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abstract
El potencial redox del suelo juega un papel clave en las tasas y las vas de
degradacin de explosivos, y est muy influenciada por el contenido de agua y
la actividad microbiana. El potencial redox del suelo puede variar
significativamente, tanto temporal como espacialmente en micro-sitios. En este
estudio, cuando el contenido de agua del suelo aumenta, el potencial redox
disminuye, y no haba mejora significativa en la biodegradacin de una mezcla
de tres explosivos. Considerando que la degradacin de TNT se produjo bajo
condiciones aerbicas y anaerbicas, RDX y HMX degradacin se produjeron
slo cuando las condiciones de contenido de agua resultaron en un perodo
prolongado de potencial redox negativo. Por otra parte, en condiciones
insaturados, que son ms representativas de las condiciones ambientales
reales, el bajo potencial redox, incluso cuando se mide por perodos
temporales, era suficiente para facilitar la degradacin anaerobia. Nuestros
resultados indican claramente una influencia negativa de TNT en la
biodegradacin de RDX y HMX, pero este efecto fue menos pronunciado que el
que se encuentra en los anteriores experimentos de suspensin por lotes: esto
puede explicarse por un efecto de enmascaramiento del suelo en los botes.
Total o parcialmente suelos saturados pueden promover la existencia de micronichos que difieren considerablemente en sus condiciones de concentracin de
explosivos, la comunidad microbiana y redox.
introduccion
En muchos sitios de explosivos contaminada, el suelo est contaminado con
mezclas de explosivos, ms comnmente 2,4,6-trinitrotolueno (TNT),
hexahidro-1,3,5-trinitro-1,3,5-triazina (RDX) y octahidro-1,3,5,7-tetranitro1,3,5,7-tetrazocine (HMX) [1] y [2] ( Fig. 1 ). La biodegradacin de estos
compuestos parece ser un medio eficaz para la remediacin de la tierra
contaminada y el agua. Condiciones redox influyen altamente la eficiencia de
explosivos biodegradacin en la sub-superficie, as como dictan la va de
degradacin y los productos de degradacin acumulados.
Experimental
2.1. productos qumicos
TNT, RDX y HMX (> 95% de pureza) proporcionado por la industria militar
israel se utilizaron para el experimento de biodegradacin. estndares
analticos para el anlisis de HPLC de RDX, 2-Am-4,6-DNT y 4-Am-2,6-DNT se
compraron a Supelco (Bellefonte, PA). estndares analticos para 4-nitro-2,4diazabutanal (NDAB), MSX, DNX y TNX eran de SRI International (Menlo Park,
CA). Tambin se prepararon los estndares de TNT y HMX para el anlisis HPLC
de polvo slido (> 95% de pureza). El metanol y acetona fueron de grado HPLC,
y todos los dems productos qumicos eran de grado reactivo.
2.2. Biodegradacin de mezclas explosivas en diferentes condiciones de
contenido de agua
Se llevaron a cabo experimentos por lotes para caracterizar la biodegradacin
de tres explosivos TNT, RDX y HMX en una mezcla, bajo diferentes condiciones
de contenido de agua: seco (1%, w / w), moderada (7%, w / w) y saturado
( 19%, w / w). Desde que ocurri la produccin de la fermentacin y gas
intensiva en el tratamiento saturada del suelo en los primeros 2 das, el agua
se filtr a partir de los botes, y se determin el contenido de agua por encima
Con el fin de seguir los cambios en las poblaciones microbianas, se extrajo ADN
de 0,65 g de suelo de varias muestras de los tres tratamientos de la primera
experimento de biodegradacin (Seccin 2.2 ) con el Kit DNA del suelo de
energa (Mo Bio, Carlsbad, CA). Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)
seguida de electroforesis en gel desnaturalizante en gradiente (DGGE) se
realiza como describir anteriormente [2] y [16] . Las principales bandas del
gel se escindieron cuidadosamente, se extrajo ADN de cortes de gel y se clon
en el plsmido pTZ57R / T usando el PCR Cloning Kit InsTAclone (Fermentas,
Hanover, MD). La secuenciacin de ADN se realiz por Macrogen Inc. (Sel,
Corea).
3. resultados
3.1. La biodegradacin de la mezcla de explosivos en diferentes condiciones de
contenido de agua
En ambos experimentos, el aumento de contenido de agua result en un
aumento de la medida de degradacin. En el primer experimento, bajo
contenido de agua gravimtrico (GWC) de 1%, se observ algo de desaparicin
de TNT pero no desaparicin de RDX o HMX ( Fig. 2 a). Menos del 7% de GWC,
aunque se degrad TNT, sin degradacin de RDX o HMX se observ ( Fig. 2 b).
En el tratamiento saturada de la primera experimento, casi completa
desaparicin (> 98%) de TNT se observ despus de 11 semanas ( Fig. 2 C).
Degradacin RDX se retras y slo comenz despus de 20 semanas, tal como
se indica por la ligera acumulacin de los productos nitroso anaerbicas. Un
promedio de ca. 7% de la cantidad inicial RDX se ha recuperado como
derivados nitrosos en este punto de muestreo (un total de 107 mmol / kg).
Estos productos de degradacin aparecieron cuando TNT haba desaparecido
casi por completo del suelo y la concentracin de los compuestos intermedios
de amino TNT fue ca. 10 7% de la concentracin inicial de TNT. Al final del
perodo de incubacin, la concentracin HMX no difera de su concentracin
Higo. 3.
Biodegradacin de RDX y HMX en presencia y ausencia de TNT en: (a) condiciones moderadascontenido de agua (7%, w / w) y (b) condiciones de alto contenido de agua (16%, w / w). Los
puntos de datos de experimentos representativos son los medios de los triplicados SD.
En la ltima muestra del tratamiento contenido en agua 7%, se observ extremadamente alta
variacin en la extensin de degradacin entre los diferentes recipientes de: mientras que 75% y
43% de degradacin de RDX y HMX, respectivamente, se encuentra en uno de los botes, sin
degradacin de RDX y HMX se observ en los otros dos repeticiones ( Fig. 3 a y b).
3.2. potencial redox durante la biodegradacin de explosivos en diferentes condiciones de
contenido de agua
Todos los tratamientos presentan una tendencia general de disminucin de potencial redox con el
aumento de contenido de agua. Sin embargo, las tendencias temporales de las diferentes rplicas
y los tratamientos eran muy diferentes. Por ejemplo, en el tratamiento GWC 7% del primer
experimento, se observaron tres patrones diferentes de potencial redox para cada una de las
repeticiones ( Fig. 4 B). Este patrn tambin se observ en el tratamiento GWC 7% del segundo
experimento ( Fig. 5 a).
potencial redox (segundo experimento) en: (a) las condiciones moderadas en el contenido
de agua (7% GWC) y (b) condiciones de alto contenido de agua (16% GWC).
En el tratamiento de alto contenido de agua (19% GWC) del primer experimento, se observaron
valores significativamente ms bajos de potencial redox ( Fig 4. C): se observ una disminucin
significativa (~170 mV) en el potencial redox en los primeros 4 das ( Fig. 4 c). Esta rpida
disminucin fue seguido por un incremento del potencial redox a un rango entre -240 y -80 mV.
Finalmente, el potencial redox anaerbica se midi en este tratamiento, con valores finales de -195,
-215 y -277 mV. En el tratamiento de alto contenido en agua de la segunda experimento (16%
GWC), se observaron patrones similares para el primer experimento, con valores finales por debajo
de -360 mV ( Fig. 5 B).
3.3. Efecto de las concentraciones de explosivos y humedad del suelo en la poblacin microbiana
Se realiz un anlisis de PCR-DGGE de las muestras de los primeros experimentos para examinar
el efecto del contenido de agua del suelo y explosivos concentracin en la poblacin microbiana
natural. En el primer experimento, dos bandas se presentaron en todos excepto en el tratamiento
seco, donde se convirtieron en muy dbil despus de la primera semana, probablemente debido a
la falta de actividad en estas condiciones ( Fig. 6 ). Estas bandas exhiben baja similitud de
secuencia con el gen 16S rRNA de uncultured Bacteroidetes y uncultured Sphingobacteria ,
respectivamente (marcados con flechas 1 y 2 en la Fig. 6 ). Otra banda fuerte, que exhibi 96% de
similitud de secuencia con el gen 16S rRNA de Sporolactobacillus kofuensis , apareci despus de
11 semanas en el tratamiento en hmedo (marcado con un crculo en la Fig. 6 ). Esta fue la ltima
muestra antes del inicio de la degradacin RDX (9 semanas despus). En general, ninguna de
estas secuencias se asoci con un conocido degradador explosivos.
la MSX, DNX y TNX) aparecieron por primera vez, estas bandas podran representar la poblacin
microbiana capaz de degradacin RDX. Anlisis de similitud de las distintas filas utilizando software
de equidad 1 1D (BioRad) proporcion algunos resultados interesantes ( Fig. 7 ). Se agruparon tres
grupos principales: M1, W1, M6 y M11 desde el primer periodo del experimento (donde M
representa el moderado y W los tratamientos en hmedo, y el entero es el tiempo transcurrido en
semanas). La muestra "La semana 0" tambin se incluy en este grupo y, en general, los grupos
de este grupo no fueron muy afectada por el contenido de agua o el tiempo de incubacin. El
segundo grupo de M20, M6 y W11 pareca estar influenciada de hecho tanto por el contenido de
agua y el tiempo. El ltimo grupo estaba formado por las tres rplicas de las muestras W20, con el
D1 muestra la agrupacin de lejos (en seco) con este grupo.
4. Discusin
Se evalu el efecto del contenido de agua y el potencial redox en la
biodegradacin de una mezcla de explosivos en muestras de suelo de la zona
no saturada. Los resultados revelaron una relacin entre el contenido de agua,
el potencial redox y la velocidad y extensin de explosivos biodegradacin.
Como era de esperar, cuando el contenido de agua del suelo aumenta, el
potencial redox disminuye, y se observ una mejora significativa en la
biodegradacin de los tres explosivos ( Fig. 2 y Fig. 3 ). Esto implica que
aunque TNT y RDX pueden degradarse aerbicamente, esta va de degradacin
no es tan rpida como la degradacin anaerobia. Tambin se observ que el
potencial redox bajo, incluso cuando se mide por perodos temporales, era
suficiente para facilitar la degradacin anaerbica a lo largo de las 20 semanas
de incubacin.
5. Conclusiones
Se encontr que la poblacin microbiana autctona del suelo puede degradar
TNT, RDX y HMX en una mezcla, en condiciones que reflejan las condiciones
naturales de la zona no saturada contaminada. La degradacin ha demostrado
ser fuertemente afectado por la humedad del suelo y las condiciones en
consecuencia, redox. Mientras que la degradacin de TNT se produjo, en estos
experimentos, tanto en condiciones aerbicas y anaerbicas, la degradacin de
RDX y HMX se produjo slo cuando las condiciones de contenido de agua
resultaron en un perodo prolongado de potencial redox negativo. Estas
condiciones generalmente desarrollan bajo la saturacin, pero tambin podran
desarrollar temporalmente en los microorganismos del suelo sitios bajo
contenido de agua moderada y as promover RDX y HMX degradacin.