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Aplicaciones ms importantes.
Crdoba, 27/06/16
Agenda
Fermentis
La fermentacin alcohlica
Compuestos voltiles
Manejo de Levadura
Cultivos de levadura
Levadura seca
Recuperacin de levadura
Azcares
Resistencia al alcohol
La fermentacin alcohlica
La fermentacin alcohlica
C6H12O6
Levadura
2C2H5OH + 2CO2
Azcar
Etanol /
alcohol
Dixido de
carbono
Glucosa o fructosa
(180g/gmol)
180 g
92 g
88 g
+ Energa
ATP
Asimiliacin de azcares
Glucosa
Transportador
Hexosas
Glucosa
Fructosa
Maltosa
Glucosidasa
Fructosa
Maltosa
Maltotriosa
Membrana plasmtica
Maltotriosa
Maltosa
Aldehdos
Alcoholes
superiores
Etanol
Etanol
ATP
Compuestos de azufre
CO2
CO2
steres
cidos
orgnicos
7.2
7.8
20
25
Horas de fermentacin
Fase estacionaria
Fase de desaceleracin
Fase exponencial
Fase de aceleracin
Curva de crecimiento
N= 58 x 106 clulas/ml
7.6
6.8
6.6
No = 5 x 106 clulas/ml
30
35
40
45
Produccin de biomasa
Lpidos
Lipopolisacridos
Azcares
(25)
NAD(P)H,
FADH2
Pi
Glucosa
ATP
Glucosa 6-P
Fructosa 6-P
Pentosa 5-P
Eritrosa 4-P
3 P-Glicerato
Priuvato
Acetil-CoA
-Cetoglutarato
Succinil-CoA
Oxaloacetato
Glicgeno
Peptidoglicanos
SO4
Amino cidos
(20)
Protenas
Cuerpos de
inclusin
Biomasa
cidos grasos
(8)
Envoltura celular
y membranas
internas
Citosol
Poliribosomas
NH4
Nucletidos
(8)
ARN
ADN
Cromosomas
Cambios en la fermentacin
Extracto
Veloc. de ferment
Azcar
P. osmtica
Levaduras
O2
Alcohol
pH
CO2
Cambios en la fermentacin
Parmetro
Extracto total
Concentracin de azcar
Valor pH
Oxgeno disuelto
Presin osmtica
Concentracin de
levadura
Concentracin de etanol
Presin CO2 a presin
constante
Inicio
12% / 1,046
g/ml
810% p/p
5,25,6
89 mg/l
0,8 mPa
Fin
1,82,5% /
1,0051,008 g/ml
00,5% p/p
4,14,5
0 mg/l
2,3 mPa
1530 mill/ml
0
5090 mill/ml
45% p/p
36 g/l
La fermentacin alcohlica
C6H12O6
Azcar
Levadura
2C2H5OH + 2CO2
Etanol /
alcohol
Dixido de
carbono
Glucosa o fructosa
(180g/gmol)
180 g
92 g
88 g
Almidn
Maceracin
Glicerol
Lactato
Acetato
Azcares
fermenta-bles
Azcares no
fermenta-bles
Fermentacin
Succnico
Biomasa
Azcar residual
Dextrinas
Azcares residuales
CO2
Almidn
Maceracin
Glicerol
Lactato
Acetato
Azcares
fermenta-bles
Azcares no
fermenta-bles
Fermentacin
Succnico
Biomasa
Azcar residual
Dextrinas
Azcares residuales
CO2
Compuestos voltiles
Compuestos voltiles que impactan en el perfil sensorial
Compuesto voltiles asociados a cervezas verdes
VOLTILES
cidos grasos
cido actico
cido butrico
cido 3-methyl butrico
steres
Aldehdos
Alcoholes
Acetato de etilo
Isoamil acetato
Etil-caproato
Etil-vapilato
Etil-laurato
Etil-hexanoato
Acetaldehdo
2-nonenal
3-Metil-butanal
Trans-2-heptanal
Isobutiraldehdo
Etanol
2-Metil-butanol
3-Metil-butanol
2-Fenil-butanol
3-Fenil-etanol
4-Etil-fenol
Hexanol
Isoamylalcohol
Isobutylalcohol
Octanol
Acetaldehdo
Acetaldehdo (ppm)
70
60
50
40
30
20
10
W34/70
S23
Saflager
S189
K97
US05
S04
Safale
17
WB06
S33
Safbrew
T58
steres totales
W34/70
S23
Saflager
S189
K97
US05
S04
Safale
WB06
S33
Safbrew
18
T58
steres separados
30
20
10
0
W34/70
S23
Saflager
S189
K97
US05
S04
Safale
WB06
S33
Safbrew
19
T58
Alcoholes superiores
S23
Saflager
S189
K97
US05
S04
Safale
WB06
S33
Safbrew
20
T58
Veloc de fermentaicn
Puntos clave
Expresin de steres
Elevada temperatura e
inoculacin
Tiempo corto de fermentaicn
22
Acetaldehdo
VDKs (diacetilo)
cido sulfdrico
23
Treonina
Piruvato
-acetohidroxibutirato
Isoleucina
-acetolactato
Valina
-acetolactato
-acetohidroxibutirato
diacetilo
2-3-pentanediona
2-3-pentanediol
2-3-butanodiol
Produccin de acetaldehdo
Fermentacin alcohlica
Aroma a manzanas
verdes
Piruvato
H
Piruvato
decarboxilasa
CO2
Acetaldehdo
NADH + H
Alcohol
deshidrogenasa
NAD
Etanol
Produccin de H2S
H2S y mercaptanos
Manejo de Levadura
Cultivos de levadura
Levadura seca
Recuperacin de levadura
31
Puerza
Almacenamiento
madre
Costo
madre
Transporte
madre
Trabajo
Riesgo
Asegurada desde
laboratorio
2 - 4 meses en
refrigerador
Elevado
Difcil
Alto
Elevado
Cultivo lquido
1 semana en
refrigerador
Bajo
Muy difcil
Alto
Elevado
2 aos a temp
ambiente
Medio bajo
Fcil
Bajo
Bajo
Presentacin
Slant puro
Fase estril
Fase no estril
Medio
lquido
Medio
slido
50
ml
10
ml
24 hs
25- 28
C
24 hs
25- 28
C
48 hs
25- 28
C
100
ml
HB
20 l
1l
Craf
t
10 l
Fase de laboratorio
Se requiere un laboratorio
microbiolgico. La esterilidad es
absolutamente necesaria.
Cultivo de 10
litros,
proveniente
de la fase lab
24 h
25- 28
C
Prop 1 (50 l)
Prop 2 (500 l)
24 h
Temp.
normal de
fermentaci
n
24 h
25- 28
C
24 h
25- 28
C
Propagacin feed
batch
24 h
25- 28
C
Tanque CC
5000 l
Fase industrial
Produccin de biomasa
Producir biomasa de
levadura en una fbrica de
cerveza?
Producir biomasa de
levadura en fbricas
especializadas?
Fcil suministro
Fcil de almacenar
Fcil de usar
Confiable consisiten
40
Produccin de LAS
Gx1600
Rehhdratacn instantnea
Gx26
42
Materia seca: 20 a 35 %.
Agua : 75 a 80 %.
Agua: 6 % a 3,5 %.
Optima turgencia.
No hay turgencia.
Permeablidad selectiva
Fosfolpidos + protenas + carbohydratos + lpids + = Membrana
Sterol
44
Source : Wikipedia
Tamao completo
Reduccin de tamao
Parcialmente cristalina
Endovescula
Plegado
Seca
45
Baja rotura
Secado
Fermentis 2015 All rights reserved
Hidratacin
46
Hidratacin
Plegado
Endovesculas
Levadura viva
Recuperacin de la funcionalidad
de la membrana
Reduccin del tamao de
membrane Riesgo de rotura
Levadura muerta
Levadura muerta
47
Riesgo de disrupcin
80 % viabilidad
Levaduras robustas
Viabilidad (%)
100
80
60
40
Levaduras frgiles
20
0
0
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Viabilidad (%)
Hidratacin
RECOMENDACIN:
Levadura sobre la
superficie del lquido
80
70
60
50
40
30
20
10
0
Agitacin suave o
nula
No agregar liquid
sobre la levadura
20 min
Rehidratacin
de la levadura
Ale
25-29C
Lager
21-25C
Mezclado suave
51
Dejar descansar 20
min
Inocular en el
fermentador
Temperatura luego de la
rehidratacin y antes de la
incoulacin
4 C
18 h
20 C
6h
25 C
4h
52
Inoculacin
Rango
Tasa de inoculacin
recomendada
[C]
[C]
[g/hl]
Ales
24-30
15-24
50-80 g/hl
Salager
20-26
12-15
80-120 g/hl
<12
200-300 g/hl
53
A
B
54
Inoculacin directa
2/ Inocular levadura
seca dircta sobre el
mosto
3/ Completar el
tanque de
fermentacin con
mosto a temperature
de fermentacin
55
Tanque de rehidratacin
Boca
hombre
Termmetro
Entrada de liquido
Drenaje
Inoculacin
MC
MF - I
MF - II
R0
R1
R2
59
Protocolo
Tubos EBC
Gravedad original: 18P (extracto de malta)
Temperatura:
20C para Ales,
12C para Lagers durante 48h y luego a 14C
60
Perfil e fermentacin
Time (Days)
10
12
14
16
18
20
0%
18 S189
18 W34/70
30%
18 S04
40%
18 US05
18 K97
60%
18 T58
70%
18 S33
80%
18 WB06
90%
100%
61
Brew
50%
Ale
% de asimilacin de azcares
20%
Lager
18 S23
10%
Time (Days)
10
12
14
16
18
20
0%
10%
% de asimilacin de azcares
20%
30%
18 S23
40%
18 S189
50%
18 W34/70
60%
70%
80%
90%
100%
Las levaduras lagers necesitan ms tiempo que las ales. Diferentes cinticas entre
lagers
Fermentis 2015 All rights reserved
62
Time (Days)
10
12
14
16
18
20
0%
10%
% de asimilacin de azcares
20%
30%
18 S04
40%
18 US05
50%
18 K97
60%
70%
80%
90%
100%
63
Time (Days)
10
12
14
16
18
20
0%
10%
% de asimilacin de azcares
20%
30%
18 T58
40%
18 S33
50%
18 WB06
60%
70%
80%
90%
100%
64
18P, 20C
0.90
Atenuacin aparente %
0.80
0.70
0.60
0.50
BE-256
Safbrew Abbaye
0.40
Safbrew K-97
5 das
0.30
0.20
0.10
0.00
0.00
2.00
4.00
6.00
8.00
10.00
12.00
14.00
Das
65
16.00
18.00
20.00
Safale US-05)
Tiempo (das)
0
10
15
20
25
30
0%
20%
40%
13,5 US05
18 US05
60%
22,5 US05
80%
100%
120%
66
Almidn
H2C
5C
H
C OH
HO C
OH
C2
OH
O H
C1
O
OH
OH
HO C
O H
C1
4C
C2
OH
O H
H
C2
OH
4C
C1
O
H
OH
C
3
O H
H
C2
OH
4C
C
1
5C
H
O
H
OH
C
3
OH
H2C
H2C
5C
OH
H2C
5C
H2C
5C
C
OH
C
OH
H2C
O H
H
C2
OH
4C
C
1
5C
H
O
H
OH
C
3
O H
H
C2
OH
COH
1
Amilosa
Actividad enzimtica
Enzima
- Amilasa
Cortes al azar
- Amilasa
Ataque desde
le extremo
reductor
Producto
pH
ptimo
Dextrinas y
maltotriosa
5,3 - 5,8
Maltosa
5,0- 5,5
Temp.
ptima
67 - 75 C
60 - 65 C
Temp. de
Inactivacin
80 C
70 C
No
Fermentables
Fermentables
Glucosa
Maltosa
Maltotriosa
Dextrinas
>3
unidad
es de
glucos
a
DP1
DP2
DP3
>DP3
Attenuacin (%)
90%
85%
80%
75%
70%
65%
60%
W34/70
S23
S189
K97
Saflager
US05
S04
Safale
WB06
S33
T58
Safbrew
73
Abbaye
BE-256
12.0
10.0
8.0
6.0
4.0
2.0
2.0
4.1
2.1
2.4
3.0
10.0
0.0
12.2
10.8
0.0
W34/70
S23
S189
K97
US05
S04
WB06
S33
T58
Abbaye
BE-256
0.0
Saflager
Safale
Safbrew
74
Maltotriosa residual
Maltotriosa residual vs gravedad original
18
16
Maltotriosa g/l
14
12
10
W34/70
T58
6
4
2
0
10
12
14
16
18
20
75
22
24
Etanol final
9.00
8.00
7.00
6.00
5.00
4.00
10
12
14
16
18
20
22
24
26
28
Original Gravity P
Example of the Safbrew T-58 :
Part from a certain level of sugar in the wort, the yeast cannot assimilate the sugar to produce
alcohol
76
Etanol final
60
50
40
Ethanol g/l
Sugars g/l
30
20
10
0
10
12
14
16
18
20
22
Gavedad orginal P
77
24
26
28
Etanol final
10.00
9.50
9.00
8.50
8.00
7.50
7.00
6.50
6.00
W34/70
S23
Saflager
S189
K97
US05
S04
Safale
WB06
S33
T58
Safbrew
78
BE-256
Abbaye
Azcares resiudlaes
12.0
10.8
10.0
10.0
8.0
6.0
4.1
4.0
2.0
2.1
2.0
2.4
3.0
0.0
0.0
W34/70
S23
Saflager
S189
K97
US05
S04
Safale
WB06
0.0
S33
Safbrew
*Depends on the wort quality
T58
79
BE-256
Abbaye
Tolerancia al alcohl
6.00
W34/70
S23
Saflager
S189
K97
US05
S04
Safale
WB06
S33
T58
Safbrew
80
Abbaye
BE-256
Etanol final
12.00
10.00
8.00
6.00
13,5P
4.00
18P
22,5P
2.00
27P
27P
22,5P
0.00
W34/70
S23
Saflager
S189
K97
18P
US05
S04
Safale
WB06
13,5P
S33
Safbrew
Tiempo (das)
81
T58
Etanol final
Depende de:
Gravedad inicial
Hidrlisis (calidad de la malta, diagram de maceracin, actividad
enzimtica)
Hydrlisis (calidad de la malta, diagram de maceracin, actividad
enzimtica)
82
Floculacin
Depende de:
83
Floculacin
Activador
Ca2+
Residuos de
manosa de
paredes
Protena Flo
inactiva
Protena Flo
(activa)
Levaduras en suspensin
Floculacin
Sedimentacion
CO2
Floculacin y sedimentacin
SafaleTM S-04
SafaleTM K-97
SafaleTM US-05
SafbrewTM WB-06
SafbrewTM S-33
SafbrewTM T-58
SafbrewTM BE-256
SaflagerTM S-23
SaflagerTM S-189
SaflagerTM W 34/70
Floculacin
Comportamiento "top
cropping"
+
+
+/+
+
+
+
+
+/+
-
Sedimentacin
Rpida
Lenta
Media
Lenta
Media
Media
Rpida
Rpida
Rpida
Rpida
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www.facebook.com/Fermentis
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95