UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA

Qumica Farmacutico Biolgica
Microbiologa General I

Caractersticas macroscpicas de cultivos

Realizado por:
Godoy Rodrguez Didin Yamileth
Rojas Cisneros No Gerardo
Victoria Chvez Rebeca Yael
Grupo: 1602
Equipo: 5
Semestre: 2017-1

Asesor: Beatriz Elena Arellano Pimentel

OBJETIVOS

Familiarizar al alumno con el manejo de los principales mtodos de esterilizacin usados en el laboratorio de microbiologa y la adecuada
preparacin del material.
El alumno analizar el fundamento de los principales tipos de medios de cultivo para bacteriologa.
El alumno elegir el tipo de siembra adecuada a la consistencia del medio de cultivo y la aplicar segn sea el objetivo.
El alumno observar y diferenciar de manera correcta las principales caractersticas de crecimiento de los microorganismos en medios
slidos, semislidos y lquidos.

METODOLOGA
Se prepararon los
medios de cultivo
slidos,
semislidos y
lquidos
necesarios; se

De los ceparios otorgados,

se seleccion y realiz la
siembra de los
microorganismos en cada
uno de los medios
preparados.

Se esterilizaron los
medios de cultivo
en la olla de presin

Se registraron las
observaciones
realizadas.

Se esteriliz por calor

hmedo (121C a 15
lb de presin, en olla
de presin) los
contenedores de vidrio
a emplear: caja Petri,
pipetas graduadas
tubos de ensaye.

MEDIOS DE CULTIVO PREPARADOS

Agar EMB
Agar nutritivo (AN)
Agar Salmonella-Shigella (SS)

Se incubaron los
medios inoculados a
37.5C durante 48
horas (aprox.)

Se observ la morfologa
de las colonias de los
microorganismos
inoculados en los

Agar Sal y manitol (SM)

KIA
SIM

Caldo nutritivo (CN)

Escherichia coli

Proteus vulgaris

CEPARIOS
Pseudomonas aureginosa

Klebsiella pneumoniae
Salmonella typhi

Streptococcus pyogenes
Corynebacterium xerosis

Bacillus cereus
Staphylococcus aureus

RESULTADOS
Despus de preparar los medios de cultivo necesarios para la proliferacin de las bacterias, se realiz la inoculacin de diferentes
microorganismos, los cuales presentaron caractersticas coloniales distintivas de cada cepa. La tabla 1 condensa la morfologa colonial observada.
Tabla 1. Resultados de morfologa colonial.
Bacteria

Pseudomonas
aeruginosa

Medio
de
cultivo

AN
AN

Bacillus cereus

SM

Forma

Circular
Filame
ntoso
Inhibid
o

Tamao

Elevacin

Margen/
borde

Luz
reflejada

Luz
transmitida

Color

Textura/
Consisten
-cia

Otras caractersticas

Viscosa

Olor a uvas
podridas. Pigmento
verdoso en el medio

Mediano

Elevada

Entero

Brillante

Traslcida

Blanco
opaco

Grande

Plana

Filamentoso

Opaca

Traslcida

Blanco

Viscosa

--

Inhibido

Inhibido

Inhibido

Inhibido

Inhibido

Inhibido

Inhibido

Inhibido

Viscosa

Lactosa positivo

Viscosa

Lactosa positivo

Viscosa

Lactosa negativo
Lactosa negativo
Produccin de H2S.
Colonia similar a ojo
de pescado
Lactosa negativo
Produccin de H2S

Verde
metlico
Rosa
intenso
Beige

Escherichia coli

EMB

Circular

Pequeo

Convexa

Entero

Brillante

Opaca

Klebsiella
pneumoniae

EMB

Circular

Mediano

Convexa

Entero

Brillante

Opaca

EMB

Circular

Pequeo

Plana

Entero

Brillante

Traslcida

SS

Circular

Mediano

Convexa

Entero

Brillante

Opaca

Negro con
halo blanco

Viscosa

SS

Circular

Pequeo

Plana

Entero

Brillante

Traslcida

Caf claro

Seca

Agar
sangre

Circular

Pequeo

Convexa

Entero

Brillante

Opaca

Blanco

Seca

hemoltico

SM

Inhibid
o

Inhibido

Inhibido

Inhibido

Inhibido

Inhibido

Inhibido

Inhibido

Inhibido

SM

Circular

Pequeo

Convexa

Entero

Brillante

Opaca

Beige

Viscosa

Manitol positivo
Produccin de cido

SM

Puntifor
me

Pequeo

Plana

Entero

Opaca

Opaca

Blanco/
Beige

Viscosa

Manitol positivo

Salmonella typhi

Proteus vulgaris
Streptococcus
pyogenes
Staphylococcus
aureus
Corynebacterium
xerosis

AN: agar nutritivo; SM: agar sal y manitol; SS: agar Salmonella-Shigella.

En la tabla 2 se muestran las imgenes de las colonias observadas en cada medio de cultivo.
AGAR NUTRITIVO

AGAR Salmonella-Shigella

Pseudomona

Staphylococcus

Bacillus cereus

AGAR SANGRE (Streptococcus pyogenes)

AGAR SAL Y MANITOL

Corynebacterium

Salmonella typhi

B. cereus

AGAR EMB

Proteus vulgaris

Sreptococcus

S. pyogenes

Escherichia coli

Klebsiella pneumoniae y S. typhi

Adems de la lectura de morfologa colonial en las placas, se interpretaron los otros medios preparados: KIA (slido en tubo y en pico de flauta),
SIM (medio semislido) y caldo nutritivo.
MEDIO DE CULTIVO

BACTERIA SEMBRADA

INTERPRETACIN

Escherichia coli

cido/cido con produccin de gas

IMAGEN

E.

KIA
Pseudomona aureginosa

P.

Staphylococcus aureus

S(-) I (No realizado) M(-)

Proteus vulgaris

S(+) I (No realizado) M(+)

SIM

S.
aureus

P. vulgaris

Caldo nutritivo

Escherichia coli

No se observ un cambio

Pseudomonas aureginosa

Crecimiento en la superficie

E.
coli

P.

ANLISIS DE RESULTADOS
Para lograr la identificacin presuntiva de una bacteria se requiere la realizacin de un trabajo previo de esterilizacin en el material de aislamiento,
conocer los medios de cultivo adecuados para el desarrollo de las bacterias, su metabolismo y las caractersticas de crecimiento de las bacterias
aisladas, as mismo como realizar el aislamiento en un ambiente asptico. En esta prctica no se realiz un diagnstico presuntivo debido a que
las bacterias trabajadas fueron dadas en ceparios etiquetados, sin embargo, con la observacin macroscpica de sus crecimientos, se logr la
confirmacin de caractersticas.
El agar nutritivo es un medio bsico para microorganismos no exigentes. En este medio se sembraron Pseudomona aeruginosa y Bacillus cereus.
P. aeruginosa tuvo un buen crecimiento, se observ que la colonia aislada presentaba una forma circular con borde entero, posea un color blanco
opaco brillante casi gris, color caracterstico de esta bacteria adems de que el medio se torn de un color amarillo verdoso, esto se debe a la
produccin de pioverdina y piocianina, molculas producidas por la misma bacteria, as mismo se detect su olor caracterstico (a uvas podridas),
son glucosas positivas, por lo que el agar nutritivo fue un buen medio para su reproduccin. B.cereus por su parte creci de buena forma, sta
present una morfologa colonial caracterstica: forma filamentosa, un tamao de 3-8 mm de dimetro de color blanco opaco asemejando un vidrio
esmerilado; las colonias tienden a extenderse por todo el medio.
Algunos medios de cultivo tienen sustancias que favorecen o inhiben el crecimiento de ciertas bacterias, estos medios de cultivo generalmente son
selectivos y diferenciales. El agar sal y manitol es un medio que contiene una concentracin muy elevada de NaCl (7.5%), por lo que permite el
crecimiento de microorganismos halfilos, principalmente estafilococos patgenos, adems de poseer un indicador de pH (rojo de fenol) y manitol,
que con su degradacin y la produccin de cidos cambia el color del medio. En este medio se aisl a Bacillus cereus, Streptococcus pyogenes,
Staphylococcus aureus y Corynebacterium xerosis.

S. aureus fue el nico microorganismo que se desarroll en todo el medio de cultivo, ocasionando un cambio en la tonalidad del medio, de rojo a
amarillo por la fermentacin del manitol y la produccin de cido. C. xerosis logr desarrollarse levemente sobre el cuadrante de la siembra
masiva, sin embargo, B. cereus y S. pyogenes no resistieron las condiciones de sal en exceso y fueron inhibidos.
Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae y Salmonella typhi se sembraron en agar EMB. Este medio de cultivo se clasifica como selectivo y
diferencial, debido a que inhibe el crecimiento de bacterias Gram positivas por los colorantes eosina y azul de metileno. Tiene lactosa como
sustrato a metabolizar, por lo que las bacterias que se consideran lactosa positivas presentan colonias rosas (K. pneumoniae), mientras que las
bacterias lactosa negativas son transparentes o ambarinas (S. typhi). El crecimiento de E. coli en este medio muestra caractersticas especiales,
porque aunque es una bacteria fermentadora de lactosa, el color de la colonia es verde metlico con negro en la parte central, por lo que no
presenta el color caracterstico de las lactosa positivas; tambin se identific en este medio que la colonia de la bacteria presenta una consistencia
viscosa, esto se debe a que en su estructura, E. coli presenta cpsula; as mismo se sabe que sta no crece en medios con citratos, por lo que la
eleccin del medio de cultivo fue fundamental para el crecimiento de la bacteria.
Agar Salmonella-Shigella es un medio altamente selectivo y diferencial que no necesita ser esterilizado despus de su preparacin por su gran
especificidad. Sin embargo, no slo crecen las especies de Salmonella sp. y Shigella sp., tambin Proteus sp. Estas bacterias se desarrollan en
este medio presentando un crecimiento caracterstico, swarming. Las especies sembradas en este agar fueron Salmonella typhi y Proteus
vulgaris, este medio sirve tambin para observar la fermentacin de lactosa; las especies sembradas fueron lactosa negativa, por lo que las
colonias eran transparentes y con un centro negro, por la formacin de cido sulfhdrico, el cual precipita por su reaccin con el citrato frrico
presente en el medio.
En el ltimo medio, el agar sangre (que no fue preparado en el laboratorio), se sembr Streptococcus pyogenes. La tcnica de sembrado fue la
empleada si el medio fuera agar chocolate porque a simple vista pareca que ste haba sufrido hemlisis, por lo que no fue puncionado el medio.
Sin embargo, se logr apreciar la hemlisis causada por S. pyogenes al observar el medio a contra luz, detectando un halo transparente que
rodeaba todas las colonias desarrolladas; por lo tanto, se determin que este microorganismo es -hemoltico. Una vez realizada la siembra, el
medio fue sellado con cinta maskin, esto para limitar la entrada de oxgeno debido a que S. pyogenes es microaeroflico y as se favoreci su
crecimiento.
El agar hierro de Kliger (KIA) es un medio diferencial en tubo, en pico de flauta, que sirve para la determinacin de las fermentaciones de
carbohidratos (glucosa y lactosa) con produccin o no de gas y para la determinacin de produccin de cido sulfhdrico. En el fondo del tubo se
metaboliza la glucosa, en el pico de flauta la lactosa. El gas suele ser un producto terminal del metabolismo de los carbohidratos (CO 2 y H2). Las
bacterias que producen gas se denominan aerognicas, lo que fue manifestado por E. coli al desplazar el medio del fondo del tubo, dejando un
rea clara. Adems, esta bacteria cambi el color de todo el medio, lo que indica la fermentacin de lactosa y glucosa con produccin de cido, lo
que ocasion el viraje del indicador de pH de rojo a amarillo.
En el caso de Pseudomona aeruginosa, las reacciones observadas en el tubo no son caractersticas de su gnero, ya que es una bacteria no
fermentadora que no produce sulfuros, por lo que el tubo debi haberse observado de color rojo. Sin embargo, se present un medio con color
anaranjado rojizo en el fondo y coloracin negra en el pico de flauta, sugiriendo la contaminacin de la cepa con otro microorganismo. Es

importante recordar que el tiempo de incubacin es un factor determinante para la interpretacin de esta prueba bioqumica, y que debe cumplirse
en el rango de 18-24 horas para evitar dar resultados catalogados como falso positivo.
En el caldo nutritivo se inocul P. aureginosa y E. coli, destacando que la primera de ellas tuvo un crecimiento en forma de pelcula sobre el caldo,
demostrando el carcter aerobio estricto de la bacteria.
El medio SIM se utiliza para la interpretacin de produccin de sulfuro, indol y verificacin de motilidad. Se aisl una bacteria muy mvil ( Proteus
vulgaris) que adems produce cido sulfhdrico y una bacteria inmvil (Staphylococcus aureus) que no produce sulfuros. En dicho medio se
observaron las caractersticas especiales de cada cepa, distinguindose fcilmente la que presenta movilidad de la que no, pues la primera
desarrolla un color negro debido a la precipitacin de sulfuros, el cual se esparce alrededor del punto de puncin en todas direcciones. En la
inoculacin de S. aureus, se observ una falsa movilidad, esto se debe a una ligera desviacin al momento de retirar el asa con que se hizo la
puncin, sin embargo, al observarse el crecimiento bacteriano en una sola direccin, se descart la presencia de organelos locomotores en la
bacteria.
Una vez explicadas las interpretaciones realizadas a todos los medios de cultivo aislados, es necesario explicar que todas las placas slidas fueron
sembradas por agotamiento, el medio KIA se sembr por estra y picadura, el medio SIM se sembr por puncin y los caldos fueron sembrados por
agitacin. Habiendo ms tcnicas de siembra, se emplearon las anteriores por ser las ms comunes en bacteriologa y las ms efectivas. Por
ejemplo, la estra por agotamiento se realiz para lograr un adecuado aislamiento y facilitar la observacin de las colonias.
CONCLUSIONES
La morfologa de cualquier colonia de bacterias es fundamental para la identificacin de stas, en el rea de bioqumica clnica es de suma
importancia debido a que la mayora de ellas causan patologas en los seres humanos. Para un buen aislamiento de colonias, es necesario tener
una serie de condiciones que propicien su crecimiento, tal es el caso de condiciones aspticas, esto para obtener un cultivo con un solo tipo de
microorganismo (el que se desea aislar), lo cual se lleva a cabo mediante la esterilizacin de los utensilios, medios y equipo a emplear.
Durante el desarrollo de la prctica se llevaron a cabo stas actividades, as mismo se prepararon los agares necesarios para el desarrollo de las
cepas y se emplearon las tcnicas de sembrado ms comunes y efectivas para cada tipo de medio preparado (slido, semislido y lquido),
obteniendo como resultado el crecimiento de colonias bacterianas puras y algunas con pocas contaminaciones. Tambin se observ que la
eleccin del medio de cultivo es fundamental para el crecimiento de las bacterias y esto depende de cada una de ellas, pues en condiciones
hostiles independientes stas se ven inhibidas.
Por lo anterior se concluye que, para obtener un aislamiento de bacterias satisfactorio, es necesario controlar todas las variables que anteriormente
se describen.
REFERENCIAS

Romero, R. Microbiologa y parasitologa humana. 3 Ed. Mxico: Editorial mdica panamericana, 2007.

Realpe, M. Hernndez, C. Agudelo, C. Especies del gnero Bacillus: morfologa macroscpica y microscpico. Revista Biomdica. 22
(2002): 106 109.
Schaechter, M. Escherichia coli. Enciclopedia de Microbiologa. 3 Ed. Espaa: Elsevier, 2009. Pp 125 132.
Koneman, E. Diagnstico microbiolgico. Mxico: Editorial Mdica Panamericana, 1985.