REZUMAT

Teza intitulat

Dinamica unor indici biochimici sangvini la mamifere n

intoxicaia cu venin de albine are la baza un studiu original efectuat pe loturi de animale de
laborator injectate cu doze variate de venin de albine, urmrindu-se modificrile produse la
nivelul principalelor organe i esuturi din organismul animal, crend premisele extrapolrii
acestor rezultate pentru viitoarele terapii de medicina veterinar i medicina uman.
Teza cuprinde un numr de 247 pagini, structurat n dou pri:
Partea I stadiul actual al cunoaterii ce cuprinde un numr de 83 pagini, compus
din trei capitole coninnd consideraii generale despre veninul de albine din punct de vedere
biochimic i toxicologic. n aceast parte s-au folosit date din literatura de specialitate, cteva
date despre parametrii biochimici sangvini la mamifere i implicaiile lor fiziopatologice
precum i toxicitatea veninului de albine la mamifere, cu prezena diverselor mecanisme
fiziopatologice.
Partea II reprezentnd cercetarea propriu zis, este partea personal structurat
deasemenea pe trei capitole, cuprinde scopul lucrarii cu prezentarea materialelor i metodelor
de cercetare, un capitol dedicat rezultatelor i discutiilor n urma inocularii de doze succesive
la animalele luate n studiu i un ultim capitol care conine concluziile generale ale
cercetrilor efectuate.
Datele prezentate n aceast lucrare sunt susinute de un numr de 47 tabele i 117
figuri, reprezentri grafice plus imagini de anatomie-patologic inserate la nivelul capitolului
II, reprezentnd adevarate dovezi ale originalitii lucrrii de fa.
Bibliografia prezent n finalul lucrrii nsumeaz 159 titluri din literatura roman i
strin, precum i pagini electronice ale diverselor reviste i lucrri de specialitate care fac
referire la tema aleas.
Deasemenea bibliografia cuprinde legislaie specific n domeniul toxicologiei,
standarde ale unor metode de lucru, precum i titlturi ale unor lucrri proprii, susinute la
diverse simpozioane ale Faculilor de Zootehnie i Medicin Veterinar, una din lucrri fiind
chiar recompensat cu premiul I n 2011.
Originalitatea tezei consta n relevarea efectului toxic al veninului de albine asupra
organismului mamiferelor n funcie de doza administrat.

Numeroasele cercetri efectuate pn n prezent, arat c veninul de albine are o

structur complex, n el fiind prezente att substane de natur organic ct i anorganic,
substane ce-i confer proprieti particulare, specifice.
Veninul de albine este un produs secretat de glandele de venin i eliminat de ctre
albinele lucrtoare sub aciunea unor stimuli externi. n momentul eliminrii din vezicula
aparatului de aprare al albinei, veninul se prezint ca un lichid incolor, dens. n contact cu
aerul se solidific repede i se elibereaz de componenii si volatili. Prin rzuirea veninului
de albine cristalizat de pe placa colectoare, acesta devine o pulbere afinat de culoare alb mat
- uor cenuie. Veninul de albine este termorezistent, temperatura sczut sau cea ridicat
nedistrugnd nsuirile lui. Sub form uscat poate fi pstrat timp ndelungat fr a-i pierde
proprietile toxice. Este rezistent n aciunea acizilor i a bazelor. Datorit compoziiei
chimice complexe veninul de albine are o aciune biologic bine determinat, constituind o
importanta surs de substane active pentru produsele apiterapeutice. Veninul de albine
conine mai mult de 40 substane active, multe cu efecte biologice. Cel mai relevant este un
antiinflamator numit melitina. Aceast substan face s se produc hormonul cortizol.
ntruct este un antiinflamator, studiile comparative au artat c melitina este de 100 de ori
mai puternic dect hidrocortizonul. De aceea veninul de albine poate fi necesar n tratarea
bolilor cu caracter inflamator precum artrita reumatoid.
Ali compui ce pot avea efect farmacologic includ: apamina, ce are ca efect ntarirea
reelei de ci nervoase; adolapina, un antiinflamator i analgezic; norepinefrina, dopamina i
seratonina cu efect n depresii.
Apicultorii, ce folosesc ntreaga gam de produse apicole, sunt persoanele cu cea mai
ridicat medie de via (dup categoria profesional a dirijorilor de orchestr) i la care rar
sunt semnalate cazuri de cancer, este categoria socio-profesional cea mai plin de energie i
sntate.
n literatura de specialitate se apreciaz c dintre compuii evideniai pn n prezent
n veninul de albin (VA), cei majori sunt reprezentai de ctre histamin, catecholamine,
poliamine, apamin, melitinin i fosfolipaz .
Veninul de albine este compus din proteine, enzime, hormoni, sruri minerale, uleiuri
eterice i alte substane volatile. Principalul component al veninului de albine l reprezint
substanele proteice n a cror structur exist trei fracii. Cea mai important fracie proteic
este melitina, aceasta fiind considerat i componenta cea mai activ a veninului. n melitin
s-au identificat glicocol, alanin, valin, leucin, izoleucin, serin, tirozin, lizin, arginin,
asparagin, glutamin, triptofan, prolin. Aceast fracie a veninului este hemolitic,
2

degajeaz histamin i serotonin, scurteaz fibrele musculare netede i striate, scade

presiunea sanguin i ritmul respirator, blocheaz sinapsele nervoase periferice i centrale etc.
Are reacie alcalin, cu pH-ul de 11,0. O alt fracie bine reprezentat este cea alctuit din
fermenii hialuronidazei i fosfolipazei A n fosfolipaz, care are pH-ul 10.
Natura complex a veninului trebuie pus pe seama marii diversiti de insecte i
vertebrate prdtoare care pot ataca familia de albine. La om reaciile la pictura de venin
sunt de trei feluri: locale, sistemice i anafilactice. n primul caz de reacie, umfltura local
se extinde n timp de cteva ore, iar locul nepat poate fi rou, cald i sensibil 2-3 zile. O
reacie sistemic se petrece n cteva minute dup neptur i poate provoca o erupie
general, tulburri respiratorii, grea, vomismente, dureri abdominale i sincope.
n reacia anafilactic, simptomele se manifest n cteva secunde dup nepare i
comport dificulti respiratorii, confuzii mentale, vomismente, un oc de tensiune sanguin
care poate conduce la pierderea cunotinei; i la moartea prin colaps respirator i circulator.
n general se poate crea o oarecare rezisten la nepturile albinelor dar totui, reaciile la
acestea pot deveni pe neateptate, dintr-o cauz sau alta, foarte intense. Cei care sunt foarte
sensibili pot muri dintr-o singur neptur de albin, dar un om a nregistrat 2243 de
nepturi i a supravieuit.
Din punct de vedere toxicologic, veninul de albine are o aciune direct - toxicitatea
celular (care duce la destructurarea celulelor) i o aciune indirect - manifestari
imunologice. Aceasta, datorit compoziiei chimice care este foarte complex i contine
enzime, peptide, amine, acizi aminai i alte substane care pot fi alergeni puternici pentru
organism.
Din punct de vedere fiziologic toate aciunile veninului de albine sunt toxice.
Toxicitatea veninului de albine este dat de glanda veninoas mare a albinei. n urma
nepturii, inflamarea se datoreaz histaminei din venin. Nu exist vaccin mpotriva veninului
de albine. Anumii cercettori consider ca antidot al vaccinului de albine soluia apoas de
propolis, stabilizat i standardizat - Propolis H4. n afara utilizrii sale intenionate i
supravagheate medical, veninul de albine trebuie evitat.
Sausemnalaturmtoarele aciuni ale veninului de albine:
1.

hemolitic (produce distrugerea globulelor roii);

2.

hemoragic (produce ieirea sngelui din vas);

3.

neurotoxic.

S-a dovedit c veninul albinelor are proprieti antiinflamatoare. Aciunea terapeutic

a veninului se datoreaz coninutului de melitin, o substan cu proprieti antiinflamatoare.
Melitina stimuleaz secreia de ctre organism a unui hormon antiinflamator, cortizolul. n

acelai timp, melitina are proprieti antibacteriene, stimuleaz producerea de anticorpi i

imunitatea organismului, mbuntete microcirculaia.
Scopul tezei de doctorat const n urmrirea evoluiei unor constante biochimice
sangvine i hematologice la obolanii i iepurii inoculai cu venin de albine. Experimentul
reprezint un mijloc de stabilire a corelaiei ntre intoxicaia cu venin de albine i modificarea
constantelor biochimice sangvine la mamifere. Cercetarea precede testrile clinice i este
bazat aproape n totalitate pe teorie i experimentele pe animale.
Evoluia valorilor constantelor biochimice ale sngelui unor specii de mamifere
(obolani si iepuri), poate reflecta tendina respectivelor constante n intoxicaia cu venin de
albine pentru toate mamiferele.
n cadrul acestei teze doctorale modelul experimental prezentat reprezint mijlocul
pentru a stabili corelaia ntre intoxicaia cu venin de albine i modificarea constantelor
biochimice sangvine, aceasta fiind ipoteza particular de lucru pentru acest experiment.
n afar de efectul toxic, inflamator, alergic, veninul are efect terapeutic. Actualmente
a ctigat popularitate medicina alternativ, inclusiv terapia cu venin de albine, datorit
numeroaselor rapoarte de cercetare care au evideniat efectele sale benefice.
Aceste proprieti controversate atribuite veninului de albine (anafilaxia, edemul
angioneurotic, cardiotoxic, nefrotoxic, hemolitic dar i efectele imunomodulatoare,
antimutagene, antitumorale, antiinflamatoare i antinociceptive) ne-au condus la iniierea
studiului.
Consecveni scopului propus, urmrim dinamica modificrii indicatorilor biochimici
sanguini la administrarea unor doze subletale variabile de venin de albine i variaia
raspunsului organismului mamifer la veninul de albine dependent de doza i timpul de
aciune.
De asemenea prezint interes i evoluia valorilor hematologice, la fiecare recoltare
fcndu-se i o hemoleucogram complet.
La obolanii inoculai cu venin de albine n variate doze (0,3; 0,6; 1,2 mg) am
constatat urmatoarele:
creterea semnificativ statistic a numrului de hematii proporional cu doza inoculat, de la
6,22 la 8,60 x 106/l dup 6 ore.
De asemenea hemoglobina crete de la 10,26 g/dl la 13,75 g/dl dup 9 h.
Se produce o hemoconcentraie semnificativ tradus prin creterea numrului de hematii i a
hematocritului. Apoi are loc hemoliza cu eliberarea hemoglobinei.

creterea simultan a numrului de leucocite de asemenea proporional cu doza inoculat; n

primele 6 ore de la inoculare numarul de leucocite aproape se dubleaza, de la 3,5 la 6,5 x
103/l.
proteinele totale au avut o evoluie sincron cu granulocitele.
Din studiul dinamicii majoritii parametrilor luai n studiu (eritrocite, CHEM, creatinin,
proteinele totale, AST, ALT), se remarc existena a dou subfaze de evoluie fiziologic:
subfaza de hemoconcentraie;
subfaza hemolitic.
n prima faz se constat o cretere o dat cu hemoconcentratia urmnd ca n faza a doua s
intervin probabil reacii de aparare-compensare, respectiv procese de reparare tisular.
Dinamica proteinelor la iepurii inoculai cu doze variabile de venin de albine i
recoltare periodic a probelor biologice, arat o scdere treptat a proteinemiei n primele 6
ore indiferent de doza de venin inoculat de la 6,90 g/dl la 5,70 g/dl la lotul E1 (scderea cea
mai mare) urmat de o revenire treptat la valorile iniiale.
In ceea ce privete evoluia fosfatazei alcaline (PAL) se observ o cretere progresiv,
de la 210.5 la 504,6 la 9 ore dup inoculare cu 0,1 mg venin albin.
Evoluia transaminazelor serice. Remarcm diferene net semnificative i o cretere
constant n ceea ce privete nivelului seric al indicatorilor AST, ALT, creatinin i uree
urmat de o tendin de scdere a valorilor la 9 ore de la inoculare.
Creatinina, proteinele totale, AST i ALT nregistreaz o cretere progresiv a
valorilor n primele 6 ore, urmat de o scdere constant dup acest interval. CHEM scade n
prima subfaz, pentru ca apoi s revin progresiv la valorile normale. Albumina, ureea,
fosfataza alcalin i amilaza nregistreaz o cretere constant pn la 24 ore de la inocularea
initial.
Analiznd evoluia colesterolului se nregistreaz o scdere a valorilor pn la 6 ore de
la 156,2 la 95,4 mg/dl la lotul E1 (scderea cea mai accentuat) urmat de o revenire
accentuat la doza de 0,3 mg venin i o revenire treptat a valorilor iniiale la inocularea cu
0,6 i 0,12 mg venin de albin.
Variaiile glicemiei la toate loturile experimentale sunt n limite fiziologice de
referin, n timp ce variaiile indicatorilor metabolismului lipidic sunt extrem de oscilante.
Lipoproteinele HDL, LDL, VLDL i chilomicronii sunt modificate de 2 enzime
plasmatice:

lecitin-colesterol

aciltransferaz,

cu

activitate

fosfolipazic

A2

lipoproteinlipaza. S-a demonstrat c fosfolipazele A2 din veninuri au activitate enzimatic de

3 ori mai mare dect lecitin-colesterol aciltransferaza plasmatic.
5

Creatinina s-a meninut n limite normale i a variat nesemnificativ la lotul E2, n timp
ce la lotul E3 am remarcat o scdere sub limita inferioar de referin la 6 ore de la inoculare,
cu o revenire ctre limita inferioar la 24 de ore.
Ureea a crescut uor la T1 i T2 fa de T0, valorile depind limita superioar de
referin, urmnd ca la 24 de ore s nregistreze o reducere semnificativ pn n limitele
valorilor de referin.
La iepurii luai n studiu, inoculai cu aceleai doze de venin, am constatat modificarea
urmtorilor parametri biologici:
-creterea glicemiei (fr a depi limitele de referin ale speciei) la doze de 0,3 mg
per animal, ncepnd cu 6 ore de la inoculare, n timp ce la doze de 0,6 mg i 1,2 mg per
animal, creterea a aprut la 2 ore de la inoculare, cu revenire la valorile iniiale dup 24 de
ore. Creterea nesemnificativ i tranzitorie a glicemiei se datoreaz efectului adrenergic i
corticosteroidic indus de substana inoculat.
-fosfolipaza A2 din veninul de albine a determinat la iepurii luai n studiu o reducere
semnificativ a colesterolemiei i trigliceridemiei, relevant la 2 i 6 ore de la inoculare, cu
revenire la valorile iniiale la 24 de ore. Efectul este rezultatul coroborat al aciunii enzimatice
asupra lipoproteinelor plasmatice i a prelurii trigliceridelor n esutul adipos.
Aceast aciune favorabil pentru organism ar merita speculat n vederea valorificrii
efectului terapeutic al veninului de albine n tratamentul dislipidemiilor.
Inocularea dozelor de 0,3 mg de venin de albine per individ la iepurii luai n studiu a
evideniat creterea progresiv a nivelului seric al transaminazelor (ALT i AST) i al ureei,
demonstrndu-se astfel instalarea insidioas, lent a strii de hepatotoxicitate i disfuncie
renal, chiar la doze mici de venin.
Inocularea dozelor de 0,6 i 1,2 mg venin de albine per iepure a evideniat creterea
imediat, la 2-6 ore a transaminazelor serice (AST i ALT) cu revenire dup 24 de ore, dar i
o cretere a PAL la 24 de ore de la inoculare, modificri care indic instalarea unor leziuni
hepato-celulare reversibile (rmne de clarificat dac originea creterii PAL este leziunea
colangiocelular sau secundar stimularii corticosuprarenale).
Creterea rapid a nivelului seric al ureei la doze de 0,6 i 1,2 mg venin per iepure,
apoi revenirea la valori normale dup 24 de ore, evideniaz disfuncia renal acut cauzat de
reducerea tranzitorie a fluxului renal sanguin, urmat de declanarea unor mecanisme
compensatorii de restabilire a homeostaziei la nivel celular.
Modificarile anatomopatologice survenite la obolani dup 9 ore de la inoculare:

La nivelul ficatului s-a observat spaiu port cu congestie vascular i dilatarea

canaliculelor biliare; limfocite i hematii n sinusoide; nuclei hepatocitari mari cu cromatin
condensat; binucleere; staz n venele centrolobulare i sinusoidele perivasculare;
microtromboze sinusoidale; hepatocitoliz n zona centrolobular; staz n venula spaiului
porto-biliar; degenerescen hidropic a hepatocitelor; hipertrofia celulelor Kupfer.
n miocard s-au observat: hematii aderente la endoteliul vascular; tromboze; hemoragie
interstiial; miocitoliz; limfocitoz interstitial; leziuni distrofice.
n rinichi am constatat: congestia capilarelor glomerulare; hipertrofie glomerular cu
pensarea capsulei Bowman; microtromboze vasculare, hemoragie interstitial; tubulonecroz;
cilindri hialini; staz arterial cu hipertrofia mediei.
La nivelul muschilor striai s-a evideniat: miocitoliz; inflamatie interstitial;
hemoragie interstitial.
n splin s-au observat: hiperplazia pulpei albe; tromboze vasculare; sinusoide dilatate;
limfocitoz sinusoidal.
n pulmon s-au evideniat: tromboz; reacie inflamatorie monocitar interstitial;
congestie i staz vascular.
Leziunile histologice observate concord cu datele analizelor biochimice confirmnd
aciunea toxic foarte complex a veninului de albine n experiment acut, tradus prin
tulburri circulatorii, inflamatorii i degenerative la nivel hepatic, renal, pulmonar i
miocardic. Acestea nu exclud aciunea terapeutic a veninului ci sugereaz pruden n
evaluarea clinic a pacienilor, ntruct modificrile circulatorii pro- i antiinflamatorii pot fi
exploatate n scop medical.