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1.
SEDIMENTACION...................................................................................... 2
2.
FLOTACIN............................................................................................... 4
3.
EXTRACCION SOLVENTE...........................................................................5
4.
ADSORCIN............................................................................................ 11
5. FILTRACION.......................................................................................... 17
6.
CENTRIFUGACION.................................................................................. 20
1. SEDIMENTACION
Cuando las clulas tienen una alta tendencia a agregarse de cerca
(coagular) o para formar flculos multicelulares con la ayuda de cationes
polivalentes o polmeros extracelulares, la recuperacin de la biomasa
celular llega a ser simple y fcilmente aplicable por el proceso de
sedimentacin. Dicha agregacin ofrece corrientes de recirculacin de
clulas en el tratamiento de lodos de aguas residuales de activacin; y
varias cepas de levadura altamente floculantes se utilizan en la elaboracin
de cerveza y la produccin de protenas de una sola clula. De hecho,
tenemos que extraer clulas del caldo de fermentacin, por lo que la
sedimentacin se considera como un mtodo de procesamiento
descendente o corriente abajo. Alumbre, cal y polielectrolitos son
comnmente utilizados para crear macro-flculos.
Hay varias coagulantes naturales y qumicos utilizados para la agregacin
de clulas suspendidas en bioprocesos. Figura 7.5 muestra que las clulas
se eliminan del caldo de fermentacin y el lodo de coagulantes con biomasa
se asienta en forma de lodo. La solucin clara se analiz para determinar
que se necesita la actividad enzimtica y purificacin adicional proceso para
la recuperacin de la enzima.
Cell removal + polyelectrolyte aggregated floc
Retiro de la clula + polielectrolito flculos agregado
Solucin
Caldo
Lodo
cerevisiae (levadura de
Cebada (almidn) -------------------------------------------------->cerveza
cerveza)
2. FLOTACIN
La flotacin es otro mtodo de quitar (clulas) slidos a partir caldo de
fermentacin, utilizando burbujas de aire para flotar protena. Podemos
utilizar diferentes tipos de dispositivos de alto esfuerzo cortante para
obtener soluciones homogneas para las enzimas intracelulares liberadoras.
La figura 7.8 muestra varios tipos de impulsor para la homogeneizacin.
.
fig. 8 Varias formas de
Tambin se utilizan mtodos no mecnicos para romper la pared celular y
liberar enzimas intracelulares o protenas. A continuacin se enumeran
varios mtodos que fracturan las paredes celulares y liberan contenido de
clulas:
Choque osmtico
Congelacin
Solvente
Detergentes
Sobre la base de las fuerzas de corte: homogeneizador de alta
presin
Manton Gaulin homogeneizador funciona a alta presin, sobre 550
atm
La lisis de las clulas de los productos intracelulares
Pared de clulas lisadas con la extraccin de disolvente orgnico
RUPTURA CELULAR
El procesamiento posterior de los caldos de fermentacin por lo general
comienza con la separacin de las clulas por filtracin o centrifugacin. En
la centrifugacin, se utiliza un tipo de rotor vertical, horizontal o rotor de
disco de equilibrio. La sedimentacin o coagulacin se utilizan en el
procesamiento corriente abajo. Se requiere una combinacin de bioprocesos
para la recuperacin del producto. La separacin de los productos tales
como el etanol, el cido ctrico y los antibiticos es extracelular pero el
aislamiento de enzimas dentro de las clulas requiere la ruptura celular. Las
clulas se descomponen por la lisis de la pared celular. La ruptura celular se
utiliza para la recuperacin del producto descendente. La remocin de la
3. EXTRACCION SOLVENTE
Muchos antibiticos tienen una excelente solubilidad en disolventes
orgnicos y son inmiscibles con agua. La extraccin de mltiples etapas
separa la fase acuosa de la fase orgnica. La extraccin puede proporcionar
productos concentrados y purificados.
Un caldo tpico penicilina contiene 20 a 35 mg / l de antibitico. La filtracin
se utiliza para eliminar la biomasa del micelio del caldo de fermentacin. La
filtracin puede ser sometida a un filtrado polmero ayudado. Se requiere la
neutralizacin de la penicilina a pH 2-3. Acetato de amilo o acetato de butilo
se usa como un disolvente orgnico para eliminar la mayor parte del
producto del caldo de fermentacin. Por ltimo, la penicilina es retirada
como penicilina de sodio y se precipit mediante una mezcla butanol-agua.
La extraccin de la penicilina del caldo de fermentacin se practica
normalmente utilizando disolventes orgnicos tales como acetato de butilo,
acetato de amilo metil isobutil cetona y metil etil cetona (MEK). Aislamiento
de eritromicina utilizando pentilo o acetato de amilo es otro ejemplo de
extraccin con disolvente. Para la recuperacin de los esteroides, se utiliza
la extraccin con disolvente. Purificacin de vitamina B y el aislamiento de
los alcaloides como la morfina y la codena a partir de materias primas
vegetales se utilizan en los mtodos de extraccin con disolventes. Se
forman dos fases: las fases orgnica y acuosa separadas. Una mezcla
vigorosa requiere un contacto perfecto de fases lquidas y turbulencias para
facilitar la transferencia de soluto desde la fase acuosa a la fase orgnica.
However, disolventes orgnicos no son deseables para el aislamiento de
protenas. Dos fases se producen cuando un polmero particular, ms sal se
disuelven en agua por encima de ciertas concentraciones. Cuando
biomolculas y fragmentos de clulas se distribuyen en la fase acuosa, una
fase contiene fragmentos de la protena y la clula se limita a la otra fase.
La fase extrada se va a otra unidad para la precipitacin o cristalizacin. El
coeficiente de reparto (K = C AU / CAL) es constante, donde C AU es la
concentracin de equilibrio del componente "A" en la fase superior y C AL es
la concentracin de equilibrio de "A" en la fase inferior. Si
componente "A" favorece la fase superior; si
k >1 , el
K= y /x
, y el coeficiente de
c =C AL /C A 0
Ejemplo 4
Las clulas microbianas se separan de un caldo de cultivo a una velocidad
de flujo de
dimetro promedio de
esta
separacin.
agua =997 kg / m3
Teniendo
a 25 C;
en
cuenta
los
datos:
0.9 x 10-3N.S/m2.
Solucin
Ejemplo 5
La recuperacin de clulas microbianas se lleva a cabo en una centrfuga de
disco pila continua. La centrfuga se hace funcionar a 5000 rpm para la
separacin de la levadura de panadera. A una velocidad de alimentacin de
60 L / min, 50% de las clulas se recuperan. A velocidad constante, la
recuperacin slida es inversamente proporcional a la velocidad de flujo.
Qu tasa de flujo se requiere para recuperar el 90% de las clulas si
la velocidad de centrifugacin se fija en 5000 rpm?
Qu velocidad de funcionamiento se requiere para recuperar el 90%
de las clulas si la velocidad de flujo en la centrfuga se mantiene a
60 L/ min?
Solucin
VU
=5
VL
VU
=0.5
VL
4. ADSORCIN
En general, la adsorcin es un fenmeno de superficie, donde el gas o el
lquido se concentran en la superficie de partculas slidas o interfaces de
fluido. Hay muchos sistemas de adsorcin.
Intercambio Inico
Los lechos de adsorcin de carbn activado para la purificacin de cido
ctrico, y la adsorcin de productos qumicos orgnicos de carbn o
polmeros porosos, son buenos ejemplos de los sistemas de adsorcin de
intercambio inico. Las resinas sintticas tales como estireno,
divinilbenceno, polmeros de acrilamida de carbono activado son medios
porosos con superficie total de 450 a 1800 m2 g -1. Hay algunos sistemas de
adsorcin bien conocidos, tales como sistemas de adsorcin isotrmicas. El
modelo de adsorcin ms conocida es la adsorcin isoterma de Langmuir.
CROMATOGRAFA
cromatografa de adsorcin
cromatografa de reparto
cromatografa de intercambio inico tal como carboximetil celulosa (CMC),
agarosa y / o dextrinas
cromatografa en gel o cromatografa de tamiz molecular tales como geles
de poliacrilamida
Cromatografa de afinidad, que es la unin de biomolculas con el lecho
matriz, a menudo utilizado para anticuerpos y antgenos
capaz de atraer a los anticuerpos o antgeno, por lo que hay una buena
afinidad para separar el producto. La capacidad de la columna est dada
por:
Principio de cromatografa
La base de la cromatografa es en la migracin diferencial de los productos
qumicos inyectados en una columna. El fluido portador lleva los solutos a
travs del lecho utilizado para la elucin (fase mvil). La cama es la fase
estacionaria. Sobre la base de la movilidad, los detectores en tiempo de
retencin de identificar las molculas rpidos y lentos. Sobre la base de las
Ejemplos
1)La cromatografa en gel se utiliza para la separacin de la hormona. Una
columna de cromatografa de gel de escala de planta piloto lleno de resina
Sephacryl se utiliza para separar dos hormonas, A y B. La columna es de 5
cm de dimetro y 30 cm de altura; Vo = 1,9 10-4 m3, Vr = 3 10-3 m3 /
kg Sephacryl seca, g = 1,25 103 kg / m3. Los coeficientes de reparto son
kPa = 0,38 y KPB = 0,15. Si el caudal de elucin es de 0,7 l / h, cul es el
tiempo de retencin para cada hormona?
Solucion
5. FILTRACION
En la filtracin, las partculas slidas se separan de una mezcla fluido-slido
forzando el fluido a travs de un pao que acta como medio filtrante, que
retiene las partculas slidas. Como resultado, los slidos se retenido por
medios de filtro y se obtiene el filtrado, que es una solucin clara sin
partculas slidas. Las partculas slidas depositadas en el filtro forman una
capa, que se conoce como torta de filtracin.
Los slidos depositados crean resistencia que reduce el flujo de filtro. La
profundidad de la torta de filtro aumenta gradualmente a medida que se
retienen ms slidos. La torta de filtracin puede crear ms resistencia a la
filtracin adicional. La filtracin se puede realizar usando cualquiera de
vaco o equipo de presin positiva.
La presin diferencial a travs del filtro ejerciendo separa lquido de slido y
se llama la cada de presin de filtracin. La facilidad de filtracin depende
de las propiedades de partculas y de fluido de filtracin. La compactacin
de las partculas, ya sea duras o blandas, compresibles o no compresibles, y
la viscosidad del fluido puede crear diferentes resistencias. Los caldos de
fermentacin son molestos y difciles de filtrar, debido al comportamiento
no newtoniano del caldo. La mayora de las tortas de filtracin microbianas
son compresibles. Cuando los poros del filtro estn obstruidas por cuerpos
celulares, a continuacin, el alto resultados de prdida de carga en los
principales problemas en la filtracin del caldo de fermentacin. A
continuacin, se crea ms presin y cae gradualmente la tasa de filtracin.
La cantidad mnima necesaria para lograr el resultado deseado debe ser
establecida experimentalmente. Los caldos de fermentacin pueden ser pretratados para mejorar las caractersticas de filtracin. Calefaccin para
desnaturalizar protenas mejora la filtrabilidad de los caldos de micelio como
en la produccin de penicilina. Como alternativa, se pueden aadir
electrolitos para promover la coagulacin de los coloides en partculas ms
densas, ms grandes, que son ms fciles de filtrar. El proceso de filtracin
se ve afectada por la viscosidad y la composicin del caldo, y la torta
celular.
Los filtros de placas son adecuados para la filtracin de caldo de
fermentacin;
las
biomasas
acumuladas
deben
ser
limpiadas
peridicamente. Un filtro de tambor de vaco rotativo se utiliza para un
sistema continuo.
Este tipo de filtro se puede utilizar para la eliminacin de Penicillium y
Streptomyces micelios en la produccin de penicilina y estreptomicina,
respectivamente.5 En estos procesos el filtro de tambor giratorio se utiliza
con un filtro de tela pre-recubierto con auxiliar de filtracin; la torta de
filtracin se elimina por una hoja de cuchillo que raspa la torta del tambor
giratorio.
Teora de la Filtracin
Supongamos que el flujo es laminar a travs de la torta de filtro. Tasa de
filtracin se mide generalmente como la velocidad a la que se recoge
filtrado lquido. La tasa de filtracin depende del rea de la tela de filtro, la
viscosidad del lquido, la cada de presin a travs del filtro y el filtro de la
resistencia de la torta. En cualquier instante durante la filtracin, la tasa de
filtracin est dada por la ecuacin:
La separacin de variables se
usa con integraciones adecuadas, que se traducen en las siguientes
ecuaciones:
t
V f/ A
Vf
A
contra
Donde,
6. CENTRIFUGACION
La centrifugacin se utiliza para separar materiales de diferentes
densidades cuando una fuerza mayor que la gravedad se ha aplicado, como
por ejemplo las fuerzas centrfugas. La centrifugacin puede ser utilizada
para eliminar las clulas de caldo de fermentacin; de levadura, por
ejemplo, se cosecha en una unidad de centrfuga.
Para las suspensiones diluidas de cada clula se puede tratar como una sola
partcula en un fluido infinito. En el lquido concentrado con slidos en
suspensin, movimiento de la partcula est influenciada por las partculas
vecinas. Un proceso continuo se utiliza comnmente en la separacin de
donde Q es el
caudal volumtrico y g es la velocidad terminal de las partculas en un
campo gravitatorio. El factor sigma representa fsicamente el rea de
seccin transversal de un sedimentador por gravedad con las mismas
caractersticas de sedimentacin como la centrfuga. Durante dos
centrifugadoras con velocidades iguales de partculas, el desempeo de su
eficacia est relacionada por su velocidad de flujo: