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Botucatu, SP
2012
Botucatu, SP
2012
Agradecimentos
ii
Agradecimentos
Agradeo primeiramente a Deus, por me dar fora em todos os momentos de minha
vida.
Aos meus pais, Jos e Marli, pela confiana em mim depositada em todos os
momentos, por todo o apoio e incentivo que me deram aos estudos e, principalmente, aos
conselhos para no desistir apesar das dificuldades.
minha irm Francislaine, por me incentivar e acreditar em mim desde o incio.
Aos meus sobrinhos, Gabriela, Igor e Isadora, por aguentarem essa tia desastrada e
pelo carinho e alegria que me proporcionam.
Ao meu namorado, Daniel, pelo carinho, apoio e incentivo em todas as minhas
atividades.
Ao meu orientador, Prof. Dr. Reinaldo Jos da Silva, pelos ensinamentos,
oportunidade e confiana em mim depositada desde o incio. Voc uma pessoa por quem
tenho muito respeito, carinho e admirao. Muito obrigada por tudo!
Profa. Dra. Maria Conceio Zocoller Seno, de quem recebi os primeiros
ensinamentos na rea de Parasitologia. Obrigada pela amizade e por ter compartilhado
comigo seus conhecimentos e suas experincias, com toda pacincia, carinho e simplicidade
que possui.
minha companheira Lidiane, que vem compartilhando comigo as dificuldades e
alegrias desde a poca da graduao, obrigada pela amizade, companheirismo e conselhos.
Voc uma pessoa muito especial em minha vida!
Aos pesquisadores da APTA de Votuporanga/SP, Fabiana e Srgio, pela
oportunidade concedida, ensinamentos e pelo auxlio para a realizao deste trabalho.
iii
iv
Sumrio
Resumo............................................................................................................... 2
Abstract.............................................................................................................. 4
Introduo geral
A piscicultura no Brasil........................................................................................... 6
Principais problemas relacionados sanidade em pisciculturas no Brasil.............. 9
Principais parasitoses em cultivo de tilpias no Brasil........................................... 10
Infeces bacterianas que afetam tilpias em cultivo............................................. 12
Consideraes finais............................................................................................... 14
Referncias bibliogrficas...................................................................................... 14
Objetivos
Gerais...................................................................................................................... 20
Especficos.............................................................................................................. 20
Artigo 1
Ectoparasitas de tilpias do Nilo (Oreochromis niloticus) provenientes de cultivo
em tanques-rede e suas inter-relaes com as variveis limnolgicas e fase de
criao..................................................................................................................... 21
Resumo............................................................................................................. 22
Abstract............................................................................................................ 23
Introduo.........................................................................................................24
Material e mtodos........................................................................................... 25
Resultados........................................................................................................ 29
Discusso.......................................................................................................... 41
Referncias bibliogrficas................................................................................ 44
Agradecimentos................................................................................................ 44
Artigo 2
Bactrias isoladas de tilpias do Nilo (Oreochromis niloticus) provenientes de
cultivo em tanques-rede e suas inter-relaes com as variveis limnolgicas e fase
de criao................................................................................................................ 49
Resumo............................................................................................................. 50
Abstract............................................................................................................ 51
Introduo.........................................................................................................52
Material e mtodos........................................................................................... 53
Resultados........................................................................................................ 57
Discusso.......................................................................................................... 61
Agradecimentos................................................................................................ 65
Referncias bibliogrficas................................................................................ 66
Resumo
Dissertao de Mestrado 2
RESUMO
O Brasil rene condies extremamente favorveis para a aquicultura, principalmente
devido ao seu grande potencial hdrico. Nos ltimos anos, a tecnologia de piscicultura em
tanques-rede vem sendo amplamente difundida no Brasil, uma vez que possibilita o
aproveitamento de recursos aquticos j existentes e exige menores investimentos quando
comparado piscicultura tradicional. O aumento significativo das atividades relacionadas a
aquicultura tem aumentado consideravelmente a relevncia dos estudos desenvolvidos com
parasitas, bactrias e outros patgenos de organismos aquticos, principalmente daqueles
hospedeiros com potencial para o cultivo e para a comercializao. Desta forma, o objetivo
deste projeto consistiu em analisar, sob o ponto de vista parasitolgico e microbiolgico,
espcimes de tilpias do Nilo (Oreochromis niloticus) criadas em tanques-rede no
reservatrio de gua Vermelha, Estado de So Paulo, Brasil, bem como observar suas
inter-relaes com as variveis limnolgicas e fases de criao. Durante o perodo de
maro de 2010 a maro de 2011, foram estudados 63 peixes, pertencentes a trs fases de
criao (inicial, intermediria e final). Com relao anlise parasitolgica, verificou-se a
presena de quatro espcies e um gnero de protozorio, bem como trs espcies e dois
gneros de monogenides. No perodo seco, foi observada maior abundncia de
Trichodina spp. e prevalncia de Epistylis sp.; e no perodo chuvoso, houve maior
prevalncia de Cichlidogyrus halli. Verificou-se que para a maioria dos ectoparasitas
encontrados, os peixes pertencentes s fases intermediria e final encontravam-se com
maiores taxas de parasitismo do que aqueles pertencentes a fase inicial. Quanto anlise
microbiolgica, foi observada a presena de oito espcies e sete gneros de bactrias,
sendo que 42,9% dos peixes estavam infectados por pelo menos uma espcie ou gnero
destes organismos. No foram observadas diferenas na prevalncia das bactrias com
relao s fases de criao ou sazonalidade. Entre as bactrias submetidas ao teste do
antibiograma, foi verificada sensibilidade a apenas dois dos antibiticos testados. Atravs
dos resultados obtidos, pode-se constatar a ocorrncia no reservatrio estudado, das
principais parasitoses e bacterioses que acometem o cultivo de O. niloticus, e que as
caractersticas limnolgicas e fase de criao influenciaram na ocorrncia das parasitoses.
Abstract
Dissertao de Mestrado 4
ABSTRACT
Brazil presents extremely favorable conditions to aquaculture, mainly due to its large
hydric potential. In recent years, fish cage technology has been widespread in Brazil
because it allows the use of water resources and requires less investment compared to
traditional fish farming. Significant growth in activities related to aquaculture has
considerably increased the relevance of studies with parasites, bacterias and other
pathogens of aquatic organisms, especially of those hosts with potential to fish farming and
marketing. Thus, this study aimed to perform a parasitological and microbiological
analyzes of tilpia do Nilo (Oreochromis niloticus) cultivated in fish cages from gua
Vermelha Reservoir, So Paulo State, Brazil, as well as observe their inter-relations with
limnological and fish production phase. From March 2010 to March 2011, 63 fish
belonging to three fish production phases (initial, intermediate and final) were studied. For
the parasitological analysis, it was found four species and one genus of protozoans, as well
as three species and two genus of monogeneans. It was observed a higher abundance of
Trichodina spp. and prevalence of Epistylis sp. in the dry season and a higher prevalence
of Cichlidogyrus halli in the rainy season. The majority of ectoparasites found presented
higher rates of parasitism in that fish specimens belonging to intermediate and final phases.
In relation to microbiological analysis, it was observed the occurrence of eight species and
seven genus of bacteria, and 42.9% of fish were infected with at least one species or genus
of these organisms. There were no differences in the prevalence of bacteria in relation to
fish phase creation or seasonality. It was observed susceptibility only for two antibiotics
tested among bacteria submitted to antibiogram test. According to data obtained, it was
possible to verify the occurrence in the reservoir studied of the main parasitosis and
bacteriosis that affect the cultivation of O. niloticus, and that the limnological
characteristics and fish creation phase influenced only the occurrence of parasites.
Introduo geral
Dissertao de Mestrado 6
INTRODUO GERAL
A piscicultura no Brasil
O Brasil apresenta condies extremamente favorveis para a aquicultura,
principalmente devido ao seu grande potencial hdrico. So mais de 8.000 km de zona
costeira e cinco milhes de hectares de gua doce em reservatrios naturais e artificiais, os
quais podem ser aproveitados para a produo de organismos aquticos (Ono & Kubitza,
1999).
A produo aqucola no Brasil vem crescendo significativamente nos ltimos anos.
Em 2008, o setor apresentou uma elevao na produo de 34,4%, quando comparada com
a de 2007. Esse crescimento, embora menor, teve continuidade em 2009, quando se chegou
a 19,6% em comparao com 2008. Este incremento pode ser um reflexo das polticas
pblicas voltadas para o setor e que contriburam para melhorar o acesso aos programas
desenvolvidos pelo Ministrio da Pesca e Aquicultura (Brasil, 2010).
No mbito regional, a produo aqucola se encontra ascendente em todo o Brasil.
No Estado de So Paulo, a aquicultura apresenta um expressivo crescimento, sendo
responsvel pela segunda maior produo de pescado do pas, totalizando 38.503 t/ano
(Brasil, 2010).
Dentre as estruturas de cultivo que o Brasil emprega para a engorda de organismos
aquticos, destacam-se a utilizao de audes, viveiros escavados e tanques-rede (Brasil,
2010).
Nos ltimos anos, o cultivo de peixes em tanques-rede tem se desenvolvido com
maior intensidade no Brasil (Brasil, 2010). Esta modalidade de cultivo bastante difundida
em todo o mundo, uma vez que possibilita o aproveitamento de ambientes aquticos j
existentes e exige menores investimentos quando comparada piscicultura tradicional,
praticada em viveiros escavados (Ono & Kubitza, 1999).
Alguns reservatrios, inicialmente destinados para o abastecimento humano,
gerao de energia eltrica e irrigao, dentre outras finalidades, vm sendo
progressivamente utilizados para a instalao de projetos de piscicultura em tanques-rede
(Sampaio & Braga, 2005). Tal fato deve-se a iniciativas do governo brasileiro (decreto n
4.895, de 25 de novembro de 2003) para o ordenamento da implantao de sistemas de
Dissertao de Mestrado 7
Dissertao de Mestrado 8
Dissertao de Mestrado 9
Dissertao de Mestrado 10
Dissertao de Mestrado 11
Dissertao de Mestrado 12
sp. von Nordmann, 1832 (encontrado em trs estgios de desenvolvimento: jovem, imaturo
e adulto) e uma espcie de ergasildeo.
Braccini et al. (2008) estimaram a prevalncia de ectoparasitas de tilpia do Nilo (O.
niloticus), da linhagem Chitralada, cultivadas em tanques-rede nos rios do Corvo e
Guairac, Estado do Paran, Brasil. No Rio do Corvo, a prevalncia total de ectoparasitas
foi de 38,2%, com maior prevalncia de monogenides (19,4%); e no Rio Guairac, a
prevalncia total foi de 44,2%, com maior prevalncia de tricodindeos (17,4%).
A presena de ectoparasitas em alevinos de O. niloticus, das linhagens Chitralada e
GIFT, cultivadas em diferentes densidades (30, 40 e 50 peixes/m3) e alimentadas com 25 e
30% de protena bruta, foi analisada por Bracini et al. (2007). As prevalncias observadas
de Trichodina sp., monogenides da famlia Dactylogyridae e infeco mista, variaram de
26,2 a 73,3%, 0 a 11,9%, e 13,4 a 33,3%, respectivamente, na linhagem Chitralada, e de
33,3 a 73,3%, 0 a 16,7%, e 0 a 33,3%, respectivamente, na linhagem GIFT. Trichodina sp.
foi o ectoparasita que apresentou maior prevalncia, tanto na linhagem Chitralada como na
GIFT. Os peixes da linhagem GIFT, cultivados na maior densidade, apresentaram maior de
prevalncia de ectoparasitas quando comparados aos da linhagem Chitralada.
Dissertao de Mestrado 13
de
tilpias
do
Nilo
(O.
niloticus)
bagre
do
canal
(Ictalurus
Dissertao de Mestrado 14
Consideraes finais
O sucesso dos empreendimentos aqucolas depende de vrios fatores, sendo que um
dos mais importantes refere-se a condio sanitria dos animais que esto sendo cultivados
(Pavanelli et al., 2008). Dessa forma, o monitoramento do estado de sade dos peixes
essencial para garantir a produo de animais saudveis e evitar perdas na atividade
(Onaka, 2009). Ademais, o conhecimento da distribuio sazonal dos organismos
causadores de enfermidades, assim como, da complexa relao entre fatores ambientais,
hospedeiros e patgenos so importantes para que se possa intervir no sistema, com
tcnicas profilticas adequadas, atravs de programas preventivos de controle destas
enfermidades (Schalch & Moraes, 2005).
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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BRACINI, G. L.; VARGAS, L.; RIBEIRO, R. P.; TAKEMOTO, R. M.; LIZAMA, M. A.
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Dissertao de Mestrado 15
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Dissertao de Mestrado 17
Dissertao de Mestrado 18
Objetivos
Dissertao de Mestrado 20
OBJETIVOS
Gerais:
Avaliar, do ponto de vista parasitolgico e microbiolgico, exemplares de tilpias do
Especficos:
1. Determinar a prevalncia, abundncia, intensidade de infeco, frequncia de
Artigo 1
Dissertao de Mestrado 22
RESUMO
A tilpia do Nilo (Oreochromis niloticus) vem ocupando lugar de destaque no cenrio da
piscicultura mundial, constituindo-se numa das espcies mais indicadas para o cultivo
intensivo em regies tropicais. Esse sistema de cultivo de peixes possui como caracterstica
densidades populacionais elevadas, favorecendo a ocorrncia de surtos epizoticos, visto a
possibilidade da presena de diferentes organismos patognicos. Desta forma, o presente
trabalho teve como objetivo realizar anlise parasitolgica de tilpias do Nilo (O. niloticus)
criadas em tanques-rede no reservatrio de gua Vermelha, Estado de So Paulo, Brasil,
bem como observar suas inter-relaes com as variveis limnolgicas e fase de criao.
Durante o perodo de maro de 2010 a maro de 2011, foram coletados 63 peixes,
pertencentes a trs fases de criao. Verificou-se a presena de quatro espcies e um
gnero de protozorio, bem como trs espcies e dois gneros de monogenides. No
perodo seco, foi observada maior abundncia de Trichodina spp. e prevalncia de Epistylis
sp.; e no perodo chuvoso, houve maior prevalncia de Cichlidogyrus halli. Verificou-se
que para a maioria dos ectoparasitas encontrados, os peixes pertencentes s fases
intermediria e final encontravam-se com maiores taxas de parasitismo do que aqueles
pertencentes fase inicial.
Dissertao de Mestrado 23
ABSTRACT
The tilpia-do-Nilo (Oreochromis niloticus) stands out in production systems and is one
of the most commonly used species in intensive culture in tropical regions. This system of
fish culture is characterized as high population densities, favoring the occurrence of
epizootic outbreaks, by the presence of different pathogens. Thus, this study aimed to
perform a parasitological analysis of tilapia do Nilo (O. niloticus) cultivated in fish cages
from gua Vermelha Reservoir, So Paulo State, Brazil, as well as observe their interrelations with limnological and fish production phase. From March 2010 to March 2011
were collected 63 specimens belonging to three fish production phases. It was observed the
presence of four species and one genus of protozoans, as well as three species and two
genus of monogeneans. Significant difference was verified in the abundance of Trichodina
spp. and prevalence of Epistylis sp. in the dry season, and prevalence of Cichlidogyrus
halli in the rainy season. For the majority of ectoparasites found in this study, fish
belonging to intermediate and final phases presented higher rates of parasitism than those
belonging to the initial phase.
Dissertao de Mestrado 24
INTRODUO
A piscicultura constitui-se de um tipo de explorao animal que vem se tornando
cada vez mais importante como fonte de protenas para o consumo humano. No contexto
internacional, o Brasil se coloca como um dos pases com grande potencial para a
piscicultura, pois possui um vasto territrio e suas condies climticas favorecem o
implemento de cultivo de peixes de gua doce (Pavanelli, Eiras & Takemoto 2008).
A tecnologia de piscicultura em tanques-rede vem sendo amplamente difundida no
Brasil, uma vez que possibilita o aproveitamento de recursos aquticos j existentes e exige
menores investimentos quando comparado piscicultura tradicional, praticada em tanques
escavados ou revestidos (Ono & Kubtiza 1999).
O sistema de cultivo de peixes em tanques-rede caracterizado pela utilizao de
altas densidades de estocagem, sendo comuns neste tipo de explorao problemas de
manejo, m qualidade da gua, questes nutricionais, entre outros (Thatcher & Brites-Neto
1994; Kubtiza, 2000). Estes fatores de estresse ambiental podem afetar a homeostasia dos
peixes, predispondo-os ao ataque de organismos patognicos (Pavanelli et al. 2008). Esses
agentes, em tais condies de estresse, podem desencadear surtos epizooticos graves e
dizimar criaes inteiras em poucos dias (Onaka 2009). Desta forma, a relevncia dos
estudos relacionados com parasitas e outros patgenos de organismos aquticos tm
aumentado consideravelmente, principalmente daqueles hospedeiros com potencial para o
cultivo e comercializao (Thatcher & Brites-Neto 1994).
Entre as espcies de peixes utilizadas como fonte de economia no Brasil, destaca-se
a tilpia do Nilo (Oreochromis niloticus Linnaeus 1758), cultivada amplamente nas
pisciculturas em todo o territrio nacional (Lizama, Takemoto, Ranzani-Paiva, Ayroza &
Pavanelli 2007). No ano de 2009, a produo de tilpias (O. niloticus e Tilapia rendalli
Boulenger 1897) representou 39% do total de pescado proveniente da aquicultura brasileira
(Brasil 2010).
Diversas doenas e parasitoses acometem o cultivo de O. niloticus, porm destacamse aquelas causadas por protozorios ciliados, como Trichodina spp. Ehrenberg 1830 e
Ichthyophthirius multifiliis Fouquet 1876, bem como por monogenides (Kubtiza 2000;
Shoemaker, Phillip & Joyce 2000).
Dissertao de Mestrado 25
MATERIAL E MTODOS
Procedimentos no campo
As coletas foram realizadas bimestralmente, durante o perodo de maro de 2010 a
maro de 2011, na Bacia do rio Grande, reservatrio de gua Vermelha, na Associao de
Piscicultores do municpio de Mira Estrela (Figura 1), Estado de So Paulo, Brasil
(195547.52 S, 500836.56 O).
Dissertao de Mestrado 26
Figura 2. Tilpias do Nilo (Oreochromis niloticus) provenientes de cultivo em tanquesrede no rio Grande, reservatrio de gua Vermelha, Estado de So Paulo, Brasil. A) Fase
inicial, B) Fase intermediria, e C) Fase final.
Dissertao de Mestrado 27
Caractersticas
Inicial
5000
2000
800
2 a 150
151 a 400
401 a 800
Alimentao
8 vezes ao dia
5 vezes ao dia
3 vezes ao dia
Tipo de rao
Rao comercial
extrusada com
38% de protena
bruta
Peso (g)
Final
Dissertao de Mestrado 28
a anlise no laboratrio dos seguintes parmetros: amnia, nitrito e pH, processados com o
auxlio de reagentes da marca Alfakit.
Dissertao de Mestrado 29
Anlise estatstica
Os dados de prevalncia, abundncia mdia e intensidade mdia de infeco dos
parasitas foram calculados de acordo com Bush, Lafferty, Lotz & Shostak (1997), e os de
frequncia de dominncia e dominncia relativa mdia de acordo com Rohde, Hayward &
Heap (1995). A comparao da prevalncia dos parasitas em relao s fases de criao e
sazonalidade foi feita utilizando-se o teste de proporo (teste Z). A variao na
intensidade de infeco e abundncia dos parasitas com relao sazonalidade foi feita
utilizando-se o teste t de Student ou teste U de Mann-Whitney, de acordo com a
distribuio dos dados. Com relao s fases de criao, para se verificar a variao na
intensidade de infeco e abundncia dos parasitas, foi utilizado o teste One Way ANOVA
(sendo a diferena entre os grupos determinada pelo teste de Tukey) ou Kruskal-Wallis (H)
(sendo a diferena entre os grupos determinada pelo teste de Tukey ou mtodo de Dunn),
de acordo com a distribuio dos dados. Para o clculo do fator de condio (K), foi feita a
curva da relao entre peso total (Wt) e o comprimento padro (Ls) dos espcimes de O.
niloticus, conforme Le Cren (1951), utilizando-se de um grfico de disperso das variveis
(peso e comprimento). A relao Wt/Ls foi ajustada por uma equao exponencial do tipo
Wt = a.Lsb, onde a constante a (coeficiente linear) indica o bem estar do peixe, e o
parmetro b (coeficiente angular) expressa o tipo de crescimento da espcie (Santos 1978;
Benedito-Ceclio & Agostinho, 1992; Orsi, Carvalho & Foresti 2002). Com os dados do
coeficiente angular, foi calculado o fator de condio individual (K = Wt/Lt b) para cada
espcime de peixe. O teste de correlao de Spearman (rs) foi utilizado para observar
possveis correlaes entre o fator de condio (K) e a abundncia parasitria de acordo
com a sazonalidade e fases de criao. Os testes estatsticos foram feitos atravs do
programa SigmaStat 3.1 (Systat Software Inc., California, USA), adotando-se o nvel de
significncia de 5%.
RESULTADOS
Todos os peixes estavam infestados por pelo menos uma espcie de ectoparasita,
sendo observada a presena dos seguintes taxa: Trichodina compacta Van As & Basson
1989, Trichodina magna Van As & Basson 1989, I. multifiliis e Epistylis sp. Iwoffi Faur-
Dissertao de Mestrado 30
Fremiet 1943 presentes tanto na superfcie corporal, quanto nas brnquias; Piscinoodinium
pillulare (Schperclaus 1954) Lom 1981, Cichlidogyrus halli Price & Kirk 1967,
Cichlidogyrus thurstonae Ergens 1981, Cichlidogyrus sp. 1 Paperna 1960 e Scutogyrus
longicornis Paperna & Thurston 1969 presentes somente nas brnquias; e Gyrodactylus sp.
Nordmann 1832, presente somente na superfcie corporal (Figuras 3-8).
Os dados biomtricos dos peixes e as taxas de parasitismo total em cada fase de
criao podem ser observados na Tabela 2. Foi verificado que os peixes das fases
intermediria e final apresentaram maiores abundncias do que aqueles pertencentes fase
inicial (H = 10,7, p = 0,005).
A variao na prevalncia, intensidade mdia de infeco e abundncia mdia dos
parasitas de O. niloticus de acordo com a fase de criao esto apresentados na Tabela 3, e
de acordo com a sazonalidade na Tabela 4. Trichodina spp. apresentaram os maiores
valores de prevalncia, intensidade mdia de infeco e abundncia mdia em todas as
fases de criao, bem como nos perodos seco e chuvoso. Trichodina spp. tambm
apresentaram os maiores valores de frequncia de dominncia e dominncia relativa mdia
entre os parasitas encontrados (Tabela 5).
Os peixes das fases intermediria e final apresentaram as maiores abundncias de
Trichodina spp. (U = 11,5; p = 0,003) e Cichlidogyrus sp. 1 (U = 31,7; p < 0,001), e
intensidade de infeco e abundncia de S. longicornis (U = 18,8; p < 0,001) quando
comparados com aqueles pertencentes fase inicial.
Os peixes da fase final apresentaram maiores prevalncias de I. multifiliis (Z = 2,8; p
= 0,006) e Epistylis sp. (Z = 2,2; p = 0,026) do que aqueles pertencentes fase inicial. Os
animais da fase intermediria apresentaram maiores prevalncias (Z = 2,6; p = 0,01) de S.
longicornis, prevalncia (Z = 2,751; p = 0,006) e abundncia (U = 7,1; p = 0,03) de C.
halli, e prevalncia (Z = 2,5; p = 0,011), intensidade de infeco (U = 6,2; p = 0,046) e
abundncia (U = 14,8; p < 0,001) de C. thurstonae quando comparados com aqueles da
fase inicial. A fase final foi a que apresentou maior taxa de prevalncia do monogenide
Cichlidogyrus sp. 1 (p > 0,05).
Os peixes das fases intermediria e final apresentaram maiores valores de abundncia
total quando comparados com aqueles pertencentes fase inicial (H = 10,6; p = 0,005).
Com relao sazonalidade, foi observado que Trichodina spp. (U = 1010,5; p =
0,043) foi mais abundante no perodo seco, assim como Epistylis sp. (Z = 2,739; p = 0,006)
Dissertao de Mestrado 31
foi o mais prevalente. No perodo chuvoso, foi verificada maior prevalncia de C. halli (Z
= 2,239; p = 0,025).
No foi observada correlao entre o fator de condio (K) e a abundncia parasitria
quanto sazonalidade ou fases de criao (p > 0,05).
Na Tabela 6, podem ser verificados os parmetros fsico-qumicos da gua
mensurados no rio Grande, reservatrio de gua Vermelha, Estado de So Paulo, Brasil. O
pH, amnia, amnia txica e nitrito apresentaram valores semelhantes durante todo o
perodo de estudo. A transparncia da gua e os nveis de oxignio dissolvido
apresentaram-se com valores mais baixos durante o ms de novembro de 2010. Com
relao temperatura da gua, foram encontrados os menores valores nos meses referentes
ao perodo seco (maio, julho e setembro de 2010).
Peso (g)
CP* (cm)
P (%)
IMI**
AM**
56,4 13,7
(1,4 - 214,3)
228,4 27,4
(59,8 - 444,6)
590,6 59,6
(205,4-1481,1)
10,06 0,9
(4,2 - 17,2)
18 0,8
(13 - 23,5)
24,2 0,8
(17 - 32)
100
25 5,9
(2 - 108)
181 94,3
(10-2030)
581,2 387,6
(4 - 8199)
25 5,9
(2 - 108)
181 94,3
(10-2030)
581,2 387,6
(4 - 8199)
100
100
CP: comprimento padro. **Valores apresentados como erro padro da mdia (amplitude).
Dissertao de Mestrado 32
Tabela 3. Prevalncia (P), intensidade mdia de infeco (IMI) e abundncia mdia (AM)
dos parasitas encontrados em cada fase de criao de tilpias do Nilo (Oreochromis
niloticus), provenientes de cultivo em tanques-rede no rio Grande, reservatrio de gua
Vermelha, Estado de So Paulo, Brasil, durante o perodo de maro de 2010 a maro de
2011.
Parasita
P (%)
IMI*
AM*
76,2
0
19,1
4,8
61,9
57,1
0
42,9
33,3
100
9,5
52,4
0
100
95,2
0
85,7
33,3
159, 3 83 (2 - 1778)
100 98 (2 - 198)
0
4,5 0,7 (0,9 - 13,5)
4,2 0,7 (0,8 - 12,2)
0
1,6 0,4 (0,3 - 6)
7 3 (1 - 24)
159, 3 83 (2 - 1778)
9,5 9,4 (0 - 198)
0
4,5 0,7 (0,9 - 13,5)
4 0,7 (0 - 12,2)
0
1,4 0,3 (0 - 6)
2,3 1,2 (0 - 24)
90,5
38,1
57,14
0
90,5
85,7
61,9
76,2
47,6
100
Gyrodactylus sp.
Fase Intermediria (n = 21)
Trichodina spp.
Ichthyophthirius multifiliis
Epistylis sp.**
Piscinoodinium pillulare
Cichlidogyrus halli
Cichlidogyrus thurstonae
Cichlidogyrus sp. 1
Scutogyrus longicornis
Gyrodactylus sp.
Fase Final (n = 21)
Trichodina spp.
Ichthyophthirius multifiliis
Epistylis sp. **
Piscinoodinium pillulare
Cichlidogyrus halli
Cichlidogyrus thurstonae
Cichlidogyrus sp. 1
Scutogyrus longicornis
Gyrodactylus sp.
Total
*
Valores apresentados como erro padro da mdia (amplitude). **Por se tratar de um protozorio colonial, os
clculos de intensidade mdia de infeco e abundncia mdia no foram realizados.
Dissertao de Mestrado 33
Tabela 4. Prevalncia (P), intensidade mdia de infeco (IMI) e abundncia mdia (AM)
de acordo com a sazonalidade dos parasitas encontrados em tilpias do Nilo (Oreochromis
niloticus), provenientes de cultivo em tanques-rede no rio Grande, reservatrio de gua
Vermelha, Estado de So Paulo, Brasil, durante o perodo de maro de 2010 a maro de
2011.
Parasitas
Trichodina spp.
P (%)
96,3
Ichthyophthirius
multifiliis
28,6
37,7 32,1
(2-198)
8,4 7,3
(0-198)
11,1
3,8 1,2
(2-7)
0,4 0,2
(0-7)
Epistylis sp.**
71,4
33,3
Piscinoodinium
pillulare
11,1
0,1 0,1
(0-1)
Cichlidogyrus halli
70,4
90,5
3,6 0,9
(0 - 18,75)
2,6 0,7
(0 - 12,17)
94,4
Cichlidogyrus
thurstonae
5,1 1,2
(0,7 - 18,75)
3,7 0,8
(0,3 - 12,17)
6,4 1,6
(0,6 - 45,5)
4,1 1
(0,32 - 24,5)
6,1 1,5
(0 - 45,5)
3,5 0,9
(0 - 24,46)
Cichlidogyrus sp. 1
18,5
0,4 0,2
(0,03 - 1)
0,1 0,04
(0 - 1)
22,2
0,2 0,1
(0,01 - 0,91)
0,04 0,03
(0 - 0,91)
Scutogyrus
longicornis
59,3
1,7 0,4
(0,02 - 6)
1 0,3
(0 - 6)
75
1,2 1,6
(0,05 - 8,2)
0,9 0,3
(0 - 8,2)
Gyrodactylus sp.
48,2
36,3 29,4
(2 - 388)
17,5 14,3
(0 - 388)
30,6
5,4 1,6
(1-18)
1,6 0,6
(0-18)
100
506,1 322,4
(0-8166)
506,1 322,4
(0-8166)
100
94, 2 30,1
(2-943)
94,2 30,1
(2-943)
Total
*
86,1
Valores apresentados como erro padro da mdia (amplitude). **Por se tratar de um protozorio colonial, os clculos de
intensidade mdia de infeco e abundncia mdia no foram realizados.
Dissertao de Mestrado 34
Frequncia de dominncia
45
0
14
4
0
0
0
Parmetros
O2D1
Tr2
pH
T3
Am4
At5
Nt6
1
Oxignio
txica (mg.L-1); 6Nitrito (mg.L-1).
Dissertao de Mestrado 35
Dissertao de Mestrado 36
Dissertao de Mestrado 37
Dissertao de Mestrado 38
Dissertao de Mestrado 39
Dissertao de Mestrado 40
Dissertao de Mestrado 41
DISCUSSO
No presente estudo, foi observada a presena de quatro espcies e um gnero de
protozorio, bem como trs espcies e dois gneros de monogenides em tilpias do Nilo
(O. niloticus) criadas em tanques-rede no rio Grande, reservatrio de gua Vermelha,
Estado de So Paulo, Brasil. Os ectoparasitas encontrados neste estudo so comumente
observados em O. niloticus, tendo sido relatados em diversos trabalhos e sob o regime de
diferentes sistemas de cultivo (Vargas et al. 2000; Tavares-Dias et al. 2001a; Tavares-Dias
et al. 2001b; Martins, Moraes, Andrade, Schalch & Moraes 2001; Ranzani-Paiva et al.
2005; Ghiraldelli, Martins, Jernimo, Yamashita & Adamante 2006; Lemos et al. 2006;
Braccini et al. 2008; Bucur et al. 2011; Jernimo et al. 2011).
Os tricodindeos so parasitas de grande significncia na produo comercial de
tilpias e esto presentes em quase todos os ambientes de cultivo (Kubtiza, 2000). No
presente estudo, Trichodina spp. apresentaram os maiores valores de frequncia de
dominncia e dominncia relativa mdia, bem como as maiores taxas de parasitismo em
todas as fases de criao e perodos do ano. Ghiraldelli et al. (2006), estudando os
ectoparasitas de O. niloticus cultivadas em trs regies do Estado de Santa Catarina, Brasil,
encontraram resultados semelhantes, nos quais os tricodindeos constituram o grupo de
parasitas mais numerosos e dominantes. Da mesma forma, Ranzani-Paiva et al. (2005)
observaram as maiores taxas de infestao por protozorios do gnero Trichodina spp. em
O. niloticus provenientes da represa de Guarapiranga, Estado de So Paulo, Brasil.
De acordo com Kubtiza (2000) e Pavanelli et al. (2008), a susceptibilidade das
tilpias as parasitoses e doenas depende de diversos fatores, como: as condies de
qualidade da gua e a carga orgnica nas unidades de produo, o estado de nutrio dos
peixes, e particularmente, as condies de qualidade da gua. A anlise dos parmetros
fsico-qumicos da gua revelou que a maioria dos valores encontrados estava de acordo
com as condies adequadas para o cultivo de O. niloticus, exceto a temperatura, que nos
meses referentes a estao seca apresentou valores abaixo do recomendado para a espcie,
que varia entre 27 a 32 C (Kubtiza, 2000). De acordo com Kubtiza (2000), temperaturas
abaixo de 27 C reduzem o apetite e o crescimento, alm de suprimirem o sistema
imunolgico, predispondo os peixes ao ataque de organismos patognicos. No perodo
Dissertao de Mestrado 42
Dissertao de Mestrado 43
Dissertao de Mestrado 44
AGRADECIMENTOS
Os autores agradecem ao CNPq (Processo n 577649/2008-6), a CAPES e FAPESP
(Processo n 2010/01424-0) pelo auxlio financeiro durante a realizao da pesquisa. Ao
Sr. Lus Borges, proprietrio da Unidade de piscicultura em tanques-rede de Mira Estrela,
Estado de So Paulo, Brasil, pela doao dos peixes. Aos amigos do Instituto de Pesca de
So Jos do Rio Preto, Estado de So Paulo, Brasil, bilogo Pedro Guilherme Panin
Candeira, MSc Fernando Stopato da Fonseca e Dr. Eduardo Makoto Onaka pelo auxlio
durante as coletas.
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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Dissertao de Mestrado 45
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of
Urocleidoides
(Dactylogyridae,
Ancyrocephalinae).
Proceedings
of
the
Dissertao de Mestrado 46
Dissertao de Mestrado 47
Dissertao de Mestrado 48
Artigo 2
Dissertao de Mestrado 50
RESUMO
As bactrias apresentam grande importncia na piscicultura intensiva, podendo ocasionar
impactos econmicos considerveis devido s doenas que provocam. Nesse sistema de
cultivo, os peixes ficam susceptveis ao ataque de organismos patognicos, uma vez que
so submetidos a um estresse crnico, resultante da alta densidade, da manipulao
inerente ao cultivo, e da degradao da qualidade da gua. Desta forma, o presente trabalho
teve como objetivo realizar anlise microbiolgica de tilpias do Nilo (O. niloticus) criadas
em tanques-rede no reservatrio de gua Vermelha, Estado de So Paulo, Brasil, bem
como observar suas inter-relaes com as variveis limnolgicas e fase de criao. Durante
o perodo de maro de 2010 a maro de 2011, foram coletados 63 peixes, pertencentes a
trs fases de criao (inicial, intermediria e final). Os animais foram examinados
externamente, a procura de sinais caractersticos de bacterioses. Amostras do rim ceflico e
crebro dos peixes foram coletadas e semeadas em meios de cultura artificiais. A
susceptibilidade dos isolados a antimicrobianos foi determinada pela tcnica de difuso em
disco em gar Mueller-Hinton. Foi observada a presena de nove espcies e seis gneros
de bactrias. Verificou-se que 42,9% dos peixes estavam infectados por pelo menos um
taxon, sendo que o gnero Pseudomonas foi o mais prevalente. No foram observadas
diferenas na prevalncia das bactrias com relao s fases de criao ou sazonalidade.
Entre as bactrias submetidas ao teste do antibiograma, foi verificada sensibilidade a
apenas dois dos antibiticos testados.
Dissertao de Mestrado 51
ABSTRACT
In intensive fish farming, bacteriosis have a great importance because they can cause
considerable economic impact. In this culture system, fish are susceptible to attack by
pathogens, because they are submitted to chronic stress, resulting from high density, the
manipulation inherent in the cultivation and low water quality. Thus, this study aimed to
perform a microbiological analysis of tilapia do Nilo (O. niloticus) cultivated in fish cages
from gua Vermelha Reservoir, So Paulo State, Brazil, as well as observe their interrelations with limnological and fish production phase. From March 2010 to March 2011
were collected 63 specimens belonging to three fish production phases (initial,
intermediate and final). Fish were externally examined for characteristic signs of
bacteriosis. Samples of head kidney and brain of fish were collected and grown in artificial
culture medium. Antimicrobial susceptibility of bacteria isolates was determined by disk
diffusion technique on Mueller-Hinton agar. It was observed the presence of nine species
and six genus of bacteria. It was verified that 42.9% of fish were infected by at least one
taxon, and the genus Pseudomonas was the most prevalent. Neither fish production phase
nor seasonality was statistically different in relation to prevalence of bacteria. It was
observed susceptibility only for two antibiotics tested among bacteria submitted to
antibiogram test.
Dissertao de Mestrado 52
INTRODUO
O Brasil rene condies extremamente favorveis para a aquicultura,
principalmente devido ao seu grande potencial hdrico. So mais de 8.000 km de zona
costeira e cinco milhes de hectares de gua doce em reservatrios naturais e artificiais, os
quais podem ser aproveitados para a produo de organismos aquticos (13, 22).
O cultivo de peixes em tanques-rede uma alternativa de investimento com
menores custos e maior rapidez de implantao, uma vez que possibilita o aproveitamento
de recursos hdricos j existentes (13). Este sistema de cultivo caracterizado pela
utilizao de altas densidades de estocagem, sendo comuns neste tipo de explorao
problemas relacionados com a sanidade dos peixes. Nesse regime de confinamento, os
peixes ficam mais susceptveis ao ataque de organismos patognicos, uma vez que so
submetidos a um estresse crnico, resultante da alta densidade, da manipulao inerente ao
cultivo, e da degradao da qualidade da gua (22).
As bactrias constituem-se de importantes patgenos na piscicultura intensiva,
devido a sua facilidade de disseminao e por apresentarem um carter oportunista (14,
22). Embora existam inmeras bactrias patognicas, algumas delas so de ocorrncia
frequente e apresentam maior impacto econmico na produo comercial de peixes
cultivados,
como:
Aeromonas
spp.,
Pseudomonas
spp.,
Streptococcus
spp.
Dissertao de Mestrado 53
MATERIAL E MTODOS
Procedimentos no campo
As coletas foram realizadas bimestralmente, durante o perodo de maro de 2010 a
maro de 2011, na Bacia do rio Grande, reservatrio de gua Vermelha, na Associao de
Piscicultores do municpio de Mira Estrela (Figura 1), Estado de So Paulo, Brasil
(195547.52 S, 500836.56 O).
Um total de 63 peixes pertencentes a trs fases de criao (21 da fase inicial, 21 da
intermediria e 21 da final) foram coletados (Figura 2). A diviso dos peixes em fases era
determinada pelo produtor, de acordo com o tamanho e peso dos peixes.
Imediatamente aps a coleta, os peixes foram individualizados em sacos plsticos e
mantidos em gelo dentro de caixa trmica para o transporte at o laboratrio.
Dissertao de Mestrado 54
Figura 2. Tilpias do Nilo (Oreochromis niloticus) provenientes de cultivo em tanquesrede no rio Grande, reservatrio de gua Vermelha, Estado de So Paulo, Brasil. A) Fase
inicial, B) Fase intermediria, e C) Fase final.
Dissertao de Mestrado 55
Caractersticas
Inicial
5000
2000
800
2 a 150
151 a 400
401 a 800
Alimentao
8 vezes ao dia
5 vezes ao dia
3 vezes ao dia
Tipo de rao
Rao comercial
extrusada com
38% de protena
bruta
Peso (g)
Final
Dissertao de Mestrado 56
Dissertao de Mestrado 57
Anlise estatstica
A comparao da prevalncia das bactrias em relao s fases de criao e a
sazonalidade foram feitas utilizando-se o teste de proporo (teste Z).
Os testes estatsticos foram calculados atravs do programa SigmaStat 3.1 (Systat
Software Inc., California, USA), adotando-se o nvel de significncia de 5%.
RESULTADOS
Foi observada a presena das seguintes bactrias: Flavobacterium columnare,
Aeromonas spp., Streptococcus agalactiae, Pseudomonas spp., Citrobacter freundii,
Plesiomonas shigelloides, Vibrio spp., Pantoea spp., Serratia spp., Stenotrophomonas
maltophilia, Bergeyella zooheleum, Burkholderia cepacia, Enterobacter spp., Moraxella
osloenses e Ochobactrum anthrope (Tabela 2). Verificou-se que 42,9% dos peixes estavam
infectados por pelo menos um taxon, sendo que as bactrias isoladas estavam presentes no
crebro (11,1%), rins (48,2%) ou em ambos os rgos (40,7%).
Entre os exemplares infectados, apenas dois apresentaram sinais clnicos da presena
de bacterioses: um deles, infectado com Aeromonas sp., apresentava-se letrgico e com
exoftalmia; e o outro, infectado com Pseudomonas sp., foi observado com uma colorao
plida no fgado.
Os dados biomtricos dos peixes e a prevalncia total das bactrias encontradas em
cada fase de criao podem ser observados na Tabela 3. Verificou-se que as prevalncias
totais das bactrias observadas em cada fase de criao apresentaram valores similares (p >
0,05).
A variao na prevalncia de cada espcie de bactria isolada de acordo com a fase
de criao mostrada na Tabela 4, e de acordo com a sazonalidade na Tabela 5. Valores
semelhantes foram observados com relao prevalncia das bactrias entre as fases de
criao ou sazonalidade (p > 0,05).
Com relao ao antibiograma, observou-se que S. agalactiae apresentou resistncia
maioria dos antibiticos testados, com exceo do Florfenicol. Pseudomonas sp.
Dissertao de Mestrado 58
rgo de isolamento
Rim e crebro
Rim
Rim
Rim
Rim e crebro
Rim e crebro
Rim
Crebro
Rim
Rim
Rim e crebro
Rim
Rim e crebro
Rim e crebro
Rim e crebro
-
Prevalncia (%)
7,9
1,6
1,6
3,2
14,3
15,9
1,6
1,6
1,6
1,6
17,5
3,2
11,1
1,6
3,2
42,9
Dissertao de Mestrado 59
Tabela 3. Prevalncia (P) das bactrias isoladas e os dados biomtricos observados nas
diferentes fases de criao de tilpias do Nilo (Oreochromis niloticus) provenientes de
cultivo em tanques-rede no rio Grande, reservatrio de gua Vermelha, Estado de So
Paulo, Brasil, durante o perodo de maro de 2010 a maro de 2011.
Fase
Peso (g)
P (%)
Inicial
23,8
Intermediria
57,1
Final
52,4
Tabela 4. Prevalncia das bactrias isoladas em cada fase de criao em tilpias do Nilo
(Oreochromis niloticus), provenientes de cultivo em tanques-rede no rio Grande,
reservatrio de gua Vermelha, Estado de So Paulo, Brasil durante o perodo de maro de
2010 a maro de 2011.
Bactrias
Aeromonas spp.
Bergyella zooheleum
Burkholderia cepacia
Citrobacter freundii
Enterobacter spp.
Flavobacterium columnare
Moraxella osloenses
Ochobactrum anthrope
Pantoea spp.
Plesiomonas shigelloides
Pseudomonas spp.
Serratia spp.
Stenotrophomonas maltophilia
Streptococcus agalactiae
Vibrio spp.
Inicial
0
0
0
0
4,8
4,8
0
4,8
0
0
19,1
0
4,8
0
0
Prevalncia (%)
Intermediria
14,3
0
4,8
4,8
23,8
23,8
4,8
0
0
0
9,5
4,8
14,3
4,8
4,8
Final
9,5
4,8
0
4,8
14,3
19,1
0
0
4,8
4,8
23,8
4,8
14,3
0
4,8
Dissertao de Mestrado 60
Streptococcus agalactiae*
R
R
R
R
I
S
R
I
I
R
R
R
Pseudomonas sp.**
I
I
R
I
S
I
I
I
I
R
R
I
Dissertao de Mestrado 61
Mar/10
6,6
2
7
29,3
0,1
9 x 10-4
0,1
Mai/10
6,7
>2
7
24,5
0
0
0,03
DISCUSSO
No presente estudo, foi realizada avaliao microbiolgica de O. niloticus criadas em
tanques-rede no rio Grande, reservatrio de gua Vermelha, Estado de So Paulo, Brasil,
verificando suas inter-relaes com as caractersticas limnolgicas e fase de criao. Foi
observada a presena de oito espcies e sete gneros de bactrias, sendo que aquelas
frequentemente encontradas e que possuem grande importncia na produo comercial de
O. niloticus so: Streptococcus spp., Aeromonas sp., Pseudomonas sp. e F. columnare
(14).
Diversos fatores predispem os peixes a infeces bacterianas, tais como: m
nutrio, acmulo de resduos orgnicos nos tanques ou viveiros, estresse causado pelo
manejo ou transporte, qualidade inadequada da gua e mudana abrupta da temperatura
(14, 21, 22).
A maioria dos parmetros fsico-qumicos da gua mensurados no presente trabalho
apresentou valores adequados para o cultivo de O. niloticus, exceto a temperatura, que nos
meses referentes ao perodo seco estava abaixo do recomendado para a espcie, que varia
entre 27 a 32C (14). Apesar disso, a prevalncia de todas as bactrias encontradas neste
Dissertao de Mestrado 62
Dissertao de Mestrado 63
Dissertao de Mestrado 64
Dissertao de Mestrado 65
AGRADECIMENTOS
Os autores agradecem ao CNPq (Processo n 577649/2008-6), a CAPES e FAPESP
(Processo n 2010/01424-0) pelo auxlio financeiro durante a realizao da pesquisa. Ao
Sr. Lus Borges, proprietrio da Unidade de piscicultura em tanques-rede de Mira Estrela,
Estado de So Paulo, Brasil, pela doao dos peixes. Aos amigos do Instituto de Pesca de
So Jos do Rio Preto, Estado de So Paulo, Brasil, bilogo Pedro Guilherme Panin
Candeira, MSc Fernando Stopato da Fonseca e Dr. Eduardo Makoto Onaka pelo auxlio
durante as coletas.
Dissertao de Mestrado 66
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