Mesofilos 1

1
INSTITUTO TECNOLOGICO DE SONORA
Determinacin de organismos mesfilos aerobios en el

ambiente de Cd. Obregn, Sonora; mediante el uso del
monitor areo microbiolgico y mtodo de cuenta en
placa abierta
TESIS
QUE PARA OBTENER EL TTULO DE

INGENIERO BIOTECNLOGO
PRESENTA
GLORIA EDITH CAMACHO ESPINOZA
CD. OBREGN, SONORA
MAYO DE 2005
DEDICATORIAS
A Dios: Por estar siempre a mi lado, por ser quien me gua y me hace el ser humano
que soy. Por brindarme paz, alegra y amor siempre.
A Bacilisa Espinoza Ruz y Amalia Gonzlez Ruz: Por ser las mujeres
maravillosas del mundo, que me brindan su apoyo en cualquier situacin que se me
presenta, me dan su amor y su cario; por ser mis mejores amigas y mis madres a
quienes le debo todo lo que soy, Gracias por estar siempre a mi lado, las AMA su
hija.
A mi ta Ma Elena Castaeda Ruz: Por ser como una madre, por darme su gran
fortaleza y su amor da con da. Te quiero mucho!!
A mis hermanos: Jaime Antonio y Jess David, por desearme lo mejor y quererme
tanto.
A mis abuelos: Estefana Ruz, Margarita Ruz, Aurelio Castaeda, Jess Surez,
Pioquinto Espinoza y Mara Jess Gmez. Por quererme y desearme siempre lo
mejor, los Quiero mucho!!
A toda mi familia: a mis primos, tos, tas, etc.
A Raymundo Fon Galaviz: Por su apoyo incondicional, por compartir tristezas y

alegras, por ser mi mejor amigo. Gracias por otorgarme momentos maravillosos,
Dios no me pudo haber dado mejor persona a mi lado. Te quiero mucho!!
ii
AGRADECIMIENTOS
A mis amigas: Sandra, Silvia y Marisela, por compartir estos aos de su vida a mi
lado, por escucharme y apoyarme siempre; y por esos grandes momentos que
hemos compartido. Y espero compartir muchos ms.
A mis amigos: Santy,
Javier, Ren, Said, Dago y Hugo. Por compartir tantas
alegras, aventuras; y sobre todo por apoyarme y brindarme su amistad

incondicional. Adems por estar conmigo en el transcurso de mi carrera,
desendome lo mejor, los quiero!!
A mi asesor Ing. Anacleto Flix Fuentes: Por confiar en m y llevar a cabo este
trabajo. Por compartir sus conocimientos, brindarme su ayuda y amistad en cada
momento.
Al Instituto Tecnolgico de Sonora: Por ser la plataforma en mi educacin

profesional.
A mis revisores: Dr. Francisco Cervantes, Olga Campas y Rosario Glvez; por su
ayuda y consejos para este trabajo.
iii
NDICE
Pgina
INDICE
iv
NDICE DE FIGURAS
vi
NDICE DE TABLAS
vii
NDICE DE ANEXOS
viii
RESUMEN
ix
I. INTRODUCCIN
1.1 JUSTIFICACIN
1.2 OBJETIVO GENERAL
1.3 OBJETIVOS ESPECFICOS
1.4 HIPTESIS
II. MARCO TERICO
2.1 Generalidades.
2.2 Aire.
2.3 Microorganismos del aire.
2.4 Clasificacin de los contaminantes del aire.
2.4.1 Contaminantes fsicos.
2.4.2 Contaminantes qumicos.
10
2.4.3 Contaminantes biolgicos.
10
2.5 Organismos causantes de enfermedades infecciosas.
11
2.6 Vas de entrada de los organismos causantes de enfermedades
13
infecciosas.
2.7 Mtodos de muestreo.
13
2.7.1 Muestreo por contacto.
13
2.7.2 Muestreo con filtro.
15
2.7.3 Muestreo por Impactadores.
16
2.7.4 Muestreo por centrfugos.
21
2.8 Principio del monitor microbiolgico de aire SAS SUPER 100-180 TM.
23
iv
III. MATERIALES Y MTODOS
24
3.1 Toma de muestra.
25
3.2 Esterilizacin y sanitizacin del equipo.
25
3.2.1 Piezas del equipo del monitor microbiolgico de aire SAS SUPER
100-180
25
TM.
3.2.2 Procedimiento del manejo del equipo.
26
3.3 Grabado de datos.
28
3.4 Calibracin del equipo.
28
3.5 Procedimiento del anlisis.
29
3.5.1 Determinacin de organismos mesfilos aerobios en el ambiente
29
por tcnica de placa abierta.

30
mediante el monitor microbiolgico de aire SAS SUPER 100-180 TM.

3.5.3 Observaciones de cada sitio estratgico en estudio.
31
3.6 Clculo de resultados.
31
IV. RESULTADOS Y DISCUSIN
33
4.1 Organismos mesfilos aerobios por el mtodo en placa abierta,
33
observaciones a las 24 horas.

36

4.3 Organismos mesfilos aerobios por el mtodo del monitor
microbiolgico de aire SAS SUPER 100-180
TM
37
y el Mtodo de placa
abierta en el punto de muestreo ubicado en calle 5 de Febrero esquina

con calle Galeana.
V. CONCLUSIONES
40
BIBLIOGRAFA
41
ANEXOS
43
NDICE DE FIGURAS
Descripcin
Figura
Pgina
1.
Placas de contacto RODAC para el muestreo de superficies.
14
2.
Esquema de un muestreador de rendija.
17
3.
Muestreador Andersen (6 niveles).
18
4.
Muestreadores multiorificio.
19
5.
Frascos borboteadotes.
21
6.
Esquema de un cicln.
22
7.
Esquema de un muestreador RCS.
23
vi
NDICE DE TABLAS
Descripcin
Tabla
Pgina
1.
Localizacin de las zonas de muestreo.
24
2.
Lista de men y utilidad de sub-mens del monitor
26
microbiolgico SAS SUPER 100-180 TM.

3.
Resultados de organismos mesfilos aerobios por el mtodo
35
de cuenta en placa abierta a las 24 horas (UFC /placa / 15

minutos).
4.
36
en placa abierta a las 48 horas (UFC /placa / 15 minutos).

5.
38
de cuenta en placa abierta y Monitor Microbiolgico SAS

SUPER 100-180
TM
(24 horas.) en el punto de muestreo
ubicado en calle 5 Febrero esquina con calle Galeana.

6.

de cuenta en placa abierta y Monitor Microbiolgico SAS
SUPER 100-180
TM
(48 horas.) en el punto de muestreo
ubicado en calle 5 Febrero esquina con calle Galeana.
39
vii
NDICE DE ANEXOS
Descripcin
Anexo
Anexo Observaciones
I
realizadas,
en
cada
Pgina
muestreo,
de
los
43
diferentes sitios estratgicos de Ciudad Obregn Sonora.
1.1
Observaciones Primer Muestreo (11 ENERO 2005).
43
1.2
Observaciones Segundo Muestreo (18 ENERO 2005).
45
1.3
Observaciones Tercer Muestreo (25 ENERO 2005).
46
1.4
Observaciones Cuarto Muestreo (1 FEBRERO 2005).
47
1.5
Observaciones Quinto Muestreo (9 FEBRERO 2005).
49
1.6
Observaciones Sexto Muestreo (15 FEBRERO 2005).
50
Anexo Fotografas de los diferentes sitios estratgicos de Ciudad

II
52
Obregn, Sonora.
2.1
Calle Fco. Villanueva esquina con calle Constitucin.
52
2.2
Calle Fco. Villanueva esquina con calle Constitucin.
52
2.3
Blvd. Norman E. Bourlaug esquina con calle 300.
53
2.4
Blvd. Norman E. Bourlaug esquina con calle 300.
53
2.5
Calle 5 de febrero esquina con calle Galeana.
54
2.6
Calle 5 de febrero esquina con calle Galeana.
54
2.7
Carretera internacional y calle norte.
55
2.8
Carretera internacional y calle norte.
55
2.9
Calle Sahuaripa esquina con Calle Guerrero.
56
2.10
Calle Sahuaripa esquina con Calle Guerrero.
56
viii
RESUMEN
El presente estudio se realiz en el perodo de enero a febrero de 2005, en el

laboratorio de microbiologa del Instituto Tecnolgico de Sonora Unidad Obregn. El
objetivo fue determinar organismos mesfilos aerobios en los diferentes ambientes
de Ciudad Obregn Sonora, con el fin de evaluar la calidad microbiolgica del aire.
Se seleccionaron cinco sitios para muestreo, estos se efectuaron cada semana,
recolectndose un total de 96 muestras.
La toma de muestras para el anlisis se llev a cabo por la tcnica de cuenta en
placa abierta, en las diferentes reas de muestreo: Carretera internacional y calle
norte, Blvd. Norman E. Bourlaug Esquina con calle 300, calle Fco. Villanueva
Esquina con calle Constitucin, calle Sahuaripa Esquina con calle Guerrero y calle 5
de febrero Esquina con calle Galeana. En este ltimo sitio, tambin se utiliz el
monitor microbiolgico SAS SUPER 100-180
TM
; para despus efectuar el conteo de
unidades formadoras de colonias por placa en 15 minutos. Adems se tomaron

distintas observaciones de cada lugar de muestreo
Los resultados obtenidos de organismos mesfilos aerobios exponen que todas las
muestras, de los diferentes lugares de muestreo, no cumplen con los criterios
establecidos de no ms de 15 unidades formadoras de organismos mesfilos
aerobios en el ambiente, en placa abierta por 15 minutos incubada a 24-48 horas a
37C, de acuerdo al mtodo estndar, que es para lugares cerrados y limpios. Sin
embargo,
Mouilleseaux
Squinzali
(1991)
indican
que
la
presencia
de
concentraciones de bacteria Gram (+) y bacterias Gram (-) arriba de 1000 UFC / m3
de volumen de aire proveen una calidad pobre del aire en ese lugar. Por lo tanto, el
ambiente de los diferentes sitios estratgicos de Ciudad Obregn Sonora no es
considerado de mala calidad, o sea, que el aire es aceptable para llevar a cabo las
ix
actividades diarias. Pero no se puede inferir al 100% que estos lugares no puedan
causar un problema a la salud; ya que no existen normas oficiales que establezcan
lmites permisibles de dichos microorganismos para que certifiquen esto.
CAPTULO I
INTRODUCCIN
En el siglo VXIII tuvo lugar uno de los acontecimientos ms importantes de la

industria de la humanidad, la revolucin industrial. En este perodo de la civilizacin
agrcola cede su lugar a las mquinas, y con esto se originan las grandes
concentraciones urbanas. El humo de las chimeneas era aparentemente considerado
como el smbolo de una gran actividad fabril y de prosperidad. Pero el fomento
industrial que ha experimentado el mundo actual, a su vez, ha propiciado efectos
colaterales en nuestro ambiente, que se han reflejado en la aparicin de signos
nocivos en la vida existente del planeta, influenciados por el aumento de lo que
conocemos como contaminacin ambiental, que ha llevado consigo la alteracin de
la calidad del aire (Dickson, 1996).
A lo largo de la historia, la humanidad ha estado en contacto con los contaminantes
atmosfricos; sin embargo, a medida que se desarrollan las grandes ciudades y se
consolida la revolucin industrial, la contaminacin del aire se ha visto como algo
comn y cotidiano (Dickson, 1996).
La contaminacin del aire es la presencia de material indeseable en ese aire, en
cantidades bastante grandes como para producir efectos nocivos. Estos materiales
pueden daar la salud humana, la vegetacin, los bienes humanos o el medio
ambiente global; as como crear caractersticas indeseables en la forma del aire, de
color caf o brumoso, o bien, olores desagradables. Se sabe que los contaminantes
pueden hacer todas estas cosas. Muchos de estos materiales nocivos entran a la
2
atmsfera proveniente de fuentes que, en la actualidad, se encuentran ms all del
control humano. Sin embargo, en las partes ms densamente pobladas del mundo,
en particular en los pases industrializados, las fuentes principales de estos
contaminantes son actividades humanas. Estas actividades se encuentran
ntimamente asociadas con nuestro estndar de vida. Eliminar estas actividades
causara una disminucin drstica en la calidad de vida, que esta accin rara vez se
considera. Una propuesta de solucin por la mayor parte de los pases industriales
es continuar las actividades y controlar las emisiones contaminantes del aire que
provengan de ellas (Nevers, 1998).
Las autoridades ambientales en varios pases han creado programas y estndares
para proteger el aire del ambiente y la salud de la poblacin, con esto se pretende,
preservar la calidad del aire. El cumplimiento de estos estndares queda a cargo de
las autoridades u organizaciones que implementen los programas de calidad del aire.
Por esta razn son muy pocas las ciudades que cuentan con informacin de calidad
y en cantidad, que permita identificar el cumplimiento de stos.
Por ello la investigacin est enfocada a evaluar la calidad microbiolgica del aire de
Cd. Obregn Sonora, con el propsito de estudiar las condiciones que presentan las
distintas reas de estudio: Calle Fco. Villanueva esquina con calle Constitucin, Blvd.
Norman E. Bourlaug esquina con calle 300, Calle Sahuaripa esquina con calle
Guerrero, Carretera internacional y calle norte y Calle 5 de Febrero esquina con calle
Galeana. Para lograrlo, se utiliza el monitor microbiolgico SAS SUPER 100-180 TM y
la Cuenta Total Viable de Mesfilos Aerobios en placa abierta.
3
1.1 JUSTIFICACIN
Es evidente la gran cantidad de conocimientos que sobre los contaminantes

qumicos y fsicos se han ido acumulando a lo largo del tiempo; no pudindose
afirmar lo mismo al hablar de los contaminantes biolgicos, ya que la gran
variabilidad de factores que condicionan su presencia, supervivencia y actuacin
sobre el hombre, hace difcil abordar los posibles problemas planteados por su
presencia en el medio ambiente.
El hecho de que los contaminantes biolgicos sean seres vivos y por tanto capaces
de reproducirse; que en una misma especie bacteriana existan cepas con distinto
poder patognico o bien que factores ambientales tales como la temperatura y la
humedad puedan condicionar su presencia, resulta interesante profundizar en el
estudio de organismos mesfilos aerobios en el ambiente de Ciudad Obregn, con el
fin de intentar avanzar en el conocimiento de estos contaminantes. Adems de
evaluar la calidad microbiolgica del aire.
1.2 OBJETIVO GENERAL
Realizar anlisis de organismos mesfilos aerobios en el ambiente de Ciudad

Obregn Sonora, mediante el uso del monitor areo microbiolgico SAS SUPER
100-180 TM y el mtodo de Cuenta Total Viable de Mesfilos Aerobio en placa abierta
para evaluar la calidad microbiolgica del aire.
4
1.2.1 OBJETIVOS ESPECFICOS
Identificar sitios estratgicos de muestreo en Ciudad Obregn, Sonora.
Determinar organismos mesfilos aerobios en el ambiente de Ciudad Obregn

por el mtodo de cuenta en placa abierta.
Monitorear el aire del sitio de muestreo de la calle 5 de Febrero esquina con

Galeana, de Ciudad Obregn, con el aparato SAS SUPER 100-180 TM para
determinar organismos mesfilos aerobios.
Realizar conteo de organismos mesfilos aerobios con el fin de determinar la

calidad del aire.
1.3 HIPTESIS
Probablemente el aire que se respira en el ambiente de Ciudad Obregn contenga

una alta carga microbiana, lo que puede representar un riesgo para la salud de sus
habitantes.
CAPTULO II
MARCO TERICO
2.1 Generalidades.
La atmsfera es una mezcla de gases que no ejercen ninguna accin qumica entre
s. A esta mezcla de gases se le denomina aire. Si no se tienen en cuenta las
partculas lquidas y slidas de diferentes orgenes que aparecen en suspensin,
queda una mezcla gaseosa con unos compuestos en concentraciones ms o menos
constantes, como el oxgeno, el nitrgeno, los gases nobles y otras variables, como
el anhdrido carbnico, el vapor de agua, el ozono y tambin otros gases como el
SO2, NO, NO2, CH4, NH3.
La contaminacin atmosfrica se define como la condicin atmosfrica en la que
ciertas
sustancias
y/o
energas
alcanzan
concentraciones
niveles
lo
suficientemente elevadas, sobre su nivel ambiental normal, como para producir

riesgos, daos o molestias a las personas, ecosistemas o bienes (MAPFRE, 1994).
2.2 Aire.
El Aire es el elemento indispensable para todos los seres vivos por el oxgeno
presente, que es esencial para las funciones metablicas. A partir de la Revolucin
Industrial inici un proceso de contaminacin acelerado por quema de combustibles
fsiles.
6
La flora microbiana del aire es transitorio y variable. El aire no es un medio en el que
los microorganismos pueden desarrollarse, pero es portador de partculas, polvo y
gotas de agua o de vapor, que pueden estar cargadas de microbios. El nmero y tipo
de microbios en el aire estn determinados por las fuentes de contaminacin del
ambiente: como los organismos que son expelidos del aparato respiratorio al toser o
estornudar, y las partculas de polvo que circulan al ser levantadas de la tierra por el
viento. Los microorganismos transmitidos por el aire son transportados en las
partculas de polvo, en las gotas grandes que quedan suspendidas brevemente y en
el ncleo de las gotas, que se forman cuando las pequeas gotas se evaporan. As
son llevados unos cuantos metros o muchos kilmetros; algunos mueren en cuestin
de segundos, otros sobreviven durante semanas, meses o ms tiempo. Su destino
final depende de un sistema de complejas circunstancias que incluyen las
condiciones atmosfricas como humedad, luz solar, temperatura; tamao de las
partculas que los transportan, y su propia naturaleza, es decir, el grado de
susceptibilidad o resistencia de cada especie en particular al medio ambiente, o su
capacidad de formar esporas resistentes o quistes (Pelczar, 1992).
2.3 Microorganismos del aire.

Muchos microorganismos del aire se encuentran en movimiento en suspensin.
Muchos son muertos por desecacin, inanicin, radiacin ultravioleta u otras
condiciones desfavorables. Los microorganismos vivos transportados por el aire
suelen tener resistencia inslita o solamente se encuentran en este medio por
temporadas breves. Las formas resistentes pueden formar esporas o quistes, alguna
de ellas son esfricas (las clulas esfricas tienen la menor zona superficial y
resisten los agentes nocivos mejor que las clulas de otras formas); y algunos
microorganismos resistentes poseen pigmentos que los protegen contra las
radiaciones nocivas (Carpenter, 1989).
Fuentes de microorganismos del aire.
Los microorganismos del exterior provienen del suelo y de masas de agua. Los
microorganismos del terreno o partculas de polvo son llevadas a la atmsfera por el
viento y las corrientes ascendentes de aire caliente; los microorganismos acuticos
llegan a la atmsfera en gotitas de agua por la accin combinada de olas y viento
(Carpenter, 1989).
En el aire del ambiente predominan bacterias y hongos: las bacterias terrestres que
sobreviven en el aire incluyen bacilos Gram positivos, esporgenos y cocos; las
bacterias marinas del aire son principalmente bacilos Gram negativos, menos de la
mitad son bacterias esporgenas. Las esporas de los mohos, por lo regular, tienen
origen terrestre. A veces se encuentran nmeros impresionantes en nubes o
tormentas y pueden viajar miles de kilmetros de su punto de origen. Tambin se
encuentran en el aire esporas, quistes de levaduras, algas y protozoarios.
(Carpenter, 1989).
Los microorganismos pueden localizarse en ambientes exteriores; caractersticos de
la situacin geogrfica, del hombre y otros habitantes de la zona. El hombre expele
gran cantidad de microorganismos en la saliva y gotitas de moco al estornudar o, en
grado menor, cuando tose o habla. Suelen encontrarse en el interior de las
habitaciones patgenos humanos en donde fcilmente, llegan a huspedes
susceptibles, lo que permite el paso fructfero adecuado a pesar de su capacidad
limitada de supervivencia (Carpenter, 1989).
Nmero de microorganismos del aire.
El nmero de microorganismos del aire es difcil precisar exactamente. Se han hecho

comparaciones sencillas por medio de placas de medios nutritivos a las que se le
adhieren por gravedad los microorganismos. Se expone el medio nutritivo en caja de
8
Petri por un periodo preciso (15 60 minutos) y se cuentan las colonias que
aparecen despus de incubar (Carpenter, 1989).
Se han empleado varios artefactos para obtener muestras de volmenes precisos de
aire: se hace pasar el aire por arena o algodn hmedos o se burbujea por agua
estril; despus de ello se hace un recuento en placas de los microorganismos
incluidos. Con dichos mtodos raramente se logra la recuperacin del 100% de la
flora del medio ambiente. Se han empleado tambin filtros con membranas de
acetato de celulosa para contar las bacterias del aire. Se hace pasar por el filtro un
volumen conocido de aire, se coloca el filtro en la caja de Petri, en un cojincillo
humedecido con caldo nutritivo: entonces aparecen colonias visibles despus de
incubacin breve (Carpenter, 1989).
El recuento de microorganismos transportados por el aire varan ampliamente segn
el momento del da y la estacin del ao, las condiciones climticas, la localizacin y
otros factores. El nmero determinado en una calle de una ciudad haciendo
burbujear aire a travs del lquido estril vara desde unos pocos centenares hasta
muchos miles por litro (Carpenter, 1989).
2.4 Clasificacin de los contaminantes del aire.

Los contaminantes pueden dividirse en tres grupos: fsicos, qumicos y biolgicos.
2.4.1 Contaminantes fsicos.
Ruido.
La propagacin de ondas de presin audible a travs de un medio elstico es lo que

se conoce como ruido. Este no es ms que un sonido indeseable para la persona
que lo percibe, y por tanto, es un concepto subjetivo.
Radiaciones ionizantes.
Las radiaciones ionizantes son de cuatro tipos: rayos x, partculas alfa, partculas
beta y rayos gama; y el gran peligro para los seres vivos es el poder ionizar la
materia que se encuentra a su paso (MAPFRE, 1994).
2.4.2 Contaminantes qumicos.

Desde el punto de vista de su origen, los contaminantes qumicos se pueden dividir
en dos grupos:
Contaminantes primarios, emitidos directamente a la atmsfera por los focos

contaminantes.
Contaminantes secundarios, se originan en la misma atmsfera por reaccin

entre dos o ms contaminantes primarios o con los constituyentes normales
del aire.
La mayor parte de los contaminantes son constituyentes naturales de la atmsfera

que estn presentes en pequeas concentraciones (MAPFRE, 1994).
2.4.3 Contaminantes biolgicos.

El aire no es un medio adecuado para el desarrollo de microorganismos; sin
embargo, acta como medio de transmisin de todos aquellos agentes biolgicos
que puedan estar en l. Todos estos contaminantes existen ya en la naturaleza; pero
debido a la actividad humana en ocasiones estos agentes se multiplican en ciertos
ambientes, dando lugar a problemas epidemiolgicos en los seres vivos (MAPFRE,
1994).
10
Los contaminantes biolgicos se pueden clasificar en:
Organismos vivos causantes de enfermedades infecciosas, como bacterias,

virus, hongos.
Provenientes de animales, principalmente domsticos, pelos, plumas, y

plantas, como polvo vegetal, que pueden producir enfermedades respiratorias
y alergias (MAPFRE, 1994).
2.5 Organismos causantes de enfermedades infecciosas.
Virus.
Son las formas de vida ms simples, estn constituidas nicamente por material
gentico: ADN (cido desoxirribonucleico) o ARN (cido ribonucleico) y una
cpside o cubierta proteica. Son parsitos obligados, es decir, precisan de un
husped para poder reproducirse. La infeccin la llevan a cabo inyectando su
material gentico en las clulas del husped. Una vez en su interior se sirven de
la maquinaria biolgica del husped para producir copias de s mismos hasta
lograr su total recomposicin y en un nmero tal que rompe las membranas
celulares pasando as a infectar nuevas clulas (Stanier, 1997).
Bacterias.
Son organismos ms complejos que los virus y a diferencia de ellos son capaces
de vivir, en un medio adecuado, sin la necesidad de un husped para completar
su desarrollo. Muchos de ellos son patgenos para el hombre. Adems, algunos,
tienen la capacidad de elaborar esporas. Las esporas no son ms que formas de
vida resistentes a condiciones adversas. Pueden resistir, durante aos incluso,
altas temperaturas, sequedad, falta de nutrientes, etc. recuperando su estado
normal y capacidad infectiva al entrar en contacto con un medio adecuado para
su desarrollo (Stanier, 1997).
11
Protozoos.
Son organismos unicelulares siendo algunos de ellos parsitos de los

vertebrados. Su ciclo vital es complejo, necesitando, en algunos casos, de varios
huspedes para completar su desarrollo. La transmisin de un husped a otro la
realizan habitualmente insectos (Stanier, 1997).
Hongos.
Son formas complejas de vida que presentan una estructura vegetativa

denominada micelio que est formada por hifas (estructuras filiformes por las que
circula el citoplasma plurinucleado). Esta estructura vegetativa surge de la
germinacin de sus clulas reproductoras o esporas. Su hbitat natural es el
suelo; pero algunos componentes de este grupo son parsitos tanto de hombres y
animales como de vegetales (Stanier, 1997).
Helmintos.
Son organismos pluricelulares con ciclos vitales complejos y con diversas fases
en su desarrollo. As, es frecuente que completen cada una de sus fases de
desarrollo (huevo-larva-adulto) en diferentes huspedes (animales, hombre), y
que la transmisin de un husped a otro sea realizada por diferentes vectores
(agua, alimentos, insectos, roedores) (Stanier, 1997).
Artrpodos.
Son organismos pluricelulares con ciclos vitales complejos y con diversas fases
en su desarrollo, (huevo-larva-adulto) fases que pueden ser completadas en
diversos huspedes siendo transmitidas de unos a otros por varios vectores.
Algunas especies de artrpodos son endoparsitos, es decir, atraviesan la
superficie del cuerpo. Otras especies no penetran en el organismo sino que viven
12
temporalmente sobre l, pudiendo causar el efecto adverso para la salud al
inocular en el husped toxinas que producen diversas modificaciones patolgicas
(Stanier, 1997).
2.6 Vas de entrada de los organismos causantes de enfermedades infecciosas.

Muchos de los procesos propios de los sectores de actividad en que los
contaminantes biolgicos estn presentes son susceptibles de producir polvo y
aerosoles a los que, habitualmente, irn asociados los microorganismos (Hernndez
y Mart, 2005).
La exposicin y subsiguiente infeccin de un individuo por un agente biolgico puede
tener lugar por varas vas: Oral (ingestin), Respiratoria (inhalacin), Ocular (a
travs de la conjuntiva), Parenteral (pinchazos), Drmica (a travs de lesiones y/o
roturas de la piel); siendo de todas ellas la va respiratoria la de mayor probabilidad
(Hernndez y Mart, 2005).
Las dosis infectivas para el hombre varan con: el agente biolgico, la va de entrada
y la resistencia del husped, es decir, el grado de integridad de sus sistemas
defensivos (Hernndez y Mart, 2005).
2.7 Mtodos de muestreo.

2.7.1 Muestreo por contacto.
Es el mtodo ms utilizado y consiste en la aplicacin de placas de contacto sobre la
superficie que se desea muestrear y sobre las que se ejerce una ligera presin para
captar las partculas. El resultado del recuento de las colonias que han crecido se
expresa en UFC/cm2. Otra tcnica consiste en la utilizacin de cintas adhesivas que
atrapan las partculas (Hernndez, 2005).
13
Placas de contacto.
Las placas de contacto son placas de cultivo especiales en las que el medio
de cultivo est en ligero exceso. Existen diferentes tipos de placas de
contacto, pero las ms utilizadas son las placas RODAC, en la base de estas
placas est grabada una cuadrcula, de superficie determinada que permitir
el clculo de la concentracin de los microorganismos que han formado
colonia. El resultado se expresa en UFC/cm2. La principal ventaja de este
mtodo es su sencillez; mientras que el principal inconveniente es que
superficies muy sucias van a provocar la sobrecarga de la placa y, por tanto
dificultar el anlisis de la misma. En la Figura 1 se muestra una placa RODAC
y las colonias crecidas (Hernndez, 2005).
Figura 1. Placas de contacto RODAC para el muestreo de superficies.
Cintas adhesivas.
El uso de estas cintas esta indicado cuando no se precisa informacin sobre los
microorganismos viables y cultivables. El mtodo es muy sencillo y consiste en
atrapar en la cinta las partculas depositadas en una superficie. El anlisis consiste
en la observacin al microscopio, por lo que el material de la cinta debe tener una
buena calidad ptica y permitir la tincin. Este mtodo no permite anlisis
cuantitativos (Hernndez, 2005).
14
2.7.2 Muestreo con filtro.
La filtracin es uno de los sistemas que permite tomar muestras personales que
representan mejor el patrn de exposicin de los trabajadores. En general, los filtros
son los soportes de retencin ms utilizados cuando se pretende muestrear los
componentes del bioaerosol ms resistentes (esporas, polen), los productos
(endotoxinas, micotoxinas, etc.) o cuando la viabilidad de los microorganismos no es
esencial para el ensayo analtico seleccionado (Hernndez, 2005).
El equipo de toma de muestras consiste en una bomba de aspiracin de aire a la que
se une el portafiltro, en general, casetes de poliestireno, y el filtro. Como en cualquier
sistema de muestreo, la determinacin del caudal de aire y del tiempo de muestreo
son pasos fundamentales para la obtencin de muestras tiles para el anlisis. Otro
aspecto es si la captacin se realiza con el casete abierto o cerrado, la decisin
estar basada en el tipo de muestra y el ensayo que se vaya a realizar. En los
casetes abiertos la distribucin de las partculas es ms regular, lo que facilita su
observacin y recuento; mientras que en casete cerrado, las partculas tienden a
acumularse en la zona central del filtro dificultando as su observacin (Hernndez,
2005).
Filtros capilares.
Los filtros capilares estn hechos de una fina capa de policarbonato. En este
tipo de filtros los poros consisten en cilindros rectos alineados de forma
perpendicular a la superficie del filtro. La eficacia de captacin de estos filtros
es baja para las partculas de un tamao inferior al poro. La eficacia aumenta
para las partculas submicrnicas (< 1 m) que son retenidas segn el
principio de difusin. Lgicamente, las partculas de tamao mayor que el del
poro son retenidas con gran eficacia. El diseo de estos filtros hace que se
colmaten antes que otros filtros con el mismo tamao de poro, lo que limita la
cantidad de material que puede recoger (Hernndez, 2005).
15
Son filtros muy finos y con una superficie muy lisa lo que los hace idneos
para la observacin de las partculas captadas al microscopio ptico o al
electrnico de barrido, por otra parte, este hecho tambin facilita el lavado del
filtro y la recuperacin de la muestra para su anlisis (Hernndez, 2005).
Filtros de membrana.
Este tipo de filtros tienen una microestructura compleja que proporciona
caminos irregulares o tortuosos al flujo de aire. Dependiendo del principio de
captacin, se puede decir que, en general, la eficacia de estos elementos es
bastante elevada, incluso para partculas de tamao inferior que el del poro,
por ejemplo, la eficacia de captacin para partculas de 0,3 m es 95% en
filtros de membrana con tamao de poro de 0,5 m (Hernndez, 2005).
Los materiales de los que estn hechos los filtros son variados, uno de los usados
con mayor frecuencia para la captacin de bioaerosoles son los steres de celulosa.
Los bioaerosoles captados se pueden teir sobre los mismos filtros para su
observacin directa al microscopio ptico; el filtro se puede trasparentar con un
producto adecuado como fase previa a la observacin y estos filtros se pueden
colocar sobre medio de cultivo para la incubacin de los microorganismos captados
(Hernndez, 2005).
2.7.3 Muestreo por Impactadores.
Muestreador de rendija.
En estos muestreadores el aire penetra a travs de una o cuatro rendijas con
flujos de aire de 30 I/min y 700 I/ min, segn el modelo, y es impulsado sobre
la superficie de impactacin que consiste en: una placa con medio de cultivo,
un portaobjetos o una cinta adherente. La placa de cultivo permite la
incubacin, recuento de colonias e identificacin de las especies microbianas;
los portaobjetos y las cintas, permiten la observacin directa al microscopio de
16
las partculas captadas. Estos soportes de captacin pueden estar estticos o
colocados sobre un soporte giratorio dotado de distintas velocidades. Al
disponer de un nico nivel de captacin no se obtiene informacin sobre la
distribucin por tamao de partcula. Este equipo tiene un dimetro
aerodinmico de corte (dae50) calculado de 0,67 pm. En la Figura 2 se
muestra un esquema de este tipo de muestreador (Hernndez, 2005).
Figura 2. Esquema de un muestreador de rendija.
Muestreador Andersen.
Este muestreador es un impactador en cascada que capta las partculas en
una serie de placas con medio de cultivo a un caudal de aire de 28,3 I/min. En
general, este impactador tiene seis niveles de captacin, cada nivel est
separado del siguiente por un elemento perforado por 400 orificios, debajo de
cual se coloca la placa con medio de cultivo, en cada nivel todos los orificios
tienen el mismo dimetro, pero de un nivel al siguiente disminuye el tamao
del dimetro de los orificios, lo que provoca un aumento de la velocidad del
aire al pasar de un nivel a otro. La captacin se basa en la inercia de las
partculas, en el primer nivel se separan las partculas de mayor tamao; las
de menor tamao, cuya inercia no es lo suficientemente grande, son
arrastradas por la corriente de aire que pasa al siguiente nivel, al aumentar la
velocidad tambin aumenta la inercia de las partculas arrastradas, algunas
sern captadas en el segundo nivel mientras que otras seguirn en el aire
pasando al tercer nivel, y as sucesivamente. El resultado final es una
separacin por tamao de partcula. Los dimetros de corte tericos para cada
17
uno de los niveles son, del nivel 1 al nivel 6, respectivamente: 7 m, 4,7 m,
3,4 m 2,1 m, 1,1 m y 0,65 m (Hernndez, 2005).
Otros modelos de este equipo se presentan con uno o dos niveles de
captacin. El modelo con un solo nivel dispone de un placa perforada (400
orificios), su caudal de aire es de 28,3 I/min y el dimetro de corte terico es
de 0,65 pm. En el modelo con dos niveles, las placas perforadas disponen de
200 orificios, un caudal de aire de 28,3 I/min y unos dimetros de corte
tericos de 8,0 m y 0,95 m respectivamente. Este muestreador es uno de
los designados como de referencia en las pruebas de ensayo para la
validacin de otros muestreadores. En la Figura 3 se muestra un esquema de
este muestreador (Hernndez, 2005).
Figura 3. Muestreador Andersen (6 niveles).
Muestreadores multiorificio.
El muestreador SAS (Surface air system) es un equipo porttil con un nico
nivel de captacin basada, asimismo, en la inercia de las partculas. La
captacin de las partculas tiene lugar en una placa RODAC con medio de
cultivo. Existen dos modelos calibrados a dos caudales de aire (90 I/min y 180
I/min). El equipo dispone de un cabezal con 219 orificios, un ventilador y un
programador del tiempo de muestreo (intervalos de 20 segundos), permitiendo
un mnimo de 20 segundos y un mximo de 5 minutos. El dimetro de corte
terico es de 2,0 m (Hernndez, 2005).
18
Estudios comparativos realizados con este muestreador y otros de referencia,
como el muestreador Andersen, muestran una reduccin de la eficacia de
captacin del 50%. En la Figura 4 se muestran este muestreador y otros de
caractersticas similares como son: el muestreador M air T (Millipore) o el
muestreador MAS-100 (Merck) (Hernndez, 2005).
Figura 4. Muestreadores multiorificio.
Frascos borboteadores (Impingers).

Los frascos borboteadores o impingers funcionan conduciendo una corriente
de aire al interior de un frasco que contiene un medio de captacin,
normalmente, lquido. Las partculas son transferidas al lquido siguiendo los
principios de la impactacin inercial ayudada por la dispersin de las
partculas en las burbujas formadas en la zona de impactacin (Hernndez,
2005).
Como lquido de captacin puede utilizarse cualquiera que sea compatible con
el ensayo analtico y el agente biolgico objeto de estudio. Los lquidos ms
frecuentemente utilizados son: agua destilada, soluciones salinas tamponadas
o medios de cultivo diluidos. A estos lquidos se les aaden los aditivos que se
consideren necesarios para mejorar la supervivencia de los microorganismos.
Tambin, y para evitar problemas, a algunos se les suele aadir un
antiespumante (Hernndez, 2005).
19
El volumen de lquido con el que habitualmente trabajan estos equipos oscila
entre 15 ml y 20 ml. Este volumen puede verse reducido por la evaporacin, lo
que tiene como consecuencia una modificacin de la concentracin de sales
que podra afectar la supervivencia de los microorganismos captados. La
cantidad de lquido evaporado depende del grado de humedad del aire
aspirado y de la duracin del muestreo (Hernndez, 2005).
La captacin en medio lquido presenta ciertas ventajas sobre otros tipos de
equipos y es que a partir de una muestra se pueden realizar diferentes
ensayos o determinar diferentes componentes del bioaerosol. Por ejemplo:
con el lquido muestreado se pueden inocular diferentes placas con medios de
cultivo distintos, su incubacin a diferentes temperaturas facilitar los trabajos
de identificacin de los agentes biolgicos vivos y cultivables del bioaerosol.
La agitacin del lquido permite disgregar los agregados de partculas evitando
as que las colonias crezcan de forma solapada. Las muestras obtenidas
permiten el recuento del nmero total de partculas. Mediante filtracin del
lquido se pueden concentrar las partculas y la muestra puede ser utilizada en
la realizacin de otros tipos de ensayo (Hernndez, 2005).
Uno de los modelos ms ampliamente utilizados en la captacin de
bioaerosoles es el AGI-30 (All glass impinger) que ha sido seleccionado como
muestreador de referencia, la cifra indica la distancia que hay entre el orificio
de salida del aire dentro del frasco y el fondo del mismo, estos 30 mm
permiten reducir el estrs fsico de los microorganismos captados. El dimetro
de corte calculado es de 0,3 pm, y el caudal de aire es de 12,5 I/min. Una
modificacin de este muestreador es el frasco borboteador multinivel. Dispone
de tres niveles y proporciona la distribucin por tamao de partcula simulando
la que ocurre en el sistema respiratorio humano. Cada nivel contiene un
volumen conocido de lquido de captacin estril. El diseo de este equipo
reduce la velocidad de inyeccin y minimiza las salpicaduras y la formacin de
espuma. Los dimetros de corte tericos son, respectivamente: 1 pm, 4 pm y
20
10 pm, el equipo trabaja a caudales de aire de 20 y 55 I/min (Hernndez,
2005).
Tradicionalmente estos muestreadores se fabricaban en vidrio, pero las
imprecisiones en su construccin afectaban a la eficiencia de captacin
dificultando los estudios de intercomparacin, ms recientemente y para evitar
estos problemas, estos equipos se fabrican en acero inoxidable. En la Figura 5
se muestra un esquema de estos muestreadores (Hernndez, 2005).
Figura 5. Frascos borboteadotes.

2.7.4 Muestreo por centrfugos.
Ciclones lavadores.
La captacin de las partculas ocurre por impactacin en un medio lquido que
baa la superficie interior del cicln, potenciada por la accin de la fuerza
centrfuga. El lquido con las partculas es retirado por la parte inferior del
equipo. Los ensayos realizados con estos equipos para determinar la eficacia
de la captacin revelan que a caudales de 500 I/min y velocidad del aire de 4
m/s, la eficacia de captacin para partculas de dimetro aerodinmico de 20
pm es de entre un 70% y 110%. En Figura 6 se muestra un esquema de estos
muestreadores (Hernndez, 2005).
21
Figura 6. Esquema de un cicln.
Muestreador RCS (Reuter Centrifugal Sampler).

Es un equipo porttil en el que la impactacin de las partculas ocurre
potenciada por la accin de la fuerza centrfuga que un ventilador confiere al
aire aspirado en la zona frontal del equipo. Las partculas son recogidas en
cintas flexibles con pocillos que contienen medio de cultivo. El caudal de aire
de este equipo es de 40 L/min y dispone de un programador de tiempo (entre
30 segundos y 8 minutos) que determina el volumen de aire muestreado. La
captacin ocurre en un nico nivel por lo que no se obtiene informacin sobre
la distribucin por tamao de partcula (Hernndez, 2005).
Una de las limitaciones de este equipo es que no se puede precisar con
exactitud el caudal real de aire, ya que ste es aspirado desde una distancia
de 40 cm y el aire expulsado lo hace rodeando la columna de aire de
aspiracin (Hernndez, 2005).
Una versin mejorada es el RCS plus en el que, a diferencia del anterior, la
entrada y salida del aire estn separadas. Este muestreador opera a un
caudal de 50 I/ min. En la Figura 7 se muestra un esquema de este
muestreador (Hernndez, 2005).
22
Figura 7. Esquema de un muestreador RCS.

2.8 Principio del monitor microbiolgico de aire SAS SUPER 100-180 TM.
El sistema de superficies areas (SAS), comprende a varios modelos que usan el
mismo principio:
El aire es aspirado a una velocidad constante durante un tiempo variable o
determinado a travs de una tapa de acero con una serie de agujeros, basada en un
diseo especial. El flujo laminar resultante que dirige el flujo areo hacia la superficie
del plato de contacto, el cual tiene una membrana. Esta membrana contiene el
examen microbiolgico a realizar. Al completar el ciclo, la membrana es removida y
colocada en la placa de agar estndar mtodos e incubada (Pbi internacional, 2002).
CAPTULO III
MATERIALES Y MTODOS
Para el estudio de organismos mesfilos aerobios mediante el mtodo de cuenta en

placa abierta, se recolectaron las muestras de diversas reas estratgicas de Ciudad
Obregn Sonora, como se aprecia en la Tabla 1. Adems, en la ubicacin calle 5 de
Febrero esquina con calle Galeana, se aplic el mtodo del monitor microbiolgico
de aire SAS SUPER 100-180
TM
. El perodo de muestreo comprendi los meses de
enero a febrero del 2005.

Tabla 1. Localizacin de las zonas de muestreo.
Sitio de muestreo
Ubicacin
Calle Fco. Villanueva esquina con calle Constitucin
Blvd. Norman E. Bourlaug esquina con calle 300
Calle Sahuaripa esquina con calle Guerrero
Carretera internacional y calle norte
Calle 5 de febrero esquina con calle Galeana
3.1 Toma de muestras.
24
En cada lugar se tomaron 6 muestreos, con tres repeticiones, dando un total de 90

muestras con el mtodo de cuenta placa abierta. Adems en la ubicacin calle 5 de
Febrero esquina con calle Galeana se utiliz el monitor microbiolgico de aire SAS
SUPER 100-180
TM
obteniendo 6 muestras ms, por lo tanto, se recolect un total de
96 muestras.
3.2 Esterilizacin y sanitizacin del equipo.
3.2.1 Piezas del equipo del monitor microbiolgico de aire SAS SUPER 100180TM.
Tapa del cabezal.- se esteriliz con papel aluminio para que no se encuentre en
contacto directo del calor con la tapa y evitar volver a infectar despus de haber sido
esterilizado, esto se realiz en una autoclave a 15 libras de presin por pulgada
cuadrada durante 15 minutos.
Turbina.- esta parte se desinfecta frotando la superficie con algodn humedecido de
alcohol al 70%.
Plato de contacto.- s sanitiza utilizando etanol al 70%, a 30 centmetros de distancia
frente al monitor cuando el abanico este corriendo, 30 segundos son suficientes para
desinfectar la ruta area.
Cuerpo de la unidad.- se limpia con alcohol etlico al 70%.
Membranas.- estas no se esterilizan ya que se proporcionan previamente estriles.
25
Nota: El rea donde se realice la desinfeccin del equipo tendr que ser de
preferencia una mesa del laboratorio previamente desinfectada con etanol al 5% y el
equipo deber ser sanitizado en medio de dos mecheros a una distancia
considerablemente cerca.
3.2.2 Procedimiento del manejo del equipo.
Se conecta a la toma de electricidad, el equipo, por un espacio de tiempo no

mayor de 6 horas.
El submen, del equipo del monitor microbiolgico de aire SAS SUPER 100180TM, se elige con las flechas indicadoras Arriba y Abajo. En el submen se
encontrarn los siguientes comandos como: standard
mode, user mode,
program mode, delay mode, multi mode y utility mode; los cuales se
seleccionan con el botn enter.
Tabla 2. Lista de men y utilidad de sub-mens del monitor microbiolgico SAS
SUPER 100-180 TM.
MENU
DESCRIPCIN
Este mensaje indica que el probador de aire est
START FOR XXX
leyendo, para repetir el mismo volumen de aire.

Este mensaje indica que la prueba de aire puede ser
STANDARD MODE
seleccionada de uno de los 8 arreglos de estndares

de volumen de prueba.
USER MODE
seleccionada de una de las 8 pruebas de volumen

programables.
PROGRAM MODE
modificada 8 veces cada vez que se programe el

volumen de prueba.
DELAY MODE
26
programada para iniciar la prueba despus de
empezar el perodo.
MULTI MODE
programada para extender el tiempo total de prueba

en el intervalo de tiempo secuencial para la
prueba.
Este mensaje indica que la prueba de aire est
programada para iniciar el siguiente submen:
SET TIME
Para programar fecha y hora
SAMPLING SITE
Para identificar el punto de prueba
IDENTIFY
Para identificar el nombre del operador
LANGUAGE
UTILITY MODE
Para desplazar el texto en diferentes lenguajes

CLEAR RECORD
Para borrar los datos grabados en la otra prueba
DISPLAY RECORD
Para mostrar los datos grabados de la prueba
PRINT
Para reportar los datos grabados
AUTO SWITCH OFF
Para desconectar el switch automtico de apagado
cuando el control remoto infrarrojo es usado
27
3.3 Grabado de datos.
Todos los datos relacionados e identificados por el instrumento son: nombre del
operador, sitio de prueba, fecha y hora de muestreo, tipo de medida y Unidades
Formadoras de Colonias (UFC) pueden ser reportadas en software especfico del
software SAS.
3.4 Calibracin del equipo.

Para proceder a la calibracin del equipo se hizo un muestreo con un volumen
considerable de aire a analizar, el cual despus de varias pruebas, se concluy que
era de 360 litros de aire durante un ciclo de 15 minutos para este caso.
Pudindose variar conforme al rea o lugar de muestreo que se desee analizar,
segn las caractersticas propias de cada sitio; s es contaminado, ligeramente
contaminado, moderadamente o muy extremo.
Se utiliz el volumen de aire de 360 litros durante un lapso de 15 minutos, debido a
que se calibrar el equipo con respecto al mtodo de conteo de placa abierta en el
que se confirm que exista una cantidad similar de UFC/placa/15 minutos, despus
de haber hecho pruebas preliminares y haber analizado cuenta total viable de
mesfilos aerobios en placa abierta por un lapso de 15 minutos.
Generalmente, si el instrumento es usado diariamente, la calibracin puede ser
realizada cada 6 meses. Mensualmente o intervalos semanales requiere calibracin
anual.
28
3.5 Procedimiento del anlisis.
3.5.1 Determinacin de organismos mesfilos aerobios en el ambiente por

tcnica de placa abierta.
Preparar cajas con 15-20 ml de agar estndar mtodos.
Prueba de esterilidad (24-48 horas.) de las cajas con agar

estndar mtodos.
Colocar las cajas en los sitios de muestreo para el anlisis.
Abrir la caja, cuidando de no tocar la superficie de la base que

contiene el medio de cultivo.
Mantener la exposicin de la caja al ambiente por un perodo de

tiempo de 15 minutos.
Posteriormente cerrar la caja perfectamente cuidando el no

contaminar la misma.
Incubar las cajas a 35-37 C por un lapso de tiempo de 24-48

horas, expresando los resultados en UFC/placa/15 minutos.
29
mediante el monitor microbiolgico de aire SAS SUPER 100-180 TM.
Colocar el plato de maxi contacto que contiene la membrana en

el cabezal del equipo cuidando que este procedimiento se haga
en medio de dos mecheros para evitar posible contaminacin.
Volver a colocar el papel aluminio en el cabezal.
En el sitio de muestreo quitar el papel aluminio y seleccionar un

volumen de 360 litros de aire por un perodo de 15 minutos.
Despus de tomar la muestra apagar el equipo y colocar

nuevamente el papel aluminio en el cabezal para evitar
contaminacin.
Esterilizar la mesa con fenol al 5% y en medio de dos mecheros

quitar el plato de maxi contacto.
Proceder a retirar la membrana cuidadosamente con unas

pinzas de diseccin estriles y sembrarlas en la placa con agar
estndar mtodos.
Incubar las cajas a 35-37 C por un lapso de tiempo de 24-48

horas, expresando los resultados en UFC/ 360 litros /15 minutos.
30
3.5.3 Observaciones de cada sitio estratgico en estudio.
Nmero de personas.
Basura en el lugar de muestreo.
Polvo en el lugar de muestreo.
Circulacin de vehculos.
Humo presente en el lugar de muestreo.
3.6 Clculo de resultados.

Unidades Formadoras de Colonias por 360 litros de aire.
El nmero de organismos contabilizados sobre la superficie del plato de contacto
debe ser correctamente por la posible permanencia de varias partculas que pueden
estar pasando por el mismo agujero. La frmula estadstica fue tomada del trabajo
realizado por J. Macher en el manual instructivo del equipo SAS SUPER 100-180
TM
La cuenta probable (Pr) se usa para calcular las UFC por metro cbico de aire
muestreado.
X = ( Pr) (1000)
V
31
Donde:
V = volumen de aire muestreado ( 360 litros de aire).
r = unidades formadoras de colonias contabilizadas en un plato de contacto de 55
mm.
Pr = probable conteo obtenido por correccin positiva de los poros.
X = unidades formadoras de colonia por 1000 litros (=1 metro cbico) de aire.
Para expresar el resultado final en UFC / ft3, multiplicar el valor de UFC / m3 por
0.02832.
Nota: frmula de conversin 1 pie cbico = 28.32 litros.
CAPTULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIN

Los resultados obtenidos de organismos mesfilos aerobios del ambiente, de los
diferentes sitios estratgicos, de Ciudad Obregn Sonora; indican que todas las
muestras analizadas no cumplen con los criterios establecidos de no ms de 15
unidades formadoras de organismos mesfilos aerobios en el ambiente en placa
abierta por 15 minutos incubada de 24 a 48 horas a 37C, de acuerdo al mtodo
estndar que se recomienda aplicar en lugares cerrados y limpios ( laboratorios,
clnicas, hospitales, cocinas). Sin embargo, podemos decir que estos resultados son
afectados por diferentes variables, las cuales repercuten con facilidad al evaluar la
carga o la cantidad microbiana del aire en un recinto de trabajo o en un ambiente
externo. Como por ejemplo: influye la temperatura, las corrientes de aire, el nmero
de personas presentes, acumulamiento de basura, transporte de vehculos,
presencia de polvo.
En los muestreos realizados en el lugar estratgico ubicado en la calle Fco.
Villanueva esquina con calle Constitucin, las variables que contribuyen a la carga
microbiana existente en ese lugar son: que hay una parada de camiones, que est
cerca de una caseta de comida, enfrente de una industria, presencia de polvo,
trfico vehicular y de personas. Adems como se observa en la Tabla 3, los
resultados de organismos mesfilos aerobios en el muestreo 1 y 6 tienen la mayor
33
cantidad de estos microorganismos, y esto puede deberse a que hubo mayor
presencia de gente (18-20 personas) y demasiado trfico vehicular; lo cual puede
provocar una elevada cantidad de polvo. Por lo contrario, los dems muestreos la
gente presente era de 8 a 10 personas, haba poco polvo y trfico constante de
autos.
En el rea ubicada en el Blvd. Norman E. Bourlaug esquina con calle 300 las
variables que repercuten en la cantidad de organismos mesfilos aerobios presentes
son: hay demasiado trfico vehicular, mucho polvo, presencia de basura y no hay
presencia de gente, excepto en el muestreo 6. Y como se puede apreciar en la tabla
3, los resultados obtenidos en ese muestreo son cantidades elevadas de
microorganismos (400-488 UFC / placa/ 15 minutos),
al igual que en el primer
muestreo. En los dems muestreos se observa que la cantidad de microorganismos

presentes est en un nivel de 300 UFC/ placa / 15 minutos, lo cual puede deberse a
las diferentes variables ya mencionadas.
En el punto de muestreo de calle Sahuaripa esquina con calle Guerrero hay
demasiada variabilidad en los resultados, como se muestra en la Tabla 3. Pero
puede deberse a que haba una construccin cerca, demasiado trfico, poca
presencia de gente y demasiado polvo. Adems se obtuvo un conteo masivo en el
muestreo 3, por la alta cantidad de polvo presente provocada por el paso vehicular.
Asimismo, como se aprecia en la Tabla 3, el muestreo 4 y 5 son los de menor
cantidad de organismos mesfilos aerobios existentes, ya que
las calles fueron
regadas y hubo menos presencia de polvo.

En la Carretera internacional y calle norte hay variabilidad en los resultados. Esto se
debe a los factores que influyen en cada muestreo. En la Tabla 3 en los muestreos 1,
2 y 6 presentan mayor cantidad de organismos mesfilos aerobios, ya que hay un
trfico vehicular constante, demasiado polvo y presencia de gente. Y en los dems
muestreos hay menos polvo y no hay presencia de gente, aunque sigue presentando
un trfico vehicular constante.
34
Por ltimo, en el ambiente de la calle 5 de febrero esquina con calle Galeana el

trfico vehicular es constante, hay poco polvo, gente fumando y presencia de gente
(20-30 personas), excepto el tercer muestreo con 15 personas. Adems en el
muestreo 1, que se observa en la tabla 3 hay mayor cantidad de organismos
mesfilos aerobios, presenta humo de camiones y demasiada gente (20-35
personas) cerca de la toma de muestra. Y el muestreo 3 es el de menor cantidad,
esto puede deberse a la menor cantidad de gente presente (15 personas).
Tabla 3. Resultados de organismos mesfilos aerobios por el mtodo de cuenta en
placa abierta a las 24 horas (UFC /placa / 15 minutos).
Lugar
Muestreo 1 Muestreo 2 Muestreo 3 Muestreo 4 Muestreo 5 Muestreo 6
CONSTITUCIN
689
186
148
181
198
381
CONSTITUCIN
861
188
157
138
231
305
CONSTITUCIN
781
138
162
142
218
397
CALLE 300
481
298
318
284
381
413
CALLE 300
478
307
298
301
394
488
CALLE 300
532
289
307
317
412
403
GUERRERO
507
389
Masivo
98
134
389
GUERRERO
588
376
Masivo
112
158
398
GUERRERO
538
392
Masivo
133
173
442
CARRETERA
475
238
102
134
118
484
CARRETERA
498
273
108
113
133
401
CARRETERA
507
259
97
108
164
412
GALEANA
608
105
98
189
113
234
GALEANA
639
138
87
203
158
287
GALEANA
689
117
102
215
119
204
Nota: El nombre del lugar esta simplificado: CONSTITUCIN: Fco. Villanueva Esq. Con calle Constitucin; CALLE 300: Blvd. Norman E. Bourlaug Esquina con calle 300;
GUERRERO: Sahuaripa Esquina con calle Guerrero; CARRETERA: Carretera internacional y calle norte, y GALEANA: 5 de febrero Esquina con calle Galeana.

35
En la Tabla 4, se puede apreciar un conteo masivo de organismos mesfilos
aerobios en el muestreo 1 y 6. Adems en el muestreo 3 en el sitio estratgico 5 de
Febrero Esquina con calle Galeana y en el muestreo 5 en el lugar Blvd. Norman E.
Bourlaug Esquina con calle 300. Esto puede deberse a las variables como: presencia
de gente, trfico vehicular, acumulamiento de basura, presencia de polvo, etc.
Adems al crecimiento de los microorganismos por estar ms tiempo en incubacin.
Tabla 4. Resultados de organismos mesfilos aerobios por el mtodo en placa
abierta a las 48 horas (UFC /placa / 15 minutos).
Lugar
Muestreo 1 Muestreo 2 Muestreo 3 Muestreo 4 Muestreo 5 Muestreo 6
CONSTITUCIN
Masivo
198
184
198
241
Masivo
CONSTITUCIN
Masivo
210
193
156
302
Masivo
CONSTITUCIN
Masivo
154
187
174
291
Masivo
CALLE 300
Masivo
324
397
328
Masivo
Masivo
CALLE 300
Masivo
358
385
342
Masivo
Masivo
CALLE 300
Masivo
297
364
351
Masivo
Masivo
GUERRERO
Masivo
402
Masivo
138
191
Masivo
GUERRERO
Masivo
398
Masivo
185
218
Masivo
GUERRERO
Masivo
415
Masivo
198
209
Masivo
CARRETERA
Masivo
258
143
184
178
Masivo
CARRETERA
Masivo
289
135
195
193
Masivo
CARRETERA
Masivo
283
118
159
204
Masivo
GALEANA
Masivo
143
119
238
174
Masivo
GALEANA
Masivo
157
121
289
183
Masivo
GALEANA
Masivo
148
133
258
155
Masivo
Nota: El nombre del lugar esta simplificado: CONSTITUCIN: Fco. Villanueva Esq. Con calle Constitucin; CALLE 300: Blvd. Norman E. Bourlaug Esquina con calle 300;
GUERRERO: Sahuaripa Esquina con calle Guerrero; CARRETERA: Carretera internacional y calle norte, y GALEANA: 5 de febrero Esquina con calle Galeana.
4.3 Organismos mesfilos aerobios por el mtodo del monitor microbiolgico

TM
y el Mtodo de placa abierta en el punto de
muestreo ubicado en calle 5 de Febrero esquina con calle Galeana.
36
Los conteos masivos de los muestreos 1 y 6 presentes en la Tabla 5 y Tabla 6
pueden deberse a que las variables de presencia de gente, presencia de humo,
presencia de polvo y constante trfico vehicular son factores que contribuyen al
aumento de la carga microbiana existente en ese lugar; adems el tiempo de
incubacin, principalmente en la Tabla 6.
Conjuntamente en la Tabla 5 y Tabla 6, se localizan los resultados de organismos
mesfilos aerobios en el sitio 5 de Febrero esquina con calle Galeana a las 24 horas
y 48 horas respectivamente; tanto por el mtodo de placa abierta como por el monitor
TM
. En estas se pueden observar que el
mtodo de cuenta en placa abierta presenta una doble cantidad de organismos

mesfilos aerobios aproximadamente, que en el monitor microbiolgico de aire SAS
SUPER 100-180
TM
. Esto puede presentarse debido a que el monitor microbiolgico
TM
esta diseado para analizar ambientes en lugares
externos e internos, y el mtodo de placa abierta es un mtodo estandarizado que se

recomienda para lugares cerrados y limpios. Adems un inconveniente del mtodo
de cuenta en placa abierta es que en superficies muy sucias pueden provocar la
sobrecarga de microorganismos en la placa y, por tanto dificultar el anlisis de la
misma. Debemos de tener en cuenta que estos resultados son afectados por las
diferentes variables ya citadas.
Asimismo, los resultados presentes en las Tablas 5 y 6 por el mtodo del monitor
TM
nos proveen un ambiente aceptable
para llevar a cabo las actividades cotidianas, de acuerdo a Mouilleseaux y Squinzali

(1991). Ellos indican que la presencia de concentraciones de bacteria Gram (+) y
bacterias Gram (-) arriba de 1000 UFC / m3 de aire proveen una calidad pobre del
aire, por lo cual ningn muestreo presenta dicha cantidad.
Adems, segn la Asociacin Americana de Higiene, la Comisin de Comunidades
Europeas y la Confederacin Americana de Higienistas industriales del gobierno
(2005), definen 1000 UFC / m3 como lmite superior para las concentraciones en
ambientes de interior, mientras que la Comisin de Comunidades Europeas 2000
37
UFC / m3 . Por lo tanto un valor de 10, 000 UFC / m3 de microbios aerotransportados
se considera un nivel peligroso para los ambientes de interior. Por lo dems, se
puede inferir que los diferentes sitios de muestreo son lugares aceptables para llevar
a cabo las actividades cotidianas.

placa abierta y Monitor Microbiolgico SAS SUPER 100-180
TM
(24 horas.) en el
punto de muestreo ubicado en calle 5 Febrero esquina con calle Galeana.

Promedio
Monitor
Placa Abierta
48 HORAS
UFC/360L/15min.
Desviacin
Estndar
UFC/Placa/ 15 min.
UFC/Placa/ 15 min.
Muestreo 1
225
645.3
40.8
Muestreo 2
53
120
16.7
Muestreo 3
56
95.6
7.7
Muestreo 4
83
202.3
13.01
Muestreo 5
61
130
62.9
Muestreo 6
150
241.6
42.02
38
placa abierta y Monitor Microbiolgico SAS SUPER 100-180 TM (48 horas) en el punto
de muestreo ubicado en calle 5 Febrero esquina con calle Galeana.
Promedio
Monitor
Placa Abierta
48 HORAS
UFC/360L/15min.
Desviacin
Estndar
UFC/Placa/ 15 min.
UFC/Placa/ 15 min.
Muestreo 1
Masivo
Masivo
Masivo
Muestreo 2
94
149.3
7.09
Muestreo 3
78
124.3
7.5
Muestreo 4
119
261.6
25.6
Muestreo 5
103
170.6
14.2
Muestreo 6
Masivo
Masivo
Masivo
CAPITULO V
CONCLUSIONES
Todas las muestras obtenidos de organismos mesfilos aerobios del ambiente

de los diferentes sitios estratgicos de Ciudad Obregn Sonora, no cumplen
con los criterios establecidos de no ms 15 unidades formadoras de
organismos mesfilos aerobios en el ambiente en placa abierta por 15 minutos
incubada a 24-48 horas a 37C, de acuerdo al Mtodo Estndar, que se
recomienda aplicar en lugares cerrados y limpios.
El monitor microbiolgico de aire SAS SUPER 100-180
TM
es el mtodo
aceptable para analizar ambientes de lugares externos, y el mtodo de placa

abierta es un mtodo estandarizado que se recomienda para lugares cerrados
y limpios.
El aire del sitio estratgico calle 5 de Febrero esquina con calle Galeana de
Ciudad Obregn Sonora presenta buena calidad ambiental.
Por lo anterior, se puede decir que el aire es aceptable para llevar a cabo las
diferentes actividades cotidianas. Pero no se puede confirmar que estos
lugares no causen problemas a la salud, ya que no existen normas que
respalden o indiquen los lmites permisibles de estos microorganismos.
BIBLIOGRAFA
Carpenter, L. (1989). Microbiologa. Segunda Edicin. Interamericano, Mxico. D. F.

Pgs. 439 y440.
Dickson, T. R. (1996). Qumico-Enfoque-Ecolgico. LIMUSA, Mxico. D. F. Pg. 48.
FUNDACIN MAPFRE (1994). Manual de contaminacin ambiental ITSEMAP
Madrid.
Manual SAS SUPER 100-180
TM
DUO SAS THE ENVIROMENT. Pbi internacional.
2002.
Nevers, N. (1998). Ingeniera de control de la contaminacin del aire. Editorial Mc
Graw-Hill. Interamericana Editores, S. A de C. V. Mxico D. F. Pgs. 28, 67 y 68.
Pelczar y otros. (1982). Microbiologa. Cuarta Edicin.
Editorial Mc-Graw-Hill,
Mxico. D. F. Pg. 651.

Salle, A.J. Bacteriologa. Editorial Gustavo Gili, S.A. Barcelona. Pgs. 546-548, 555 y
556.
Stanier, R.Y. (1997). Microbiologa. Madrid. Ed. Aguilar. pgs. 910-911
Asociacin Americana de Higiene, la Comisin de Comunidades Europeas y la
Confederacin Americana de Higienistas industriales del gobierno. 2005. Outdoor
Purge
Air
Systems
http://www.engr.psu.edu/ae/iec/abe/control/outdoor_purge.asp.).
ver
41
Hernndez, C. A. 2005. Agentes Biolgicos: Equipos de muestreo. ( Ver

http://www.mtas.es/insht/ntp/ntp_609.htm).
Hernndez, C. A. y Mart S. Ma . 2005. Contaminantes biolgicos: Evaluacin en
ambientes laborales. ( Ver http://www.mtas.es/insht/ntp/ntp_203.htm).
Miller, J.D. (1993). Fungi and the Building Engineer In IAQ 92, Environments for
Healthy People, Atlanta: American Society for Heating, Refrigerating and Air
Conditioning Engineers (ver http://www.ehrinc.com/iaq/testing.htm).
Mouilleseaux, A., and P. Squinzali. (1991). Contamination Microbienne del Air:
Strategic d Etude et Examples d Differents Environments. In Proc. Societe Francais
d Aerobiologie. Institut Pasteur, Paris. (ver http://www.ehrinc.com/iaq/testing.htm).
ANEXO I
Observaciones realizadas, en cada muestreo, de los diferentes sitios estratgicos de
Ciudad Obregn Sonora.
ANEXO 1.1 Observaciones Primer Muestreo (11 ENERO 2005).

LUGAR DE MUESTREO
OBSERVACIONES 1 MUESTREO
Presencia de gente (20 personas).
Demasiado el Trfico constante de carros,

trailer, camiones de carga y camiones de gente.
Calle Fco. Villanueva

Esquina con calle
Constitucin
Mucho polvo.
Paso de trailer de doble remolque, los cuales

provocaron un gran levantamiento de polvo.
Hacia aire.
Hay una caseta de comida cerca, la cual estaba

abierta,
Toma de muestra esta enfrente de una

Industria.
Parada de camiones.
Mucho trfico de carros y camiones.
Mucho polvo.
Blvd. Norman E. Bourlaug
No hay presencia de gente.
Esquina con calle 300
Hay un canal cerca, el cual esta lleno de basura

y no tiene corriente de agua.
Calle Sahuaripa Esquina
Demasiado polvo.
con Calle Guerrero
Hay construccin cerca, lo cual provoca mucho

polvo.
43
Demasiado el trfico constante de carros y

camiones.
Esta cerca una gasolinera.
Poca gente (3-5 persona).
Demasiado polvo.
Carretera Internacional y
Trfico constante de camiones, trailer y carros.
Calle Norte
Se estacion un trailer de doble remolque cerca

de la toma de muestra, el cual hizo un
levantamiento de polvo.
Es una parada de camiones.
Mucha gente (20-35 personas).
Calle 5 de febrero
Gente acercndose
Esquina con calle
Presencia de poco polvo.
Galeana
Gente fumando
Trfico constante de carros y camiones.
Humo de un camin muy cerca de la toma de

muestra.
44
ANEXO 1.2 Observaciones Segundo Muestreo (18 ENERO 2005).
LUGAR DE MUESTREO
Presencia de gente (8-10 personas).
Poco movimiento de carros.
Poco polvo.
Esquina con calle

Constitucin
abierta,

Industria.
Parada de camiones.
Mucho polvo.

Demasiado polvo.

con Calle Guerrero
polvo.

camiones.
Poca gente( 8 personas).
No hay gente
Calle Norte
Demasiado polvo.
45
Calle 5 de febrero
Esquina con calle
Poco polvo.
Galeana
Gente fumando, pero no muy cerca.
ANEXO 1.3 Observaciones Tercer Muestreo (25 ENERO 2005).

LUGAR DE MUESTREO
Poca presencia de gente (5 personas).
Poco trfico de carros, trailer, camiones de

carga y camiones de gente .
Poco polvo.
Esquina con calle
Constitucin
abierta,

Industria.
Parada de camiones.
Mucho polvo.

Demasiado polvo.
con Calle Guerrero

polvo.
46
camiones.
Poca gente (3 personas).
No hay gente.
Calle Norte
Poco polvo.
Poco trfico de camiones, trailer y carros.
Calle 5 de febrero
Esquina con calle
Poco polvo.
Galeana
Gente fumando
ANEXO 1.4 Observaciones Cuarto Muestreo (1 FEBRERO 2005).

LUGAR DE MUESTREO
Trfico constante de carros, trailer, camiones de

carga y camiones de gente.
Poco polvo.
Esquina con calle
Constitucin
cerrada,

Industria.
Parada de camiones.
Mucho polvo.
47

y tiene corriente de agua.
Poco polvo.
Hay construccin cerca.
con Calle Guerrero
Poca presencia de gente (5 personas).
Acababan de regar la calle.
No hay gente.
Calle Norte
Poco polvo.
Mucha gente (30 personas).
Calle 5 de febrero
Gente acercndose.
Esquina con calle
Poco polvo.
Galeana
Gente fumando
Humo de camiones.
48
ANEXO 1.5 Observaciones Quinto Muestreo (9 FEBRERO 2005).
LUGAR DE MUESTREO
Presencia de gente (5-10 personas).
Trfico constante de carros, trailer, camiones de

carga y camiones de gente.
Poco polvo.
Acumulamiento de basura cerca.
Esquina con calle
Presencia de humo de camiones.
Constitucin

abierta,

Industria.
Parada de camiones.
Mucho polvo.

Aire
Demasiado polvo.
Hay construccin cerca.
con Calle Guerrero
camiones.
Recin regaron la calle, demasiada humedad.
49
Calle Norte
No hay gente
Poco polvo.
Calle 5 de febrero
Esquina con calle
Galeana
Gente fumando
Poco trfico de carros y camiones.
ANEXO 1.6 Observaciones Sexto Muestreo (15 FEBRERO 2005).

LUGAR DE MUESTREO
Presencia de gente ( 18 personas).
Demasiado el Trfico constante de carros,

trailer, camiones de carga y camiones de gente.
Mucho polvo.
Esquina con calle

Constitucin
abierta,

Industria.
Parada de camiones.
Mucho polvo.

Aire
50
Demasiado polvo.

con Calle Guerrero
polvo.

camiones.
Presencia de gente b( 6 personas).
Poca gente (3-5 persona).
Calle Norte
Demasiado polvo.
Presencia de gente ( 15 personas).
Calle 5 de febrero
Gente acercndose
Esquina con calle
Galeana
Gente fumando
51
ANEXO II
Fotografas de los diferentes sitios estratgicos de Ciudad Obregn, Sonora.
Foto 2.1 Calle Fco. Villanueva esquina con calle Constitucin.
52
Foto 2.3 Blvd. Norman E. Bourlaug esquina con calle 300.
Foto 2.4 Blvd. Norman E. Bourlaug esquina con calle 300.
53
Foto 2.5 Calle 5 de Febrero esquina con calle Galeana.
Foto 2.6 Calle 5 de Febrero esquina con calle Galeana.
54
Foto 2.7 Carretera internacional y calle norte.
Foto 2.8 Carretera internacional y calle norte.
55
Foto 2.9 Calle Sahuaripa esquina con Calle Guerrero.
Foto 2.10 Calle Sahuaripa esquina con Calle Guerrero.

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INSTITUTO TECNOLOGICO DE SONORA

Determinacin de organismos mesfilos aerobios en el

QUE PARA OBTENER EL TTULO DE

GLORIA EDITH CAMACHO ESPINOZA

CD. OBREGN, SONORA

A toda mi familia: a mis primos, tos, tas, etc.

A Raymundo Fon Galaviz: Por su apoyo incondicional, por compartir tristezas y

A mis amigos: Santy,

Javier, Ren, Said, Dago y Hugo. Por compartir tantas

alegras, aventuras; y sobre todo por apoyarme y brindarme su amistad

Al Instituto Tecnolgico de Sonora: Por ser la plataforma en mi educacin

1.2 OBJETIVO GENERAL

1.3 OBJETIVOS ESPECFICOS

II. MARCO TERICO

2.3 Microorganismos del aire.

2.4 Clasificacin de los contaminantes del aire.

2.4.1 Contaminantes fsicos.

2.4.2 Contaminantes qumicos.

2.4.3 Contaminantes biolgicos.

2.5 Organismos causantes de enfermedades infecciosas.

2.6 Vas de entrada de los organismos causantes de enfermedades

2.7.1 Muestreo por contacto.

2.7.2 Muestreo con filtro.

2.7.3 Muestreo por Impactadores.

2.7.4 Muestreo por centrfugos.

3.1 Toma de muestra.

3.2 Esterilizacin y sanitizacin del equipo.

3.2.2 Procedimiento del manejo del equipo.

3.3 Grabado de datos.

3.4 Calibracin del equipo.

3.5 Procedimiento del anlisis.

3.5.1 Determinacin de organismos mesfilos aerobios en el ambiente

por tcnica de placa abierta.

mediante el monitor microbiolgico de aire SAS SUPER 100-180 TM.

3.6 Clculo de resultados.

IV. RESULTADOS Y DISCUSIN

4.1 Organismos mesfilos aerobios por el mtodo en placa abierta,

observaciones a las 24 horas.

observaciones a las 48 horas.

abierta en el punto de muestreo ubicado en calle 5 de Febrero esquina

Placas de contacto RODAC para el muestreo de superficies.

Esquema de un muestreador de rendija.

Muestreador Andersen (6 niveles).

Esquema de un muestreador RCS.

Localizacin de las zonas de muestreo.

Lista de men y utilidad de sub-mens del monitor

microbiolgico SAS SUPER 100-180 TM.

Resultados de organismos mesfilos aerobios por el mtodo

de cuenta en placa abierta a las 24 horas (UFC /placa / 15

Resultados de organismos mesfilos aerobios por el mtodo

en placa abierta a las 48 horas (UFC /placa / 15 minutos).

Resultados de organismos mesfilos aerobios por el mtodo

de cuenta en placa abierta y Monitor Microbiolgico SAS

(24 horas.) en el punto de muestreo

ubicado en calle 5 Febrero esquina con calle Galeana.

Resultados de organismos mesfilos aerobios por el mtodo

(48 horas.) en el punto de muestreo

ubicado en calle 5 Febrero esquina con calle Galeana.

diferentes sitios estratgicos de Ciudad Obregn Sonora.

Observaciones Primer Muestreo (11 ENERO 2005).

Observaciones Segundo Muestreo (18 ENERO 2005).

Observaciones Tercer Muestreo (25 ENERO 2005).