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Anlise Instrumental
SUMRIO
1. Fsica Aplicada - ptica e ondulatria
2.Introduo os mtodos instrumentais
3. Fundamentos da Espectrofotometria
4.Colorimetria e Espectrofotometria de Absoro no ultravioleta e visvel
5.Espectrofotometria de absoro no infravermelho
6.Turbidimetria e Nefelometria
7.Introduo aos mtodos espectroqumicos de chama
8.Espectrofotometria de Absoro Atmica
9.Espectrofotometria de Emisso de Chama
10.Introduo aos mtodos cromatogrficos
11.Cromatografia Gasosa (CG)
12.Cromatografia lquida da alta eficincia (HPLC)
13.Potenciometria
14.Condutimetria
Nos primeiros anos da Qumica, a maioria das anlises era realizada por separao dos
componentes da amostra por precipitao, extrao ou destilao. Em anlises qualitativas os
componentes separados eram identificados por sua cor, ponto de fuso ou ebulio, solubilidade, odor,
atividade tica ou seus ndices de refrao. Em anlises quantitativas, utilizava-se medidas titulomtricas
ou gravimtricas.
Ainda hoje os laboratrios empregam muitos mtodos clssicos de separao e determinao de
analitos, mas sua aplicao est diminuindo em funo dos novos mtodos instrumentais.
Devido ao desenvolvimento tecnolgico a que os processos esto sujeitos, a anlise qumica
tambm se desenvolveu e, atualmente, a maioria das anlises tanto qualitativas quanto quantitativas, so
realizadas atravs de instrumentos ou aparelhos prprios, desenvolvidos para realizar uma gama muito grande
de anlises, surgindo, ento a Anlise Instrumental.
A anlise instrumental no dispensa, entretanto, o conhecimento das anlises via mida
tradicionais (qualitativa e quantitativa), nem os fundamentos bsicos da instrumentao utilizada, visto que o
tcnico qumico no deve tornar-se um mero seguidor de receitas ou de roteiros e, muito menos, um leitor de
manuais de aparelhos.
Mtodos Convencionais de anlise qumica:
Estes mtodos no envolvem nenhum equipamento sofisticado, utilizando apenas vidrarias e
reagentes. As anlises quantitativas que utilizam os mtodos convencionais geralmente so baseadas na:
gravimetria, atravs de uma balana de preciso;
volumetria, atravs de vidrarias ou recipientes cuidadosamente calibradas.
1.2.1
O mtodo instrumental:
Nos mtodos instrumentais necessrio efetuar uma operao de calibrao, em que se usa amostra
do material com a composio conhecida como substncia de referncia.
1.2.3
Mtodos ticos de emisso de luz: envolvem o tratamento da amostra pelo calor ou pela
eletricidade, de modo que os tomos so promovidos a estados excitados que proporcionam
Propriedades caractersticas
Emisso da radiao
Mtodos instrumentais
Espectroscopia de emisso (raios X, UV, Vis);
fluorescncia, fosforescncia
Espectrofotometria e fotometria (UV, Vis, raios X,
IV, RMN)
Turbidimetria, nefelometria, RAMAN
Refratometria
Difrao de raios X
Polarimetria
Potenciometria
Coulometria
Amperometria, polarografia
Condutimetria
Absoro da radiao
Espalhamento da radiao
Refrao da radiao
Difrao da radiao
Rotao da radiao
Potencial eltrico
Carga eltrica
Corrente eltrica
Resistncia eltrica
1.3 INSTRUMENTOS PARA ANLISE:
Um instrumento para anlise qumica converte a informao armazenada nas caractersticas fsicas
e qumicas do analito em um determinado tipo de informao, que pode ser manipulada ou interpretada
pelo homem. Geralmente, os instrumentos para anlise qumica compreendem alguns componentes
bsicos, como os da tabela 3.
TABELA 3 - Alguns exemplos de componentes instrumentais
Instrumento
Fotmetro
Espectrof. de
Absor atmica
atmica
pHmetro
Comparador
de cores
Fonte de energia
(estmulo)
Informao
analtica
Transdutor de
entrada
Lmpada de W,
filtro de vidro
Chama
Feixe de luz
atenuado
Radiao
UV ou Vis
Fotoclula ou
fototubo
Vlvula
fotomultiplicadora
Amostra/eletrodo
de vidro
Luz do sol
Atividade do
on H
Cor
Eletrodos
calomelanos
Olho
vidro-
Domnio de
dados da
informao
Corrente
eltrica
Potencial
eltrico
Potencial
eltrico
Sinal
no
nervo tico
Processador da
informao
Escala
Amplificador,
monocromador
Amplificador
Crebro
Dispositivo
de leitura de
sada
Medidor de
corrente
Unidade
digital
Unidade
digital
Resposta
visual cor
c)
d)
e)
f)
g)
h)
i)
j)
k)
Preciso
Limite de deteco
Sensibilidade
Faixa de concentrao
Seletividade
Velocidade
Habilidade requerida do operador Facilidade e convenincia
Custo e disponibilidade
Custo por amostra
Velocidade
Custo
Gravimetria
Titrimetria
Potenciometria
Espectrofotometria
Absoro atmica
Espectrometria de emisso
Cromatografia (CLG;CLAE)
Fluorescncia de raios X
L
M
M-R
M-R
R
R
R
R
B
B
S-M
S-M
M-E
E
M-E
E
Domnio
concentrao (pC)
1-2
1-4
1-7
3-6
3-9
5-9
3-9
0.1 - 0.000001 g
de Exatido
E
E
M
M
M
M
M
E
Processo
que
relaciona
sinal
analtico
medido
(leitura)
com
1.6.1
Para o uso da tcnica de curva de calibrao, vrios padres que contm concentraes do analito
exatamente conhecidas so introduzidos no instrumento e feita a leitura. Normalmente, essa leitura corrigida
para o valor obtido para o branco no instrumento. Idealmente, o branco contm todos os componentes da
amostra original, exceto o analito. Os dados resultantes so colocados num grfico com a resposta do instrumento
corrigida versus a concentrao do analito no padro.
PADRO OU SOLUO PADRO = soluo preparada em laboratrio de concentrao
exatamente conhecida da substncia que se quer analisar na amostra. Contm todos os
reagentes adicionados na amostra.
Portanto, esse mtodo consiste em preparar um grfico das leituras instrumentais em funo da
concentrao de padres, conhecido como curva de trabalho ou curva de calibrao, e contm as
concentraes dos padres na abscissa e as leituras instrumentais correspondentes na ordenada. Para ser
til, o grfico deve estender-se sobre todo o intervalo de concentraes possveis para as amostras a serem
analisadas.
Depois de preparada a curva de trabalho, localiza-se a leitura instrumental da amostra como um
ponto sobre a curva e l-se a concentrao da amostra na coordenada que representa o eixo das
concentraes.
Uma variao linear da leitura em funo da concentrao no um requisito obrigatrio para o uso
do mtodo. Uma vez preparada, a curva de trabalho pode ser usada para tantas anlises quantas se deseje,
desde que as condies experimentais no sejam modificadas. Quando a concentrao da substncia
na soluo amostra situar-se alm dos valores da faixa de linearidade, necessrio dilu-la, efetuar nova
leitura e incluir nos clculos o fator de diluio.
Este procedimento e medida, avaliao e construo do grfico usado em vrios mtodos
instrumentais. Hoje dispe-se de softwares que, alem do traado das curvas, efetuam o tratamento
estatstico dos dados, facilitando a obteno dos resultados em menor tempo (Planilha Excel).
Preparao da curva de calibrao:
Vrios padres com Concentrao conhecida da substncia que se deseja analisar so introduzidos no
instrumento e a leitura registrada.
A resposta corrigida para o valor obtido com o branco (soluo que contm todos os componentes
da amostra original, exceto a substncia desejada)
Os dados so plotados num grfico de Leitura x Cp
A curva ajustada matematicamente pelo mtodo dos mnimos quadrados (ou no Excel) e uma
equao da reta produzida: Y = ax +b, onde a Concentrao pode ser calculada diretamente pela
equao (Y = leitura e x = Concentrao da substncia na amostra)
Volume (Vp)
adicionado do padro
VT = Va+VP
Volume da amostra
(Va)
Volume da amostra
(Va)
1.7.1
O sistema SI composto por unidades de medida bsicas das quais outras se derivam. Padres de
comprimento, massa e tempo so o metro (m), o quilograma (Kg) e o segundo (s), respectivamente. A
temperatura medida em kelvins (K), a quantidade de substancia em mols (mol), a corrente eltrica em
ampre (A).
Quadro 2 - Unidades SI de base
[UNIDADES SI DE BASE]
GRANDEZA
comprimento
massa
tempo
corrente eltrica
temperatura termodinmica
quantidade de matria
intensidade luminosa
NOME
metro
quilograma
segundo
ampre
kelvin
mol
candela
SMBOLO
m
kg
s
A
K
mol
cd
As unidades derivadas so unidades que podem ser expressas a partir das unidades de base,
utilizando smbolos matemticos de multiplicao e de diviso. Dentre essas unidades derivadas, diversas
receberam nome especial e smbolo particular, que podem ser utilizados, por sua vez, com os smbolos de outras
unidades de base ou derivadas para expressar unidades de outras grandezas. O Quadro 3 fornece alguns
exemplos de unidades derivadas expressas diretamente a partir de unidades de base. As unidades derivadas so
obtidas por multiplicao e diviso das unidades de base.
Quadro 3 - Exemplos de unidades SI derivadas, expressas a partir das unidades de base.
[UNIDADE SI]
GRANDEZA
NOME
SMBOLO
metro quadrado
m2
metro cbico
metro por segundo
metro por segundo ao quadrado
metro elevado potncia
menos um (1 por metro)
m3
m/s
m/s2
m-1
massa especfica
volume especfico
densidade de corrente
campo magntico
concentrao (de
quantidade de matria)
kg/m3
m3/kg
A/m2
A/m
mol/m3
luminncia
ndice de refrao
cd/m2
1*
superfcie
volume
velocidade
acelerao
nmero de ondas
UNIDADE SI DERIVADA
NOME
SMBOLO
radiano (a)
rad
hertz
Hz
newton
EXPRESSO
EM OUTRAS
UNIDADES SI
DERIVADA
ngulo plano
freqncia
fora
presso,
esforo
pascal
Pa
N / m2
energia, trabalho,
joule
N.m
quantidade de calor
potncia,
watt
J/s
coulomb
volt
fluxo de energia
quantidade de eletricidade,
carga eltrica
diferena de potencial eltrico,
fora eletromotriz
W/A
capacidade
eltrica
farad
C/V
resistncia
eltrica
ohm
V/A
siemens
A/V
weber
Wb
V.s
induo magntica
tesla
Wb / m2
henry
Wb / A
condutncia eltrica
indutncia
temperatura Celsius
fluxo luminoso
lmen
Im
cd . sr
iluminamento
lux
Ix
Im/m2
SMBOLO
FATOR
PREFIXO
SMBOLO
1024
yotta
21
10-1
zetta
deci
10-2
centi
1018
exa
10-3
mili
1015
peta
10-6
micro
m
m
1012
tera
10-9
nano
109
giga
10-12
pico
10
-15
femto
10
-18
atto
zepto
yocto
FATOR
10
10
10
10
101
mega
quilo
hecto
deca
K
H
Da
-21
10
10-24
Certas unidades que no fazem parte do Sistema Internacional, porm esto amplamente
difundidas, desempenham papel to importante que necessrio conserv-las para uso geral com o Sistema
Internacional de Unidades. Elas figuram no Quadro 6 a seguir.
Quadro 6 - Unidades fora do Sistema Internacional, em uso com o Sistema Internacional
NOME SMBOLO
VALOR EM UNIDADE SI
10
Minuto
hora(a)
dia
grau(b)
minuto
segundo
litro
tonelada
min
h
d
l, L
t
1 min = 60s
1 h = 60 min = 3.600s
1 d = 24 h = 86.400s
1 = (/180) rad
1 = (1/60) = (/ 10 800) rad
1 = (1/60) = (/ 648 000) rad
1 L = 1 dm3 = 10-3 m3
t = 103 kg
SMBOLO
VALOR EM
UNIDADES SI
DEFINIO
1 eletronvolt a energia cintica adquirida por um eltron
atravessando uma diferena de potencial de 1 volt no vcuo: 1 eV =
1,602 19 x 10-19 , aproximadamente.
A unidade unificada de massa atmica igual frao 1/12 da massa
de um tomo do nucldio 12C. 1 u = 1,660 57 x 10-27kg,
aproximadamente.
eV
1 eV = 1,602 177
33 x 10-19J
1 u = 1,660 540 2
x 10-27kg
ua
1 ua = 1,495 978
706 91 x 1011
O Quadro 8 menciona outras unidades fora do SI utilizadas de maneira corrente e com o SI, a
fim de satisfazer s necessidades no campo comercial ou jurdico, ou a interesses cientficos particulares.
SMBOLO
(a)
Milha martima
n
angstrm
are(b)
hectare(b)
a
ha
VALOR EM UNIDADE SI
1 milha martima = 1 852m
1 milha martima por hora = (1 852/3 600)m/s
1 = 0,1 nm = 10-10 m
1 a = 1dam2= 102 m 2
1ha = 1hm2= 104 m 2
a) A milha uma unidade especial utilizada na navegao martima e area para expressar distncias.
b) Estas unidades e seus smbolos so empregados para exprimir superfcies agrrias.
O Quadro 9 fornece as relaes entre as unidade CGS e as unidades SI. O quadro menciona as
unidades CGS com nomes especiais. No campo da mecnica, o sistema de unidades CGS se baseava em 3
grandezas de base e suas unidades: o centmetro, o grama e o segundo. No campo da eletricidade e
magnetismo, as unidades foram tambm expressas em
funo dessas trs unidades de base. Como essas unidades podiam ser expressas de vrias maneiras, vrios
sistemas foram estabelecidos, como, por exemplo, o Sistema CGS Eletrosttico, o Sistema CGS
Eletromagntico e o Sistema CGS de Gauss. Nesses trs ltimos sistemas, o sistema de grandezas e o sistema
de equaes correspondentes so diferentes
daqueles que se utilizam com as unidades SI.
Quadro 9 - Unidades CGS derivadas dotadas de nomes particulares
NOME SMBOLO
erg
erg
dina
dyn
poise
P
Stokes
St
gauss
G
VALOR EM UNIDADE SI
1 erg = 10-7J
1 dyn = 10-5N
1 P = 1 dyn.s/cm2= 0,1Pa.s
1 St = 1 cm2/s = 10-4 m 2/s
1G = 10-4 T
11
PREFIXO
SMBOLO
Tera
Giga
Mega
Quilo
Hecto
Deca
Deci
Centi
Mili
Micro
Nano
pico
T
G
M
k
h
da
d
c
m
n
p
1.7.2
UNIDADES
SMBOLO
metro
metro quadrado
metro cbico
mcron
litro
grama
tonelada
segundo
erg
dina
grau Celsius
grau absoluto
caloria
bar
hora
m
m2
m3
l
g
t
s
erg
dyn
C
K
cal
bar
h
UNIDADES
SMBOLO
ampre
volt
watt
ohm
coulomb
farad
henry
hertz
poise
newton
candela (vela nova)
lux
lmen
stilb
A
V
W
C
F
H
Hz
P
N
cd
lx
lm
sb
Algarismos significativos:
1,362 x 10-4
3,111 x 10-4
4,473 x 10-4
12
Multiplicao e diviso:
Quando multiplicao: somam-se os expoentes da potncia de 10
Quanto diviso: subtraem-se os expoentes da potncia de 10
Arredondamento:
Para se arredondar um nmero com casas aps a vrgula:
Sendo o ltimo n maior que 5: soma-se 1 ao n. anterior a ele: Ex:
121,7948 121,795 = 121,80 = 122,0
Sendo o ltimo n menor que 5: no modifica:
Ex.: 9,8413
9,841 = 9,84 = 9,8
sendo o ltimo n igual a 5:
Se o anterior for par no modifica
12,2
Ex.: 12,25
Se o anterior for impar soma-se 1 ao n anterior a ele.
Ex.: 12,35
12,4
1.7.3
Logaritmos e antilogaritmos:
Tipos de erros:
Erro sistemtico:
Tambm chamado de erro determinado, aparece de uma falha no projeto de um experimento ou de um
equipamento. reprodutvel se voc conduzir o experimento vrias vezes exatamente da mesma maneira. Pode
ser descoberto e corrigido, embora isso possa ser no muito fcil.
Por exemplo:
O uso de um peagmetro que foi padronizado incorretamente produz um erro sistemtico. O
uso de uma bureta no calibrada.
Erro aleatrio:
Tambm chamado de erro indeterminado, resulta de efeitos de variveis descontroladas nas medidas. Pode
ser positivo ou negativo. Ele est sempre presente, no corrigido, e a ltima limitao na determinao
de uma grandeza. Est associado leitura de escala.
Por exemplo:
13
Preciso e exatido:
Exerccios:
1-
Os seguintes dados de calibrao foram obtidos por um mtodo instrumental para determinao da
substncia X em soluo aquosa:
Leitura instrumental
0,031
0,173
0,422
0,702
0,956
1,248
Construa a curva de calibrao para a substncia X. Duas amostras dessa substncia obtiveram leituras
iguais a 0,85 e 0,520, respectivamente. Encontre a concentrao de X nas duas amostras pela curva de
calibrao.
2- Uma amostra de 25 mL contendo Cu+2 obteve uma leitura instrumental igual a 23,6 unidades
(corrigida pelo branco). Quando foi adicionado essa soluo exatamente 0,5 mL de Cu(NO3 )2 a
0,0287 M, a leitura instrumental aumentou at 37,9 unidades. Calcule a concentrao de Cu+2 na
amostra, assumindo que o sinal analtico diretamente proporcional concentrao do analito.
3- A forma reduzida do dinucleotdeo da nicotinamida adenina (NADH) uma coenzima fluorescente.
Essa substncia foi determinada em uma amostra a partir da sua curva de calibrao, onde os padres
foram:
14
A partir da curva de calibrao do Zn, encontre a concentrao de Zn+2 em uma amostra cuja leitura foi igual a
10,46%.
5- Qual a concentrao em mol/Lde NaCl quando dissolvemos 32 g do sal em gua e dilumos a 0,5 L?
6-
Quantos gramas de metanol (CH3OH) esto contidos em 0,1 L de uma soluo aquosa a 1,71 mol/L
de metanol?
7-
Uma soluo diluda tem densidade prxima de 1 g/mL. Suponha que a soluo contm 1 ppm de
soluto. Expresse a concentrao do soluto em g/L, g/L, g/mL e mg/L.
8-
A concentrao de C20H42 na chuva de inverno de 0,2 ppb. Presumindo que a densidade da chuva
prxima de 1 g/mL calcule a concentrao molar deste composto.
9- Converta as unidades:
a) 15,5 ppm em g/L
d) 3,9 x 10-9 mg/L em g/L
b) 3,4 mg/mL em g/L
e) 2,35 g/L em %
c) 9,0 x 10-25 g/L em mg/dL f) 7,8 g/dL em g/mL
g)41,5% em g/L
h)5,6ppm em %
15
2. FSICA APLICADA:
2.1 RADIAO ELETROMAGNTICA
2.1.1
a) Teoria corpuscular:
Em 1672, o fsico ingls Isaac Newton apresentou uma teoria conhecida como modelo corpuscular
da luz. Nesta teoria, a luz era considerada como um feixe de partculas emitidas por uma fonte de luz
que atingia o olho estimulando a viso e por isso foi chamada de teoria ou modelo corpuscular da luz.
b) Teoria ondulatria:
No sculo XIX, o cientista francs L. Foucault, medindo a velocidade da luz em diferentes meios
(ar/gua), verificou que a velocidade da luz era maior no ar do que na gua, contradizendo a teoria
corpuscular que considerava que a velocidade da luz na gua deveria ser maior que no ar (Newton
no tinha condies, na poca, de medir a velocidade da luz).
Na segunda metade do sculo XIX, James Clerk Maxwell, atravs da sua teoria de ondas
eletromagnticas, provou que a velocidade com que a onda eletromagntica se propagava no espao
era
igual
velocidade
da
luz,
cujo
valor
,
aproximadamente:
c = 3 x 10 8 m/s = 300 000 km/s. Assim, Maxwell estabeleceu teoricamente que: A luz uma
modalidade de energia radiante que se propaga atravs de ondas eletromagnticas.
Quinze anos aps a descoberta de Maxwell, Hertz comprovou experimentalmente a teoria
ondulatria.
c) Dualidade onda/partcula:
Definio:
Radiao eletromagntica - A luz, como verificou Maxwell, formada por ondas eletromagnticas, que
so campos eltricos e magnticos paralelos se propagando no espao. As ondas eletromagnticas tem
velocidade c = lf , onde c a velocidade da luz, l o comprimento de onda, que a distncia entre os picos,
e f a freqncia (o inverso do perodo de uma oscilao).
a) Por que vemos um objeto?
Segundo o filsofo grego Plato, nossos olhos emitiam pequenas partculas que tornavam os objetos
visveis ao atingi-los.
Atualmente, acredita-se que o objeto que envia luz para os nossos olhos. Por isso, temos dois tipos
de objetos:
16
Objetos luminosos ou fontes de luz: a luz gerada por eles prprios (Sol, lmpada
acesa, chama);
Objetos iluminados: recebem luz de outros objetos (pessoas, livros, mveis, Lua, planetas);
A maioria dos corpos reflete difusamente a luz que incide sobre eles, e quando esta luz penetra em
nossos olhos, ns enxergamos o objeto.
b) A cor de um objeto:
At o sculo XVIII, a luz branca, como a luz solar, era considerada uma luz pura, constituda por
uma nica cor, sem mistura.
Isaac Newton observou experimentalmente que um feixe de luz branca ao atravessar um prisma de
vidro originava vrios feixes coloridos, e postulou que a luz branca uma mistura de todas essas
cores, e sua separao chamada disperso da luz, e o conjunto de cores formado era o espectro da
luz branca.
Quando um objeto iluminado com luz branca, ele absorve algumas cores do espectro dessa luz e
reflete outras. A cor com que o objeto visto ser determinada pelas cores que ele reflete.
Assim, um objeto de cor branca reflete todas as cores e no absorve nenhuma; o objeto de cor preta
absorve toda a luz e no envia nenhuma luz para nossos olhos; j o objeto transparente (por exemplo,
uma lmina de vidro vermelha) absorve todas as outras cores deixando a cor vermelha passar atravs
dele.
2.2 PROPRIEDADES ONDULATRIAS DA LUZ:
A luz um tipo de onda que pode se propagar no ar e no vcuo, e constitui um exemplo de ONDA
ELETROMAGNTICA, que so ondas que no necessitam de um meio material para se propagar.
Outros exemplos de onda eletromagntica so as ondas de rdio e de TV, as microondas, os raios X,
gama, infravermelhos e ultravioletas.
Todas as ondas eletromagnticas possuem a mesma velocidade de propagao no vcuo, e seu valor de
300.000 km/s (3.108 m/s), e so caracterizadas pelas grandezas: velocidade (c ou v); freqncia (f) e
comprimento de onda ()
Todas as ondas possuem trs grandezas que as caracterizam: VELOCIDADE (v ou c),
FREQUNCIA (f) e COMPRIMENTO DE ONDA (), que se relacionam entre si atravs de
uma frmula:
c=fx
Comprimento de onda (): distncia linear entre dois pontos (mximos ou mnimos
sucessivos) (nm, m, cm, Km, mm, , m)
A velocidade da luz varia de acordo com o meio em que ela est. Por exemplo, no vcuo ou no ar a
velocidade da luz de 300.000 Km/s.
Na gua v = 230.000 km/s
No vidro v = 200.000 km/s
17
Por isso, em qualquer meio material, a luz se propaga com uma velocidade menor que a sua
velocidade de propagao no vcuo.
Quando uma onda passa de um meio para outro ela se refrata, isto , ocorre uma mudana em sua
direo de propagao:
Feixe incidente
Feixe refletido
AR
VIDRO
Feixe refratado
Isso ocorre porque a velocidade de propagao da luz nos dois meios diferente muda a direo
da propagao da luz;
= c
v
Quando um feixe de luz branca atravessa um prisma de vidro, ele se refrata ao entrar e sair do prisma
(pois a velocidade de propagao da luz no ar e no vidro so diferentes), ocorrendo um desvio na direo
da propagao do feixe, sofrendo disperso, separando-se nas cores do espectro.
Vimos que quando um feixe luminoso incide em um prisma, ele decomposto em vrios outros
feixes, devido ao fenmeno da disperso da luz. O raio luminoso, ao passar pelo prisma, sofre uma
decomposio segundo suas freqncias (ou comprimentos de onda) constituintes. Se fizermos a luz
solar passar atravs de um prisma, ela ser decomposta em vrias cores que so popularmente
18
conhecidas como arco-ris. A imagem da luz decomposta chamada ESPECTRO,obtido ou sobre uma
tela branca ou sobre uma chapa fotogrfica.
A regio ULTRAVIOLETA abrange comprimentos de onda menores que 4 x 10-4 mm, ou seja,
mais curtos que os da luz visvel e mais longo que os dos raios X. invisvel para o olho humano,
e dividida em regies denominadas UV prximo (400-300 nm), UV afastado (300-200 nm) e UV
no vcuo (200-4 nm); estes ltimos so prejudiciais, pois so absorvidos pela camada de oznio da
Terra.
Raios X - radiao de alta energia que tem a capacidade de penetrar nos organismos, atravessando os
tecidos de menor densidade e sendo absorvidos pelas partes densas do corpo, com dentes e ossos. ----
Ultravioleta (UV) - um tipo de radiao proveniente do Sol, retida em parte pela camada de oznio.
Radiao visvel (VIS) - a faixa de radiao que nos permite enxergar o mundo que nos cerca. A
decomposio da radiao visvel nos mostra que ela constituda por sete cores: violeta, anil, azul, verde,
amarelo, alaranjado e vermelho.
Raios infravermelhos (IV) - esse tipo de radiao emitida por objetos quentes. As chamadas
lmpadas infravermelho so utilizadas para ativar a circulao sangunea e para diminuir processos
inflamatrios.
Raios hertezianos - essa forma de radiao apresenta baixa energia e sua recepo e transmisso so
feitas por antenas. Esto includas as ondas de rdio AM e FM, e as ondas de TV.
Quadro 1- Caractersticas do espectro eletromagntico
Escala de Comprimento
de onda
ngstrom ()
Nanmetro (nm)
Micrmetro (m)
Centmetro (cm)
Raios
gama
1
-
Raios
X
10
-
Ultravioleta
Visvel
Infravermelho
Microondas
1.800
180
-
3.800
380
-
7.800
780
0,7
-
400
0,04
Ondas de
radio
25
E=hxf
(equao 2)
19
f= c/
(equao 3)
E=hx c
(equao 4)
Um fton de alta freqncia (f) e curto comprimento de onda () mais energtico do que um
com baixa freqncia e longo comprimento de onda. Da deduz-se que as ondas
eletromagnticas transportam energia e quanto maior for a freqncia da onda, maior ser a
energia transportada por ela.
Por exemplo: como a quantidade de energia por fton varia de um tipo de radiao a outro, cada
fton est relacionado a um determinado comprimento de onda; como o comprimento de onda
inversamente proporcional energia, um fton de luz UV, de comprimento de onda pequeno, possui maior
energia que um fton de luz infravermelha, de comprimento de onda maior.
Exerccios:
2. Calcule a energia de:
a. um fton de raios X de 5,3
b. um fton de radiao visvel de 530 nm
3.
Calcule a freqncia em hertz, a energia em joules de um fton de raios X que tem comprimento de
onda de 2,70 .
4.
7.
Qual o comprimento de onda de um fton que tem trs vezes mais energia que a de um fton cujo
comprimento de onda igual a 500 nm?
8. O iodeto de prata tem energia de ligao aproximadamente igual a 255 KJ/mol (AgI um dos
componentes dos culos de sol). Qual o comprimento de onda mais longo da luz que capaz de
quebrar as ligaes do iodeto de prata?
9. Calcule o comprimento de onda de:
a. linha de sdio a 589 nm em uma soluo aquosa de n = 1,35
b. radiao de sada de um laser de 694,3 nm que atravessa um pedao de quartzo com n =
1,55
10. Supondo os seguintes nveis de energia para um tomo X:
nE1 = 0
nE2 = 10,2 J
nE3 = 12,5 J
20
nE4 = 15,4 J
Calcule a Energia do fton, o comprimento de onda emitido/absorvido e a freqncia associada s
transies: nE1 nE3 e nE2 nE1
10. Calcule a freqncia da radiao de 2.537 emitida pelo Hg no vcuo. A que cor do espectro
eletromagntico corresponde esta radiao?
CONVERSO DE UNIDADES:
1 ngstrom = 1 = 10-10 m = 10-8 cm
1 nanmetro = 1 nm = 10-9 m = 10-7 cm
1 micrmetro = 1 m = 10-6 m = 10-4 cm
1 eltron-volt = 1 eV = 1,602 x 10-19 J
1 Hertz = 1 Hz = 1 s-1
21
3. FUNDAMENTOS DA ESPECTROFOTOMETRIA
Muitos mtodos analticos quantitativos e qualitativos fazem uso da interao da energia radiante
(radiao eletromagntica = REM = luz) com a matria so chamados mtodos fotomtricos ou mtodos
ticos de anlise.
Os mtodos fotomtricos medem a quantidade de radiao de determinado comprimento de onda que
absorvida ou emitida por uma amostra lquida ou gasosa. No primeiro caso, so chamados mtodos ticos de
absoro de luz, e no segundo caso, mtodos ticos de emisso de luz.
3.1. INTERAO ENTRE A MATRIA E A ENERGIA RADIANTE:
3.1.1- Estados energticos das espcies qumicas:
A teoria quntica, proposta por Marx Planck em 1900, procura explicar as propriedades da
radiao emitida por corpos aquecidos. A teoria foi posteriormente estendida para explicar outros
processos de emisso e absoro de luz, atravs de dois postulados importantes:
1 tomos, ons e molculas podem existir somente em certos estados discretos de energia. Quando uma
espcie altera seu estado, absorve ou emite uma quantidade de energia exatamente igual diferena de
energia entre os estados.
2 quando tomos, ons ou molculas absorvem ou emitem radiao ao efetuar uma transio de um estado
de energia para outro, a radiao de freqncia f ou de comprimento de onda est relacionada diferena de
energia entre dos dois estados pela equao:
E1 - E0 = h.f = h.c
22
freqente), ou a espcie excitada sofre uma transformao qumica (reao fotoqumica) ficando a energia
retida no sistema, ou em outros casos, a radiao reemitida como fluorescncia ou fosforescncia.
Ento, quanto uma molcula emite um fton, a energia da molcula diminui.
Exemplificando:
ABSORO
EMISSO
As radiaes visvel e ultravioleta tem energia suficiente para provocar transies somente dos
eltrons da camada mais externa, ou dos eltrons de ligao. Por outro lado, as freqncias dos raios X
so mais energticas e so capazes de interagir com eltrons mais prximos do ncleo dos tomos.
3.1.2.1- Fluorescncia e fosforescncia:
So importantes processos analticos de emisso, nos quais os tomos ou molculas so
excitados por um feixe de radiao eletromagntica; ento, a emisso radiante ocorre quando as espcies
excitadas retornam ao estado fundamental. A fluorescncia ocorre mais rapidamente que a fosforescncia e
geralmente se completa aps 10-5 segundos a partir do instante da excitao. A emisso fosforescente acontece
em perodos superiores a 10-5 s, e pode permanecer ativa por minutos e at horas.
3.1.3- Emisso de radiao eletromagntica:
Quando o eltron perde a excitao ou a energia absorvida, isto , passa de um estado energtico
mais elevado para outro menos elevado, ele emite energia sob a forma de radiao eletromagntica.
Quanto maior o salto energtico que o eltron realiza ao deslocar-se de uma rbita mais externa para
outra mais interna, maior a freqncia do fton emitido (e menor seu comprimento de onda) e maior a
energia emitida.
A radiao emitida pelos tomos excitados ao retornarem ao estado fundamental, pode ser
exibida em ESPECTROS DE EMISSO, como se fossem fotografias das transies eletrnicas dos tomos
ou molculas das espcies qumicas.
radiao:
SELECIONADOR
DO
COMPRIMENTO
DE ONDA
DETECTOR
AMOSTRA
Fig. 1- Diagrama dos componentes usados em mtodos analticos baseados na absoro de energia
radiante.
b) Mtodos de Emisso - baseados na emisso da energia radiante emitida por tomos, ons ou
molculas excitados. Na anlise qualitativa, se baseia na medio dos comprimentos de onda de radiao
e na anlise quantitativa, se mede a intensidade da radiao emitida.
FONTE DE ENERGIA
RADIANTE ONDE
EST INCLUIDA A
AMOSTRA
SELECIONADOR DE
COMPRIMENTO DE
ONDA
DETECTOR
Fig. 2- Diagrama dos componentes usados nos mtodos analticos baseados na emisso da energia
radiante.
24
Tipo de espectroscopia
Emisso de raios gama
Absoro,
emisso,
fluorescncia e difrao de raios
X
Absoro,
emisso
e
fluorescncia
ultravioleta
e
visvel
Absoro
infravermelha
e
Raman
Absoro de microondas
Ressonncia magntica nuclear
Intervalo de comprimento de
onda de trabalho
0,005 a 1,4
0,1 a 100
180-780 nm
Eltrons de ligao
0,78 a 300 m
0,75 a 3,75 mm
0,6 a 10 m
Rotao de molculas
Spin dos ncleos em um campo
magntico
Nuclear
Eltrons internos
25
4.
COLORIMETRIA E ESPECTROFOTOMETRIA DE
ABSORO NO ULTRAVIOLETA E VISVEL:
4.1. INTRODUO:
Desde que a cor foi reconhecida como uma caracterstica de certos materiais, ela tem sido
utilizada como um meio de identificao. Porm, as anlises qualitativas baseadas na colorao so
limitadas tanto em preciso como em alcance, j que se baseia no olho humano como detector da energia
radiante.
A construo de outros detectores de radiao junto com o avano da instrumentao tem
produzido uma grande extenso das tcnicas neste campo, que cobrem todo o espectro eletromagntico desde
a regio do infravermelho at o ultravioleta.
As tcnicas fotomtricas esto baseadas na capacidade que as substncias tm de interagir com
freqncias de radiao caractersticas. Como cada espcie isolada de on, tomo ou molcula exibir um
conjunto de nveis de energia definidos, absorver somente as freqncias eletromagnticas que
correspondem excitao de um nvel ao outro.
Trataremos dos mtodos analticos baseados na absoro da REM. A luz tem radiaes para as
quais a vista humana sensvel, e as ondas de comprimentos de onda diversos provocam cores diferentes.
A percepo visual das cores provocada pela absoro seletiva, por um objeto corado, de certos
comprimentos de onda da luz incidente. Os outros comprimentos de onda so refletidos ou transmitidos, e
so percebidos como a cor do objeto. Se um corpo slido opaco tem aparncia de branco, todos os
comprimentos de onda so refletidos; se o corpo parece negro, a reflexo da luz de qualquer comprimento
de onda mnima; se um corpo parece azul, so refletidos os comprimentos de onda que correspondem
cor azul, e assim sucessivamente.
A variao da cor de um sistema com a modificao da concentrao de um certo componente a
base da ANLISE COLORIMTRICA. A cor provocada pela formao de um composto corado,
resultante da adio de um reagente apropriado, ou pode ser intrnseca do constituinte analisado.
A COLORIMETRIA visa a determinao da concentrao de uma substncia pela medida da
absoro relativa da luz, tomando como referncia a absoro da substncia numa concentrao
conhecida.
Na COLORIMETRIA VISUAL usa-se como fonte a luz branca natural ou artificial. As
determinaes so feitas num instrumento chamado COLORMETRO OU COMPARADOR
DE CORES.
Quando a vista substituda por uma clula fotoeltrica (dispositivo detector de radiao) a
tcnica chamada de COLORIMETRIA FOTOELTRICA e o instrumento o
FOTOCOLORMETRO. Neste instrumento, usa-se a luz que est numa banda estreita de
comprimentos de onda, que se consegue pela passagem da luz atravs de filtros (dispositivo
selecionador de comprimento de onda), que so materiais coloridos na forma de placas de
vidro, gelatina, etc. , que s transmitem a luz numa regio espectral limitada.
Na ESPECTROFOTOMETRIA a fonte de radiao emite da regio visvel at a regio UV
(160 a 780 nm) do EEM, o que necessita de um instrumento mais complicado, e por isso,
mais caro - o ESPECTROFOTMETRO.
A principal vantagem dos mtodos colorimtricos e espectrofotomtricos a de proporcionarem um
meio simples de determinar quantidades diminutas de substncias.
26
27
Luz
incidente
(Io)
emerge 30%
Soluo amostra
Fig.4- Transmisso e absoro da luz por uma soluo
Considerando um bloco de material absorvente (slido, liquido ou gasoso), um feixe paralelo de luz
monocromtica com intensidade Io incide sobre este bloco perpendicularmente superfcie. Aps passar
atravs de uma espessura b do material, que contm n tomos, ons ou molculas absorventes, sua
intensidade diminui como resultado da absoro de luz, proporcionalmente concentrao C do
material absorvente.
A absoro da luz quantificada por uma grandeza denominada ABSORBNCIA (A), onde a escala
varia de 0 a 2. A absorbncia muito importante porque ela diretamente proporcional
concentrao das espcies absorventes de luz na amostra.
A transmisso de luz quantificada pela TRANSMITNCIA (T) e sua escala varia de 0 a 100%.
As investigaes de J. H. Lambert e A. Beer permitiram concluir que a intensidade da luz
transmitida depende:
a) da intensidade da luz incidente (Io)
b) do comprimento percorrido pela luz (espessura do recipiente = b)
28
c)
= a . b . Cg/L,
A = . b . Cmol/L ,
onde k =
= absortividade molar.
A = - log T/100
Por esta expresso, entende-se que um valor em porcentagem de transmitncia lido na escala do
fotocolormetro pode ser facilmente transformado em absorbncia. Por ex., 20% de transmitncia
correspondem a uma absoro de 0,699.
TABELA 7 - Termos e smbolos usados na equao da Lei de Beer.
Termo
Smbolo
Absorbncia
Transmitncia
Equao
A = - log T
absoro molar)
A=k.b.C
-A
T = (10 ) x 100
b = A / k .C
cela)
Absortividade molar (coeficiente de
= a.PM
ou
= A/b. Cmol/L
29
Absortividade especfica
a = /PM
ou
a = A / b. Cg/L
Exemplo:
Prepara-se uma srie de solues padro contendo a espcie em estudo, a diferentes concentraes
perfeitamente conhecidas, cobrindo uma faixa conveniente de concentrao;
Determina-se a absorbncia (ou %T) de cada uma dessas solues padro e constri-se o grfico de
A (absorbncia) em funo de C (concentraes das solues padro), em papel milimetrado.
4. Pode ser usado o aplicativo Excel para tabular as leituras e concentraes das solues padro. O
ajuste da reta feito pelo mtodo dos mnimos quadrados, e uma equao da reta apresentada,
facilitando o clculo da concentrao da amostra pela equao (ver capitulo 2)
4.4.2- Desvios da lei de Beer-Lambert:
Esses desvios podem ser classificados como positivos ou negativos, e ocorrem quando algumas das
seguintes condies ideais para as determinaes no so respeitadas:
-
30
Alguns destes desvios podem ocorrer como conseqncia da maneira como as medidas de
absorbncia foram feitas ou como resultado de mudanas qumicas associadas com variaes de
concentrao. A lei de Beer bem sucedida ao descrever o comportamento da absoro de solues com
concentraes relativamente baixas (usualmente < 0,01 M).
Os desvios podem ser divididos em dois grupos: desvios qumicos e desvios devido ao
instrumento:
Desvios qumicos:
- interao qumica do soluto com reagentes de anlise ou impurezas
- alta concentrao da soluo (maior que 0,01 mol/L)
- variaes no pH
- pureza e estabilidade dos reagentes
- tempo de leitura (estabilidade qumica)
- temperatura na qual desenvolve-se a cor
Desvios devido ao instrumento:
- desgaste nos fotodetectores
- troca de lmpada por outra no correspondente
- p sobre a ampola da lmpada
- uso de filtros de outros aparelhos. Cada vez que se troca um filtro, o instrumento dever ser
recalibrado.
- Uso de tubos de vidro comum ao invs de cubetas especialmente fabricadas para o aparelho
- Perda de calibrao do comprimento de onda
- Flutuaes na fonte de radiao.
31
Ex.1: considere uma soluo padro contendo 0,5 mg/mL de Hg+2 com
transmitncia de 62% e
uma soluo desconhecida com 70% de transmisso, medida nas mesmas
condies. Determine a
concentrao da soluo desconhecida. (Resposta = 0,37 mg/mL)
Faz-se a leitura da soluo problema (amostra) e localiza o valor da absorbncia da amostra no eixo y
da curva, interceptando-a para encontrar a concentrao correspondente no eixo x.
As condies de trabalho para a construo da curva com solues padro devem ser mantidas em
relao soluo problema (seleo do mesmo comprimento de onda, cubeta, lmpada, pH,
reagentes, temperatura).
Se a curva for construda com diluio de 1:10, por exemplo, a soluo problema dever ser diluda
de 1:10.
A curva dever compreender faixas teis, ou seja, valores situados abaixo do normal, dentro do
normal e acima do normal do elemento ou substncia pesquisada.
A curva dever ser traada numa faixa de concentrao da substncia que siga a Lei de Beer,
utilizando o comprimento de onda de mxima absoro.
32
4.7. INSTRUMENTAO:
Espectrofotmetros em geral so instrumentos compostos por um conjunto de componentes do
seguinte tipo:
- uma fonte de radiao eletromagntica
- um conjunto de componentes pticos que levam esta radiao at a amostra
- um compartimento de amostra e um ou mais detectores que medem a intensidade de radiao.
Dependendo da finalidade e do fabricante os arranjos pticos destes instrumentos podem ser
bastante diferentes. Este texto se refere apenas aos espectrofotmetros de absoro, operando na regio
espectral do ultravioleta (UV) ( = 200/380nm - 400 nm), visvel (Vis) ( = 380/400 nm - 700/800 nm)
Os componentes de um sistema fotomtrico de absoro de luz so:
Fonte de
radiao
monocromador
Recipiente da
Detector
soluo
de luz
Medidor ou
registrador
Fontes de radiao visvel - lmpada de tungstnio, constituda por um filamento de tungstnio que
se aquece mediante uma corrente contnua e emite radiao contnua na regio entre 350 e 2.500 nm.
Normalmente a regio espectral em que se pode medir os espectros a regio chamada UV-Vis ( =
200 nm a 800 nm). Normalmente a troca de uma lmpada por outra ocorre durante a varredura do espectro de
modo completamente automtico, de modo que o operador muitas vezes no toma conhecimento do
fato.
uma fenda de entrada por onde penetra a radiao policromtica da fonte de luz (lmpada);
um espelho ou lente, para colimar (estreitar) o feixe admitido;
um elemento dispersor da radiao, como um prisma ou uma rede de difrao, que desdobra a
radiao nos comprimentos de onda componentes (separa a luz nos seus vrios comprimentos de
onda);
uma lente ou espelho para focar (direcionar) a radiao dispersa;
uma fenda de sada, que seleciona o comprimento de onda da radiao que ir incidir sobre a
amostra.
34
comprimentos de onda iro incidir sobre a amostra permitindo que se determine sua absorbncia em cada um
destes comprimentos. Este conjunto de dados resulta no que se chama espectro de absoro.
Uma grade de difrao um componente ptico que contm uma srie de ranhuras, que so
justamente os elementos responsveis pela difrao. Dependendo do nmero de ranhuras por milmetro,
haver uma maior ou menor resoluo dos espectros. Instrumentos com melhor resoluo espectral tero
grades de difrao com maior nmero de ranhuras por milmetro, e, conseqentemente, este um (mas no o
nico) parmetro a ser avaliado na seleo de um instrumento.
Em pocas passadas as ranhuras eram feitas mecanicamente, porm atualmente estas so feitas
atravs de processos denominados hologrficos. Neste caso feito um depsito de uma camada muito fina
de um material sobre um substrato de vidro ou de quartzo, que , posteriormente, corrodo em certas regies
definidas por uma figura de interferncia gerando sobre este material um conjunto de vales e topos
denominados ranhuras.
A qualidade de uma grade de difrao controlada pelo nmero de ranhuras por unidade de rea e
pela preciso com que estas foram feitas.
35
b) Tubo fotomultiplicador: formado por um tubo de vidro ou de quartzo sob vcuo, no qual existe um
conjunto de placas metlicas interligadas. Quando a radiao incide sobre estas placas metlicas elas
induzem uma corrente eltrica, de acordo com o que descrito pelo efeito fotoeltrico proposto por
Einstein. Em funo do fato destas placas estarem interligadas e de uma diferena de potencial eltrico
estar sendo aplicada entre elas, esta fotocorrente amplificada por um circuito eletrnico adequado, de
modo que um sinal muito baixo de corrente eltrica pode ser detectado e registrado. Pode ser considerado
um tipo de clula fotoeltrica amplificada (da ordem de 106 vezes), usada nos espectrofotmetros. mais
sensvel, mede intensidades 200 vezes mais fracas do que as medidas por uma clula fotoeltrica.Um
instrumento que se utiliza deste detector deve fazer com que comprimentos de onda individuais o atinja,
de modo que para cada um deles seja detectado um sinal de corrente, que ser transformado, segundo uma
certa escala, em um sinal de absorbncia. Deve ter ainda algum tipo de sistema que permita eliminar o
sinal de fundo, comumente chamado de background.
c) Arranjo de diodos (ou detectores do tipo fotodiodo): de modo simplificado, um arranjo de diodos consiste
em uma srie de detectores fotodiodo posicionado lado a lado em um cristal de silcio, de modo que cada
comprimento de onda difratado pela grade atinge um ponto deste arranjo, e conseqentemente um detector.
Cada diodo tem um capacitor dedicado e est conectado por um interruptor tipo transistor para uma linha de
sada comum a todos. Deste modo, a radiao que atravessa a amostra integral e instantaneamente
analisada determinando-se, portanto, a absorbncia em todos os comprimentos de onda determinada de modo
simultneo. Este tipo de instrumento bastante simplificado na sua ptica, se comparado aos instrumentos
com fotomultiplicadoras como detectores, e os espectros so obtidos mais rapidamente, mas um instrumento
com menor sensibilidade.
Assim:
4 Qualquer tipo de detector absorve a energia dos ftons que chocam contra ele e a converte em uma
quantidade mensurvel, como a impresso em chapa fotogrfica, uma corrente eltrica ou variaes
trmicas.
4
Qualquer tipo de detector deve gerar um sinal que est quantitativamente relacionado com a radiao
recebida.
Todo detector deve obedecer aos seguintes critrios:
alta sensibilidade;
curto tempo de resposta;
estabilidade a longo prazo para assegurar a exatido das respostas quantitativas;
sinal eletrnico facilmente amplificvel por qualquer instrumento de leitura;
b) Feixe duplo:
DOS
ESPECTROFOTOMETROS
Colormetro fotoeltrico:
fotocolormetros dispem de numerosos filtros, cada um dos quais transmite uma diferente poro do
espectro; a escolha do filtro depende da natureza do sistema absorvente; d-se preferncia ao filtro com cor
complementar da soluo problema.
Mecanismos de funcionamento:
4
A luz proveniente de uma fonte (ex. lmpada de tungstnio) delimitada, no percurso tico, por uma
abertura varivel (fenda); o filtro seleciona a faixa espectral desejada. Aps atravessar a cubeta
contendo a soluo amostra ou solvente (branco), a luz transmitida alcana a fotoclula; a corrente gerada
medida pelo galvanmetro, sobre uma escala de 0 a 100%.
Inicialmente, o medidor ajustado mecanicamente para leitura zero.
Em seguida, o aparelho deve ser
calibrado para 100% de transmitncia, com relao ao solvente puro (branco): coloca-se o solvente na
cubeta e regula-se a 100% de T. Finalmente, coloca-se a na cubeta a soluo amostra e l-se a
transmitncia. A escala do medidor d diretamente a percentagem de transmitncia; em muitos casos, a escala
do medidor d os correspondentes valores de absorbncia.
Colormetro no visvel: lmpada de filamento de tungstnio, lente, filtro ptico, clula fotovoltaica.
Colormetro no ultravioleta: lmpada de vapor de mercrio, filtro ptico, clula fotoeltrica.
4.8.3- Espectrofotmetros:
Os espectrofotmetros utilizam monocromadores para isolar uma banda espectral desejada,
empregado no intervalo do visvel ao UV. O campo de trabalho deste instrumento se estende de 220 nm a 1000
nm., e dispes de 2 fontes de radiao: uma lmpada de hidrognio ou deutrio para a regio UV, e uma lmpada
de tungstnio para o visvel e infravermelho. O instrumento tem dois fototubos, um para ser usado acima de 600
nm e outro, abaixo de 600 nm. O monocromador constitudo por um prisma de quartzo ou uma rede de
difrao.
Ao deixar o monocromador, a feixe de radiao refletido por uma srie de espelhos para atingir o
obturador eletromecnico. No caso dos espectrofotmetros convencionais, o obturador eletromecnico formado
por um disco giratrio dividido em trs partes: uma parte espelhada (mirror), uma parte slida pintada de preto
(solid matt black) e a outra vazada (cut out).
Este disco gira a uma certa velocidade, de modo que o feixe que o atravessa ser modulado na
mesma freqncia em que as aberturas do disco passarem pelo ponto de incidncia do feixe, gerando um
sinal luminoso.
Quando o feixe atinge a parte vazada atravessa e segue um caminho ptico; quando ele atinge a parte
espelhada refletido e segue um outro caminho; e finalmente, quando atinge a regio negra, o feixe absorvido
pelo disco. Portanto, a finalidade do obturador a de alternar o caminho ptico do feixe. Como ele gira a uma
velocidade maior que a velocidade de varredura da grade, cada comprimento de onda selecionado pela grade
que incide sobre o disco ir, alternadamente, fazer um ou outro caminho ptico. Um destes caminhos far com
que o feixe atravesse a amostra; o outro caminho far com que o feixe atravesse uma soluo padro ou
branco.
Ambos os feixes sero posteriormente dirigidos, por espelhos at o detector
(tubo
fotomultiplicador), de modo que este estar medindo a intensidade do feixe que, alternadamente, passa
pela amostra e pela referncia, a cada comprimento de onda.
Um circuito eletrnico compara estes dois sinais e os converte em uma escala apropriada de
absorbncia a cada comprimento de onda, corrigida eletronicamente.
Espectrofotmetro para a regio visvel: projetados para operar no intervalo de de 380 a 800
nm, simples construo, de feixe nico e rede de difrao, relativamente baratos (< U$ 1.000
at U$ 3.000), resistentes e portteis. Aplicao mais comum a anlise quantitativa. Possui
fonte de filamento de tungstnio, rede de difrao simples, clula fotoeltrica.
Espectrofotmetros para a regio UV/visvel: faixa de medio de de 190 a 210 nm (extremo
inferior) e 800 a 1.000 nm (extremo superior), equipado com lmpadas intercambiveis de tungstnio e
hidrognio ou deutrio, tubos fotomultiplicadores e redes de difrao, leitura digital. Seu preo varia de
U$ 2.000 a U$ 8.000.
Espectrofotmetros computadorizados: operam na regio de 190 a 800 nm de , com varredura de .
As amostras so lidas e as absorbncias calculadas com a ajuda de softwares. Possui vrias opes de tratamento
dos dados e apresentao, como absorbncia, transmitncia, derivadas, espectros de absoro, clculos de
concentrao, etc.
Mecanismo de funcionamento: a luz emitida da lmpada (2) purificada nos filtros (3) e condensada sobre a
38
fenda de entrada (4). O feixe de luz atravessa a fenda de entrada , refletido pelo espelho plano, sendo
condensado pelo espelho colimador sobre a rede de difrao (5), que obtm-se a varredura dos comprimentos
de onda. O feixe de luz que passa pela fenda de sada atravessa o compartimento de amostras (7) - cubeta - e
atinge o detector (8).
compostos aromticos
produtos naturais como esterides e clorofila
corantes e vitaminas
estabilizantes e antioxidantes.
39
Exerccios:
1-
Considere uma soluo padro contendo 0,5 mg de Me+n / mL com transmitncia igual 62%. Uma
amostra dessa substncia obteve uma transmitncia igual a 70%, medida nas mesmas condies (b =
1 cm). Calcule a concentrao do metal Men+ na amostra.
= 200
A absorbncia de uma amostra 0,17, e a do padro 0,13. A concentrao do padro 100 g/100
ml. Qual a concentrao da amostra, em g/L?
6- Converta em absorbncia:
T (%) = 25,5 - 56,7 - 32,8 - 3,58 -
7- Em uma determinao de cobre, se mede uma absorbncia de 0,65. Sabe-se que existe uma
concentrao aproximada de 10-4 moles/L de um interferente com absortividade molar de 100
L/moles.cm. Sabendo que a cubeta tem uma espessura de 1 cm, calcule a absorbncia devida somente
ao cobre.
8- A absorbncia de uma soluo de concentrao igual a 2,31 x 10-5 M de X de 0,822, numa cubeta
de 1 cm. Calcule a absortividade molar de X.
9-
10- Uma soluo de 15 g/dL de nitrognio de amnia tem uma Absorbncia de 0,14. A Absorbncia de
uma amostra desconhecida de sangue 0,12. Qual a concentrao da amostra de sangue?
11- Um colormetro porttil registrou uma transmitncia de 73,6% com uma soluo do branco no
caminho ptico. A substituio do branco por uma soluo absorvente forneceu uma transmitncia de
24,9%. Calcule:
a) A absorbncia do branco e da soluo absorvente
b) A transmitncia esperada para uma soluo na qual a concentrao do absorvente seja 1/3 da soluo
da amostra original
c) A absorbncia esperada para uma soluo que apresenta duas vezes a concentrao da soluo na
amostra.
12- Uma amostra de soluo colorida que segue a Lei de Beer mostra 80% de T quando medida numa
cela de 1 cm de comprimento.
a) Calcular a % T para a soluo de concentrao 2 vezes maior na mesma cubeta.
b) Calcular a % T da soluo original quando contida numa cubeta de 0,5 cm de comprimento.
c) Se a concentrao original for de 0,005% p/v qual o valor da absortividade especfica?
13- Vrias solues padro de Y se empregam para traar uma curva de calibrao com os seguintes
dados:
Concentrao (ppm)
Absorbncia
1,00
0,26
2,00
0,44
3,00
0,54
4,00
0,61
40
e uma soluo problema tem uma absorbncia de 0,50 nas mesmas condies, qual a concentrao de Y em
moles/l, sabendo que seu peso molecular 156 g/mol ?
14- Os seguintes valores de absorbncia foram obtidos e anotados para um procedimento de determinao de
concentrao de glicose:
Reagente branco: 0,1
amostra desconhecida: 0,2
soluo padro: 0,3
O valor conhecido para a soluo padro de 250 mg/100 ml. Que concentrao de glicose, em g/L, deve ser
apresentada por esta amostra?
15- Na construo da curva de calibrao para uma anlise com um colormetro fotoeltrico, obtiveram-se os
seguintes dados:
%T
98,0
77,2
63,5
50,0
41,3
33,5
27,9
23,4
20,3
%T
18,1
16,4
Protena (g):
0,00
9,36
Absorbncia a 595 nm:
0,466
0,676
18,72
28,08
37,44
0,883
1,086
1,280
41
20- A leitura da transmitncia de sete solues padres de metano (CH4) forneceram os dados:
CH4 (%):
0
0,062 0,122
Transmitncia (%)
97,19 81,25 28,75
0,245
0,486
0,971
19,38
9,56
4,75
42
5. ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORO NO
INFRAVERMELHO:
1.1 INTRODUO
A espectroscopia de absoro no infravermelho umas das tcnicas analticas utilizadas em
laboratrios de pesquisa, tanto nas indstrias quanto no meio acadmico, to importante como outros
meios analticos instrumentais modernos: a espectrometria no ultravioleta, a espectrometria de absoro
atmica e a espectrometria de raios x.
Algumas das vantagens dessa tcnica so a facilidade de preparao da amostra; a possibilidade
do uso de amostras em filmes slidos, amostras lquidas e gasosas; bem como o custo, o tamanho e a
versatilidade do equipamento necessrio para as anlises. Outras tcnicas para o preparo das amostras
precisam de extrao ou calcinao, ou ainda podem demandar equipamentos muito caros. Um
espectrofotmetro de infravermelho custa menos que a metade de um aparelho de espectrometria de raios
x.
A espectrofotometria o processo instrumental de medio baseado nas propriedades de
absoro e emisso de energia eletromagntica em alguma regio do espectro eletromagntico. A poro do
espectro percebida pelo olho humano (regio visvel) est compreendida entre comprimentos de onda de 380
nm e 780 nm e, acima desse limite, at cerca de 50.000 nm (faixa entre as regies do visvel e das microondas),
a radiao chamada infravermelha (IV). A regio do infravermelho entre 2,5 mm e 15,0 mm (2.500 nm a
15.000 nm) concentra o maior interesse dos qumicos, embora as regies do infravermelho prximo
(0,7 mm a 2,5 mm) e do infravermelho distante (14,3 mm a 50 mm) venham angariando maior ateno,
ultimamente.
Intervalo de comprimento
onda () , m.
0,78 a 2,5
2,5 a 50
50 a 1.000
Aplicaes em amostras
Materiais comerciais slidos ou lquidos, misturas gasosas.
Compostos puros e misturas complexas slidas, lquidas ou gasosas,
Compostos puros slidos ou lquidos, amostras atmosfricas, espcies
puras inorgnicas ou organometlicas.
2,5 a 15
43
2.2 INSTRUMENTAO:
Componentes do aparelho - Os espectrofotmetros de feixe duplo utilizados na determinao de espectros de
IV (figura 1) consistem de cinco sees principais: fonte de radiao, rea de amostras, fotmetro,
monocromador e detector.
3
espelho
Fenda
entrada
espelho
d) Monocromador: a maior parte das anlises espectroscpicas deve utilizar radiao composta por um
pequeno conjunto de comprimentos de onda, de modo a conferir ao mtodo instrumental a sensibilidade e a
seletividade necessrias, entre outras propriedades. Para isso, o equipamento utiliza um monocromador, que
dispersa a luz proveniente da fonte em diferentes comprimentos de onda. O dispositivo permite isolar bandas
de comprimento de onda geralmente muito mais estreitas que as obtida por filtros, sendo formado por um
elemento de disperso, que pode ser um prisma ou uma rede de difrao, junto com duas fendas estreitas que
servem como aberturas de entrada e de sada de radiao.
Quanto menor a largura das fendas, maior ser a resoluo obtida. Na maior parte dos
instrumentos, a largura das fendas programada de modo a aumentar quando a energia emitida pela fonte
diminui, mantendo a energia do feixe de referncia constante. Obtm-se um mximo de resoluo
usando-se as redes apenas em suas faixas de maior poder de disperso; nos instrumentos modernos de alta
resoluo, costume a utilizao de duas ou mais redes.
O monocromador tambm tem como funes principais dispersar a radiao em seus
comprimentos de onda, selecionar o comprimento de onda particular da radiao a ser transmitida ao
detector, e manter aproximadamente constante a energia no detector para todos os comprimentos de onda.
Durante a varredura, filtros so inseridos automaticamente no caminho da radiao, para eliminar toda
radiao indesejvel, inclusive as harmnicas da freqncia medida, provenientes da rede.
e) Detector: a medio da energia radiante feita atravs do detector, que utiliza o efeito trmico da
radiao para quantific-la. Aps deixar a fenda de sada do monocromador, o feixe refletido por um
espelho plano para um espelho elipsoidal, cujos focos esto na fenda de sada e no detector. Os detectores
podem ser divididos em duas classes gerais: seletivos e no seletivos. Os seletivos respondem em funo
do comprimento de onda da radiao incidente (placas fotogrficas, fotoclulas e celas de
fotocondutividade); os no seletivos, mais adequados para trabalhos espectroscpicos, respondem em
funo da energia da radiao incidente.
Os dois tipos comuns de detectores no seletivos so o termopar e o bolmetro. No caso dos
termopares, a energia radiante aquece uma das duas junes bimetlicas do dispositivo, produzindo uma
fora eletromotriz proporcional ao aquecimento. Os bolmetros baseiam-se na medida da variao da
resistncia com o aquecimento. O detector montado como um dos braos de uma ponte, de modo que a
mudana de temperatura provoca um desequilbrio no sinal atravs do circuito, que pode ser amplificado
e registrado ou, ainda, utilizado para ativar um servomecanismo para restabelecer o balano.
Como o detector recebe alternadamente o feixe de referncia e o da amostra, qualquer mudana
na intensidade da radiao devida absoro de energia detectada como um sinal diferente de zero. O
sinal assim obtido amplificado, e usado para posicionar o atenuador ptico de modo que a radiao dos
feixes de referncia e de amostra mantenham-se na mesma intensidade. A quantidade de atenuao
necessria uma medida direta da absoro pela amostra - o movimento do atenuador registrado, ento,
pela pena do instrumento.
3.3 A FORMAO DO ESPECTRO:
As fontes utilizadas em equipamentos comerciais emitem radiaes com comprimentos de onda
variando entre 2,5x10-4 cm at 1,5x10-3 cm, ou seja, com nmero de onda desde 4.000 cm-1 a 200 cm-1.
Suponhamos que uma amostra possa absorver energias correspondentes aos nmeros de onda 3.100 cm-1,
1.550 cm-1, 1.080 cm-1 e 610 cm-1. A amostra, aps o preparo, colocada na posio adequada e inicia-se
a anlise. A fonte comea a irradiar a amostra e a referncia, simultaneamente, com ftons de 4.000 a 200
cm-1.
Porm, nem todos esses nmeros de onda chegam simultaneamente ao detector, pois caso isso ocorresse, a
anlise ficaria prejudicada. Essa justamente a funo da rede de difrao.
A rede de difrao responsvel pela separao da radiao (ftons) de acordo com o seu
comprimento de onda, e sua funo pode ser representada esquematicamente como na figura 2, onde se
observa que apenas ftons com 4.000 cm-1 chegam ao detector.
45
Por meio de um movimento circular, a rede de difrao focaliza no detector, um a um, todos os
comprimentos de onda separadamente (4.000 cm-1, 3.999 cm-1, 3.998 cm-1 e 3.997 cm-1), e assim
sucessivamente at completar a varredura.
No detector, s incidem os ftons de 4.000 cm-1 vindos da referncia e da amostra. Como estas
no absorvem nenhum fton em 4.000 cm-1 - alis, a referncia no absorve nenhum fton na faixa 4.000
cm-1 - 200 cm-1 -, no ocorrer diferena de potencial no detector, nem tampouco movimento no
servomecanismo que aciona a pena do registrador. Assim, tem-se um ponto que corresponde a 0 de
absorbncia, ou 100% de transmitncia. A amostra nada absorve, transmitindo toda a radiao, como se
v na figura 4.
As redes de difrao movimentam-se continuamente. O mesmo fenmeno descrito anteriormente
acontece nos nmeros de onda 3.999 cm-1, 3.998 cm-1,..., 3.101 cm-1, porm, quando as redes de difrao
focalizam no detector 3.100 cm-1, por exemplo, algo diferente acontece, pois a amostra absorveu parte dos
ftons deste nmero de onda.
Deste modo, a intensidade de ftons que passa a amostra em 3.100 cm-1 menor que a
intensidade que passa pela referncia, o que gera uma corrente no detector que aciona o servomecanismo,
e a pena no registrador registra um pico que nada mais que o registro da parte da energia absorvida pela
amostra (figura 5).
Pode-se ver que 80% da energia com nmero de onda igual a 3.100 cm-1 foi absorvida. Com a
continuao do movimento de rotao das redes de difrao, chega-se novamente em nmeros de onda
que no puderam ser absorvidos pela amostra. Neste ponto, a corrente no detector volta a ser nula, e
retorna-se linha base do aparelho (0% de absoro). Isto se d abaixo de 3.100 cm-1. No espectrograma
da figura 6, o fenmeno retratado como um pico em 3.100 cm-1, pois a amostra absorve este nmero de
onda.
Continuando o movimento de rotao das redes de difrao at o nmero de onda 200 cm-1, o
espectro final da molcula ser semelhante ao da figura 7. Picos aparecem nos valores 1.550 cm-1, 1.080 cm-1
e 610 cm-1, onde a molcula absorve a radiao.
5.4- OS TIPOS DE VIBRAO:
Basicamente, o termo espectroscopia tem sido utilizado para designar mtodos analticos em que se
estuda a interao de radiaes eletromagnticas com molculas ou partculas. Tanto radiaes, como
molculas, porm, possuem energias caractersticas, cuja conseqncia a propriedade de uma molcula
absorver energia proveniente de uma radiao. O fenmeno, no entanto, no ocorre em todos os casos, mas
somente naqueles onde a energia do fton (outra forma de se chamar radiao) for compatvel com a energia da
vibrao molecular.
Deste modo, se um feixe de ftons com intensidade I0 incidir sobre uma amostra com molculas
que apresentam energia de vibrao incompatvel com a energia dos ftons, nenhuma energia ser
absorvida e todos os ftons passaro pela amostra, isto , o feixe I, que emerge da amostra, tem a mesma
intensidade que o feixe Io (Io = I). Por outro lado, se a energia dos ftons for compatvel com a energia
vibracional, cada molcula absorver um fton, aumentando seu movimento vibracional. Como
conseqncia, a intensidade dos ftons que deixa a amostra ser menor do que a intensidade incidente (Io
> I), pois parte dos ftons foi absorvido. Depreende-se que, quanto maior for o nmero de molculas
presente na amostra, menor ser a intensidade final, pois maior ser a chance dos ftons serem
absorvidos.
46
tornaram os instrumentos mais precisos e com maior sensibilidade. Instrumentos dispersivos trabalham
razoavelmente bem. No entanto, as aplicaes constantemente exigem maior velocidade, sensibilidade e
preciso. Estes equipamentos apresentam os seguintes problemas:
Grande nmero de partes mveis:
Mesmo o sistema dispersivo mais simples apresenta grande nmero de partes mveis:
a) Um mecanismo de modulao ou chopping, que alterna o feixe entre a amostra e a referncia,
produzindo um sinal no detector;
b) Um complexo e preciso motor de rotao da rede de difrao, que dispersa espacialmente o feixe nas suas
freqncias individuais;
c) Para os espectrmetros convencionais de duplo feixe, um atenuador deve ser usado na referncia para igualar
a intensidade de energia entre os feixes da amostra e da referncia;
d) Controladores de fenda utilizados para determinar a resoluo. A largura da fenda tambm muda ao longo
do espectro, para manter constante a intensidade de energia atravs da fenda;
e) Trocadores de filtro que eliminam a energia indesejada;
f) Registrador analgico (e no digital) para registro do espectro nos sistemas mais antigos.
Todas essas partes esto sujeitas ao desgaste mecnico e perda de preciso com o tempo. Se qualquer parte
for danificada, o espectrmetro torna-se inopervel.
Baixa velocidade de varredura
Somente um elemento de resoluo detectado de cada vez. Isto significa que o tempo requerido para
obter um espectro determinado pelo tempo que o instrumento detecta cada elemento de resoluo,
multiplicado pelo nmero de elementos de resoluo no espectro. As baixas velocidades de varredura dos
instrumentos dispersivos tornam impraticvel o monitoramento pelo espectro total de uma amostra que
sofre rpidas modificaes fsicas ou qumicas. Assim, o monitoramento cintico geralmente limitado a
uma nica banda de absoro, o que limita a extenso da informao desses experimentos.
Decrscimo da sensibilidade do sistema com os efeitos de fenda
O mecanismo de fendas que determina a resoluo bloqueia a maior parte da luz proveniente da fonte para a
obteno do espectro. A sensibilidade do sistema decresce, criando um problema para amostras que
apresentam baixa transmisso, ou para acessrios que no so opticamente eficientes. O problema ainda
maior em maiores resolues, quando as fendas so muito estreitas, permitindo a passagem de ainda menos
energia para o detector, e decrescendo a sensibilidade proporcionalmente.
No existe referncia interna
No h referncia interna para a calibrao das freqncias. Cada espectro deve ser calibrado
externamente, atravs do espectro de algum material com freqncias de absoro conhecidas - por
exemplo, o poliestireno ou o indeno - para determinar a diferena entre a freqncia conhecida e aquela que foi
obtida. Alm disso, os erros de calibrao no so constantes ao longo do espectro, o que significa que o
espectro deve ser calibrado em diversas reas. A adio de um sistema de tratamento de dados ao
espectrmetro dispersivo permite que se armazene a curva de calibrao, que pode, ento, ser usada para
corrigir o espectro obtido.
Entretanto, a calibrao pode ser afetada por outros fatores, como a temperatura, o que implica em
correr o padro de calibrao freqentemente. Isto requer mais tempo do operador e aumenta o custo de
cada anlise.
Permite luz espria
Devido modulao do feixe infravermelho pelo chopper numa freqncia constante, contribuies da
luz espria dentro do sistema so lidas pelo detector, e causam erros nas leituras de intensidade. Por
47
exemplo, pode-se encontrar luz em uma rea do espectro onde a amostra absorve inteiramente. Esta luz
espria difcil, ou quase impossvel de eliminar.
A luz espria faz com que anlises quantitativas nos instrumentos dispersivos sejam difceis. Conforme a lei
de Beer, existe uma relao linear entre a absorbncia medida e a concentrao da amostra.
Instrumentos dispersivos no so confiveis para anlises quantitativas em amostras com absorbncia
superior a 1,0 (nveis de luz abaixo de 10% de transmitncia). Como resultado, mais tempo deve ser
empregado preparando um filme mais fino ou uma amostra mais diluda para enquadrar a banda analtica na
faixa adequada de leitura. Novamente, o custo de cada anlise aumenta.
Aquecimento da amostra
A amostra, usualmente posicionada prxima da fonte, pode sofrer aquecimento, e alimentar a
possibilidade de decomposio, ou outras modificaes, particularmente, em amostras slidas.
Emisso da amostra
Uma amostra aquecida, como mencionado anteriormente, pode emitir radiao. Em alguns esquemas de duplo
feixe, a luz passa atravs da amostra antes de chegar ao chopper. Para esse tipo de sistema, qualquer
radiao emitida pela amostra ser lida pelo detector. Bandas de emisso so negativas em relao s
bandas normais de transmisso, mas quando ambas aparecem simultaneamente no espectro, a interpretao
pode ser dificultada.
Exerccios:
1- Explique a diferena entre a espectrofotometria no infravermelho e no ultravioleta e visvel. 2Qual o objetivo da anlise qumica por espectrofotometria de infravermelho?
3- Como o mecanismo de deteco de substncias por esta tcnica?
4- Cite vantagens e desvantagens do mtodo, sucintamente.
5-
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