Universidad Tecnolgica de

Chile
Instituto profesional
Centro de formacin tcnica

LABORATORIO N 2
CUANTIFICACIN DE PROTENAS SEGN EL MTODO DE
BRADFORD

Integrantes:

Docente:
Restaino
Asignatura:

Valeska Cea
Dasna Concha
Claudia Cruz
Stephany Lerma
Carmen
Gloria
Bioqumica

INTRODUCCIN
Las protenas son macromolcula formada por una larga cadena lineal de aminocidos unidos por
enlaces peptdicos. Las protenas se repliegan adquiriendo una configuracin tridimensional, lo que
junto a los aminocidos que la componen determina su actividad y funcin biolgica.
Este mtodo es un ensayo calorimtrico para la medicin de protenas totales en una solucin dada
involucra la unin de un colorante. el azul de cromassie a las protenas en un medio cido y su
cambio de absorbancia de 465 nm a 595 nm. Debido a que el reactivo causo la precipitacin de la
protena con el tiempo la lectura de absorbancia se debe realizar de forma rpida. Las protenas se
unen a la forma azul para dar un complejo protena colorante con un coeficiente de extincin mayor
que el colorante libre la determinacin del contenido proteico de una muestra requiere la
comparacin de un valor de la absorbancia

de la muestra con los resultados obtenidos a partir de

actividades conocidas de protenas con las que se construye una curva de calibracin. A mayor
cantidad de protenas mayor color desarrollado, por lo tanto mayor absorbancia, es por ello que se
considera un cromatforo exoquino , este es un mtodo que depende de la interaccin relativa
inespecfica entre un colorante hidrfobo y las protenas por lo que es sensible a la presencia de
contaminantes tales como restos de lquidos orgnicos y detergentes , ya que las protenas pueden
perder su estabilidad y perder su forma activa , lo que provocara la perdida de la unin entre los
cromforos y la zona hidrofobica de las protenas.
Para determinar la concentracin total de las protenas se requiere una curva de calibracin
empleando una protena patrn que generalmente es la servo albumina se preparan tubos con
diferentes cantidades de protenas y otra dilucin llamada blanco el cual contiene agua y reactivo de
Bradford, y los tubos testigos se le mantiene constante el reactivo de Bradford siendo los volmenes
de todos los tubos iguales, una vez preparado los tubos se mide la absorbancia a cada uno de ellos
a una longitud de onda de 595 nm es calibrado el equipo con el tubo que contiene el blanco de esta
manera se construye la grfica de absorcin versus concentracin . Objetivo: determinar la
concentracin de protenas en una solucin de albumina de suero bovino de( bsa) en diferentes
concentraciones.

Parte experimental
Materiales

Reactivos

Gradilla

Solucin patrn BSA 500mg/ml

16 tubos de ensayo

Agua destilada

Pipetas

Reactivo de Bradford

DESARROLLO EXPERIMENTAL
Se comenz por la recoleccin oportuna del material que usamos.
Se lav con detergente y se ambientaron con agua destilada todo el material de vidrio que se utiliz.
De acuerdo a la siguiente tabla, y con bastante precaucin se prepar en tubos de ensayo una
batera de 8 muestras.
Tubo

Solucin BSA

1
2
3
4
5
6
7
8
9

0,1
0,1
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2

Agua (ml)

Volumen final (ml)

BSA (mg/ml)

9,9
4,9
4,8
4,6
4,4
4,2
4,0
3,8

10
5
5
5
5
5
5
5

5
10
20
40
60
80
100
120

(ml)

Foto

A partir de estas muestras se prepar otra batera de 8 muestras, tomando por separado 0,6 ml de
cada tubo las cuales para diferenciarlo de la batera anterior se identificaron como 1, 2, 3, 4, 5,6, 7,8
a cada uno de estos tubos se les agrego 3ml de reactivo de Bradford.

Foto

Se procedi a medir observancia a 595 nm, longitud de onda, separadamente se prepar un

problema blanco con 0,5ml de agua destilada y 3ml de reactivo de Bradford, al cual igualmente se
midi observancia a una longitud de onda de 595nm , antes de cada tubo de muestra.
Se midi observancia a dicha longitud de onda a todas las muestras de los tubos de la segunda
batera.
Una vez obtenidos e impresos los datos se procedi a graficar observancia v/s concentracin

DATOS DEL GRAFICO

BSA (mg/ml) eje X
5
10
20
40
60
80
100
120

Absorbancia eje Y
-0,40
0,015
0,040
0,232
0,286
0,322
0,383
0,551

CALIBRACION
Curva patrn BSA

COMENTARIO GRAFICO
Primero queremos concluir que es de suma importancia la precisin en el procedimiento, ya que se
ve alterado el grafico y valores, pueden cambiar y arrojar una curva imprecisa que no nos ayudara
con el real objetivo del grfico.
Al agregar el reactivo de Bradford podemos observar una diferencia en los colores debido a la
concentracin de la solucin.
El primer dato nos dio negativo, esto se puede deber a un error humano en la preparacin del
reactivo blanco utilizado, que principalmente no nos incluy considerablemente en le grfico.
Al realizar el grafico trazamos una curva promedio la que claramente tiene tendencia a (mientras
ms concentracin mayor absorbancia).