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INTRODUCCION:
Actualmente, la cromatografa es una tcnica analtica que se utiliza para identificar y /o separar
los componentes de una mezcla de sustancias.
Esta tcnica tiene gran aplicacin prctica, como por ejemplo, en laboratorios farmacuticos,
dnde se utiliza para analizar y purificar medicamentos; en laboratorios de criminologa, para
determinar metabolitos, o drogas, en el torrente sanguneo y, en el mbito de la agronoma,
para la deteccin y anlisis de pesticidas y otras sustancias.
La cromatografa es una tcnica de separacin de una mezcla de solutos, basndose esta
separacin en la diferencia de velocidad con que se mueve cada uno de los solutos a travs
de un medio poroso (fase estacionaria), arrastrados por un disolvente en movimiento (fase
mvil). La fase estacionaria puede estar sujeta a un soporte slido.
Existen diversos tipos de cromatografa.
Dependiendo de la naturaleza de las fases, se pueden distinguir distintos tipos de cromatografa:
Cromatografa slido-lquido: la fase estacionaria es un slido y la mvil un lquido.
Cromatografa lquido-lquido: ambas fases son lquidos y en la estacionaria el lquido se ancla a
un soporte slido.
Cromatografa lquido-gas: la fase estacionaria es un lquido no voltil sobre soporte slido y la
fase mvil un gas.
Cromatografa slido-gas: la fase estacionaria es un slido y la mvil un gas.
La mezcla a separar se deposita sobre la fase estacionaria y la fase mvil atraviesa el sistema
desplazando los componentes de la mezcla a distintas velocidades que dependen de la afinidad
de los mismos por cada una de las fases. Se denomina elucin a la migracin de los
componentes de la mezcla a lo largo de la fase estacionaria impulsados por la mvil.
M. Patricia Arias
1.Aplicacin de mezcla
en la fase estacionaria
2. Elucin de la mezcla en la
fase mvil, comienza la
separacin de los
compuestos
3. Separacin adecuada, el
compuesto representado
por crculos, tiene menos
afinidad con la fase
estacionaria.
M. Patricia Arias
H2O > CH3-OH > (CH3)2CH-OH > CH3-CN > Dioxano > CH3COOEt > THF > CH2Cl2
( Cloruro de metileno) > CHCl3 (Cloroformo) > CCl4 (Tetracloruro de carbono) >
CH3(CH2)4CH3
M. Patricia Arias
Figura 2
Figura 3
Determinacin del Rf
Se conoce como Rf (rate factor) la relacin entre las distancias recorridas por un compuesto y por
el disolvente desde el origen del cromatograma..
Figura 4
M. Patricia Arias
En las placas cromatogrficas (1,0 cm x 6,7 cm) marque la lnea de origen (1.0 cm del borde) y
la del frente del eluyente a 0.5 cm del borde superior. En la lnea de origen marque con una cruz
donde colocar los frmacos (trabaje con lpiz grafito).
Aplique 2 a 3 veces la muestra con un capilar sobre la cruz. Deje secar cada vez.
Coloque la cromatoplaca en un vaso de precipitado que contiene el eluyente tapado con un
vidrio reloj o cpsula Petri (el vaso debe ambientarse 5 a 10 min. antes con el eluyente). Figura 5
y figura 6.
Deje eluir hasta aproximadamente 0,5 cm del borde superior de la placa.
Saque cuidadosamente la placa y luego djela secar.
Proceda a eluir las placas que contienen la muestra patrn y las respectivas a la muestra
problema hasta la marca indicada en las placas usando dos mezclas de solvente que poseen
polaridades diferentes:
Mezcla 1: Metanol/diclorometano (1:1)
Figura 5
M. Patricia Arias
Discuta con su grupo la polaridad de los solventes usados, el solvente que mejor los
separa.
Con toda la informacin concluya cuales son los frmacos presente en su muestra
Problema (dos Como Mximo).
Cuestionario de Cromatografa
HO
O
Vitamina A
M. Patricia Arias
O Me COCH2OH
Me
H H
Cortizona
-caroteno
M. Patricia Arias