I.

GENERALIDADES
La degradacin de los nutrientes: Las protenas, los lpidos y
los carbohidratos son degradados mediante reacciones
enzimticas que ocurren una despus de la otra. Este proceso
de degradacin est dividido en tres etapas que a grandes
rasgos son las siguientes:
La primera consiste en la conversin de molculas complejas
a molculas ms simples; esto quiere decir que una protena,
que no es ms que una cadena de aminocidos, tiene que ser
convertida de nuevo en sus constituyentes, que son los
aminocidos, para que stos puedan ser debidamente
aprovechados en la segunda etapa de degradacin. Estos
procesos degradativos no requieren de energa y ocurren en el
interior del microorganismo.
La segunda etapa consiste en la conversin de estas
molculas, ya bastante simples, en una an ms simple y
comn, independientemente del origen de las molculas. Es
decir, que tanto los carbohidratos como las protenas o los
lpidos son convertidos en una molcula mucho ms simple
llamada "acetil coenzima A".
Es a partir de esta molcula que la tercera etapa del
metabolismo se lleva a cabo y consiste en generar la energa
que necesita la clula para realizar procesos vitales, como
desplazarse o dividirse, entre otros. En esta etapa ocurre uno
de los ciclos metablicos ms importantes de la biologa: el
ciclo de los cidos tricarboxlicos o ciclo de Krebs. As pues,
todas las molculas que sirven a un organismo como fuente
de subsistencia son llevadas, por medio de diversos caminos
de degradacin, a un camino metablico comn. Esta va

metablica comn degrada una sola molcula en una serie de

pasos y como resultado se obtiene energa principalmente en
forma de ATP.

II. OBJETIVOS

Observar y comprender la accin de los microorganismos en los

diferentes sustratos en los procedimientos de identificacin bacteriana.
Adquirir conocimientos bsicos tericos sobre el proceso de
identificacin de bacterias a travs de su accin en diferentes sustratos.

III. EQUIPOS y MATERIALES

-

Tubos de ensayo conteniendo cultivos bacterianos en diferentes sustratos de

identificacin.

IV. MTODO
Observacin macroscpica
V. PROCEDIMIENTO
-

Observamos los sustratos de identificacin bacteriana.

Observamos la accin diferente que tiene cada bacteria en cada sustrato.
Anotamos las observaciones.

VI. RESULTADOS

SUSTRATOS INDICADORES:
SIMMONS, UREA, SIM

TSI,

LIA,

CITRATO

1. REACCIN BIOQUMICA DE LA BACTERIA: Escherichia coli

2. REACCIN BIOQUMICA DE LA BACTERIA: Proteus

DE

3. REACCIN BIOQUMICA DE LA BACTERIA: Salmonella

VII.

CONCLUSIONES

Para E. coli

Observamos que utiliza los hidratos de carbono del Agar TSI al

virar al color amarillo, adems de producir burbujas de gas.
En Agar LIA Se observa la produccin de lisina descarboxilasa
en el viraje de color amarillo a violeta.
En Agar CITRATO DE SIMMONS, Se observa que no utiliza el
citrato para su metabolismo, por lo que no hay cambio de color.
En Agar UREA, Se observa que no degrada la urea, por lo tanto
no hay cambio de color.
En Agar SIM + PRUEBA DE INDOL, Se observa que el control es
positivo.

Para Proteus

Observamos que utiliza algunos hidratos de carbono del Agar

TSI, adems de producir H2S.
En Agar LIA Se observa la produccin de lisina descarboxilasa
en el viraje de color amarillo a rojo parduzco.
En Agar CITRATO DE SIMMONS, Se observa que utiliza el citrato
como nica fuente de carbono para su metabolismo, por lo que
hay cambio de color verde al azul.
En Agar UREA, Se observa que degrada la urea, por lo tanto
hay cambio de color.
En Agar SIM + PRUEBA DE INDOL, Se observa que el control es
positivo para Agar SIM al producirse H2s al ennegrecerse el
medio e Indol negativo.

Para Salmonella

Observamos que utiliza algunos hidratos de carbono del Agar

TSI, adems de producir H2S.
En Agar LIA Se observa la produccin de lisina descarboxilasa
en el viraje de color amarillo a rojo parduzco.
En Agar CITRATO DE SIMMONS, Se observa que no utiliza el
citrato para su metabolismo, por lo que no hay cambio de color.
En Agar UREA, Se observa que no degrada la urea, por lo tanto
no hay cambio de color.
En Agar SIM + PRUEBA DE INDOL, Se observa que el control es
positivo.

VIII. DISCUSIN
1. AGAR TRIPLE AZUCAR HIERRO: TSI

Determina la capacidad de un organismo de atacar un

hidrato de carbono especfico incorporado en un medio
de crecimiento bsico, con produccin o no de gases, junto
con la determinacin de posible cido sulfhdrico.
El agar TSI es un medio diferencial que determina tanto la
fermentacin de los hidratos de carbono y la produccin de
cido sulfhdrico.
Reaccione
s
Pico de flauta alcalino / profundidad alcalina (K/K).
No fermentacin de hidratos de carbono. Caracterstico de
bacterias no fermentadoras como Pseudomonas aeruginosa.
Pico de flauta alcalino / profundidad cida (K/A).
Glucosa fermentada, lactosa no fermentada. Caracterstico
de bacterias no fermentadoras de lactosa como especies de
Shigella.
Pico de flauta alcalino / profundidad cida (negra)
(K/A/H2S). Glucosa fermentada, lactosa no fermentada;
produccin de H2S. Caracterstico de bacterias no
fermentadoras de lactosa y productoras de H2S como:
Salmonella, Arizona, Citrobacter y algunas especies de
Proteus.
Pico de flauta cido / profundidad cida (A/A).
Glucosa y
lactosa fermentadas. Caracterstico de coliformes que
fermentan lactosa como:
E. coli y grupo Klebsiella- Enterobacter.

2. ASIMILACION DEL CITRATO. Medio de cultivo: Citrato de

Simmons
Determina si un microorganismo es capaz de utilizar citrato
como nica fuente de carbono para el metabolismo y
crecimiento, provocando alcalinidad.
Resultados

Medio no inoculado

Positivo

negativo

Positivo

Interpretacin

Positivo: Crecimiento aunque no exista cambio de

color.
Crecimiento y el medio de color azul
intenso en pico de flauta.

Negativo: No se observa crecimiento y medio de color

verde.

3. HIDRLISIS DE LA UREA. Medio de cultivo: Agar urea de

Christensen
Determina la capacidad de un organismo de desdoblar
la urea formando dos molculas de amoniaco por la accin
de la enzima ureasa produciendo un cambio de color rojo en
el medio.
La hidrlisis de la urea es catalizada por la ureasa, para dar
dos molculas de amoniaco. La ureasa es una importante
enzima microbiana vinculada con la descomposicin de los
compuestos orgnicos.

4. Prueba de la produccin de Indol

La prueba de indol se bas en la formacin de un
complejo de color rojo cuando el indol reacciona con el
grupo aldehdo de p-dimetilaminobenzaldehdo (sustancia
activa del reactivo de Kovacs).
La formacin de indol se produce solamente en aquellos
organismos capaces de fermentar los hidratos de carbono.
La elevada acidez producida por la fermentacin de la
glucosa puede impedir el crecimiento del organismo o inhibir
la enzima. El agregado de triptfano estimula la
produccin de indol mientras que la glucosa la inhibe.
Reactivo de Kovacs

Adicionar
5 gotas
suavemente el tubo

agitar

Interpretar
inmediatamente

Reporte resultados
PRUEBA

POSITIVO

NEGATIVO

Sulfuro

Indol

Resultados

positivo

Medio sin
inocular
Indol negativo

Indol

Interpretacin
- cido sulfhdrico
Positivo: Ennegrecimiento del medio
Negativo: Sin ennegrecimiento
- Indol
Positivo: Anillo rojo en la superficie del medio. Negativa: No
se produce color
Negativa: Color naranja en la superficie del medio. Indica
desarrollo de escatol, un compuesto metilado que puede ser
el precursor de la formacin de indol.

IX.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
-

MANUAL
DE
PROCEDIMIENTOS
BACTERIOLOGICOS
EN
INFECCIONES INTRAHOSPITALARIAS. MINISTERIO DE SALUD.

INSITUTO NACIONAL DE SALUD. SERIE DE NORMAS TECNICAS

N 28. Lima, 2005.
ATLAS DE PRUEBAS BIOQUIMICAS PARA IDENNTIFICAR
BACTERIAS. UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO.
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA. 2003.
Ambron
S.
y
Hooper
K,
2002.
http://dis.unal.edu.co/eidos/node47.html