PUNCIN FOLICULAR (OVUM PICK-UP, OPU)

Introduccin:
La tcnica de OPU guiada por ultrasonografa, fue desarrollada en un principio para la
reproduccin asistida en humanos, usada por primera vez en ganado bovino en
Holanda a finales de la dcada de los 80, pero el empleo oficial fue en 1994 (Ruiz
Lopez, 2006).
A travs de la manipulacin transrectal del ovario en la donante resulta ms trabajoso
por visualizacin indirecta ya sea por ultrasonografa o laparoscopia, siendo mucho
ms fcil en ovarios de matadero, debido a que el operador puede examinarlos y
puncionarlos directamente (Palma, 2001).
Esta tcnica nos permite trabajar en vacas adultas en varios estados fisiolgicos:
cclicas, acclicas, primer tercio de la gestacin, vacas que no responden a estmulos
hormonales y en animales viejos con problemas reproductivos. Tambin nos permite
trabajar en lo que son novillas y terneras desde el 6to-8vo mes de vida (Ruiz Lopez,
2006).
El xito de la puncin folicular transvaginal se puede dividir en 2 categoras:

Aspectos tcnicos: aspiracin, tipo y dimetro de aguja, presin de aspirado y

bisel de la aguja.
Aspectos biolgicos: momento del ciclo estral, raza, estimulacin hormonal,
edad y estado fisiolgico de la donante (Palma, 2001) .

Puncin folicular transvaginal y recuperacin de ovocitos

La tcnica de OPU en bovinos fue desarrollada para obtener ovocitos de vaquillonas
vivas de alto potencial gentico, y as lograr un mayor nmero de terneras y terneros
ao.

Aspectos tcnicos
Para realizar la tcnica de OPU se necesitan 3 requisitos principales: ecgrafo con
transductor sectorial, bomba de aspiracin y un sistema de gua de aguja, que se
encuentra conectado a un recipiente recolector de ovocitos.
Mtodo
Para realizar el proceso de puncin folicular las vacas pueden ser sedadas ya sea con
uso de Xilacina o Detomidina, posteriormente se procede a la remocin de heces del
recto mientras se realiza la palpacin se procede a realizar anestesia epidural con
lidocana al 2%. Adems se debe realizar una correcta desinfeccin de la vulva y
perin para mayor asepsia del sistema de OPU; Despus se procede a la introduccin
del sistema gua en vagina hasta que la cabeza del transductor se fije crneo
dorsalmente, ya sea a la izquierda o derecha de la abertura exterior del crvix, esto
depender del ovario que ser puncionado (Palma, 2001).
Realizado esto se posiciona a los ovarios por va rectal delante de la sonda, pero para
proceder a la puncin primero drenamos el sistema con la aspiracin de una cantidad
pequea de medio, despus de aspirar de 3-4 folculos se recomienda lavar la aguja de
aspiracin y el sistema de medio con PBS suplementado con heparina sdica (22
UI/ml) y suero fetal bovino (1%). El fluido que se obtendr de cada animal recogido en
tubo de 50 ml ser filtrado inmediatamente, la sangre ser eliminada por lavados
continuos que se realizan en medio fresco PBS, luego se los pasa a una placa de Petri
para continuar con su evaluacin luego de ser estos localizados por medio del
estereomicroscopio (Ruiz Lopez, 2006).
Ventajas de la puncin folicular
Nos permite optimizar la utilizacin del semen, en un da podemos fecundar ovocitos
recogidos de donantes diferentes con una sola dosis de semen. Ovocitos de una
donante pueden ser fecundados por diferentes toros en una sola sesin de aspiracin,
permitindonos as una variabilidad en cuanto a gentica. Permite incrementar tasas de
fecundacin mediante el uso de semen Sexado debido a que se reduce el nmero de

espermatozoides que ser necesario para fecundar ovocitos. Adems permite trabajar
en hembras con problemas reproductivos como infertilidad, repetidoras, afecciones del
tracto reproductivo o con respuesta negativa a tratamientos hormonales.
Adems se puede utilizar donantes a intervalos ms cortos comparando con lo que es
la tcnica de superovulacion y ovarios de matadero. Se pueden realizar hasta 2
punciones por semana lo que nos permitir obtener en promedio de 4,1
ovocitos/vaca/sesin, pudiendo alcanzar un promedio de 10,4 ovocitos/vaca/sesin en
caso de previa utilizacin de FSH y bST, lo que nos permitir obtener entre 50 (sin
estimulacin hormonal) y 100 (con estimulacin hormonal) cras al ao por vaca
donante. Lo que representa 3 a 4 veces ms los valores logrados mediante
transferencia de embriones.
Es de alta importancia recalcar que la tcnica de OPU no solamente est restringida a
bovinos ya que ha sido aplicada en otras especies como lo son: equinos, rumiantes
silvestres y bfalos, permitiendo recuperar especies en peligro de extincin (Nava
Trujillo & Hernandez Fonseca, 2009).
Ovocitos obtenidos por OPU para FIV
Mediante la tcnica de OPU se recogen los ovocitos, posterior a esto deben ser
identificados, aislados y clasificados para la FIV.
Para la clasificacin se toma en cuenta el aspecto del citoplasma y el nmero de capas
que constituyen el cumulus. Un citoplasma homogneo y oscuro es un indicativo de un
desarrollo ptimo y un cumulus formado por varias capas de clulas compactas nos
presenta un mayor porcentaje de vialidad en cuanto a maduracin, fecundacin y
desarrollo hasta blastocistos, siendo de otra manera en aquellos que carecen de
cumulus.
Morfolgicamente se clasifican: A, B, C y D.
Tipo A: cumulus intacto, capas mltiples >4 y compactas.
Tipo B: capas mltiples de clulas de cumulus (1-3).

Tipo C: ovocitos desnudados.

Tipo D: capas celulares del cumulus expandidas.

Figura 2. Ovocitos tipo A, B, C y D.

Los ovocitos tipo A y B que llegan a ser fertilizados mediante FIV consiguen dividirse
(80% los A y 77 % los B), llegando a blastocistos (40% de los A y 20% de los B). En
cuanto a los tipos C y D consiguen dividirse (40% los C y 34% los D), no pudiendo
alcanzar su desarrollo hasta blastocisto (Gonzalez Gonzalez, 2013).

Bibliografa
Gonzalez Gonzalez, J. (junio de 2013). Repositorio Institucional Universidad de
Oviedo. Recuperado el 28 de junio de 2016, de RUO:
http://digibuo.uniovi.es/dspace/bitstream/10651/17747/3/TFM%20jimena.pdf
Nava Trujillo, H., & Hernandez Fonseca, H. (2009). Asociacion Venezolana de
Produccion Animal. Recuperado el 28 de junio de 2016, de AVPA:
http://www.avpa.ula.ve/docuPDFs/libros_online/manualganaderia/seccion8/articulo3-s8.pdf
Palma, G. A. (2001). Biotecnologia de la Reproduccin. Argentina: Instituto Nacional
de Tecnologia Agropecuaria.
Ruiz Lopez, S. (2006). Axon comunicacion. Recuperado el 30 de junio de 2016, de
http://axonveterinaria.net/web_axoncomunicacion/criaysalud/31/cys_31_5863_OVUM_PICK_UP_OPU)_bovinos.pdf