Extraccin del ADN de tejidos vegetales

I. Objetivo:

Obtener el cido desoxirribonucleico (ADN) de tejido vegetal y observar el ADN de los

tejidos vegetales mediante el uso del microscopio compuesto.

II. Fundamento terico

El cido desoxirribonucleico (ADN), es el material gentico de todos los organismos

vivos y de casi todos los virus. Es el ADN quien lleva la informacin necesaria para
dirigir la sntesis de protenas y la duplicacin de la misma molcula.

Para estudiar el ADN es imprescindible aislarlo e identificarlo. Existen diferentes

mtodos de aislamiento, dependiendo del tipo de estudios o investigacin que se quiera
realizar. Sin embargo todos comparten el hecho de que, debido a que la molcula se
encuentra al interior de estructuras membranosas y est asociada con protenas, se
requiere usar sustancias adecuadas para obtener al ADN de la forma ms purificada
posible.

La tcnica utilizada en esta actividad experimental, se basa en el principio de que el

componente fundamental de las membranas plasmtica y nuclear, son los lpidos, por
lo cual se utiliza un detergente (surfactante) para romper estas estructuras y permitir
la salida del ADN. Por otro lado, el ADN de vegetales y animales se encuentra asociado
a protenas de tipo histona, por lo tanto, al agregarle alcohol se precipitan las
protenas y de esta forma se obtiene al ADN como una estructura ms pura.

III. Materiales y reactivos

Equipo-materiales

Reactivos

Microscopio compuesto

Alcohol de 96 previamente guardado en

Portaobjetos
Pipeta
Vasos de precipitado
Papel filtro
Varilla de vidrio
Tubos de ensaye
Gradilla

el refrigerador por 24 horas

Agua destilada
Champ o jabn lquido para trastes
Sal de mesa
Jugo de pia (natural)
Una de las siguientes muestras por cada
equipo: pltano, cebolla, brcoli, coliflor,
lenteja, pimiento, tomate fresas.

IV. Desarrollo experimental

Antes de la prctica se debe preparar el siguiente tampn salino:

Se toma un vaso precipitado de 250 ml, se hace una mezcla con 200 ml de agua
destilada,

2 gramos sal de mesa, 5 gramos de bicarbonato sdico y se mantiene en refrigeracin

(por duplicado):

Preparacin de la muestra

1. En el vaso de la licuadora, triturar los trozos del tejido vegetal (50 gramos) con
100 ml de agua; accionar 4 veces las cuchillas a impulsos de 15 segundos. As se
rompern muchas clulas y quedaran expuestas a la accin del detergente.
2. Agregar a la mezcla obtenida, la preparacin del tampn salino frio y accionar
nuevamente la licuadora durante 1 minuto.
3. En un vaso precipitado de 250 ml, coloca un papel filtro cuidando que no toque
el fondo del vaso. Pasa la solucin por el filtro.
4. En un tubo de ensaye toma 5 ml de la solucin filtrada y se le aade 30 ml de
detergente lquido y se mezcla con la varilla de vidrio evitando ocasionar
emulsin (espuma). Dejndolo reposar de 15 a 20 minutos.
5. Agregar 5 ml de alcohol enfriado. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol
por la cara interna del tubo de ensaye, inclinado. Dejar actuar el alcohol
durante 20 minutos.
6. Durante este tiempo se forman 3 fases; la primera que es la parte inferior del
tubo y corresponde al caldo molecular, la segunda fase en la fase superior y
corresponde al alcohol y en la tercera fase la unin del caldo molecular y el
alcohol donde se formara unas fibrillas de color blancuzco que son fibrillas de
DNA.
7. Se introduce la punta de una varilla hasta justo debajo de la separacin entre el
alcohol y el tampn. Remover la varilla hacia delante y hacia atrs y poco a
poco se irn enrollando los fragmentos de mayor tamao de ADN. Pasado un
minuto retirar la varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN

quedar adherido a su extremo con el aspecto de un copo de algodn mojado,

colcalo en un portaobjetos estirndolo para poder observar el tamao de la
molcula. Observa la molcula en el microscopio a 10x, 40x y 100x.
8. Repite los pasos anteriores, agregando 50 ml de jugo de pia en el paso 1.
Puedes hacer la extraccin con la variante en el paso 1, al mismo tiempo.

Contesten las siguientes preguntas:

Cul es el propsito de la extraccin de ADN?
Cul es la importancia del ADN para la vida?
Existen cidos nucleicos sintticos? Y de ser as para que se usan
Cul es la forma de la molcula del ADN del tejido vegetal analizado? Dibjala.
Cul es propsito de utilizar tampn salino en el procedimiento?
Qu finalidad tiene el exponer las clulas a un detergente fuerte?
Qu accin tiene el alcohol sobre la molcula de DNA?
Cul es el propsito de utilizar el jugo de pia en la preparacin de la muestra?