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Elemental analysis of nuts and seeds by axially viewed ICP

OES
Abstrato
Um mtodo para a determinao de multi-elemento de metais (Al, Ba, Ca, Cu,
Fe, K, Mg, Mn, Sr e Zn), metalides (B e Si), e os no metais (Cl, P e S) na
porca e mesocarpo de babau, sapucaia porca, polpa de coco, polpa e
semente de cupuau e castanha de caju por axialmente visto indutivamente
acoplado a espectrometria de emisso ptica com plasma apresentado. Uma
mistura oxidante diludo (2 ml HNO

+ 1 ml de H 2 O 2 + 3 ml de H 2 O) foi

utilizado para alcanar a completa decomposio da matriz orgnica, em um

forno de microondas vaso fechado. A preciso de todo o mtodo proposto foi
confirmada pela anlise de material de referncia padro (pssego folhas-NIST
SRM1547). Os valores certificados mostrou um bom acordo em um limite de
confiana de 95% (Student t -test). O RSD mdia de repetibilidade para
calibrao medies solues estavam na faixa de 1,1-6,7%. Os limites de
quantificao (LOQ = 10 LOD) estavam no nvel de ,00072-,0532 mg / l. As
faixas de macro e micronutrientes nas diferentes nozes e sementes no
exceder a ingesto diettica de referncia (DRI), exceto para Mn no coco
babau.
Palavras-chave: Anlise elementar; ICP OES ; Espectrometria de emisso ;
Nuts ; Sementes

Introduo

Nos ltimos anos as porcas da regio amaznica tm atrado a ateno devido

alta concentrao de alguns elementos essenciais ( Kannamkumarath,
Wuilloud, & Caruso, 2004 ). Nuts so ambos livre de colesterol e rica em
nutrientes importantes, incluindo protenas e cidos graxos insaturados
( Brufau, Boatella, e Rafecas, 2006 ). Eles tambm contm micronutrientes
importantes, tais como o cido flico e niacina, vitaminas (E e B 6 ) e minerais
(Ca, Mg, Mn, Cu, Fe, Zn, Se, P e K) ( Brufau et al. de 2006 e e Naozuka

Oliveira, 2007 ). Destaque especial foi dado para a castanha do Brasil

( Bertholletia excelsa ), devido sua alta concentrao de Se de at 0,5 g kg
1

( Chang, Gutenmann, Reid, & Lisk, 1995 ).

Outros nozes e sementes tropicais, a maioria deles tpico do norte e noroeste

do Brasil, so consumidas pela populao local e suas composies
elementares

no

so

bem

conhecidos,

por

exemplo,

babau

(Orbignya speciosa ), cupuau ( Theobroma grandiflorum ), sapucaia ( Lecythis

pisonis ) e caju ( Anacardium occidentalle L.). Farinha, alimentos para animais,
cosmticos, medicamentos e bebidas pode ser produzido a partir do fruto de
babau, enquanto que as sementes contm leo til para cozinhar e interesses
comerciais. O mesocarpo do babau uma fonte de farinha amilcea,
contendo aproximadamente 50% m / m de amido ( Baruque, Baruque, &
Sant'Anna, 2000 ). A fruta cupuau tem uma polpa branco-amarelada com um
sabor cido agradvel e um aroma forte. Devido presena de substncias
volteis responsveis pelo aroma, tais como linalol, -terpinol, 2-feniletanol,
mirceno e limoneno, diis e metoxi-2 ,5-dimetil-3 (2H)-furanona, cupuau
consumida como suco , gelados e de aperto ( Augusto et al. de 2000 e Rogez
et ai. de 2004 ). Sementes de cupuau pode ser processada de uma maneira
semelhante para produzir o chocolate de cupuau, chamado "cupulate
'( Augusto et al. de 2000 ). A composio apresenta as protenas, gorduras,
acares, macro e micronutrientes ( Augusto et al. de 2000 e Rogez et ai. de
2004 ). Porcas apetitosas pode ser obtido a partir do fruto sapucaia que contm
nveis elevados de macro e micronutrientes e sais minerais, tais como P, Cu e
Mn ( Vallilo, Tavares, Aued-Pimentel, Campos, & Neto, 1999 ). O caju
valorizado no s por seu alto teor de cido ascrbico, mas tambm para o
miolo do fruto, que pode ser industrializado. uma rica fonte de gordura,
protena, Ca, P, Fe e tem uma elevada percentagem de cidos gordos
poliinsaturados ( Jekayinfa & Bamgboy, 2006 ). gua e polpa adquirida a
partir do coco ( Cocos nucifera ). A polpa comestvel do coco maduro
normalmente utilizado na produo de flocos de coco, o leite de coco e
azeite. A composio elementar de polpa de coco pouco conhecida, no
entanto, o fraccionamento e caracterizao de protenas tem sido estudada. A

composio qumica da polpa de coco apresenta os hidratos de carbono,

protenas, lpidos, macro e microelementos ( Kwon, Park, & Rhee, 1996 ).
Espectrometria de emisso ptica de plasma (ICP OES) uma tcnica de
multi-elemento que permite a determinao de maiores, menores e
oligoelementos

em

amostras

complexas. No

entanto,

dependendo

da

configurao do equipamento e do analito, a deteco inferior obtida

usando tipicamente fornalha de grafite espectrometria de absoro atmica
(AAS GF) e acoplado indutivamente a espectrometria de massa com plasma
(ICP-MS) ( Silva, Baccan, & Nbrega, 2003 ). Na maioria dos mtodos de ICP
OES, necessrio converter as amostras em solues slidas por digesto
cida. Para esse efeito, o forno de microondas vaso fechado tem sido
extensivamente utilizada para a digesto das amostras, devido aos tempos de
aquecimento de curta durao (20-40 min), a reduo do risco de
contaminao, os requisitos de baixo volume de reagente, e perdas mnimas
de espcies volteis ( Korn et al., 2008 ). Alm disso, a combinao de mistura
oxidante diludo e vaso fechado forno microondas permite a minimizao dos
valores em branco, a melhoria dos limites de deteco, as quantidades de
reagentes, a gerao de resduos e reduzindo os custos das anlises. Para ICP
OES, este procedimento oferece outras vantagens, tais como a produo de
solues digeridos melhor adequado para ser introduzido por nebulizao e da
minimizao de ataque qumico em partes do aparelho, tais como a
nebulizao, a cmara de nebulizao e o maarico (Arajo, Gonzalez,
Ferreira, Nogueira, & Nbrega, 2002 ).
Considerando a importncia destes alimentos como uma fonte de minerais e na
necessidade de entender as suas composies de minerais, o presente
trabalho mostra os resultados obtidos pelo mtodo proposto para a
determinao simultnea de metais (Al, Ba, Ca, Cu, Fe, K , Mg, Mn, Sr e Zn),
metalides (B e Si), e no-metais (Cl, P e S) do coco babau e mesocarpo, a
porca de sapucaia, polpa de coco, polpa e semente de cupuau e da castanha
de caju porca por axialmente visto indutivamente acoplado a espectrometria de
emisso ptica com plasma (ICP OES), aps a digesto com mistura oxidante
diluda em um forno de microondas recipiente fechado.

2. Experimental
2.1. Instrumentao

A Spectro Ciros CCD ICP espectrmetro de emisso ptica (Spectro Analytical

Instruments, Kleve, Alemanha) equipado com plasma axialmente visto foi
usado ao longo deste trabalho. O espectrmetro est equipado com um
detector de estado slido CCD simultnea que permite medies de 120-825
nm. Este equipamento permite determinaes de no-metal, por exemplo, Cl,
Br, I, P e S, em funo do sistema de pr-ptica, que purgado com gs inerte,
a fim de permitir as leituras abaixo de 180 nm. O rgon continuamente
circulada atravs de um filtro que remove oxignio, vapor de gua, e outras
espcies que podem absorver radiao electromagntica na ultravioleta de
vcuo (VUV). O policromador foi termostatizada a 34 C e purgou-se com
rgon. Uma ponta na interface gs foi usado na configurao axialmente viram
para minimizar a interferncia provocada pela absoro e auto-recombinao,
para proporcionar uma vasta gama dinmica linear e baixo fundo. O sistema de
introduo era composta por uma dupla passagem (Scott-type) cmara de
spray e um nebulizador cross-flow. O dimetro do tubo injector do maarico foi
de 2,0 mm.
A digesto das amostras, utilizando uma mistura oxidante diluda foi realizado
por um sistema de micro-ondas vaso fechado (Multiwave 3000, Anton Paar,
ustria), equipada com recipientes de fluoropolmero 16 e um revestimento de
cermica navio. Eles suportam uma temperatura mxima e da presso de 240
C e 4 MPa, respectivamente. A temperatura interna e a presso so
monitorizadas em vaso nico, utilizando um tubo de controlo do sensor de vidro
de proteco que entra em contacto directo com a soluo de digesto.A
temperatura externa controlada em todos os navios que utilizam um sensor
infravermelho, que mede cada navio digesto atravs de portas na base do
rotor.

2.2. Reagentes e amostras

Todas as solues foram preparadas a partir de produtos qumicos de

qualidade analtica e utilizando reagentes de alta pureza de gua desionizada
obtida a partir de um sistema de purificao de gua Milli-Q (Millipore, Belford,
MA, EUA). Grau analtico a 65% (w / v) de HNO 3 , destilado em um quartzo
ainda sub-ebulio (Marconi, Piracicaba, Brasil) e 30% (w / v) de
H 2 O 2 (Merck, Darmstadt, Alemanha) foram utilizadas por digesto da
amostra. Tritisol solues padro de 1000 mg / l de todos os elementos (Merck,
Darmstadt, Alemanha) foram utilizadas para preparar as solues de anlise de
referncia em 0,14 mol / l de HNO 3 . Para a determinao do carbono residual
em solues de amostra digerida, solues stock foram preparadas com ureia
(CH 4 N 2 O) (Reagen, Colombo, PR, Brasil) em meio aquoso, tal como
anteriormente descrito na literatura ( Gouveia, Silva, Costa, Nogueira, &
Nbrega, 2001 ). Uma soluo contendo 5,0 mg / l de magnsio (Merck,
Darmstadt, Alemanha) foi utilizado para avaliar a robustez do espectrmetro
( Mermet e Poussel, 1995 e Silva et al. de 2002 ).
As curvas analticas foram preparadas com as seguintes solues de
referncia: em branco 0,10 mol / l HNO 3 ; 1,0-100 mg / l de Al, Ba e Si; 0,5-50
mg / l de B, Cu, Fe, Mn, Sr e Zn ; 5,0-500 mg / l Ca, Cl, K, Mg, P e S. Todas
estas solues foram preparadas em 0,10 mol / l de HNO 3 .
Amostras de diferentes regies do Brasil foram analisados: babau porca (A1 e
A2) e do mesocarpo (B1 e B2) a partir de Piau e Maranho, sapucaia porca
(C1, C2 e C3) de Piau, So Paulo e Minas Gerais, castanha de caju (D) do
Estado da Paraba, Brasil-porca (E) do Estado do Par, coco polpa (F) do
Estado da Bahia, polpa de cupuau (G) e semente (H) do Estado Amaznia.
2.3. ICP OES otimizao

O Mg II 280,265 nm / Mg I 285,208 nm relao da intensidade de linha de

emisso foi utilizado para verificar a robustez do ICP ( Mermet & Poussel,
1995 ). A zona de observao foi definido automaticamente pelo programa
fornecido com o Smart Analyzer Viso 1.50.0534 espectros usando a linha de

emisso de Mn II 257,610 nm ( Silva et al., 2002 ). A energia da frequncia de

rdio foi variado 1200-1700 W e a taxa de fluxo de gs nebulizador foi ajustado
a 1,0 l / min. A fim de verificar os efeitos da matriz sobre a sensibilidade e a
selectividade de uma digitalizao das linhas de emisso foi obtido a partir de
uma soluo padro contendo 10 mg / l de cada amostra de analito e
digeridos. Com este ensaio foi possvel escolher a melhor linha de emisso e
de anlise da relao de sinal-para todos os elementos de fundo. Depois disso,
a correco de fundo foi selecionado manualmente para todas as linhas de
emisso para as medies quantitativas.
Os limites de deteco (LOD) foram calculados utilizando a concentrao
equivalente de fundo (BEC) e relao sinal-fundo (SBR), de acordo com as
recomendaes da IUPAC ( IUPAC, 1978 ): BEC = C rs / SBR; SBR
= I rs - eu em branco / I em branco ; LOD = 3 BEC RSD/100; onde, C rs representa
a concentrao da soluo de referncia de multi-elemento (10 mg / l), I rs e I em
branco

so as intensidades de emisso para o multi-elementar referncia (10 mg /

l) e de solues em branco e RSD o desvio-padro relativo para dez medidas

consecutivas de soluo em branco. Os limites de quantificao (LOQ) foi
calculado como 10 LOD ( & Poussel Mermet, 1996 ).
2.4. A preparao das amostras

Cerca de 50 sementes (cupuau) e 50 porcas (sapucaia e castanha de caju),

cinco babau e seu mesocarpo ea polpa de cinco cocos de cada estado
brasileiro acima mencionado foram modas e homogeneizadas em uma fbrica
de alimentos da casa para 5 min (tamanho de partcula> 300 im). Exemplos de
massas variando entre 150 a 250 mg foram digeridos utilizando uma mistura
oxidante diludo (2 ml HNO

+ 1 ml de H 2 O 2 + 3 ml de H 2 O). O programa

de aquecimento foi realizado em trs fases (temperatura / C; rampa / min;

mantenha / min): 1 (140, 5, 1), 2 (180, 4, 5) e 3 (220, 4, 10) . Existe uma quarta
etapa de arrefecimento do sistema de ventilao forada atravs de um
perodo de 20 min. Aps a digesto, as amostras em branco e solues foram
transferidos para frascos de plstico e fez-se a 10 ml com gua desionizada. O
processo de digesto foi realizada em triplicado para cada amostra.

Folhas de pessegueiro (SRM 1547) como materiais de referncia padro do

NIST (National Institute of Standards and Technology, Gaithersburg, Maryland,
EUA) foram utilizados para verificar toda a preciso do mtodo analtico.
3. Resultados e discusso
3.1. Desempenho analtico do ICP

A robustez prazo foi proposta para representar a eficincia de transferncia de

energia e a resposta do plasma para a alterao das condies de atomizao
e de excitao, e da composio qumica da soluo aspirado. Quando a
operao de plasma prximo do equilbrio termodinmico local, a razo Mg
II / Mg maior do que 8. Este valor indica uma transferncia de energia eficaz a
partir de plasma para os analitos que fluem atravs do canal central. Uma boa
resposta foi observada utilizando a taxa de fluxo de gs nebulizador padro de
1,0 l / min ( Mermet & Poussel, 1995 ).
Mantendo o mesmo gs de exterior, as melhores intensidades matrias a
relao de fundo foi obtida quando 1400 W foi aplicada. Sob estas condies, a
relao Mg II / Mg era de 4,9. Este rcio obtido foi multiplicado por 1,8 para
compensar as diferentes intensidades de resposta de comprimento de onda,
tendo em conta a utilizao de uma grade Echelle e um detector de estado
slido ( Stepan, Musil, Poussel, & Mermet, 2001 ).A configurao do ICP
condies instrumentais para anlise descrito na Tabela 1 .
3.2. Avaliao do carbono residual
A presena de alto teor de matria orgnica na soluo final fundamental
para vrias tcnicas analticas e isso no diferente para ICP OES
determinaes. Por esse motivo, aps a digesto foi realizada, o teor de
carbono

residual

foi

determinada. Esta

determinao

baseou-se

um

procedimento descrito na literatura (Gouveia et al. de 2001 ), utilizando uma

soluo de ureia para a calibrao do instrumento, e ICP OES para medir o
sinal de emisso atmica para C a 193,091 nm.

As porcentagens de carbono residual foram calculadas considerando os

valores de cinza para cada amostra: 9,2% m / m para o Brasil nozes
( Nagashiro, Saucedo, Alderson, Madeira, e Nagler, 2001 ), 5,2% para a polpa
de coco ( Samson, Khaund, abastea, e Mattil , 1971 ), 2,9% m / m para
semente de cupuau (Carvalho, Gallardo-Willians, Benson, e Martin, 2003 ),
5,3% m / m de polpa de cupuau ( Rogez et al., 2004), 1,7% m / m para
babau, 0,88% m / m para o mesocarpo do babau ( Teixeira, 2008 ), 3,8% m /
m para porcas sapucaia ( Denadai et al., 2007 ) e 2,8% m / m de castanha de
caju ( Akinhanmi, Atasie, e Akintokun, 2008 ). As porcentagens de carbono
residuais obtidos para as solues digeridas de todas as amostras variaram de
4,9% m / m (sementes de cupuau) para 13,4% m / m (castanha do Brasil). O
baixo teor de carbono residual encontrada em todas as amostras digeridas
confirmou a elevada eficincia do processo de digesto de amostras proposto,
utilizando uma mistura de oxidante diludo e vaso fechado do forno de
microondas.
Apesar de ser diludo, a mistura oxidante de HNO

+ H 2 O 2 apresenta um

elevado poder de oxidao, o aumento da presso e da temperatura no interior

dos vasos comprometidos fechados durante a digesto da amostra. Alm
disso, a gua uma molcula de dipolo excelente adequada para interagir
eficientemente com a radiao de microondas e para aumentar o aquecimento
causado por ele, aumentando a rapidez do poder oxidante do HNO

H 2 O 2 de mistura ( Arajo et ai. de 2002 ). Como consequncia, o teor de

matria orgnica de amostras decomposto por pequenas quantidades de
reagentes, quando diludos numa estufa de micro-ondas vaso fechado,
adoptada para efectuar o pr-tratamento da amostra.

3.3. Figuras de mrito

Caractersticas dos parmetros da curva de calibrao de anlise, tais como a
escala linear, o coeficiente de correlao ( R 2 ), a mdia RSD para a
repetibilidade de medies de calibrao de solues ( n = 5), os limites de
quantificao (LOQ), em (ig / g) e em (mg / l) so apresentados na Tabela 2 . O
RSD mdia de repetibilidade para calibrao medies solues estavam na
faixa de 1,1-6,7%. Considerando a massa da amostra de 250 mg e volume final

de 10 ml, os limites de quantificao (10 LOQ) estavam no nvel de

0,00072-,0532 mg / l para as micro e at 0,0522 mg / l de macro-elementos
(Ca, K, Mg, P e S).
A qualidade dos resultados obtidos usando o procedimento analtico, foi
verificada por anlise de um SRM 1547 que foi submetida aos mesmos passos
experimentais adoptadas para as amostras. A comparao entre os valores
experimentais e certificados para todos os analitos apresentada na Tabela
3 . Os resultados obtidos mostraram que o mtodo seletivo e precisas. Eles
esto em boa concordncia considerando Student t -test em um limite de
confiana

de

95%. Dados

avaliados

apresentaram

bom

nvel

de

preciso. Mdia de RSD para a repetibilidade das medies ( n = 5) variou de

1,4% para P e 8,5% para o K. O pior resultado foi observado para Zn (RSD =
19%).
Composio elementar das amostras
Os valores da concentrao dos elementos nas amostras, utilizando as
condies previamente estabelecidas robustos so mostrados na Tabela 4 . Os
desvios-padro (DP), esto relacionados com o erro associado expandida com
as medies instrumentais ( n = 5) e trs anlises de cada amostra. Como
esperado, Ca, K, Mg, P e S podem ser considerados os macro-elementos
nestas amostras. Pode ser que a celulose parece cupuau tem uma menor
concentrao de Ca e Mg. A presena de altas concentraes de P e S em
babau, sapucaia, castanha de caju e pode ser associado com a relativamente
elevada concentrao de protenas nas amostras. Chloride foi detectado no
Brasil porca, polpa de coco, cupuau polpa e semente. A alta concentrao de
Ba (470 ng / g) em castanha do Brasil justificado pelas caractersticas do
solo. No

Estado

do

Par

uma

presena

do

mineral,

hollandite

(Ba 2 Mn 8 O 16 ), no solo da Bacia Amaznica ( Chang et al., 1995 ). A

concentrao

relativamente

elevada

de

Ba

em

Sapucaia

porca

surpreendente. No h nenhuma evidncia da presena de brio mineral nos

estados brasileiros onde foram coletadas as amostras de sapucaia.
importante destacar que as concentraes de elementos essenciais e noessenciais so dependentes das caractersticas do solo, a fisiologia da planta,

10

composio fonte de gua e os fertilizantes, inseticidas, pesticidas e fungicidas

utilizados nas plantaes.As plantas tm a capacidade de absorver, de
transportar e acumular elementos qumicos. Cada espcie tem suas prprias
exigncias e diferentes nveis de tolerncia ao absorver e acumular um
elemento. O movimento do componente inorgnico selectivamente controlada
pela planta, com algumas sendo facilmente absorvida e outros impedida a
diferentes graus ( Chang et ai. de 1995 ).

Estudos envolvendo a composio qumica dos alimentos so importantes do

ponto nutricional e de vista toxicolgico. A quantidade de um nutriente
essencial considerado adequado para as necessidades dos seres humanos
chamado de Ingesto Diettica de Referncia (DRI). Regulamentos da Food
and Drug Administration (FDA) exige a rotulagem nutricional para a maioria dos
alimentos. Ingesto diria de referncia (RDIs) para alguns elementos
essenciais da alimentao humana, e os valores de referncia dirias (DRVs)
tiverem sido estabelecidos, a saber: Ca (1000 mg), Cl (3400 mg), Cu (2 mg), Fe
(18 mg) , K (3500 mg) e Mg (400 mg), Mn (2 mg), P (1000 mg) e Zn (15 mg)
( Dolan & Capar, 2002 ). Considerando-se a concentrao dos elementos
( Tabela 4 ) e que a quantidade dos alimentos consumidos iguala 28 g ( Parekh,
Khan, Torre, & Kitto, 2008 ), as massas de estes elementos ingeridos variou de
2,7 mg (polpa de cupuau) a 70 mg (sapucaia porca) para Ca, 2,4 (polpa de
cupuau) a 86 mg (sapucaia porca) para Cl, 11 (polpa de cupuau) a 616 mg
(castanha do Brasil) para Cu, 76 (polpa de cupuau) para 1.764 mg (castanha
de caju) para Fe, 73 mg (polpa de coco e sementes de cupuau) a 204 mg
(castanha de caju) para K, de 2,6 mg (polpa de cupuau) a 105 mg (sapucaia
porca) para Mg, 17 mg (polpa de cupuau) para 3444 mg (babau porca ) para
Mn, 3,3 mg (polpa de cupuau) a 244 mg (sapucaia porca) para P e 56 mg
(castanha do Brasil, coco polpa e mesocarpo do babau) a 1512 mg (castanha
de caju) para Zn. Para a maioria dos elementos, esta quantidade consumida
no excedeu os DRI, com a excepo de Mn na noz de babau. Para este
alimento, uma massa no mais do que cerca de 16 g, deve ser consumida por
dia, de modo a no exceder o DRI (2 mg).

11

4. Concluses
Um mtodo analtico simples, robusto e confivel para a determinao
simultnea de macro-e micro-elementos em nozes e sementes brasileiras por
axialmente visto ICP OES apresentado aqui. O ajustamento de parmetros
instrumentais era essencial para a determinao simultnea de 15 elementos
cobrindo uma grande gama espectral (134,724-766,490 nm). A eficcia derecipiente fechado forno de microondas em combinao com a mistura
oxidante diluda (2,0 ml de HNO

+ 1,0 ml de H 2 O 2 + 3,0 ml de H 2 O) para

digerir o elevado teor de matria orgnica das amostras analisadas no presente

trabalho foi demonstrada. As concentraes residuais de baixo teor de carbono
encontrados nas solues digeridos corroboram a utilidade do processo de prtratamento

de

amostra

concebido. Os

resultados

apresentados

neste

documento ampliar o conhecimento da composio elementar destes frutos e

sementes e pode ser til e de interesse nas reas toxicolgicas e nutricionais.
Agradecimentos
Os autores so gratos ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e
Tecnolgico (CNPq) e Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de So
Paulo (FAPESP) pelo apoio financeiro. PVO e JN tambm agradecer ao
Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico (CNPq) para
os opportuinties de pesquisa e de bolsas fornecidas. Os autores tambm
agradecem Professor PRM Correia de reviso Ingls .

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