UNIVERSIDADE ESTADUAL DO OESTE DO PARAN

CENTRO DE ENGRNHARIA E CINCIAS EXATAS

ENGENHARIA QUMICA

ESTERILIZAO DO AR EM BIOPROCESSOS

Toledo - Paran
2015

ADAIR GALLO
JSSICA CAROLINE ZANETTE
JULCIMARI CAROLINE SCHOSSLER DEAK

ESTERILIZAO DO AR EM BIOPROCESSOS

Trabalho sobre os tipos de esterilizao de

ar, apresentado Universidade Estadual do
Oeste do Paran, como requisito para a
avaliao parcial da disciplina de
Engenharia Bioqumica.
Professor: Dr. Srgio Luiz de Lucena

Toledo Paran
2015

FAZER SUMRIO

1. INTRODUO

Os bioprocessos so etapas de transformao que ocorrem por meio de agentes

biolgicos como clulas e enzimas. So conhecidos e utilizados pelo homem h
milhares de anos, porm nas ltimas dcadas vm ganhando destaque como alternativas
sustentveis e solues inovadoras para a indstria.
Esse tipo de processo apresenta uma srie de caractersticas prprias, pois
frequentemente trata-se de fazer crescer um microrganismo ou uma dada clula, seja
microbiana, animal ou vegetal, exigindo a presena, desde o projeto da planta at sua
operao em regime, de uma mentalidade prpria e particular em relao existente na
indstria qumica no biolgica.
Nos bioprocessos faz-se uso principalmente da biotecnologia, que a aplicao
de conhecimentos qumicos e biolgicos e de novas tecnologias nas reas da sade, de
alimentos, qumica e ambiental. A biotecnologia apontada como uma das reas de
conhecimento que mais podem trazer benefcios humanidade e tambm como uma das
reas profissionais com maior potencial de crescimento. As aplicaes da biotecnologia
na forma de produtos, processos e servios esto presentes principalmente nas seguintes
reas:

Sade: produo de vacinas, antibiticos, probiticos, anticorpos monoclonais,

kits para diagnstico; desenvolvimento e pesquisa de novos medicamentos e
novas molculas bioativas.

Alimentos e bebidas: alimentos e bebidas fermentados como queijo, po,

vinagre, vinho, cerveja, aguardente, leite fermentado, iogurte; alimentos
funcionais; aromas e corantes naturais; enzimas para diversas aplicaes.

Agricultura:

plantas

transgnicas,

bioinseticidas

bionematicidas,

biofertilizantes, hormnios.

Energia: biocombustveis como etanol, biodiesel, biogs e bio-hidrognio;

culturas energticas melhoradas geneticamente.

Meio-ambiente: tratamento de efluentes e biorremediao.

Na maioria dos bioprocessos o acmulo do produto desejado depende da ao

isolada do microrganismo responsvel pela sua sntese, logo, para obter resultados bons
necessriaa utilizao de equipamentos e meios esterilizados, que possam permitir a
conduo de processos em larga escala em condies de assepsia, em especial, a
possibilidade de utilizao de grandes volumes de ar esterilizado, componente
indispensvel aos processos biolgicos aerbios.
O objetivo deste trabalho descrever as particularidades sobre os aerossis
microbianos, indicar formas para se estimar a concentrao de microrganismos
suspensos no ar e apresentar as principais formas disponveis para executar a
esterilizao do ar para brioprocessos.

2. AEROSSIS MICROBIANOS
Aerossis microbianos so aqueles em que as partculas em suspenso no ar
so microrganismos vivos. Provm, geralmente, dum aerossol lquido que apresentam
um ncleo infeccioso, constitudo pelo microrganismo.
As espcies microbianas suspensas no ar atmosfrico, assim como sua
concentrao, podem ser extremamente variveis, dependendo de uma srie de fatores.
Podem-se encontrar microrganismos de maiores dimenses, como bolores (fragmentos
de hifas) e leveduras, assim como espcies de menores dimenses como bactrias ou
seus esporos. Esses microrganismos so provenientes do solo, ou de plantas, ou ainda de
cursos de gua, sendo postos em suspenso pelamovimentao do ar ambiente, sendo os
de menores dimenses frequentemente associados a partculas de poeira.
Dependendo do clima de uma dada localidade, ou mesmo de um dia para outro
em uma mesma localidade, podem-se encontrar diferentes concentraes de
microrganismos suspensos no ar, assim como distintas espcies de microrganismos
suspensos. Ao se efetuar a contagem de microrganismos no ar em um ambiente livre de
radiaes solares e com umidade relativa elevada, muito provavelmente obtm-se
concentraes elevadas de clulas vegetativas. Ao contrrio, uma determinao feita
aps longa exposio luz solar forneceria uma contagem preferencial de espcies mais
resistentes, como os esporos de bactrias. Analogamente, a concentrao de
microrganismos suspensos no ar drasticamente reduzida aps um perodo de chuvas e
extremamente elevada aps um perodo de ventos fortes.
Apesar das possveis variaes em uma mesma localidade, ao se efetuar
determinaes de concentrao de microrganismos por longos perodos, obtm-se
valores mdios relativamente prximos, como encontrados em alguns estudos j
realizados.
Essas informaes permitem refletir sobre o local de onde se deve proceder
captao de ar para um processo. Esse local de captao no deve ser aleatrio, pois se
pode acabar captando ar de locais muito contaminados, como seria o caso de se
localizar a entrada de ar do sistema de compresso muito prxima do solo ou ainda
voltada para locais particulares e sujeitos a um maior nvel de contaminao.

Quanto s dimenses dos microrganismos suspensos no ar, podem-se

considerar como representativos valores da ordem de 0,5 a 1,0 m, ou seja, dimenses
de bactrias ou seus esporos. Por outro lado, as partculas de poeira, que frequentemente
transportam os microrganismos, apresentam dimetros frequentemente superiores a
4m, sendo que os esporos normalmente no esto associados a estas partculas de
poeira.

3. AMOSTRADORES
A determinao da concentrao de microrganismos suspensos no ar
atmosfrico realizada atravs do uso de dispositivos designados genericamente por
amostradores. Esses instrumentos no so apenas importantes por realizarem essatarefa,
mas tambm porque so empregados para a verificao da efetiva esterilizao do ar
destinado ao processo, ou na quantificao de eventuais contaminantes em reas ditas
estreis.
De uma forma geral, todos os amostradores operam de maneira semelhante,
pois o princpio bsico deles consiste em reter, de alguma forma, os microrganismos
suspensos em um determinado volume de ar, dando-se, a seguir, condies para que
estas clulas proliferem, de maneira a tornar possvel a contagem de colnias, para a
quantificao dos contaminantes no volume de ar amostrado.
Tendo em vista essa descrio geral, pode-se concluir que:
a) Dependendo da forma empregada para reter os microrganismos, no se pode
assegurar que esta reteno seja total, podendo-se inclusive imaginar que haja distintas
eficincias de coleta para diferentes amostradores;
b) Dependendo da forma de retenodos microrganismos, pode-se tambm
imaginar a possibilidade da ocorrncia de destruio de certas espcies;
c) As clulas microbianas suspensas no ar podem estar associadas a partculas
de poeira, podendo ocorrer a existncia de mais que uma clula por partcula. Por mais
que se busque desagregar estes conjuntos, sempre difcil afirmar que uma colnia
tenha tido, obrigatoriamente, origem em uma nica clula. Essa , inclusive, a razo
pela qual os resultados so frequentemente expressos em nmero de partculas, ou de
nmero de colnias por unidade de volume de ar amostrado;
d) A etapa final da determinao consiste em contar colnias que se
desenvolveram em um dado meio de cultura e, tendo em vista a grande variedade de
microrganismos suspensos no ar, torna-se difcil eleger um meio no qual se possa
afirmar que todas as espcies se desenvolvam em um dado intervalo de tempo.

Uma primeira consequncia dos fatos acima apontados reside na dificuldade

em comparar resultados obtidos pelo uso de diferentes amostradores, ou com um
mesmo amostrador, porm operado de formas distintas. Outra consequncia clara a
impossibilidade de se obter a concentrao total ou absoluta de microrganismos
suspensos no ar atmosfrico.
Uma forma de minorar esses problemas, especialmente quando se deseja
efetuar testes de efetividade de esterilizao de um dado sistema, consiste em preparar
uma suspenso de um dado microrganismo em ar, previamente submetido
esterilizao. Esse ar, artificialmente contaminado com o microrganismo usado como
marcador, passado atravs do filtro determinando-se a concentrao (ou o nmero) de
microrganismos no ar antes e aps o elemento filtrante, desde que tambm se conhea o
volume de ar amostrado, medindo-se a vazo de ar e o tempo do ensaio. Pode-se assim
quantificar a eficincia de reteno () do filtro em teste:
=

N 1N 2
.100
N1

Onde:
N1: concentrao de microrganismos no ar antes da passagem pelo filtro
(partculas ou colnias por unidade de volume);
N2: concentrao de microrganismos no ar aps a passagem pelo filtro
(partculas ou colnias por unidade de volume).
O fato de se conhecer o microrganismo empregado para esse tipo de
determinao significa que se conhece perfeitamente o aspecto das colnias que se quer
contar (formato, aparncia e cor), alm de se conhecer o meio de cultura e as condies
mais adequadas para a sua proliferao.
A seguir sero apresentadas algumas caractersticas de alguns amostradores
mais frequentemente empregados.

3.1.

IMPINGER
O impinger um dos amostradores mais conhecidos e sobre o qual h muitas

referncias. Existem inmeras verses desse amostrador, sendo um exemplo tpico o

indicado na Figura 1,conhecido como "all-glassimpinger" (AGI).

FONTE: Biotecnologia Industrial Vol. 2 (pgina 67)

Figura 1. All-glassimpinger (AGI) - (I) Entrada do ar; (2) Sada do ar (bomba de

vcuo).
Esse amostrador consta de um recipiente de vidro que contm 10 mLdo lquido
coletor, que pode ser gua destilada, ou determinadas solues como a soluo gelatinafosfato, constituda de gelatina (2 g.L-1) e Na2HPQ4 (4 g.L-1), qual se adiciona 0,01
mL de leo de oliva esterilizado, a fim de evitar a formao de espuma. Antes do incio
da amostragem, todo o conjunto deve ser esterilizado.
Ao se iniciar a amostragem do ar, liga-se a abertura 2, indicada na Figura 1, a
uma bomba de vcuo, de forma a reduzir a presso no interior do recipiente. Dessa
maneira, o ar entrar no amostrador atravs da abertura 1, borbulhando no lquido
coletor atravs do tubo de vidro, o qual capilar em sua parte final para gerar bolhas de
pequeno dimetro. Espera-se, portanto, que os microrganismos existentes no ar fiquem
retidos no lquido.

Terminada a tomada de amostra, o frasco agitado, a fim de promover a

desagregao dos eventuais aglomerados de clulas, determinando-se, ento, a
concentrao de microrganismos no lquido coletor, atravs dos mtodos usuais de
diluies e contagem de colnias em placas.
Conhecendo-se a vazo de ar e o tempo de amostragem, conhece-se o volume
de ar amostrado, tendo-se, portanto, todos os dados necessrios para o clculo da
concentrao de microrganismos neste ar.
Uma das vantagens desse amostrador consiste no fato de no ser necessrio o
uso de medidor de vazo de ar, uma vez executada a calibrao do aparelho, pois o tubo
capilar funciona como um "orifcio crtico". Essa expresso significa uma condio de
trabalho na qual a relao entre as presses reinantes nas extremidades do tubo capilar
suficiente para produzir velocidade do ar igual do som. Essa velocidade no mais
ultrapassada, mesmo que a presso do lado do vcuo diminua ou oscile abaixo desse
valor crtico. Para o ar, a relao de presses de 0,53, significando que se a
amostragem for efetuada de um ambiente presso de 1atm, a presso do lado do vcuo
dever ser inferior a 0,53 atm, podendo inclusive oscilar entre valores abaixo deste e,
mesmo assim, a vazo permanecer constante. Assim, uma vez construdo o
instrumento, ele deve ser submetido a uma calibrao, para se conhecer a vazo de ar
que ele permite, com a devida preciso.
No caso do AGI, pode ocorrer a reteno no tubo de admisso do ar, para
demonstrar isso, empregaram aerossol contendo cristal violeta, sendo que aps certo
tempo de amostragem efetuavam uma lavagem no tubo de admisso, determinando a
concentrao daquele corante atravs de um colorimetro. Demonstraram que no apenas
ocorre essa reteno, como tambm que ela depende do tamanho da partcula,
observando que para partculas de 20 um ocorre praticamente reteno total. Tambm
ocorre a destruio de clulas vegetativas durante a amostragem.
Uma vez constatados esses problemas com o AGI, desenvolveram um outro
tipo de amostrador, que recebeu a designao de amostrador Shipe, indicado na Figura
2.

FONTE: Biotecnologia Industrial Vol. 2 (pgina 69)

Figura 2 - Amostrador Shipe, (I) Orifcio crtico (entrada do ar); (2) sada do ar (bomba
de vcuo)

Esse outro tipo de instrumento consiste ern um erlenmeyer de 125 mL, sendo a
entrada de ar feita atravs de um "orifcio critico". Ele opera de forma similar ao AGI,
colocando-se no erlenmeyer 25 mL do liquido coletor e ligando-se a sada de ar a uma
bomba de vcuo.
Devido a entrada do 'ar ern alta velocidade ser efetuada na superfcie do
liquido, isto provoca um movimento circular do liquido coletor, sendo importante a
localizao do orifcio de entrada, a fim de evitar uma excessiva umidificao das
paredes do frasco.
Como se pode observar,o amostrador Shipe no conta com o tubo de entrada, e
ainda lana as partculas contra a superfcie do liquido coletor que esta em movimento.
Isso evita a mencionada reteno e tambm reduz a possibilidade de destruio de
clulas vegetativas.

3.2.

AMOSTRAGEM POR FILTRAO

Existem vrios amostradores cujo principio bsico da amostragem a filtrao.

Consistem em fazer passar o ar atravs de um elemento filtrante, o qual dever reter os
microrganismos suspensos. Posteriormente, pode-se colocar esse material filtrante em
suspenso em um volume conhecido de um liquido adequado, procedendo-se a uma
agitao vigorosa, a fim de propiciar a passagem dos microrganismos retidos para o
lquido. Finalmente, efetua-se a determinao da concentrao de microrganismos no
liquido, pelas tcnicas usuais de diluies e contagem em placas. Conhecendo-se o
volume de liquido sabe-se o nmero total de microrganismos retidos e, novamente,
conhecendo-se a vazo do ar amostrado e o tempo de amostragem, tem-se todos os
elementos para o clculo da concentrao de clulas no ar.
Altenativamente, pode-se aps a passagem do ar atravs do elemento filtrante
dar condies para que as clulas proliferem no pr6prio coletor, efetuando-se ento a
contagem de colnias. Esse procedimento, quando possvel, evita o trabalho adicional
de suspender as clulas em um liquido para posterior contagem. Um amostrador tpico
dessa categoria o amostrador de algodo, esquematizado na Figura 3.

FONTE: Biotecnologia Industrial Vol. 2 (pgina 71)

Figura 3 Amostrador de algodo, (I) Entrada do ar; (2) Sada do ar (bomba de vcuo).

Aps

sua

montagem

ele

deve

ser

submetido

esterilizao,

preferencialmente por meio de calor seco (estufa), a fim de evitar o umedecimento das
.fibras e a consequente perda de eficincia de reteno de microrganismos. A
amostragem e realizada conectando-se a extremidade 2 a uma bomba de vcuo,
intercalando-se um sistema para a medida da vazo de ar. Aps o tempo de amostragem,
o chumao de algodo retirado do amostrador e assepticamente transferido para um
recipiente contendo um volume conhecido de gua esterilizada. Procede-se, ento, a
uma vigorosa agitao, objetivando a passagem dos microrganismos retidos nas fibras
para o lquido, efetuando-se a determinao da concentrao de microrganismos no
liquido por contagem de colnias em placas.
Esse amostrador apresenta uma serie de inconvenientes, como a dificuldade em
suspender os microrganismos retidos, alem de provocar a destruio de clulas
vegetativas. Altenativamente pode-se empregar l de vidro, mas de qualquer maneira a
obteno de altas eficincias de coleta depende de se ter o material filtrante muito bem
compactado, de forma a se observar uma perda de carga, no leito filtrante, relativamente
elevada e da ordem de 0,5 kgf/cm.
Uma forma mais conveniente de se efetuar amostragens por filtrao consiste
no emprego de um amostrador que consiste em um suporte em ao inoxidvel, o qual
abriga membranas Millipore 47 mm de dimetro e poros de 0,22 m ou 0,8 m,
devendo ser previamente esterilizado.
O sistema dispe de uma bomba de vcuo, que succiona o obrigando a passar
atravs da membrana e tambm atravs de um orifcio critico, a fim de se ter uma vazo
constante e conhecida. Terminada a amostragem, a membrana deve ser retirada
assepticamente e colocada sobre a superfcie de um meio de cultura em pequenas placas
de Petri. Aps tempo adequado de incubao, contam-se as colnias que aparecem sobre
a membrana, obtendo-se, assim, a concentrao de microrganismos no ar amostrado.
Ao que tudo indica, o desenvolvimento de amostradores que operam por
filtrao atravs de membranas, teve seu inicio empregando um sistema cujo elemento
filtrante consistia em papel filtro Whatman 40 e 42. Esse sistema original,
esquematizado na Figura 4, era constitudo de um funil de alumnio, ao qual se adapta
uma folha de papel-filtro apoiado em uma grade de ao inoxidvel. Entre a grade e a
folha de papel coloca-se uma camada de algodo hidr6filo.

FONTE: Biotecnologia Industrial Vol. 2 (pgina 72)

Figura 4 Amostrador de papel filtro.

Aps a esterilizao do sistema, ao se efetuar a passagem de ar atravs da folha

de papel-filtro, o que poderia ser feito acoplando-se um segundo cone aps o elemento
filtrante e este ligado a um orifcio critico e a uma bomba de vcuo, os microrganismos
devem ficar retidos sobre esta folha. Terminada a amostragem, o sistema pode ser
desmontado, adicionando-se a seguir um meio de cultura ao algodo hidrfilo, de forma
a permitir, apos um certo perodo de incubao, a contagem de colnias surgidas na
superfcie do papel-filtro.

3.3.

AMOSTRADORES DE FENDA OU ORIFCIO

O principio bsico de funcionamento desses amostradores consiste em se fazer

com que o ar amostrado incida, a uma dada velocidade, sobre a superfcie de um meio
de cultura slido, havendo, em virtude de uma brusca mudana de direo do ar, o
choque das partculas suspensas que nao acompanham as linhas de corrente,
ocasionando a reteno destas partculas nesta superfcie.

A Figura 5 mostra esquematicamente o amostrador de fenda.

FONTE: Biotecnologia Industrial Vol. 2 (pgina 73)

Figura 5 Amostrador de fenda. (1) Placa de Petri; (2) Disco giratrio; (3) Tubo e
fenda (entrada do ar); (4) Sada do ar para o medidor de vazo e bomba de vcuo; (5)
Caixa metlica.
Como se nota, consta de uma placa de Petri, contendo um meio de cultura
slido preso a um disco horizontal giratrio, estando todo este conjunto no interior de
uma caixa metlica, provida de uma janela que permite fechamento hermtico. O ar
entra por um tuba vertical que possui, na extremidade inferior, uma fenda atravs da
qual as partculas em suspenso no ar so lanadas contra a superfcie coletora. Uma
vez esterilizado todo o conjunto, a sada de ar e conectada a uma bomba de vcuo,
intercalando-se um sistema para a medida da vazo de ar.
Durante o perodo de amostragem, o disco gira com velocidade angular
regulvel, em funo da contaminao do ar que se esta tomando como amostra,
podendo-se imaginar valores desde 0,1 rpm ate cerca de 2 rpm. Aps a amostragem, a
placa de Petri retirada do amostrador, fechada em condies de assepsia e incubada.
Decorrido um intervalo de tempo adequado, conta-se o nmero de colnias que
aparecem sobre o meio de cultura. Conhecendo-se a velocidade de rotao da placa, a

vazo de ar e o nmero de colnias sobre o meio, ou parte de sua superfcie, tem-se

todos os elementos para quantificar a contaminao do ar amostrado.
No h como proceder a desagregao dos aglomerados de clulas, o que
tambm ocorre com os sistemas, anteriormente descritos, nos quais se efetua a
contagem diretamente sobre a superfcie coletora. Isso significa que cuidados devem ser
tomados, especialmente quando se trabalha com aerossis de microrganismos definidos,
a fim de evitar a presena de aglomerados, que podem ser aleatoriamente desfeitos
sobre a superfcie coletora durante a amostragem, gerando contagens igualmente
aleatrias.
A eficincia de reteno de aerossis depende da vazo do ar, assim como da
distncia da fenda ao meio de cultura. Determina-se um valor Maximo de 95% de
reteno, quando empregavam vazes superiores a 28 L/min e 2 mm de distncia da
fenda ao meio. Essa reteno diminui sensivelmente quando se reduz a vazo do ar,
sendo que obtem-se retenes inferiores a 70%, operando com uma vazo da ordem de
56 L/min e uma distancia de 6 mm entre a fenda e o meio solido.
Para amostragens muito prolongadas pode ocorrer ainda o inconveniente da
perda de gua do meio de cultura slido, com a consequente abertura de fendas no meio,
o que inutilizaria o ensaio efetuado.
Apesar dos inconvenientes e cuidados apontados no que se refere a esse tipo de
amostrador, ele apresenta certas vantagens sobre os demais. De fato, pode-se imaginar a
realizao de teste de um determinado sistema para a esterilizao do ar, como por
exemplo o teste de um determinado material filtrante, determinando de forma contnua a
eficincia de esterilizao ao longo do tempo de operao do sistema. Pelo emprego de
uma suspenso de um dado microrganismo conhecido, marca-se no meio de cultura a
posio da fenda no instante inicial. Aps a incubao, pode-se proceder a contagem do
nmero de colnias existentes em determinados setores da placa, os quais
correspondero a certos intervalos de tempo conhecidos, desde que se conhea a
velocidade de rotao da placa. Como se conhece a vazo, sabe-se o volume de ar
amostrado ern cada setor da placa e, portanto, a correspondente concentrao de
microrganismos no ar que passou pelo elemento filtrante ern teste. Pode-se, assim,
determinar a variao da eficincia de reteno ern funo do tempo de amostragem, ou
de operao do sistema de esterilizao. evidente que outros amostradores tambm

permitem esse tipo de determinao, porm executada de forma intermitente, pois a

cada amostragem h a necessidade de substituio do sistema de coleta do amostrador,
para a realizao da contagem de partculas. No caso do amostrador em questo, isso
no necessrio, bastando providenciar a substituio da placa, apos um giro completo,
por outra esterilizada. Na verdade, esses testes de sistemas de esterilizao de ar,
destinados a processos fermentativos, so de grande importncia, tendo ern vista a
necessidade de alta confiabilidade.

4. MTODOS PARA ESTERILIZAO DO AR

4.1.

ESTERILIZAO POR AQUECIMENTO

4.2.

ESTERILIZAO POR RADIAES

4.3.

ESTERILIZAO POR FILTRAO

5. CONCLUSO
A esterilizao do ar para processos fermentativos exige uma rigorosa
conduo em condies de assepsia e o mtodo mais adequado o dos filtros de
membranas

polimricas

hidrofbicas.

No

entanto,

esses

filtros

devem

ser

adequadamente projetados, evitando-se o emprego de velocidades excessivas de ar

atravs da membrana esterilizante, a fim de se contar com baixas perdas de presso.
Igualmente, deve-se haver todo o cuidado com a instalao, buscando uma
efetiva vedao do sistema, para que no ocorra contato entre o ar esterilizado e o ar
atmosfrico. Uma soluo o emprego de pr-filtros, os quais podem ser substitudos
com uma maior frequncia, a fim de ampliar o tempo de operao da membrana
esterilizante. Tanto os pr-filtros como os filtros devem ser substitudos, portanto
necessrio um fcil acesso ao sistema, a fim de que esta operao possa ser rpida e
efetuada com segurana.
No caso dos processos fermentativos contnuos, nos quais se espera uma
operao ininterrupta por vrias semanas, interessante a instalao de dois filtros em
paralelo para cada reator. Dessa forma, pode-se providenciar a esterilizao de um filtro
aps certo tempo de operao sem interromper o processo.

6. REFERNCIAS
BORZANI,

W.;

AQUARONE,

E.;

LIMA,

U.

A.;

SCHMIDELL,

W.;Biotecnologia Industrial. Volume 2, Editora Edgard Blcher LTDA.

MELLO, M. T.; Aerossis Microbianos Proteo contra Aerossis
Infectantes em Tcnicas Bacteriolgicas. Seo de Bacteriologia, Instituto Oswaldo
Cruz, Rio de Janeiro, Brasil.