo 1) y 2.5 mL de solucin de almidn
al 1% (p/v). Se incub a 55 C durante cuatro horas (Badiane et al., 2001).
Una vez finalizado el periodo de incubacin, se procedi a centrifugar los tubos a 8000 r.p.m por
20 minutos y a una temperatura de 4 C. Posterior a la centrifugacin, se hizo una filtracin por
gravedad, empleando papel filtro, con el fin de separar partculas suspendidas en la fraccin
lquida de inters (Gutirrez et al., 2007).
5.2.1.4. Cuantificacin de azcares reductores en muestras de compost, mediante la tcnica

de Somogyi- Nelson
Luego de realizar la extraccin de amilasas por los dos mtodos, se procedi a cuantificar los
azcares reductores presentes en los tubos de centrfuga como consecuencia de la actividad
enzimtica. Para ello se emple la fase acuosa recuperada luego de la filtracin por gravedad. A
partir de dicha fase, se tomaron 200 L, los cuales fueron mezclados con 200 L y 50 L de los
reactivos de Somogyi I y Somogyi II respectivamente. La mezcla fue homogenizada con la
ayuda de un vortex, para luego introducirla en un bao termostatado a 90C durante 20 minutos,
transcurrido este tiempo, se introdujeron los tubos en un recipiente con agua fra por 10 minutos.
Luego se homogenizaron nuevamente con la ayuda del vortex y se les adicion a cada uno 250
L de reactivo de Nelson y 700 L de agua desionizada. El blanco fue preparado de la misma
forma, pero se tomaron 200 L de agua desionizada en vez de fase acuosa (Deng y Tabatabai,
1994; Gutirrez et al., 2007).
22
Debido a la alta concentracin de azcares reductores de algunas muestras, fue necesario realizar
diluciones. Para ello se utiliz agua desionizada, haciendo la adicin de la misma antes de
adicionar los reactivos.
La lectura se llev acabo 24 horas despus de realizada la tcnica, en espectrofotmetro Genesys
UV/ Vis a una longitud de onda de 595 nm (Deng y Tabatabai, 1994; Gutirrez et al., 2007;
Badiane et al., 2001)
5.2.1.5. Cuantificacin de la biomasa amiloltica presente en el compost

Se tom una cantidad cercana a 10 g exactamente medida de la muestra que se adicionaron a
90mL de agua peptonada al 0.1% (p/v), posteriormente se agit la muestra a 120 r.p.m. por 5
minutos. Luego se efectuaron diluciones seriadas en base 10 por triplicado, en tubos de vidrio de
13*100 cada uno con 4.5 mL de agua peptonada 0.1% (p/v), a los cuales se les agreg 0.5 mL de
muestra a diluir. Posteriormente, se sembraron cada una de las diluciones en agar almidn 1%
(p/v) (Anexo 2) (Ayala et al., 2001).
5.2.1.6. Determinacin de materia orgnica

En la fase I se realiz la determinacin de la materia orgnica total (MOT) y carbono orgnico
total (COT) por va hmeda utilizando el mtodo descrito por Walkley y Black (1934). Para ello
se pesaron 10,000 g de compost de cada parte de la pila (anterior, media y posterior) en una
bandeja previamente tarada a 105 C, y se llevaron a la mufla cuya temperatura era tambin de
105 C durante 2 horas (Swift, 1996). Pasado este tiempo se volvi a pesar la muestra con el fin
de determinar su porcentaje de humedad empleando la ecuacin 1:
23
Luego, de la muestra seca se tomaron 50 mg en un beaker, se agregaron 10 mL de cido

sulfrico y 5 mL de dicromato de potasio y se llev a la mufla a 150 C por 15 minutos, despus
se dej enfriar y se transfiri todo el contenido del beaker a un baln aforado de 50 mL
completando a volumen con agua destilada. El baln se agit para homogenizar la muestra, luego
se tomaron 10 mL y se aadieron a un erlenmeyer de 100 mL. Se agregaron 4 gotas de
difenilamina y 2 gotas de cido fosfrico para titular la muestra con sal ferrosa al 0.022N (Anexo
2) hasta que se observ un viraje de color de azul violeta a verde esmeralda. Finalmente se
determin el porcentaje de MOT y COT por medio de las ecuaciones 2, 3 y 4:
% MOT= % COT x 1.724 (4)

Fuente: Kalil et al., 2007
5.2.2. Produccin del inoculante mixto
5.2.2.1. Aislamiento primario de cepas amilolticas (Priest y Ramos, 1994)

Se tomaron 10,000g de cada una de las muestras recogidas y se adicionaron a 90 mL de agua
peptonada al 0.1% (p/v), luego, a partir de esta mezcla se realizaron diluciones seriadas de 10-1 a
10-12.
24
Posteriormente se sembraron cada una de las diluciones en superficie y por triplicado en agar
almidn al 1% (p/v) (Anexo 2) y se incubaron a 55 C durante 48 horas.
Una vez finalizado el periodo de incubacin, se determin cualitativamente la actividad
amiloltica, adicionando tres gotas de lugol sobre la caja. Los microorganismos con actividad
amiloltica fueron identificados por la aparicin de halos de hidrlisis alrededor de las colonias,
luego de la adicin del lugol.
Luego de identificar las colonias con actividad amiloltica, se les realiz coloracin de Gram a
cada una de ellas, con el fin de observar sus caractersticas microscpicas. De igual forma se
hicieron observaciones para determinar las caractersticas macroscpicas de cada colonia.
5.2.2.2 Aislamiento secundario y seleccin

Con el fin de obtener microorganismos puros con capacidad amiloltica, se hicieron por
triplicado, repiques en agar almidn al 1% (p/v) de cada una de las colonias identificadas como
amilolticas en el aislamiento primario, manteniendo las condiciones de incubacin y
comprobacin de la actividad amiloltica descritas anteriormente.
Una vez puras, se procedi a medir el halo de hidrlisis generado por cada una de las cepas
aisladas. Esto se hizo por triplicado para sacar una medida promedio del halo.
5.2.3. Conservacin de Cepas

Para la conservacin de los microorganismos aislados, se utiliz la tcnica de criopreservacin
en glicerol al 30% (v/v) (Poutou et al., 1994). Para ello, se tomaron colonias del aislamiento
secundario y se mezclaron con solucin salina al 0.85% (p/v) hasta alcanzar la turbidez del tubo
nmero 2 de la escala nefelomtrica de Mc Farland.
25
Una vez alcanzada esta concentracin, se inocularon 5 mL de la suspensin celular en 50 mL de

caldo almidn al 1% (p/v), el cual se llev a incubar a 55 C en agitacin constante a 120 r.p.m.
durante 12 horas, hasta lograr una concentracin celular de 105 y 106 (Alfaro et al., 2001)
Para los microorganismos que mostraron una microscopa filamentosa, no se emple el patrn de
Mc Farland, sino que se hizo un raspado de toda la caja, para inocularlo directamente en el caldo.
Luego de alcanzar la concentracin celular anterior, se adicionaron 50 mL de caldo almidn con
glicerol al 60% (v/v), para as obtener una concentracin final de 30% (v/v) de glicerol. De esta
mezcla se tomaron volmenes de 1 mL para depositarlos en tubos eppendorf estriles (Poutou et
al., 1994).
Posteriormente se tomaron 5 tubos de manera aleatoria para sembrarlos en agar almidn al 1%
(p/v) y comprobar pureza y viabilidad.
5.2.4. Seleccin de cepas por antagonismo

Se tom un vial del banco, por cada una de las cepas y se reconstituyeron en caldo almidn al
1% (p/v), se incub por 12 horas a 55 C y en agitacin constante a 120 r.p.m. La concentracin
celular final fue comprobada luego de hacer recuento en placa en agar almidn al 1% (p/v).
Luego de comprobar que la concentracin celular de todos los microorganismos fuera la misma
(106 UFC/mL), se realizaron pruebas de antagonismo por triplicado siguiendo la tcnica descrita
por Gauze (1965) en la cual, el efecto antagnico se determina midiendo los halos de inhibicin.
Para ello, se sembraron masivamente cada uno de los microorganismos a evaluar, en agar
almidn al 1% (p/v), y fueron enfrentados con los otros microorganismos que se haban
dispuesto en sensidiscos de papel filtro estril con un volumen de 20 L de suspensin celular
para cada uno de ellos (Alfaro et al., 2001).
26
5.2.5. Curvas de Crecimiento

Como parmetros de crecimiento de los microorganismos, se evaluaron la produccin de
biomasa, por medio del recuento en placa en agar almidn 1% (p/v), as como la actividad
amiloltica, luego de efectuar una extraccin de amilasas y medir la cantidad de azcares
reductores presentes en la matriz por el mtodo Somogyi- Nelson para la cual se utiliz la
ecuacin (Y= 0.1133 X+ 0.0049, R2 = 0.998) obtenida a partir de la curva de calibracin (Anexo
3). Posteriormente, se cuantificaron las unidades amilolticas (UA), definidas como la cantidad
de enzima capaz de liberar 1g de azcares reductores/mL*h.
Se tomaron tres viales del banco para su recuperacin y verificacin de pureza, en agar almidn
al 1% (p/v). Luego de verificar pureza y recuento de colonias, se elabor el pre- inculo.
5.2.5.1. Elaboracin del pre- inculo (Wind et al., 1994)

Para cada microorganismo se prepararon dos pre- inculos relacin 1/2, en erlenmeyers de
500mL, con 127 mL de caldo almidn al 1% (p/v), cada uno. A estos se les adicion el contenido
de tres viales. Se tom como tiempo cero el momento de la adicin de los microorganismos,
momento en el cual se determin la actividad amiloltica.
Para la cuantificacin de la biomasa, se realizaron diluciones seriadas en base 10. Para ello se
emplearon tubos khan, cada uno con 2.7 mL de agua peptonada, a los que se les adicion 300 L
de muestra a diluir. Para homogenizar la mezcla, se utiliz un agitador vortex, y luego de estar
homogneas, se sembr en superficie 1 mL de las diferentes diluciones en agar almidn 1% (p/v)
para hacer el recuento. Las cajas fueron incubadas a 55 C durante 24 horas (Wind et al., 1994).
Adicionalmente, para los microorganismos no filamentosos, se realizaron lecturas de absorbancia
teniendo como blanco caldo almidn al 1% (p/v) estril, con el fin de identificar rpidamente el
ingreso a la fase exponencial por parte de los microorganismos.
27
Para la extraccin de amilasas, se tomaron 3mL del caldo de fermentacin que fueron
centrifugados a 10 000 r.p.m. durante 20 minutos. Luego, se tom 1 mL del sobrenadante, el
cual fue mezclado con 1 mL de buffer almidn al 1% (p/v) diluido en buffer fosfato 1M. Esta
mezcla fue llevada a incubar a 55 C durante una hora, luego se fren la reaccin introduciendo
los tubos en hielo y se dejaron all por cinco minutos. Una vez frenada la reaccin, se hizo otra
centrifugacin a 10 000 r.p.m. durante 20 minutos. Se tomaron 200 L del sobrenadante para
desarrollar el protocolo de Somogyi- Nelson descrito anteriormente, haciendo diluciones con
agua desionizada.
Los parmetros mencionados se evaluaron cada dos horas y una vez se evidenci el ingreso a la
fase exponencial de cada uno de los microorganismos, se transfiri una alcuota de 50 mL a los
erlenmeyers en donde se realiz la fermentacin discontinua.
5.2.5.2. Fermentacin Discontinua

Luego de identificar la fase exponencial de cada uno de los microorganismos en sus respectivos
pre-inculos, en un erlenemyer de 1 L con 450 mL de caldo almidn al 1% (p/v) se transfirieron
50 mL de cada pre-inculo, para completar un volumen efectivo de trabajo (VET) de 500 mL.
Cada fermentacin se llev a cabo por duplicado, se continu midiendo actividad amiloltica y
biomasa, cada dos horas, hasta observar un descenso en la actividad amiloltica (Ayala et al.,
2001).
5.2.6. Curva de crecimiento del Inoculante mixto

Se hicieron pre- inculos de cada uno de los microorganismos de la misma forma explicada
anteriormente y se dejaron incubando a 55C hasta que cada uno alcanzara una biomasa de 106
UFC/mL. Luego de tener todos los microorganismos en la misma concentracin, en un
erlenmeyer de 1 L con 450 mL de caldo almidn 1% (p/v), se adicionaron 10 ml de cada uno de
los pre-inculos, para completar un VET de 500 mL. Adicionalmente, se utiliz un sistema de
aireacin, compuesto por mangueras de plstico unidas a un motor elctrico que emita el aire
suministrado al caldo, para incrementar la velocidad de crecimiento.
28
La fermentacin se hizo por duplicado y se evaluaron los mismos parmetros (actividad

amiloltica y biomasa por recuento en placa) cada dos horas.
5.2.7. Produccin del Inoculante mixto

Se llev a cabo la fermentacin discontinua bajo las mismas condiciones de operacin descritas
en el numeral 5.2.6, en 10 erlenmeyers de 1 L para completar un volumen de inoculante mixto
final de 5 L. Se incubaron a 55 C por 24 horas, tiempo en que la biomasa era superior a 1026
UFC/mL.
Una vez finalizada la fermentacin, se reenvas todo el contenido de los 10 erlenmeyers en un
recipiente con capacidad de 5 L estril y se mantuvo a -5 C por 24 horas hasta el da de su
aplicacin.
5.3. Fase II: Evaluacin del Inoculante Mixto en campo

Para hacer la evaluacin en campo del inoculante, se hizo el montaje simultneo de dos pilas de
compost exactamente iguales en composicin y dimensiones. Cada pila contena 500 kg de
lechuga, 226.5 Kg de cascarilla de arroz, 56.62 Kg de poda y 7 L de agua- melaza (Anexo 2) y
sus dimensiones fueron 2 m de largo por 1.2 m de ancho por 1.2 m de alto.
La pila sin inoculante fue denominada pila control y la otra fue inoculada con 5 L de inoculante
mixto sin diluir y fue denominada pila con inoculante.
5.3.1. Variables evaluadas

Las variables evaluadas fueron actividad amiloltica, biomasa, materia orgnica, pH y
temperatura. Todos los parmetros se evaluaron de la misma forma descrita en la fase I, aunque
los muestreos y mediciones se hicieron diariamente y no semanalmente, a excepcin de la
biomasa, que fue determinada cada tercer da.
29
Durante la fase de evaluacin del inoculante en las pilas, no se hicieron determinaciones de

actividad amiloltica para cada una de las partes de la pila, puesto que en la fase I no se
encontraron diferencias significativas en los valores de la actividad amiloltica hallada en cada
una de ellas, razn por la cual, en la fase II se tomaron las muestras de las diferentes secciones de
la pila y se hizo un pool con ellas, para determinarle la actividad amiloltica.
5.3.1.1. Determinacin de la materia orgnica (IHSS, 1996)

En la fase II se decidi cambiar el mtodo para la determinacin de la materia orgnica, ya que
se encontr que por va seca (calcinacin) tambin se podan analizar las muestras de compost.
Antes de hacer el cambio definitivo de determinacin por va hmeda a va seca, se tom la
muestra del primer da del proceso y se determin el porcentaje de MOT por los dos mtodos.
Para llevar a cabo la determinacin de la materia orgnica por va seca se pesaron 10 g de
compost (a partir de un pool que reuna fracciones de toda la pila a analizar) y se secaron a
105C durante 2 horas. Luego, se tomaron 1,500 g de muestra seca y molida depositndolas en
una bandeja de aluminio previamente tarada.
Se precalcin la muestra a una temperatura baja, mantenindola directamente en la mufla hasta
que dej de humear. Luego se realiz la calcinacin, con la mufla a 550 C e introduciendo la
muestra por 5 horas. Pasado el tiempo, se transfiri el conjunto a un desecador y unas vez fras se
retiraron las bandejas con el fin de pesarlas nuevamente.
Finalmente se realizaron los clculos aplicando las ecuaciones 5 y 6:
A: peso de la bandeja (g)
B: A + peso de la muestra seca (g)
C: A + peso de la muestra calcinada
% MOT =
(B C)
x100 (5)
( B A)
%COT= %MOT / 1.72 (6)
30
5.3.1.2.Caracterizacin microbiolgica del compost

Se tomaron muestras de 30,000 g de compost, al inicio y al final del proceso, tanto para el
tratamiento como para el control. Dichas muestras, fueron enviadas al Centro de Servicios de la
Pontificia Universidad Javeriana, para la determinacin de patgenos humanos como Salmonella
sp. y Escherichia coli.
5.4. Anlisis de la informacin
Con el fin de determinar el grado de correlacin entre la actividad amiloltica y la biomasa de

microorganismos amilolticos presentes en las pilas tratamiento y control, se aplic un test de
correlacin, para el cual se plantearon las siguientes hiptesis:
Ho: No existe una relacin directamente proporcional entre la biomasa amiloltica y la
actividad amiloltica presentes en las pilas control y tratamiento.
Hi: Existe una relacin directamente proporcional entre la biomasa amiloltica y la
actividad amiloltica presentes en las pilas control y tratamiento.
Adicionalmente, se aplic un t- student test, para determinar diferencias significativas entre los
mtodos de extraccin enzimtica empleados en las pilas tratamiento y control:
Ho: No existen diferencias estadsticamente significativas entre los dos mtodos de
extraccin enzimtica utilizados para extraer amilasas.
Hi: Existen diferencias estadsticamente significativas entre los dos mtodos de
extraccin enzimtica utilizados para extraer amilasas.
Una vez determinado el mejor mtodo de extraccin enzimtica, se emple un test Chi cuadrado
para evidenciar diferencias significativas en la actividad amiloltica presente en el tratamiento y
control:
31
Ho: No existen diferencias estadsticamente significativas entre las actividades

amilolticas cuantificadas para las pilas tratamiento y control.
Hi: Existen diferencias estadsticamente significativas entre las actividades amilolticas
cuantificadas para las pilas tratamiento y control.
De igual forma, se aplicaron los test Kruskal Wallis y Chi cuadrado, para determinar diferencias
significativas entre la actividad amiloltica presente en los tratamientos empleados y el tiempo:
Ho: No existen diferencias estadsticamente significativas en la actividad amiloltica
presente en cada uno de los tratamientos a travs del tiempo.
Hi: Existen diferencias estadsticamente significativas en la actividad amiloltica en cada
uno de los tratamientos a travs del tiempo.
Posteriormente, con el objetivo de estimar diferencias en el contenido de materia orgnica
presente en el tratamiento y control, se aplic un test t- student y se formularon las hiptesis
pertinentes:
Ho: No existen diferencias estadsticamente significativas en el contenido de materia
orgnica entre las pilas tratamiento y control.
Hi: Existen diferencias estadsticamente significativas en el contenido de materia
orgnica entre las pilas tratamiento y control.
Adicionalmente, se aplico el test Kruskal Wallis para determinar diferencias significativas entre
el contenido de materia orgnica en los tratamientos empleados y el tiempo:
Ho: No existen diferencias estadsticamente significativas en el porcentaje de materia
orgnica presente en cada uno de los tratamientos, a travs del tiempo.
32
Hi: Existen diferencias estadsticamente significativas en el porcentaje de materia

orgnica presente en cada uno de los tratamientos, a travs del tiempo.
Finalmente se aplic un test t-student para determinar diferencias significativas entre los
tratamientos, de acuerdo a los parmetros de temperatura y pH, con relacin al tiempo.
Ho: No existen diferencias estadsticamente significativas entre temperaturas y pH en los
tratamientos evaluados.
Hi: Existen diferencias estadsticamente significativas entre temperaturas y pH en los
tratamientos evaluados.
33
6. RESULTADOS Y DISCUSION
6.1. Fase I: Caracterizacin del proceso de Compostaje
6.1.1. Temperatura y pH
Al hacer el seguimiento de estas pilas preliminares, se buscaba conocer el tiempo de duracin del
proceso de compostaje y observar parmetros como la temperatura y pH. La pila 1, fue la
primera en montarse, como parte de un sistema para organizar el material residual desarrollado
en diferentes etapas; present un exceso de humedad (80%) que condujo a procesos anaerobios y
por tanto mal olor, por esta razn slo se hizo seguimiento de temperatura y pH.
La pila 2 fue organizada de la misma forma que la 1, excepto por la cubierta de poda que la
primera tena y debido a que present una humedad inicial de 60%, a partir de esta pila se
determinaron la actividad amiloltica y el contenido de MOT y COT, adems del seguimiento
que se hizo de la temperatura y el pH.
El ciclo completo de compostaje para las pilas 1 y 2 tuvo una duracin de 5 semanas, tiempo en
el que las temperaturas ms altas registradas fueron 44 C y 41 C respectivamente (Fig. 1). Si
bien el tiempo de duracin del proceso, es bastante bueno comparado con otros reportados para
materiales similares como residuos de cocina y desechos de la jardinera, que pueden durar hasta
120 das (Adani et al., 2007), las temperaturas mximas no son lo suficientemente altas ni
duraderas para eliminar microorganismos patgenos. Nobel y Roberts (2004) afirman que para
eliminar microorganismos patgenos en compost, en general se requieren temperaturas
superiores a 40 C y que se mantenga por una semana como mnimo.
34
Fig. 1. Comportamiento de la temperatura en las Pilas de compostaje 1 y 2
Fig. 2. Comportamiento del pH de las Pilas de compost 1 y 2
Contrario a lo propuesto por Nobel y Roberts (2004), en campo se observ en trminos generales
que en ninguno de los casos, se conserva la mxima temperatura por dos semanas. Este hecho
condujo a la suposicin de que el proceso se realizaba mucho ms rpido y que las mediciones
de este tipo deban hacerse en intervalos de das en vez de semanas.
Las variaciones en las temperaturas de las dos pilas se deben probablemente a los cambios de
temperatura ambiental, que tuvieron incidencia en las pilas, por el hecho de no existir paredes
que ayudaran a conservarla. Debido a esto, las pilas estuvieron muy expuestas a cambios
climticos, que pudieron afectar la circulacin del calor en ellas. Para el caso de la pila 2 que no
tena cubierta de poda, la grfica expresa muy bien la incapacidad de la pila para retener el calor,
mientras que la pila 1 logr retener un poco ms, aunque no lo suficiente para mantener la misma
temperatura o incluso aumentarla. Por otro lado se puede argumentar respecto a la velocidad de
35
degradacin, que pudo haber mantenido la temperatura por das consecutivos, en los cuales no se
efectuaron lecturas.
Las desviaciones estndar mostradas en la grafica 1 muestran tambin, que la temperatura no fue
la misma en los diferentes puntos de la pila, pero los valores no fueron muy dismiles,
evidenciando as una buena transferencia de calor dentro de la pila.
La pila 1 contena residuos bastante degradados, razn por la cual el pH inicial fue ligeramente
cido, comparado con el de la pila 2 (Fig. 2). La disminucin en el pH de la pila 2 se debe a la
produccin de sustancias cidas, que son productos intermediarios de la degradacin de la
materia orgnica, sin embargo, el pH incrementa nuevamente debido a la estabilizacin del
compost, etapa en la cual el pH se acerca a la neutralidad, luego de que los microorganismos
consumen los cidos producidos y a la vez realizan procesos de amonificacin (Beck- Friis et al.,
2003; Ayala et al., 2001).
La pila 2, a su vez reporta un incremento del pH durante la primera semana, que puede deberse a
una elevada tasa de amonificacin causada por la relacin C/N inicial (13.99 m/m), que segn
Kirchmann y Witter (1989), al ser baja (< 20) aumenta la liberacin del nitrgeno en forma de
NH3. Sin embargo, a partir de la semana 1 el pH desciende, a causa de la presencia de cidos
orgnicos simples como el actico y el lctico, que se forman durante la degradacin del material
orgnico; seguido de un nuevo ascenso en el pH, generado por el consumo de dichos cidos por
parte de los microorganismos presentes en el material en descomposicin (Sundberg, 2005).
Tanto el compost obtenido en la pila 1 como en la pila 2 reportaron valores finales de pH
aceptados por la norma 5167 de 2004, cuyo rango es entre 5 y 8.
6.1.2. Seguimiento de la Actividad Amiloltica y Biomasa de microorganismos amilolticos

en la Pila 2
Por otra parte, se determin la actividad amiloltica presente en la pila de compost 2 (Fig.3),
parmetro que fue correlacionado con la biomasa de microorganismos amilolticos presentes en
36
la matriz de estudio (Fig. 4). Las unidades amilolticas (UA) se definen como la cantidad de
enzima capaz de liberar 1 g de azcares reductores/ g de suelo* h (Sharada y Sanjat, 2004).
De acuerdo con Sharada y Sanjat (2004), los valores obtenidos para la actividad amiloltica en la
pila 2 resultaron muy bajos (< 4.22 UA con buffer Sorensen), comparados con el mnimo dato
reportado por dichos autores que fue de 8.4 UA. Pese a esto, el comportamiento descrito por la
pila, fue acelerado y con resultados finales satisfactorios como pH de 6, relacin C/N de 15,
Norgnico de 1.2 % y % MOT de 55.49 %. Estas caractersticas finales, sugieren que hubo una
mayor actividad amiloltica, que no fue reportada debido a los tiempos de muestreo utilizados, o
tambin que el muestreo no coincidi con los das de mayor actividad.
An cuando la temperatura de la pila de compost 2 no fue satisfactoria, la actividad enzimtica
present el comportamiento esperado (aunque con valores bajos), puesto que se increment de
2.9 UA a 4.22 UA (Fig.3), durante la primera semana de muestreo. Este incremento de la
actividad amiloltica coincide con cambios fsicos de la pila, la cual al cabo de la primera semana
ya no contena residuos de lechuga visibles.
As mismo, dicho incremento de actividad amiloltica y por tanto de degradacin aerobia del
material residual, conduce a un descenso gradual del pH en la pila. En la fig. 3, se observa
tambin una estabilizacin en la actividad que se ve reflejado en el comportamiento del pH, que
tambin tiende a mantenerse constante con valores cercanos a 6.
Fig.3. Actividad amiloltica y biomasa amiloltica de la pila de compost 2
37
Pelez et al., (2004), en un estudio sobre compostaje de estircol de aves de corral y aserrn,
reportaron un comportamiento ascendente de la actividad amiloltica entre los das 9 y 43,
encontrndose valores desde 1.25 a 6.26 mol/ min * g, respectivamente. Esto expresado en
g/h*g, equivaldran a 13500 y 67620 UA. Una vez ms los valores obtenidos en el compost de
lechuga se encuentran muy distantes de otros valores reportados, aunque en este caso particular
se debe tener en cuenta que el estircol puede contener una mayor carga de amilasas debido a su
contenido microbiano. Se debe resaltar tambin, que por las caractersticas de la matriz, el
tiempo de duracin del proceso fue mayor a los 43 das, aunque no se menciona en el artculo,
como tampoco el comportamiento de la actividad amiloltica a lo largo de todo el proceso.
La tendencia de la actividad amiloltica a estabilizarse, tendra que haberse reflejado en una
estabilizacin de la temperatura de la pila. Sin embargo, este efecto no se present, debido a las
fluctuaciones de temperatura en la pila, producto del tamao de la misma que redujo bastante sus
dimensiones al cabo de la primera semana y a la falta de paredes en el rea de compostaje.
Debido a que el proceso de degradacin se present en un tiempo menor al esperado
inicialmente, no se hicieron suficientes muestreos para caracterizar de una mejor manera la
actividad amiloltica presente en el proceso, puesto que pudo haber reportado valor mayores a los
mostrados en la fig. 3.
Con respecto a la biomasa de microorganismos amilolticos cuantificada en la pila de compost
(fig. 3), se puede decir que la disminucin de las UFC/g presentada en la primera semana (de 1*
105 a 1* 104 UFC/g) se gener como consecuencia de una posible adaptacin de los
microorganismos.
Durante la semana 2, se evidencia un incremento en la biomasa que puede ser indicio del
consumo de otras fuentes de carbono diferentes al almidn, puesto que para el miso tiempo se
observ una disminucin de las UA (Fig. 3).
38
6.1.3. Cuantificacin de la Materia Orgnica Total (MOT) y del Carbono Orgnico Total
(COT)
En la fase I se realiz la cuantificacin de la materia orgnica por va hmeda, este mtodo
consiste en hacer reaccionar la muestra de compost o suelo con un exceso de dicromato de
potasio en presencia de un cido fuerte (cido sulfrico) y luego titular con sal ferrosa el
dicromato que no reaccion (Chan et al., 1995; Norma Mexicana NMX-AA-021-1985).
En la fig. 4 se observa que la pila 2 empez con un alto porcentaje de materia orgnica total y
que como es de esperarse a medida que avanza el proceso de compostaje dicho porcentaje
disminuye, en general esto es lo que ocurre en todos los procesos de compostaje elaborados
correctamente, puesto que la materia orgnica presente en la matriz es mineralizada
bioqumicamente, por los microorganismos presentes en la matriz (Hernndez et al., 2005).
El valor de COT registrado fue menor que el de MOT, lo cual es de esperarse, debido a que la
determinacin del % COT se hace con base en el % MOT aplicando un factor matemtico (1.72,
ecuacin 6), que supone la proporcin de COT presente en MOT. Al aplicar dicho factor, se
establece una proporcin directa entre MOT y COT, lo cual hace que las curvas presentadas por
cada uno de estos parmetros sigan siempre el mismo comportamiento.
Fig. 4: Determinacin de la materia orgnica presente en la Pila de Compost 2.
39
Al cabo de la segunda semana, se observa un aumento del %COT que puede estar relacionado
con el aumento de la biomasa de microorganismos amilolticos, que para esa semana report la
mayor cantidad de UFC/mL. De igual forma, se evidencia un aumento del % MOT, que puede
ser causado por la generacin de sustancias hmicas como parte fundamental de la estabilizacin
del proceso de compostaje (Charest et al., 2003; Said- Pullicino et al., 2007).
Como se dijo anteriormente, el muestreo de la pila se realiz una vez a la semana, por lo tanto,
en esta etapa del experimento no fue posible conocer detalladamente el comportamiento de la
materia orgnica (degradacin y formacin de nuevos productos).
6.2. Fase I: Produccin del Inoculante Mixto
6.2.1. Aislamiento de microorganismos amilolticos termfilos

Luego de hacer el procesamiento 18 muestras provenientes de las pilas 1 y 2, se lograron aislar 8
microorganismos diferentes, que incluan bacterias filamentosas y no filamentosas. Todas ellas
con actividad amiloltica, en la tabla N 5 se describen las caractersticas micro y macroscpicas.
Las poblaciones predominantes fueron microorganismos Gram positivos con morfologas
bacilares y filamentosas, pertenecientes al grupo de los actinomycetes. Los actinomycetes han
sido descritos como microorganismos altamente facultados para sobrevivir en compost en
condiciones aerobias y en presencia de materia orgnica contenida en una gran variedad de
sustratos orgnicos. Su alta capacidad para habitar ambientes como el suelo o compost, est
relacionada con la produccin de enzimas extracelulares, que le permiten utilizar una gran
variedad de sustratos como fuente energtica (Ballows, 1991; Atlas y Bartha, 1987).
40
Tabla N 5: Caractersticas morfolgicas de las cepas con actividad amiloltica obtenidas

durante el asilamiento primario.
Cepa
AA1
AA2
Microscopa
Macroscopa
Filamentos
delgados
Gram Colonias secas y pulverulentas de color
positivos
blanco. Envs de color caf.
Esporas
Bacilos cortos Gram positivos
Colonia redondas, pequeas, cremosas
con bordes traslcidos
AA3
Bacilos delgados, medianos Gram

positivos
AA4
AA5
AA6
Filamentos delgados
Gram positivos
esporas Colonias blancas corrugadas con bordes

traslcidas
Filamentos delgados Gram
Colonias secas, corrugadas, de color
positivos
blanco.
Filamentos delgados y cortos Gram Colonias puntiformes, pulverulentas de

positivos
color blanco en el centro y borde

traslcido.
AA7
Bacilos largos Gram positivos
Colonias redondas cremosas, de color

crema en el centro y bordes traslcidos
AA8
Bacilos largos Gram positivos
Colonias redondas, cremosas de color

amarillo oscuro.
41
Fig. 5. Microscopa de la cepa AA5.
(Fuente: Autores)
Los otros microorganismos aislados, presentaron una morfologa bacilar, correspondiente al

gnero Bacillus sp, reconocido por su capacidad de degradar mltiples sustratos dentro de los
que se encuentra el almidn, y varias especies, son a menudo encontradas durante procesos de
compostaje, debido a su tolerancia a altas temperaturas (Quinceno, 1989).
Luego de hacer los pases en agar almidn 1% (p/v) por triplicado, se obtuvieron tan solo 5
microorganismos puros, que conservaron sus caractersticas tanto microscpicas como
macroscpicas y la actividad amiloltica. Las cepas recuperadas fueron AA1, AA2, AA3, AA4 y
AA5.
Posteriormente se midieron los halos de hidrlisis de cada uno de los microorganismos aislados.
Los resultados se muestran en la Tabla N6 y en la Fig. 6 los halos de hidrlisis generados por las
cepas AA1 y AA2 respectivamente.
Debido a que tres de los microorganismos asilados en el aislamiento primario no se pudieron
recuperar, se dejaron las cinco cepas restantes para producir el inoculante mixto. Al hacer la
medicin de los halos de hidrlisis de cada una de las cinco cepas, se encontr, que la mejor cepa
era la AA1.
42
Tabla N 6: Determinacin semicuantitativa de la actividad amiloltica de las cepas aisladas

y purificadas.
Cepa
Promedio Halo de Hidrlisis (cm)
AA1
2.5
AA2
1.2
AA3
AA4
0.5
AA5
0.5
Fig. 6: Microorganismos amilolticos aislados de muestras de compost. a. Cepa AA1.

b. Cepa AA2.
a.
b.
(Fuente: Autores)
Koch et al., (1997) reportan que una cepa con actividad enzimtica alta, es aquella que genera
halos de hidrlisis con dimetros superiores a 5 mm. Sin embargo, de las cinco cepas aisladas
ninguna present valores inferiores al parmetro mencionado.
Debido a que este es un mtodo semicuantitativo, la actividad amiloltica de cada una las cepas,
fue evaluada posteriormente por un mtodo cuantitativo.
43
6.2.2. Seleccin de cepas por antagonismo

No se present antagonismo ninguno entre las cinco cepas evaluadas (tabla N 7), por lo cual son
considerados aptos para su utilizacin en el inoculante mixto.
Tabla N 7: Resultados de las pruebas de antagonismo realizadas con las 5 cepas aisladas.
Cepa
AA1
AA2
AA3
AA4
AA5
AA1
AA2
AA3
AA4
AA5
De manera simultnea, se hicieron controles de los microorganismos a evaluar como antagonista,

sembrndolos por separado en el mismo medio y bajo las mismas condiciones de incubacin,
con el fin de garantizar su viabilidad y conservacin de la actividad amiloltica.
6.2.3. Curvas de Crecimiento

La actividad amiloltica inicial de todas las cepas fue muy cercana, reportando valores desde
26137 UA y 26554 UA, para las cepas AA2 y AA4 respectivamente (Fig. 7). Valores altos,
comparados con lo reportado por Goya et al., (2005), de 9396 UA en la degradacin de harina de
papa.
44
Fig. 7: Cuantificacin individual de la actividad amiloltica de los microorganismos

aislados.
Todas las cepas excepto la AA5, mantuvieron la produccin de enzimas del tiempo cero, durante
las primeras 2 horas, mientras que la cepa AA5 mostr un incremento de casi 1000 UA durante
el mismo periodo de tiempo, esto indica una fase de adaptacin de todas las cepas excepto AA5.
Las cepas AA1 y AA5, luego de tener un aumento en la produccin de amilasas, mostraron una
disminucin de la misma al cabo de 8 horas y un posterior aumento de la actividad amiloltica.
En el primer caso (AA1), esta disminucin en la actividad puede estar referida a una inhibicin
por producto (Mathews et al., 2002), puesto que en la hora 6 se observ la mxima produccin
de amilasas e inmediatamente despus se produjo el descenso. Si bien para AA5 el descenso no
estuvo antecedido por la mxima produccin, el valor inmediatamente anterior es muy cercano al
mximo y adems alto (25000 UA), por lo cual tambin puede ser considerada una inhibicin
por producto.
Las cepas que reportaron mayor actividad enzimtica fueron AA1 y AA2, que fue lo estimado
previamente, al hacer la determinacin semicuantitativa de la actividad enzimtica. Seguidas por
las cepas AA3, AA4 y finalmente AA5 con la menor produccin.
45
De manera simultnea a la cuantificacin de la actividad enzimtica, se determin el crecimiento

en biomasa (Fig. 8) de los diferentes microorganismos aislados, por medio del recuento en placa
en agar almidn 1% (p/v).
Fig. 8: Curva de Crecimiento de los microorganismos aislados, en medio almidn 1% (p/v).
Al determinar el comportamiento de la biomasa para cada uno de los microorganismos, se hall

que las cepas AA1, AA2 y AA3, presentaron una fase de adaptacin que tuvo una duracin de 2
horas. Esta fase de adaptacin coincide con el comportamiento constante que present la
actividad amiloltica para estos microorganismos, durante el mismo intervalo de tiempo. A partir
de la hora 2, estas cepas incrementaron la actividad amiloltica en 8000 UA, lo cual se vio
reflejado en un aumento repentino de la biomasa celular que increment en 2 unidades
exponenciales, para los dos microorganismos.
Por su parte, las cepas AA4 y AA5 no evidenciaron una fase de adaptacin sino que presentaron
un aumento proporcional en las UFC/mL, que en el caso de la cepa AA5 coincide con el
incremento en la actividad amiloltica reportada desde el tiempo cero.
Las cepas que evidenciaron mayor aumento en su biomasa fueron AA1 y AA2, lo que era de
esperarse puesto que estas dos cepas fueron las que sintetizaron mayor cantidad de amilasas.
Adems para las dos cepas la mxima biomasa reportada estuvo antecedida por el valor mximo
de actividad amiloltica.
46
6.2.4. Curva de Crecimiento del Inoculante Mixto

Una vez identificado el comportamiento cintico individual de las cinco cepas, se llev a cabo la
determinacin de los mismos parmetros cinticos para el inoculante mixto. Para la cual, una
unidad amiloltica fue definida como la cantidad de enzima capaz de liberar 1 g de azcares
reductores/ mL* h.
El valor inicial de la actividad amiloltica fue 7546, 33 UA (Fig. 9), que si bien fue menor que
todos los valores reportados en las cinticas individuales, no se present un valor constante de las
UA entre las horas 0 y 2, como sucedi con algunas cepas. Por el contrario, en las primeras dos
horas, se produjo un incremento de casi 31000 UA, este comportamiento era lo que se esperaba,
puesto que los microorganismos haban sido enriquecidos en el pre-inculo y deban estar
activos metablicamente.
Fig. 9: Cuantificacin de la Actividad Amiloltica y la biomasa del Inoculante Mixto
Luego del incremento en la actividad enzimtica, se produjo una estabilizacin de la misma, que
se mantuvo en un rango entre 40000 y 45000 UA, valores mayores a los demostrados por cada
cepa de manera individual, lo que indica una mayor degradacin de sustrato por parte del
consorcio microbiano (Ayala et al, 2001). As mismo, se observ un comportamiento bastante
estable de la actividad amiloltica entre las horas 4 y 14, lo que sugiere que el consorcio
microbiano adquiere una mayor estabilidad en la produccin de amilasas.
47
Al analizar el recuento de las UFC/mL, tampoco se present una fase de adaptacin (Fig. 9),
puesto que los microorganismos fueron mezclados cuando estaban todos en fase exponencial (1*
106). La tendencia del crecimiento exponencial, se mantuvo a lo largo de las 12 horas de
muestreo, durante las cuales se produjo incrementos de 1 unidad exponencial por hora de
muestreo. Los incrementos en la biomasa, no resultan muy distantes de aquellos obtenidos con
cada una las cepas de manera individual, debido a la estabilidad enzimtica presente en el
inoculante mixto, no obstante, los recuentos de biomasa fueron mayores que en las cinticas
particulares, debido a la actividad enzimtica y tambin al suministro adicional de aire que se les
dio.
Se logr obtener una biomasa mxima de 2*1028 UFC/mL y una actividad amiloltica de 11020
UA en la hora 22. Si bien los microorganismos no presentaron de manera individual, aumentos
en la biomasa ni en la actividad amiloltica por periodos de tiempo tan prolongados, en el
inoculante mixto, se obtuvo tal diferencia, gracias a la cantidad adicional de oxigeno provedo.
Este inoculante se llev a evaluacin en campo durante la fase II.
6.2.5. Fase II: Evaluacin del Inoculante Mixto en campo

Con el fin de controlar de una mejor manera los factores externos al proceso, para la fase II de
evaluacin, el rea de compostaje fue modificada. Se aumentaron sus dimensiones, se cambi el
plstico del techo por uno de mayor resistencia para proteger las pilas del agua lluvia y se
adicionaron paredes en plstico tambin, con el fin de conservar mejor la temperatura bajo el
techo.
Para la evaluacin del inoculante mixto en campo, se determinaron parmetros como la biomasa
de microorganismos amilolticos presentes en el compost, temperatura, pH, %MOT, %COT y
actividad amiloltica. La actividad amiloltica fue determinada, luego de ensayar dos mtodos de
extraccin de amilasas, uno con buffer citrato y el otro con buffer Sorensen.
48
6.2.5.1. Comparacin entre los dos mtodos de extraccin de amilasas

Al determinar la actividad amiloltica presente en las pilas, por los dos mtodos de extraccin, se
encontraron grandes diferencias entre los datos obtenidos para una misma muestra. Las unidades
amilolticas fueron definidas para los dos mtodos de extraccin, como la cantidad de enzima
capaz de liberar 1g de azcares reductores/ g*h.
Se encontr que el mtodo que lograba extraer una cantidad mayor de amilasas fue el que emplea
buffer citrato, que para la pila con inoculante mixto en el tiempo cero indic 41 UA, comparado
con 4.28 UA extradas con el mtodo del buffer Sorensen (Fig.10).
Sharada y Sanjat (2004) en su estudio, extrajeron amilasas con el fin de evaluar la actividad
amiloltica presente en una muestra de suelo. En ese estudio, se hallaron mltiples valores de
UA, desde 8.4 hasta 116 UA, encontrndose la mayora de los valores alrededor de 60 UA. De
acuerdo a estos valores de referencia, es claro, que la cantidad de amilasas extradas con este
mtodo y bajo las condiciones de operacin, no fue lo suficientemente eficaz. An ms, cuando
se obtuvieron valores hasta diez veces ms altos con el otro mtodo.
Fig. 10: Cuantificacin de la Actividad Amiloltica presente en la Pila con Inoculante luego
de utilizar dos mtodos de extraccin de amilasas.
Luego de realizar el anlisis t- student para determinar las diferencias entre los mtodos de
extraccin enzimtica, se rechaz la hiptesis nula (p < 0.0001) (Fig. 12) encontrndose que el
mtodo de extraccin con buffer citrato fue el que cuantific ms UA. A partir de este estudio, se
49
puede considerar un buen mtodo porque present menor desviacin en los datos y una mayor
extraccin de amilasas, adems de una mayor estabilidad en el color luego de realizar SomogyiNelson.
En la pila Control no se presentaron diferencias estadsticamente significativas en cuanto a la
cantidad de UA cuantificadas luego de realizar la extraccin con los dos mtodos, con p > 0.05
(Fig. 11). Aunque se reportan diferencias para el tiempo cero de 15.73 UA con buffer citrato
frente a 1.95 UA extradas con el mtodo del buffer Sorensen (Fig. 12 a.). Los mtodos no
muestran una diferencia significativa entre si, debido a que las medias de cada tcnica presentan
valores similares. Sin embargo, el mtodo de extraccin con el buffer citrato logra hacer una
mayor extraccin de enzimas a partir del da ocho. Si bien el buffer citrato logra hacer una mayor
extraccin de amilasas, la media de los datos obtenida, es similar a la del buffer Sorensen,
porque en el primer caso, se cuenta con valores muy distantes entre si, que hacen que la media
estadstica se ubique en un valor muy cercano al del otro mtodo (Fig. 11).
Fig. 11: Comparacin de los mtodos de extraccin enzimtica para cada uno de los
tratamientos
Pila con inoculante mixto
Pila Control
4
3,5
UA
2,5
UA
1,5
2
1,5
1
0,5
0,5
0
Citrato
Citrato
Sorensen
Sorensen
Buffer Extraccin
Buffer Extraccin
t-Test
9.845
DF
28
Prob> t
<.0001
t-Test
2.023
50
DF
28
Prob> t
0.0527
Fig. 12: Cuantificacin de la Actividad Amiloltica presente en la Pila Control luego de

emplear dos mtodos de extraccin de amilasas. a. Grafico integrado das 0- 7. b. Actividad
amiloltica con buffer citrato en los das 8- 15.
a.
b.
La diferencia entre los dos mtodos de extraccin radica en la presencia del tolueno en el mtodo
del buffer Sorensen, puesto que con este mtodo se formaba una solucin bifsica, que por una
parte puede impedir la solubilidad de las enzimas extradas (Pelez et al., 2004) y por otra parte,
es probable que por la temperatura y el tiempo de incubacin empleados (55 C * 24 horas)
causaran alteraciones en su capacidad de extraer las enzimas. Mientras que el mtodo del buffer
citrato solo formaba una fase acuosa, en la que la solubilizacin de las enzimas pudo haber sido
mayor.
51
Una vez establecido el mtodo del buffer citrato como el que extraj mayor cantidad de amilasas,
los valores de actividad amiloltica mencionados en adelante, hacen referencia a aquellos
cuantificados luego de la extraccin con dicho mtodo.
6.2.5.2.Cuantificacin de la actividad amiloltica de pilas tratamiento y control

Con respecto a la actividad amiloltica para la pila con inoculante (Fig. 10), es evidente un
aumento en la UA entre los das 0 y 2, sin embargo, la actividad amiloltica no permaneci
constante a travs del tiempo, puesto que present picos de ascenso y descenso de las UA. Esto
puede deberse a cortas inhibiciones en la produccin de UA, por exceso de producto (Mathews et
al., 2002).
Si bien se muestran picos de ascenso y descenso en la cantidad de UA para la pila con inoculante
mixto, debe aclararse que la temperatura durante los primeros cinco das, se mantuvo muy
constante, comparado con lo observado en la fase I. Lo cual podra indicar que an cuando las
UA disminuyen, la temperatura no vara, porque existen otro tipo de actividades enzimticas
como la celuloltica, que la mantienen constante.
Al aplicar el anlisis estadstico de Kruskal Wallis se encontr con p= 0.0001(Anexo 4) que
existen diferencias significativas en la actividad amiloltica presente en la pila tratamiento a
travs del tiempo. Esto significa, que no hay un comportamiento estable o constante de la
actividad amiloltica en la pila, sino que la actividad amiloltica flucta todo el tiempo.
La actividad amiloltica inicial de la pila control, fue menor comparada con la del inoculante
mixto, reportando 15.7 UA frente a 41.7 UA de la pila tratamiento (Fig. 13 b.), sin embargo,
present el mismo comportamiento de picos de ascenso y descenso, guardando las proporciones
en la cantidad de UA de cada una.
No obstante, la pila control al cabo del da 7, present un incremento de la actividad amiloltica
de ms de 6000 UA con el buffer citrato. Una posible razn de la mayor actividad en la pila
inoculada es la estimulacin metablica previa que tenan los microorganismos presentes en el
52
inoculante mixto, que por encontrarse en un caldo almidn 1% (p/v) en el momento de la

aplicacin a la pila; la produccin de amilasas era alta mientras que en la pila control los
microorganismos no estaban tan activos, y podra considerarse el intervalo entre los das 0 y 7
como una etapa de adaptacin o estimulacin de esos microorganismos nativos.
El comportamiento descrito por la pila control report tambin diferencias estadsticamente
significativas con respecto a la actividad amiloltica y el tiempo (p < 0.0001, Anexo 4),
presentando la mayor actividad en el da 7 y sugiriendo fluctuaciones de la actividad amiloltica,
que respalda el argumento de que la cantidad de UA es afectada negativamente por la
concentracin de producto presente en la matriz (Mathews et al., 2002).
El anlisis estadstico t- student aplicado para determinar diferencias significativas entre la
actividad amiloltica presente en cada uno de los tratamientos, arroj un valor de p= 0.2540 (Fig.
13) por el cual se acepta la hiptesis nula que afirma que no existen diferencias entre los
tratamientos. Si bien durante los primeros 7 das las pilas mostraron diferencias grandes en los
valores obtenidos de UA, la pila control mostr un aumento significativo en las UA, logrando as
que el resultado final de los dos procesos fuera muy similar.
Fig.13: Comparacin estadstica de las actividades amilolticas entre pilas tratamiento y

control
4
3,5
3
UA
2,5
2
1,5
1
0,5
0
Control
Inculo
TTO
1-way Test, ChiSquare Approximation

Prob>ChiSq 0.2540
53
Durante los primeros 4 das, las dos pilas redujeron sus dimensiones notablemente, situacin
esperada como consecuencia del proceso de degradacin y mineralizacin del material Ayala et
al (2001). Luego de emplear una cantidad cercana a 1000 Kg de lechuga se obtuvo 300 Kg de
compost maduro.
6.2.5.3. Cuantificacin de la biomasa amiloltica presente en las pilas tratamiento y control

La pila con inoculante mixto mostr un recuento de biomasa amiloltica inicial mayor a los
observados en la fase I y en la pila control. Si bien este valor es alto, no corresponde a la biomasa
determinada en el inoculante mixto antes de la aspersin, debido a la disminucin de los
microorganismos del inoculante por la presencia de otros microorganismos en la pila y por el
cambio de las condiciones en las que estaban.
Las dos pilas alcanzaron los recuentos mximos al cabo del tercer da, incremento que
corresponde a los picos de descenso de UA de las dos pilas, sustentando la afirmacin que las
UA disminuyen por inhibicin por producto.
Fig. 14: Recuento de biomasa amiloltica en las Pilas Control y con Inoculante.
An cuando se puede establecer una relacin entre las UA y la biomasa amiloltica presente en
los dos tratamientos, estadsticamente no se encontr una dependencia entre ellos. Con valores
de p> 0.05 y r2 de 0.359 y 0.018 (Anexo 5) para la pila con inoculante mixto y la control
respectivamente. Lo cual indica una correlacin del 35% y el 1.8 % para cada uno de ellos, es
54
decir, que la actividad amiloltica no depende directamente de la biomasa y por lo cual no se

puede establecer una proporcionalidad entre los valores de UA y biomasa amiloltica, para el
caso estudiado. O tambin que los microorganismos presentes en las pilas, cuentan con sistemas
enzimticos muy eficientes, por lo que la biomasa presente es capaz de degradar el sustrato
presente en tan poco tiempo y con tal eficacia.
Al cabo del da 11, se evidencia un comportamiento de estabilizacin de la biomasa para las dos
pilas, como resultado de la disminucin de la temperatura y el agotamiento del sustrato.
6.2.5.4. Cuantificacin de los porcentajes de MOT y COT

En la fase II se decidi realizar la cuantificacin de la materia orgnica por va seca
(calcinacin), ya que este mtodo es ms prctico y econmico en relacin con el de la fase I y
tambin es aplicable a muestras de compost (IHSS, 1996).
La determinacin del contenido de materia orgnica en las muestras en el da 1 del proceso, se
llev a cabo por va hmeda y calcinacin (tabla N 8), con el fin de comprobar la concordancia
entre las dos tcnicas. Se evidenci que los dos mtodos arrojan resultados similares para una
misma muestra, al menos para el caso estudiado, este resultado se puede deber a que la muestra
analizada estaba compuesta por sustratos de estructuras simples que son fcilmente oxidables,
por lo tanto es posible que el dicromato reaccionara con toda la materia orgnica presente.
Segn Magdoff y Weil, 2004 cuando se realiza la determinacin del % MOT por calcinacin los
valores obtenidos son generalmente 25% ms altos que aquellos reportados por va hmeda
puesto que estima el total de MO presente en una muestra por la prdida de peso al someterla a
una temperatura lo suficientemente alta como para volatilizar todo el material orgnico. Por otra
parte, el mtodo de Walkley y Black muestra ciertas desventajas en comparacin con la va seca
como el gasto de reactivos, la oxidacin de la sal ante la luz, las variaciones en los resultados del
blanco, el factor de correccin que se le debe realizar a los resultados debido a que segn la
norma mexicana NMX-AA-021-1985 la reaccin tiene una eficiencia del 72% y finalmente la
poca efectividad por parte del dicromato para oxidar compuestos aromticos complejos como
55
sustancias hmicas presentes en la materia orgnica (Rumpel et al., 2007; Knicker et al., 2007).
Esta ltima razn indica que si se cuantifica % MOT por ambos mtodos para una muestra de
compost en un estado ms avanzado del proceso, los resultados seguramente no seran similares.
Tabla 8. Resultados %MOT al cabo del segundo da de compostaje por va hmeda y seca.
Mtodo
% MOT pila control
% MOT pila con

inoculante
Va hmeda
63. 493
52.083
Va seca
63.200
53,132
El % MOT inicial en la fase I fue mayor que el de la fase II (fig. 5 y 15), porque el material
empleado en la segunda fase se encontraba ms degradado, a causa del tiempo de recoleccin del
material, que fue de 5 das, tiempo en el cual se inici el proceso de mineralizacin, que redujo la
cantidad de materia orgnica presente en la mezcla.
Fig. 15: Comportamiento la materia orgnica (% m/m) en las pilas tratamiento y control.
El porcentaje inicial de MOT depende directamente de los materiales a compostar, al igual que la
tasa de degradacin (Bernal et al., 1998). El % MOT en una matriz de estudio, puede variar de
acuerdo a los materiales que contenga. En un estudio realizado por Huang et al., 2005 el
porcentaje de MOT inicial era del 64% a partir de heces de vaca y pollo, paja, residuos de
championes y salvado de arroz, mientras que en un estudio realizado por Sebastia et al., 2007
56
fue del 96.3% a partir de residuos de plantas conferas, demostrando as que segn el material
compostado se pueden encontrar diversos porcentajes de MOT inicial.
Como se observa en la fig. 16 a medida que transcurre el tiempo hay una disminucin en el
porcentaje de materia orgnica total, lo cual se debe a la mineralizacin por parte de los
microorganismos presentes en el compost (Zbytniewski y Buszewski, 2005; Castaldi et al., 2005;
Zmora-Nahum et al., 2005). No obstante, las dos pilas reportaron incrementos en el % MOT en
diferentes momentos, comportamiento que puede deberse a que durante el proceso de
compostaje hay degradacin del sustrato y sntesis de nuevos compuestos, como sustancias
hmicas responsables de la estabilidad del producto final (Charest et al., 2003; Said-Pullicino et
al., 2007). Hernndez et al., 2005 reportaron que en un compost que contena lodos residuales se
encontraban altas cantidades de cido actico al final del proceso por la pirlisis de la formacin
de nuevos carbohidratos. Por otra parte, el que este fenmeno ocurra primero en la pila con
inoculante hace pensar que el proceso estaba ocurriendo ms rpido en dicha pila.
El test t-studient mostr un p= 0.796 lo que quiere decir que no hay diferencias significativas en
el contenido de MO en las dos pilas (Anexo 6). Al analizar el comportamiento de la MO frente al
tiempo, se encontraron valores de p= 0.0004 y p= 0.0005 para el tratamiento y el control,
respectivamente lo que indica que hay diferencias estadsticamente significativas en los dos
casos.
Existen diferentes teoras respecto a la cantidad de COT presente en la MO, Magdoff y Weil,
2004 establecen que el 77% de la MO es CO mientras que otros autores como Faithfull N, 2005
y Zmora-Nahum et al,2005 proponen que es solo del 58%. Al final del proceso el % COT para la
pila con inoculante y control fue 33,3% y 29,5% respectivamente (Fig. 16), lo cual segn la NTC
5167 de 2004 para abonos orgnicos indica que el producto final es de buena calidad, ya que la
norma pide que el % COT se encuentre por encima del 15%. Este resultado coincide con el
obtenido por Huang et al., 2005 donde el porcentaje de COT al final del proceso de compostaje
(63 das) se encontraba alrededor del 33%.
57
Fig. 16: Carbono Orgnico Total presente en las pilas tratamiento y control
Las sustancias hmicas son resistentes a la degradacin y la mayora de sus componentes

contienen carbono orgnico en el compost maduro; por esta razn la disminucin en el carbono
orgnico es un buen indicador de la madurez del producto final (Garca et al., 1991; Inbar et al.,
1991; Zmora-Nahum et al., 2005). Bernal et al., (1998) encontr que el carbono orgnico est
altamente correlacionado con la cantidad de carbono mineralizado, observando esto en siete
compost realizados a partir de desechos agrcolas y residuos municipales. Las altas tasas de
mineralizacin en un compost inmaduro pueden causar efectos perjudiciales sobre el crecimiento
de las plantas ya que generan la competencia por el nitrgeno y el oxgeno.
6.2.5.5. Anlisis de la temperatura y el pH

La temperatura a lo largo del proceso se comport de forma similar en ambas pilas (Figura 17),
demostrando que aunque
la pila con inoculante posea en teora una mayor cantidad de
microorganismos termfilos, en realidad este hecho no sirvi para marcar una diferencia
estadsticamente significativa respecto a la pila control con un p = 0.796 (Anexo 7). Esto se
puede deber a varias razones; primero a que los microorganismos del inoculante demostraron
una actividad ptima en el laboratorio a los 55 C, temperatura que no se logr en campo, debido
la incapacidad de las pilas de mantener el calor o tambin a las dimensiones de las mismas.
Por otra parte, es bien conocido que despus de agregar un inoculante, la biomasa de este
disminuye por el cambio drstico de ambiente representado en la interaccin con otros
microorganismos y la presencia de otras fuentes nutricionales; y finalmente, a que los
58
microorganismos del inoculante fueron aislados de las pilas de compost elaboradas en la fase I,
por lo tanto la pila control tambin posea las mismas poblaciones microbianas y al aadir el
agua melaza se estimul el aumento de dichos microorganismos, quienes a su vez incrementaron
la actividad amiloltica luego de un periodo de 7 das (Fig. 12).
Fig. 17: Temperaturas alcanzadas por las pilas tratamiento y control.
En los primeros 6 das del proceso, la temperatura se mantuvo alrededor de los 40 C, que fue la
ms alta alcanzada durante todo el proceso. En estos primeros das fue cuando ocurri el mayor
cambio del material compostado, ya que la pila disminuye drsticamente de tamao, y la lechuga
fue degradada casi por completo.
A partir del da 7 se observ un descenso constante en la temperatura hasta alcanzar su valor el
cual para la pila control fue de 20 C y para la pila con inoculante de 18 C (Fig. 17). Segn
Saebo y Ferrini (2006), el pH y la temperatura son dos variables dependientes entre s, de tal
manera que a medida que aumenta la temperatura del compost, se espera un descenso en el pH.
Esto ocurre debido a que los microorganismos mineralizan los sustratos presentes en las pilas
generando calor a partir de sus reacciones metablicas (lo que explica el aumento de la
temperatura) y se generen cidos orgnicos que bajan el pH (Avendao, 2003).
Todo lo anterior concuerda con lo observado en la figura 18, ya que en los primeros das
mientras la temperatura increment, el pH disminuy y alrededor del da 7 aument como
consecuencia de la formacin de amonaco y el consumo de los cidos producidos en los
59
primeros das (Guerra et al., 2001), hasta neutralizarse al final del proceso debido a las
propiedades naturales de tampn de la materia orgnica (Graves, 2000). Finalmente se puede
decir que segn los valores finales tanto de la temperatura como del pH en ambas pilas el
compost ya se encontraba maduro en el da 15 del proceso (Saebo y Ferrini., 2006).
Fig. 18. Comportamiento del pH en las pilas Control y con Inoculante
Finalmente, se encontr que en cuanto al pH tampoco se presentaron diferencias

estadsticamente significativas entre los tratamientos (p= 0.92, Anexo 7), lo que indica que en
trminos generales los procesos de descomposicin en las pilas fue muy similar.
6.2.5.6. Caractersticas Fisicoqumicas obtenidas en los tratamientos

Se determinaron las caractersticas fisicoqumicas de cada uno de los tratamientos y se
compararon con los valores de referencia exigidos por la NTC 5167/04. Los anlisis fueron
llevados a cabo por Agrilab, laboratorio certificado por el ICA.
En la tabla N 9 se puede apreciar que los valores para la mayora de los parmetros evaluados
no difieren mucho entre el tratamiento y el control, puntualmente en aspectos importantes como
C/N, pH y nitrgeno orgnico, cumpliendo con los parmetros fisicoqumicos exigidos por la
norma.
La caracterizacin fisicoqumica (tabla N 9) pone de manifiesto la excelente calidad del abono
orgnico obtenido en los dos casos. Una relacin C/N de 11 y 12 para el tratamiento y control,
60
que segn la NTC 5167 debe ser inferior a 25 y cercana a 15 segn Ribeiro et al.,(2007). De
igual forma, Ballesteros (2001) propone que el carbono disminuye debido a que el carbono se
convierte en anhdro carbnico, por lo cual la relacin C/N debe alcanzar un valor cercano a 10/1
al concluir el proceso; esto concuerda con los resultados obtenidos por Kalil et al (2007) donde
despus de 75 das de compostaje de residuos de plaza, poda y contenido ruminal, obtuvo una
relacin C/N final de 11.
Las diferencias en los valores de MOT y COT reportados por Agrilab (tabla N 9) y los
obtenidos en el Laboratorio de Microbiologa Ambiental y de Suelos, radica en los mtodos
empleados, puesto que ellos utilizan Walkley y Black, mientras que para este caso se emple
calcinacin.
El pH es otro parmetro importante, puesto que la aplicacin de un compost con pH muy cidos
o alcalinos, puede afectar la estabilidad del suelo acidificndolo o alcalinizndolo. En los dos
casos, los valores fueron muy cercanos a 7, lo cual demuestra la estabilidad y madurez del
compost obtenido.
La humedad fue un parmetro que no cumpli ninguno de los dos productos finales, dado que
fue mayor a 35%, sin embargo, el compost puede ser sometido a un proceso de secado,
extendindolo en una superficie plana, de tal manera que logre secarse. La pila con inoculante
result tener un mayor porcentaje de humedad que la pila control, en parte debido a que los
microorganismos fueron adicionados en suspensin y esto puedo contribuir al aumento de la
humedad.
El contenido tanto de macro como de microelementos del compost, cumple con la normatividad
colombiana vigente, sugiriendo el alto valor nutricional que tiene el abono como tal y
respondiendo a la efectividad y calidad del proceso. Adems, se puede establecer que an cuando
el tiempo de compostaje fue reducido en ms del 50 % con respecto a la fase I, se conserv la
calidad fisicoqumica del producto final.
61
Tabla N 9: Caractersticas fisicoqumicas del compost obtenido durante la fase II.

UNIDAD
PILA
CONTROL
PILA
INOCULANTE
MIXTO
LIMITES
PERMITIDOS
(NTC 5167/04)
6.86
6.87
5-8
FISICOQUIMICA
pH
Densidad
Aparente
g/mL
0.54
0.56
MENOR DE 0.6
Humedad
46.6
53.5
MENOR DE 35
meq/100g
55.6
59.2
MAYOR DE 30
12
11
MENOR DE 25
19
17.8
C.I.C
C/N
Carbono
orgnico
Oxidable
MAYOR DE 15
Nitrgeno
1.59
1.57
Fsforo
1.07
1.12
Potasio
2.39
2.57
Calcio
1.22
1.27
Magnesio
0.49
0.54
Azufre
0.21
0.21
Boro
ppm
21
23
Cobre
ppm
13
12
Manganeso
ppm
245
213
Hierro
0.47
0.50
Zinc
115
109
Sodio
1450
1400
DECLARARLO SI
SON MAYORES DE
1%
(Fuente: Agrilab, 2007)
6.2.5.7. Calidad microbiolgica del compost obtenido

Existe un importante aspecto de salud relacionado con la aplicacin del compost, el cual est
dado por la incidencia de enfermedades producidas por los microorganismos patgenos durante
la disposicin y utilizacin insalubre de estos productos. Buenas prcticas agrcolas y de higiene
62
son necesarias para proteger los cultivos de la contaminacin con los patgenos presentes en
estos biofertilizantes, adems de que se precisan de ms investigaciones para determinar como se
propagan en el campo estos microorganismos (Gmez et al., 2004).
Los resultados obtenidos por el CIAA se muestran en la tabla 10, en la cual se observa la
presencia de Salmonella sp. y E. coli en el compost obtenido a partir de las dos pilas.
Tabla N 10: Caracterizacin microbiolgica del compost

Tratamiento
Inoculante Mixto
Anlisis
Recuento de E. coli por NMP
Recuento de Salmonella sp. Por NMP
Control
Recuento de E. coli por NMP

Recuento de Salmonella sp. Por NMP
Resultado
480 NMP/g
1,01 NMP/4g
>2400 NMP/g
< 0.59 NMP/4g
De acuerdo con la norma chilena 2880 de 2004, la cantidad de Salmonella sp debe ser < 3 NMP/
4g, indicando que con respecto a este microorganismo patgeno el compost obtenido por los dos
tratamientos cumplen con los requisitos sanitarios impuestos por la norma. Sin embargo, el valor
permisible para coliformes es < 1000 NMP/g, como se observa en la tabla 10, el compost
obtenido para el control reporta para E. coli un valor superior, por lo cual debe ser reportado
como no apto para su uso en cultivos. Mientras que para el compost obtenido por tratamiento con
inoculante mixto, se observa que para E.coli el valor es inferior al requerido por la norma, por lo
cual, podra utilizarse en los cultivos de lechuga.
E.coli no es considerado un microorganismo patgeno si no un indicador de contaminacin fecal,
por lo tanto la presencia de esta bacteria en el compost puede estar dada por una mala higiene por
parte de lo trabajadores de la finca o el uso de pasto que tuvo contacto con los animales. Por otra
parte, este microorganismo es encontrado normalmente en el suelo, el problema consiste en que
cuando la temperatura alcanza los 37 C su poblacin aumenta pudiendo ser un riesgo para la
salud de las personas si se aplica el compost al cultivo.
La incidencia de Salmonella sp. y E.coli en primer lugar se debe a que la temperatura no fue lo
suficientemente alta y duradera como para eliminar estos microorganismos durante el proceso de
63
compostaje, que como Ribeiro et al, 2007 reportan, debe ser mayor a 40 C y con una duracin
mayor a una semana. Dado que ninguno de los dos tratamientos logr este comportamiento, era
de esperarse que los microorganismos persistieran. Por otro lado, el tiempo y la temperatura
necesaria para eliminar o reducir los peligros microbianos en el compost u otras materias
orgnicas puede variar segn el clima de la regin y las prcticas concretas de gestin ambiental
aplicadas en cada caso (FAO, 2000).
Pietronave et al, 2004 afirman que una gran variedad de microorganismos patgenos pueden ser
encontrados en las materias primas empleadas en un proceso de compostaje, siendo la causa mas
frecuente de contaminacin el contacto de los materiales con heces fecales. Sin embargo, Islam
et al., (2005) asegura que la contaminacin puede provenir de otras fuentes como riego con agua
contaminada, contacto con compost no apto microbiolgicamente, suelo, aire y manipulacin
humana.
Una de las actividades incluidas en la siembra de lechuga en la Hacienda Villa Amparo
incluye la aplicacin de compost proveniente del cultivo de flores. Debido a que no se tienen
datos de la calidad de dicho compost y que segn Lyon, 2000 los microorganismos patgenos
pueden sobrevivir en el compost hasta 60 das, se podra pensar en este como una fuente de
contaminacin.
Por otra parte, Islam et al., (2005) reporta que organismos como E.coli, pueden sobrevivir en el
suelo hasta por 196 das. Teniendo en cuenta lo anterior, se puede decir que el suelo fue un factor
importante de contaminacin, puesto que en un principio el suelo estaba descubierto y propenso
al contacto con aire, lluvia y heces de animales, adems del hecho de que la impermeabilizacin
del suelo era parcial, por lo que con los volteos las pilas en algn momento estuvieron en
contacto con el suelo.
64
7. CONCLUSIONES
De acuerdo a los resultados obtenidos, se puede concluir que:
1. Se logr aislar exitosamente cinco cepas de microorganismos amilolticos, descritas
como AA1, AA2, AA3, AA4 y AA5. Reportndose AA1 y AA2 como las cepa con
mayor actividad amiloltica con valores mximos de 41509 UA y 40077 UA,
respectivamente.
2. Se logr obtener compost a partir de residuos de lechuga, cascarilla de arroz y poda de
pasto kikuyo, demostrando que con el uso en determinada proporcin de estos
materiales se puede lograr la relacin C/N optima para obtener un compost
fisicoqumicamente de buena calidad (nitrgeno, fsforo y potasio mayor a 1%, pH
neutro y relacin C/N menor a 25) de acuerdo a la Norma Tcnica Colombiana 5167 de
2004.
3. Se cuantific la actividad amiloltica como indicador del progreso del proceso de
degradacin de la materia orgnica, encontrndose una mayor produccin de amilasas en
la pila tratamiento.
4. La evaluacin del mtodo de extraccin enzimtica, permiti demostrar estadsticamente
que la extraccin con buffer citrato fosfato resulta mucho mejor en la recuperacin de
amilasas a partir de muestras de compost.
5. El porcentaje de materia orgnica inicial para las pilas tratamiento y control se encontr
alrededor del 70%, aunque el tratamiento present una mayor degradacin durante la
primera semana en comparacin con la pila control. Sin embargo, al final del proceso las
dos pilas reportaron valores para MOT similares, permitiendo concluir que aunque el
inoculante mixto acelera el proceso en un principio, las caractersticas finales del
compost obtenido por los dos mtodos son muy similares para los dos tratamientos.
65
8. RECOMENDACIONES
A partir de esta experiencia se sugiere:
Evaluar diferentes mezclas y materias primas manteniendo la relacin C/N inicial de 25 a
30, para evaluar si dichas mezclas logran tener un efecto en la temperatura,
aumentndola y mantenindola por ms tiempo.
Asegurarse de que la zona de compostaje este totalmente aislada del medio exterior, con
el fin de reducir al mximo las fluctuaciones de temperatura en las pilas, debidas a los
impactos ambientales no controlados que varan el proceso.
Cuantificar el porcentaje de materia orgnica (MOT) por va seca o calcinacin, puesto
que este mtodo muestra menos desventajas respecto a la va hmeda.
Evaluar si bajo diferentes condiciones de temperatura y tiempo de incubacin, la
eficiencia en la extraccin de las amilasas mostrada en este estudio por el mtodo del
buffer citrato, se mantiene con respecto al mtodo del buffer Sorensen.
66
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ANEXO 1
COMPOSICIN DE BUFFERS SORENSEN Y CITRATO- FOSFATO
BUFFER SORENSEN 0.5 M, pH 5.5 (Ruzin S., 1999).
Preparacin para 2 L
NaH2PO4
117.676 g
Na2HPO4
2.715 g
Agua destilada
2L
BUFFER CITRATO FOSFATO 0.1 M pH 5.8 (Ruzin S., 1999).
1. Preparar una solucin de fosfato dibsico de sodio (Na2HPO4 * 12 H2O) al 0.2 M con un
volumen final de 557.5 mL. Para esto se debe agregar 15.833 g de fosfato dibsico de
sodio a 557.5 mL de agua destilada.
2. Preparar una solucin de cido ctrico al 0.1 M con un volumen final de 442.5mL. Para
esto se debe agregar 8.496 g de cido ctrico a 442.5 mL de agua destilada.
3. Mezclar las dos soluciones realizadas anteriormente.
4. Medir el pH y ajustar con el cido o la base segn sea necesario para alcanzar un pH
final de 5.8.
79
ANEXO 2
AGAR ALMIDN al 1% p/v (preparacin para 1 L)
Almidn 10 g
Extracto de levadura 2.5 g
Peptona universal 2.5 g
Sulfato de amonio 0.5 g
Cloruro de calcio 0.5 g
Fosfato monobsico de potasio 0.1 g
Fosfato dibsico de potasio 0.1 g
Agar 15 g
(Esterilizar 7 minutos a 7 lb de presin). pH 7 +/- 0.2
SAL FERROSA
1. Pesar 12,0432 g de FeSO4 7H2O y disolver en 4 L de agua destilada fra.

2. Almacenar en un frasco mbar.
Recomendaciones
- Preparar el reactivo el mismo da en que se va a usar, de lo contrario las sales que lo componen
se precipitarn y el resultado no seria significativo.
- Adicionar el agua destilada fra, de lo contrario el hierro se oxidar.
AGUA- MELAZA
Agregar 25 Kg de melaza por cada 2 litros de agua.
80
ANEXO 3
CURVA DE CALIBRACION PARA SOMOGYI- NELSON
81
ANEXO 4
ACTIVIDAD ENZIMTICA (CITRATO)
CONTROL
Oneway Analysis of UA By Time
100
90
80
70
UA
60
50
40
30
20
10
0
0
10 11 12 13 14
Time
Count
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
INOCULANTE MIXTO
110
100
90
80
70
UA
Level
0
1
10
11
12
13
14
2
3
4
5
6
7
8
9
Wilcoxon / Kruskal-Wallis Tests (Rank Sums)

Score Sum
Score Mean
(Mean-Mean0)/Std0
33
11,0000
-1,616
110
36,6667
1,843
113
37,6667
1,980
87
29,0000
0,796
57
19,0000
-0,523
52
17,3333
-0,751
75
25,0000
0,250
132
44,0000
2,844
66
22,0000
-0,114
24
8,0000
-2,025
50
16,6667
-0,842
13
4,3333
-2,526
8
2,6667
-2,753
119
39,6667
2,253
96
32,0000
1,206
ChiSquare
DF
Prob>ChiSq
42,8248
14
<.0001
60
50
40
30
20
10
0
0
10 11 12 13 14
2
Time
82

Count
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
Score Sum
56
112
119
85
39
23
85
131
6
16
40
52
108
81
82
Score Mean
18,6667
37,3333
39,6667
28,3333
13,0000
7,6667
28,3333
43,6667
2,0000
5,3333
13,3333
17,3333
36,0000
27,0000
27,3333
(Mean-Mean0)/Std0
-0,569
1,934
2,252
0,705
-1,342
-2,070
0,705
2,798
-2,844
-2,389
-1,297
-0,751
1,752
0,523
0,569

ChiSquare
41,8037
DF
14
Prob>ChiSq
0,0001
BUFFER CITRATO COMPARANDO TTOS

4
3,5
3
2,5
UA
Level
0
1
10
11
12
13
14
2
3
4
5
6
7
8
9
2
1,5
1
0,5
0
Control
Inculo
TTO

ChiSquare
1,3011
DF
1
83
Prob>ChiSq
0,2540
ANEXO 5
CORRELACIN BIOMASA Vs UA INOCULANTE
UA
(r25 = 0.359, p > 0.05)
Observed
80.00
Linear
60.00
40.00
20.00
0.00
6.00
7.00
8.00
9.00
10.00
11.00
12.00
Independent:
13.00
Biomasa
Dependent Mth
UA
LIN
Rsq
d.f.
,359
2,80
Sigf
Biomasa
b0
b1
,155 102,259 -5,9950
BIOMASA Vs UA CONTROL
UA
Observed
7000.00
Linear
6000.00
5000.00
4000.00
3000.00
2000.00
1000.00
0.00
4.00
6.00
8.00
10.00
12.00
Biomasa
Independent: Biomasa
Dependent Mth
Rsq d.f.
UA
LIN ,018
5
F
,09
Sigf
b0
b1
,775 1033,85 128,115
84
ANEXO 6
% MO EN LOS TRATAMIENTOS.
75
% MOT Inoculo
70
65
60
55
50
45
40
Control
Inoculo
TTO
t-Test
Estimate
Std Error
Lower 95%
Upper 95%
Difference
t-Test
-0,7973
-0,261
3,0578
-7,1083
5,5137
Assuming equal variances
85
DF
24
Prob > |t|

0,7965
INOCULANTE
70
65
% M.O
60
55
50
45
40
0
10
13
14
15
Time

Level
0
1
10
13
14
15
2
3
4
5
6
7
8
Count
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
Score Sum
114
71
16
10
67
87
55
102
99
63
29,5
35,5
31
Score Mean
38,0000
23,6667
5,3333
3,3333
22,3333
29,0000
18,3333
34,0000
33,0000
21,0000
9,8333
11,8333
10,3333
(Mean-Mean0)/Std0
2,820
0,553
-2,293
-2,609
0,343
1,397
-0,237
2,187
2,029
0,132
-1,581
-1,265
-1,502

ChiSquare
35,7511
DF
12
Prob>ChiSq
0,0004
CONTROL
70
% M.O
65
60
55
50
45
40
0
10
13
14
15
Time

Level
Count
Score Sum
Score Mean
86
(Mean-Mean0)/Std0
Level
0
1
10
13
14
15
2
3
4
5
6
7
8
Count
3
3
3
3
3
3
3
3
2
3
3
3
3
Score Sum
110
103
34
6
22
62
77
80
45
93
42,5
34,5
32
Score Mean
36,6667
34,3333
11,3333
2,0000
7,3333
20,6667
25,6667
26,6667
22,5000
31,0000
14,1667
11,5000
10,6667

ChiSquare
34,8662
DF
12
87
Prob>ChiSq
0,0005
(Mean-Mean0)/Std0
2,761
2,382
-1,299
-2,815
-1,949
0,162
0,974
1,137
0,360
1,841
-0,839
-1,272
-1,408
ANEXO 7
COMPARACION DEL pH EN LOS TRATAMIENTOS EVALUADOS
8,5
pH
7,5
7
Control
Inoculoante
TTo
t-Test
Difference
t-Test
0,01600
0,099
0,16220
-0,31626
0,34826
Assuming equal variantes
Estimate
Std Error
Lower 95%
Upper 95%
DF
28
Prob > |t|

0,9221

ChiSquare
14,0000
DF
14
Prob>ChiSq
0,4497
COMPARACION DE LA TEMPERATURA EN LOS TRATAMIENTOS EVALUADOS

45
40
35
30
25
20
15
Control
Inoculoante
TTO
t-Test
Estimate
Std Error
Lower 95%
Upper 95%
Difference
-0,7100
2,7209
-6,2836
4,8636
t-Test
-0,261
88
DF
28
Prob > |t|

0,7960

Tesis 129

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PRODUCCION Y EVALUACION DE UN INOCULANTE MICROBIANO CON

CAPACIDAD AMILOLITICA A PARTIR DE UN PROCESO DE

Laura Carolina Barrera Beltrn

PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA

Artculo 23 de la resolucin No. 13 de julio de 1946

PRODUCCION Y EVALUACION DE UN INOCULANTE MICROBIANO CON

Laura Carolina Barrera Beltrn

PRODUCCION Y EVALUACION DE UN INOCULANTE MICROBIANO CON

Laura Carolina Barrera Beltrn

Agradezco a Dios por permitirme llegar a este punto de mi vida,

Lechuga (Lactuca sativa)

2.1.2 Ciclo de cultivo

2.1.3 Requerimientos Fisicoqumicos

2.1.5 Aportes Nutricionales

2.2.1 Factores determinantes del compostaje

2.2.2 Caractersticas fisicoqumicas

2.2.3 Calidad del compost

2.3.1 Materia orgnica

2.3.2 Enzimas en procesos de compost

Recoleccin de las muestras

5.1.1 Sitio de muestreo

5.1.2 Recoleccin de muestras

5.2.1 Fase I: Caracterizacin del proceso de compostaje

5.2.1.2 Actividad enzimtica del compost

5.2.1.3 Evaluacin de dos mtodos para extraccin de amilasas

5.2.1.4 Cuantificacin de azcares reductores mediante la tcnica de

5.2.1.5 Cuantificacin de la biomasa microbiana presente en el compost 23

5.2.2 Produccin del inoculante mixto

5.2.2.1 Aislamiento primario de cepas amilolticas

5.2.2.2 Aislamiento secundario y seleccin

5.2.3 Conservacin de cepas

5.2.4 Seleccin de cepas por antagonismo

5.2.5 Curvas de crecimiento

5.2.5.1 Elaboracin de pre- inculo

5.2.5.2 Fermentacin discontinua

5.2.6 Curva de crecimiento del inoculante mixto

5.2.7 Produccin del inoculante mixto

Evaluacin del inoculante mixto en campo

5.3.1 Variables evaluadas

5.3.1.1 Determinacin de materia orgnica

5.3.1.2 Caracterizacin microbiolgica del compost

Caracterizacin del proceso de compostaje

6.1.2 Seguimiento de la actividad amiloltica y biomasa de

6.1.3 Cuantificacin de MOT y COT

Fase I: Produccin del inoculante mixto

6.2.1 Aislamiento de microorganismos amilolticos termfilos

6.2.2 Seleccin de las cepas por antagonismo

6.2.3 Curvas de crecimiento

6.2.4 Curva de crecimiento del inoculante mixto

6.2.5 Fase II: Evaluacin del inoculante mixto en campo

6.2.5.1 Comparacin entre los dos mtodos de extraccin de amilasas

6.2.5.2 Cuantificacin de la actividad amiloltica de las pilas tratamiento y

6.2.5.3 Cuantificacin de la biomasa amiloltica en las pilas tratamiento y

6.2.5.4 Cuantificacin de los porcentajes de MOT y COT

6.2.5.5 Anlisis de la temperatura y el pH

6.2.5.6 Caractersticas Fisicoqumicas obtenidas en los tratamientos

6.2.5.7 Calidad microbiolgica del compost obtenido

Composicin nutritiva de la lechuga

(100 g porcin comestible)

Composicin qumica de la cascarilla de arroz

Parmetros a caracterizar en el abono segn NTC 5167/04

Parmetros que permiten determinar la calidad del compost

Caractersticas morfolgicas de las cepas con actividad amiloltica