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Sedes
Chorrillos y San Borja
Agosto 2015 - II
LIMA - PER
Se sabe que las personas que laboran en los laboratorios mdicos en general, fisiolgicos, bacterilogos,
bilogos y otros relacionados con la salud en general, conforman un grupo de alto riesgo para infecciones
por virus de hepatitis B relacionadas con el trabajo y virus de inmunodeficiencia humana (HIV). En
1987 el Centro de Enfermedades Transmisibles USA (CDC) y la OSHA publicaron recomendaciones para
proteger a las personas que trabajan al cuidado de la salud y a otras de adquirir la infeccin por HIV y se
reactualizaron nuevamente en 1988. Entre las recomendaciones se aconseja que "se tomen precauciones
congruentes al manejar sangre y lquidos corporales de todos los pacientes y las muestras que se
obtengan".
Esto se conoce como precauciones universales. Las recomendaciones incluyen el uso de equipo para
proteccin personal, como guardapolvos, mandiles, batas, guantes descartables y protectores para los ojos
al manipular sangre y lquidos corporales en el laboratorio. La revisin de los CDC en 1988 recomend
usar equipo de proteccin personal para manejar todas las sustancias biolgicas y animales. Deben tratarse
todas las secreciones y excreciones corporales como potencialmente infecciosas, ya que hay otras
enfermedades adems de HBV y HIV que se transmiten a travs de diversos lquidos del organismo
humano y de los animales.
En 1991 la OSHA public una regulacin final la Occupational Exposure to Bloudborne Pathogens
(Exposicin ocupacional a patgenos que se transmiten por la sangre). Esta regla indica que el patrn debe
proporcionar equipo de proteccin personal que no permita que los materiales potencialmente infecciosos
entren en contacto con la ropa, la piel, los ojos y la boca del trabajador en condiciones normales de uso. La
regla tambin indica la manera correcta de disponer de objetos punzantes y otros desperdicios con riesgo
biolgico y seala la necesidad de administrar la vacuna de HBV y el tratamiento tras alguna exposicin a
todos los empleados que corran este riesgo.
Adems de describir equipo de proteccin personal, dicha norma incluye instrucciones para el lavado de
manos, transporte de muestras, uso de pipetas, forma de recoger derrames, desechos de desperdicios y
descontaminacin del equipo.
OSHA.
PRACTICAS DE SEGURIDAD
Todo el personal que trabaja en el laboratorio fisiolgico o ingresa a l debe cumplir obligatoriamente
reglas de bioseguridad y seguridad en general. Las normas de seguridad son OBLIGATORIAS y son
esenciales no solamente para la acreditacin acadmica, sino porque consisten en prcticas que otorgan
seguridad y proteccin al personal, alumnos e investigadores que trabajan en los laboratorios bioqumicos,
fisiolgicos, bacteriolgicos, biolgicos, qumicos, etc. Muy especialmente en el campo mdico donde
trabajamos con muestras material biolgico que es considerado potencialmente patgeno patgeno. La
mxima seguridad y proteccin es necesaria en estos casos
PRACTICAS GENERALES
Se prohbe fumar, comer y aplicarse cosmticos, para evitar la diseminacin de agentes infecciosos o
productos qumicos txicos de las mallas o mascaras hacia la boca. Con el fin de evitar el contacto con
agentes infecciosos o diseminarlos, debe utilizarse alguna prenda protectora sobre la ropa, como el
guardapolvo, mandil, la bata de laboratorio. Estas prendas de proteccin externa no deben usarse fuera
del laboratorio. Los zapatos han de ser de punta y taln cerrado. No es conveniente que las personas que
trabajan en el laboratorio usen lentes de contacto debido al desprendimiento de vapores y a las
salpicaduras que pueden producirse. Los lentes de contacto inhiben el lagrimeo y permiten que las
sustancias permanezcan ms tiempo en la crnea.
Se recomienda el uso de lentes de proteccin o protectores para la cara a las personas que usan lentes de
contacto, en particular si hay alto riesgo de vapores, aerosoles o salpicaduras. La joyera de tipo colgante,
el cabello largo y barba son riesgosos, ya que es posible que entren en contacto con muestras u otras
superficies, o se enreden o queden atrapados en instrumentos con movimiento, como mquinas rotatorias o
centrifugas. Se prohbe estrictamente pipetear con la boca todo tipo de muestra, reactivo, agua o cualquier
otra sustancia biolgica debern usarse pipetas manuales automticas con puntas descartables..
DERRAMES
.
.
Es necesario desarrollar y tener polticas escritas y procedimientos para instruir a los alumnos y a los
empleados acerca de la manera de manejar derrames qumicos y biolgicos. Existen en el comercio
estuches con insumos para ambos tipos de derrames.. Si no existen tales normas en la institucin el
laboratorio debe desarrollarlas con el fin de asegurar el ambiente de trabajo.
LAVADO DE MANOS
El lavado de manos es una de las principales maneras de evitar la diseminacin de agentes infecciosos.
Aunque se utilicen guantes, el lavado de manos es necesario. Porque es posible que stos tengan huecos
microscpicos. Al tratar con pacientes, es necesario lavarse las manos tras atender a cada uno de ellos
aunque se utilicen guantes.
LIMPIEZA
No debe permitirse que la basura, los desperdicios biolgicos, infecciosos y el material de vidrio sucio se
acumulen en el laboratorio. Los recipientes con muestras de desecho y agentes etiolgicos deben taparse
cuando no se estn empleando. Es necesario limpiar con frecuencia las superficies de trabajo con algn
desinfectante(hipoclorito o cloro) al comenzar y terminar cada turno. El personal de laboratorio fisiolgico
es responsable de mantener el rea de trabajo limpia y sanitaria, desinfectada, aunque haya servicio de
limpieza adicional por parte de la institucin.
ETIQUETAS Y SEALES
Todos los recipientes que contienen productos qumicos deben etiquetarse con claridad, indicando el
nombre del producto y cualquier precaucin para su manejo. Las reas en que se almacenan productos
inflamables, peligrosos o txicos y carcingenos, o en las cuales se utilizan deben estar marcadas
claramente rojo material biolgico y negro basura domstica. Las reas en que se almacenan o analizan
sangre o lquidos corporales deben estar marcadas claramente con el signo de riesgo biolgico .
DESECHO DE DESPERDICIOS
Existen normas de la OSHA con respecto al desecho de productos biolgicos. El desecho de materiales
biolgicos, como desperdicios infecciosos, se examina y regula en la actualidad por leyes especficas del
Ministerio de Salud Pblica.
AGUJAS Y OBJETOS PUNTIAGUDOS.
Las agujas y otros objetos puntiagudos constituyen un riesgo fsico de infeccin potencial para el personal
de laboratorio fisiolgico. Todas las agujas desechables y dems objetos punzantes deben colocarse en un
reclpl9nte resistente a la perforacin y a prueba de fugas, marcado con el smbolo de riesgo biolgico.
Estos recipientes se descartan, siguiendo las polticas de la institucin, cuando estn llenos hasta la mitad o
las tres cuartas partes. Todas las instituciones deben incinerar los recipientes que contienen objetos
punzantes. Inmediatamente despus de usada una aguja deber incinerarse y para ello existen en la
actualidad equipos especiales incineradores de agujas llamados destructores de agujas. Nunca, deber re
enfundarse o volverse a colocar la cubierta de las agujas a menos que se utilice algn dispositivo como
pinzas diseadas para este fin, para evitar la puncin cutnea accidental. Las agujas nunca deben cortarse,
ya que esto puede provocar salpicaduras de sangre o de otros lquidos al medio.
SEGURIDAD BIOLOGICA
Proteccin Personal
Derrames
Es necesario que las personas que limpian algn derrame biolgico utilicen guantes descartables y bata de
laboratorio. Se colocan toallas desechables sobre el derrame y se vaca desinfectante sobre ellas. Tras
dejarlo reposar algunos minutos. se recoge la sustancia y el desinfectante con material absorbente (los
cojinetes absorbentes son tiles para derrames grandes) A continuacin se coloca el material contaminado
en un recipiente para riesgos biolgicos: bolsas plstico grueso color rojo en el Per y bolsa de color
negro para basura domstica.
Despus de absorber la mayor parte de material, el rea se limpia con un desinfect8nte de fuerza
intermedia o alta, por ejemplo, dilucin de Leja 1:10. La solucin desinfectante se absorbe con material
desechable. El rea se enjuaga con agua y se seca para evitar que quede resbalosa. Es conveniente preparar
un conjunto de utensilios para limpiar derrames con riesgo biolgico que contenga todos los materiales
necesarios para efectuar la limpieza de este tipo y tenerlo a la mano en el laboratorio en que se manejan
dichas muestras.
SEGURIDAD QUIMICA
Hoja De Datos Sobre Seguridad De Materiales
En Agosto de .1987.)a OSHA enmend la norma Federal Hazard Communication Standard
29CFR 1919: 1200 (Rigllt to Kriow/HCS Standard), hacindola extensiva a todas las industrias,
incluyendo las instalaciones para el cuidado de la salud. Esta norma establece que los responsables de cada
rea determinen si se utilizan productos qumicos peligrosos en el trabajo y proporcionen a los empleados
hojas con datos de seguridad en el uso del material riesgoso y marquen adecuadamente los recipientes que
contienen el producto, indicando el riesgo, y se mantendr una lista de productos qumicos peligrosos, es
decir, un inventario de productos qumicos, y proporcionen al empleado informacin y entrenamiento, y
desarrollen un programa de comunicacin de riesgos por escrito.
Informacin que contiene la hoja de datos de seguridad para cada material grupo de sustancias
relacionadas, de uso en Laboratorio fisiolgico y otros Laboratorios biolgicos:
1. Identificacin del producto qumico (nombre qumico, y sinnimo y/o nombre vulgar.)
2. Ingredientes peligrosos
3. Datos fsicos
4. Datos de incendios y explosiones
5. Informacin de riesgos para la salud
6. Datos de reactividad
7. Procedimientos para derrames, fugas y desecho
8. Informacin de proteccin personal.
20 x1 (cuanto ms bajo es el numero mas es el grosor de la aguja, las de menor grosor pueden hemolizar
la muestra y las de mayor grosor se reservan para la obtencin de sangre para transfusiones).
TECNICA
1. El paciente debe estar acostado o sentado cmodamente y con el brazo apoyado en una mesa o
soporte. Algunas pacientes en especiales los jvenes pueden sufrir malestar o incluso
desmayarse. Por tanto mantngase alerta ante seales como palidez o piel fra.
2. Coloque el torniquete con un medio lazo para poder retirarlo fcilmente. No efectu demasiada
presin ya que puede detener la circulacin arterial.
3. Pida al paciente que abra y cierre el puo un par veces para obtener mayor distensin de las
venas. Algunas veces las venas no se ven con claridad pero se palpan.
4. Una vez elegido el sitio de puncin se procede a limpiar con alcohol y se deje secar. Enseguida se
fija la vena sosteniendo el brazo del paciente con la mano mientras se estiran y comprimen con el
pulgar y los tejidos blandos situados justo debajo del escogido para punzar. La jeringa se sujeta
entre el pulgar y los tres ltimos dedos de la otra mano y sus dorsos se apoyan con el brazo del
paciente. El dedo ndice se coloca sobre el casquillo de la aguja y sirve como gua. El bisel de la
aguja debe quedar hacia arriba.
5. Cuando la vena es prominente se punza en forma directa con la aguja colocada horizontal y
dirigida en paralelo a la vena. Al perforar la pared se percibe una sensacin de crujido. Cuando el
acceso a la vena no es tan perceptible, la puncin se efecta en dos tiempos: primero se punza la
piel y luego la vena. Para que la sangre entre a la jeringa se hace una traccin ligera sobre el
embolo evite realizar una traccin excesiva porque la vena puede contraerse e impedir el paso de
la sangre hacia la jeringa. Algunas veces al puncionar se traspasa la vena; entonces debe retirarse
ligeramente la aguja al verificar la entrada de la sangre. Esta operacin puede producir
hematomas; si se advierte seales de extravasacin de sangre a los tejidos, retire la aguja de
inmediato y aplique presin local.
6. Antes de retirar la aguja, quite el torniquete y pida al paciente que abra el puo. En cuanto se
adquiera la destreza necesaria, esta ltima operacin se efecta cuando la sangre termina de
entrar a la jeringa. El paciente debe mantener la presin con una torunda en el sitio de la puncin
y el brazo flexionado durante unos minutos para evitar hematomas.
7. Tras la obtencin de la sangre, se retira la aguja de la jeringa con una pinza de metal y con un
movimiento de torsin y con la ayuda de otra pinza se coloca el extremo del embolo sobre la
pared interna del tubo. Nunca realizar el reenfundamiento de la aguja sin pinzas . La sangre
se vaca suavemente para evitar que se forme espuma y produzca hemlisis. Si la determinacin
que se va efectuar exige sangre completa o plasma la muestra se coloca con un tubo con
anticoagulante y se invierte con suavidad varias veces para mezclar. Si en cambio se desea
obtener suero, la sangre se coloca en tubo, de preferencia de 37 C para que el cogulo se forme
ms rpido. La retraccin del cogulo puede acelerarse separando de la pared del tubo con un
aplicador de madera. Es imperativo usar destructores de agujas en todos los casos.
USO DE VACUTAINER
En muchos laboratorios se utilizan actualmente los tubos Vacutainer para obtener las muestras de sangre
venosa, en lugar de las jeringas. Los tubos estn sellados con un tapn de goma y extraen un volumen de
sangre predeterminado. La aguja desechable se enrosca en el tubo de manera que el tapn de goma alcanc
justo la lnea gua. La aguja ms corta se mete dentro del tapn de goma, pero no penetra y por lo tanto no
rompe el vaci. Una vez que se tiene la certeza de que la aguja ha abordado la vena, se empuja el tubo
hasta el fondo del sujetador lo que rompe el vaco y la sangre entra al tubo. Cuando el flujo cesa, el tubo se
retira y si se desea puede sustituirse por el otro para obtener otra muestra .No debe usarse el Vacutainer
para dosaje de gases arteriales.
SANGRE ARTERIAL
Para la determinacin de gases se requiere puncin arterial. En esos casos la arteria se ubica localizado el
latido por palpacin muy cuidadosa. La puncin es necesariamente ms profunda y se requiere mayor
cautela para impedir hematomas. Debe practicarla el mdico.
ANTICOAGULANTES
Los cuatro anticoagulantes mas usados son una mezcla de oxalato amoniaco y potasio, citrato trisodico,
Sequestrene (EDTA) y heparina. Los tres primeros impiden la coagulacin al sustraer el calcio del plasma
sanguneo por precipitacin o fijacin en forma no ionizada, e inhibe la activacin de los factores de la
coagulacin.
El citrato trisodico se utiliza para impedir la coagulacin de la sangre destinada a transfusiones. El
Sequestrene y la heparina pueden servir para el mismo fin, pero no la mezcla de oxalatos porque es toxica.
La mezcla de oxalato de amonio y (6partes) y oxalato potasio (4partes) en la cantidad de 2 mg/ml de
sangre no afecta el volumen globular medio y puede usarse para hemoglobina, hematocrito y recuentos
globulares. En frotis de sangre su utilidad esta limitada a los primeros minutos por que se desarrollan con
rapidez formas dentadas en los hemates, vacuolizacin en el citoplasma de los granulocitos y artefactos
en los ncleos de linfocitos y monocitos y otras deformidades. Asimismo, la sangre tomada con esta
mezcla de anticoagulantes no puede emplearse para determinados qumicas de nitrgeno ni potasio.
El citrato trisdico en solucin acuosa al 3.8%, se mezcla a razn de 1/9 con sangre para investigaciones
de coagulacin. El Sequestrene (EDTA) se emplea en una concentracin de 1 a 2 mg/ml de sangre. La
sal di sdica o di potsica de Etilendiaminotetracetato es tal vez el anticoagulante que mas se emplea para
el recuento de las clulas sanguneas. Hay que mezclarlo minuciosamente con la sangre. Para el estudio
del hematocrito es equiparable al oxalato y para estudios morfolgicos lo supera, ya que impide la
deformacin y artefactos incluso despus de un reposo prolongado. Se consiguen frotis aceptables aun
cuando hayan pasado 2 o 3 hs y hasta 24 hs si la sangre se refrigera. Tambin es posible realizar el
recuento de plaquetas aun despus de unas pocas horas.
La heparina, a razn de 0.1 a 0,2 mg/ml de sangre, no afecta el tamao corpuscular ni el hematocrito. Es el
mejor anticoagulante para prevenir la hemlisis y para las pruebas de fragilidad osmtica. No resulta
satisfactoria para recuentos de leucocitos o cuando han de prepararse frotis (o extensiones de sangre por
que en este segundo caso produce un fondo azul en las preparaciones teidas con el colorante de Wright.
Los compartimientos de animales deben estar bien iluminados y ventilados .Se procurara conservar a una
temperatura uniforme, da y noche.
IDENTIFICACION DE LOS ANIMALES
Es conveniente adoptar un sistema seguro para la identificacin de los animales .La prctica de rotular las
jaulas sirve para la distincin de los lotes numerosos de animales aun cuando para conseguir un registro
completo conviene numera a cada animal y anotar los detalles relativos al sexo, descripcin, etc.
Chapas.
Para los conejos y cobayos pueden emplearse unas pequeas chapas de aluminio que se fijan a una oreja
de animal por medio de una grapa o un hilo metlico que perfore estos rganos y atraviese tambin los
orificios de las chapas.
Para los animales de mayor tamao pueden adquirirse identificadores especiales ..Pueden obtenerse en las
casas de artculos veterinarios.
Descripcin.
Cuando se use nicamente este mtodo de identificacin y haya que alojar juntos en una misma jaula
varios animales, deben seleccionarse los que presenten seales o colores diferentes .Para facilitar el
registro debe disponerse de sellos de goma con dibujos de ratn , cobayo o conejo. Este mtodo se
utiliza junto con el de la chapa metlica a fin de asegurar la identificacin si la chapa se perdiera.
Asimismo, debe anotarse cuidadosamente cualquier deformidad o sea particular .El sexo debe registrarse
en la descripcin (macho y hembra).
Seales o marcas para identificacin de animales
Los animales pequeos, como ratones y ratas, pueden marcarse en el cuerpo o en la cola pintndose la
piel y el pelo con colorantes (soluciones alcohlicas saturadas de fucsina o cido picrico).Las jaulas
habrn de rotularse.
Una vez terminado el experimento deber lavarse la superficie de las mesas con una solucin
desinfectante; algunas veces es recomendable trabajar sobre una toalla humedecida en una de estas
soluciones, como por ejemplo lisol o tricresol al 2 por 100.
Las pipetas, tubos de ensayo y dems instrumentos empleados en la experimentacin fisiolgica tambin
se desinfectarn con una solucin lisol o tricresol al 2 por 100, o se esterilizarn inmediatamente por
ebullicin durante 20 minutos o autoclave ( vapor caliente a presin) 15 lb presin vapor por 15 min
que es lo ideal.
Los recipientes, lminas vidrio , portaobjeto, u otro material contaminado con orina heces secreciones
biolgicas de los animales, contaminados con productos biolgicos humanos, no se volvern a tocar por
ningn concepto sino que se sometern a un proceso de desinfeccin inmediata, como hemos indicado
lneas ms arriba
Los calentadores y dems aparatos elctricos se comprobarn con frecuencia para verificar la exactitud de
su funcionamiento, reparando sin prdida de tiempo sus averas a fin de evitar cortos circuitos
incendios .El mechero de Bunsen no debe utilizarse nunca en la proximidad de materias inflamables
.Siempre se verificara que la llave de mechero quede bien cerrada antes de retirarse del Laboratorio ,
igualmente se asegurar de cerrar la llave del baln contenedor del gas la llave general del gas del
Laboratorio de ser el caso. El ter, el alcohol y similares deben mantenerse alejados de todo posible
contacto elctrico. El Jefe del Laboratorio tiene la obligacin de organizar un protocolo y horario anual de
mantenimiento preventivo de todos los equipo de Laboratorio.
diferentes concentraciones estn separadas por una membrana semipermeable, el solvente por ej el agua
atraviesa la membrana siguiendo las leyes que rigen el fenmeno de la smosis.
El agua es transportada a travs de la membrana celular por una fuerza hidrosttica llamada presin
osmtica, dicho de otro modo, la presin osmtica es la fuerza de atraccin que ejercen las partculas
sobre el agua atrayndola. El agua viajar desde la solucin de menor concentracin hacia la de mayor
concentracin de partculas. La osmolaridad depende del nmero de partculas que se encuentran es
solucin. La Unidades de Osmolaridad son el Osmol /Kg H2O , en medicina usamos el sub mltiplo mili
Osmol /Kg H20
Un Osmol por Kg es la fuerza para atraer agua que ejerce un MOL de partculas que se encuentran en 1
Litro Kg de solucin. Cada partcula (tomo) ejerce una presin osmtica independientemente; por
ejemplo un mol de glucosa disuelto en un Kg (litro ) de agua ejerce una presin osmtica de 1 Osmol /kg
agua; en cambio un mol de ClNa disuelto en un litro de agua ejercer una presin Osmtica de dos
Osmoles debido a las dos partculas en que se disocia, una de sodio y otra de cloro. (Na+ y Cl- )
La capacidad de una partcula para producir un flujo de agua a travs de la membrana celular se llama
tonicidad.
Una solucin extracelular que permite que el agua fluya hacia dentro de la clula haciendo que sta se
hinche se llama hipotnica (Hipoosmolar)
Una solucin que permite que el agua fluya hacia fuera de la clula se llama hipertnica. (Hiperosmolar)
La membrana del glbulo rojo nos servir en la presente prctica para demostrar este fenmeno y
asimismo demostrar que la membrana tiene ciertos lmites de resistencia normales a variaciones de
la tonicidad en el medio interno.
Aplicacin clnica.
Existen algunas enfermedades en las cuales se producen alteraciones en la membrana que generan
hemlisis por mayor fragilidad de la membrana, son defectos genticos heterogneos que afectan a las
protenas constitutivas de la membrana del eritrocito. La Enfermedad Esferocitosis es una de ellas, en la
en la cual se ha demostrado una disminucin de la protena membranal Espectrina del hemate, y el grado
de dficit de la protena Espectrina parece asociarse con la gravedad clnica de esta enfermedad, pues los
hemates son muy frgiles y se hemolizan produciendo anemia intensa.
Fundamento
Se llama resistencia globular osmtica a la que presentan los hemates suspendidos en soluciones salinas
hipotnicas. Si empleamos soluciones salinas de 0.76 a 0.9 % y suspendemos dentro de ellas los hemates
veremos que stos se conservan sin alteracin durante varias horas, y que una vez sedimentados
(espontneamente por centrifugan), el lquido que sobrenada es claro y transparente como la misma
solucin salina. Pero si efectuamos suspensiones de hemates en soluciones de cloruro sdico a
concentraciones progresivamente decrecientes
observaremos que al llegar a una determinada
concentracin empiezan a destruirse, liberndose la Hb, lo que confiere al lquido una ligera coloracin
rojiza que no desaparece por centrifugacin. Esto se le llama hemlisis inicial o resistencia mnima, que
normalmente se presenta entre las concentraciones de 0.46 y 0.42 %.Esta hemlisis de los hemates va
aumentando en cantidad a medida que la solucin de cloruro sdico va siendo ms hipotnica hasta
presentarse una hemlisis total. Esta hemlisis total se observa entre las concentraciones de 0.34 a 0.30 %
Esta prctica sirve para determinar la resistencia de la membrana de los glbulos rojos a la hemlisis en
presencia de diferentes concentraciones de soluciones salinas hipotnicas a temperatura ambiente y
veremos en cul de ellas se presenta hemlisis inicial y total.
.
Reactivos y Equipos Necesarios
1. Solucin salina(NaCl) al 1 %
2.-Pipetas graduadas: 1 ml al 0.01
10 ml al 0.1
5 ml al 0.1
NOTA: en esta prctica y en TODAS las dems, los alumnos trabajarn con las 2
manos enguantadas (guantes descartables), mascarillas, lentes protectores y mandil
blanco de trabajo, el cual solo se usar para este fin: todo esto es rigurosamente
obligatorio.
MTODO:
1.- Preparar soluciones seriadas, en tubos de prueba marcados del 1 al 19, segn la tabla adjunta,
haciendo las diluciones con agua destilada segn lo indicado:
Marcar 19 tubos de prueba y repartir as:
N
Tubo
Solucin
NaCl
1%
(ml)
Agua
Destilada
(ml)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
1.0
2.0
3.5
3.75
4.25
4.50
4.75
6.0
7.5
8.0
8.5
------
9
8
6.5
6.25
5.75
5.5
5.25
4.0
2.5
2.0
1.5
10.0
Mezclar
Por
inversin
% NaCl de la sol.
resultante
S
S
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Si
---
0.10 %
0.20 %
0.35 %
0.375 %
0.425 %
0.45 %
0.475 %
0.60 %
0.75 %
0.80 %
0.85 %
0
%
2.- Una vez hecha la distribucin anterior, mezclar bien, por inversin cada uno de
los tubos. NO OLVIDAR ESTE PASO.
3.- Recin ahora, despus de haber mezclado, aadir 0.1 ml de sangre venosa desfibrinada cada uno de los
tubos.
4.- Tapar los tubos y mezclar nuevamente por inversin suave.
5.- Dejar en reposo 10 minutos a temperatura ambiente y luego volver a mezclar
por inversin suave.
6.- Centrifugar a 2000 rpm. Durante 10 minutos.
Examinar por simple inspeccin visual, para detectar en cul de los tubos se inicia la hemlisis
(hemlisis leve), generalmente a partir del tubo N 8, de 0.425 % NaCl (lo que se manifiesta por el color
ligeramente rojizo del lquido) y luego examinar en qu otro tubo la hemlisis es intensa
(aproximadamente en 0.36 % NaCl ).
Existe un intercambio continuo de sustancias entre el medio ambiente y el organismo, a travs de los
epitelios drmicos, digestivos y respiratorios.
Dentro del mismo organismo existe un intercambio entre los espacios intracelulares y extracelular.
Algunas sustancias pueden atravesar la membrana celular por difusin pasiva .Otras requieren consumir
energa para moverse a travs de las membranas contra sus gradientes de concentracin .Estos fenmenos
de difusin pasiva y transporte activo permiten la creacin de una composicin orgnica diferenciada.
La piel del sapo no solamente separa al espacio extracelular del medio ambiente, sino que permite el
pasaje de muchas sustancias, incluyendo el agua, el sodio, el cloro y la glucosa. La direccin del
intercambio depende del tipo de transporte involucrado y de la gradiente de concentracin de los solutos.
Cuando cambia la composicin del lquido extracelular los riones excretan las sustancias presentes en
excesos o reabsorben las necesarias para lograr preservar la homeostasis.
Material
20 sapos
Beakers
Agua destilada
Solucin de NaCI 0.68%
Solucin de dextrosa al 7.74 %
Solucin de dextrosa al 3.87 %
Hilos para ligadura
Balanza para animales pequeos
Urinmetro peditrico tipo refractmetro
Glucocintas
Tubos de ensayo
Pipetas de Pasteur
Goteros
Pinzas mosquito
Experimento N 1: Preparacin del animal y determinacin del peso .
Durante la noche previa al experimento se debe mantener a los sapos en un ambiente hmedo para que
estn adecuadamente hidratados.
Antes de la pruebas se vaca la vejiga de todos los animales y se liga la cloaca para analizar la orina
formada en condiciones experimentales. Si se coloca un sapo en una solucin de dextrosa y luego se
encuentra dextrosa en la orina, puede deducirse que fue absorbida a travs de la piel hasta alcanzar una
concentracin suficiente en liquido extracelular que obligase a los riones a excretar el exceso en la
orina. Los sapos son colocados en soluciones de diferente tonicidad y se les inyecta distintas soluciones
para producir cambios en la composicin de los lquidos corporales.
Los animales son pesados antes de realizar la prueba y despus de haber vaciado sus vejigas. Los cambios
de agua corporal se determinaran pesando a los sapos antes y despus de la exposicin a distintas
condiciones experimentales.
Para cerrar la papila cloacal se la toma con las pinzas mosquito y se liga con firmeza, sin llegar a cortar la
piel , pero lo suficientemente fuerte para prevenir el escape de orina .Despus de esto se pesa al sapo y
se registra su peso.
Experimento N2
Se inyecta a los sapos 4ml de una solucin en el saco linftico dorsal. Esta solucin puede ser hipotnica,
hipertnicas o isotnicas; de cloruro de sodio o dextrosa , tambin inyectaremos en algunos casos agua
destilada .Se vuelve a pesar para confirmar que todo el lquido inyectado se encuentre en el animal.
Se colocan 150 ml de lquido en un beaker de 250 ml y se pone al sapo dentro de l. El lquido debe
cubrir la mitad inferior del animal pero el punto de inyeccin debe permanecer por encima del nivel .Se
tapa el beaker Se pesa el sapo a intervalos de 30 minutos hasta por 8 horas. Se registra los cambios
obtenidos:
En el Saco Linftico dorsal inyectar 4 ml de cada solucin indicada:
Bao
Saco
Peso
del
Glucosa
Peso al final
Glucosuria
1
2
3
4
externo
linftico
(inyecta
r 4 ml).
NaCl
0.68%
agua
Agua
Dextros
a 3.87%
Agua
Dextros
a 7.74%
sapo
al
inicio del
experiment
o
en orina
basal
(inicial)
del
experimento
post
experimento
(final)
NaCl
0.68%
Agua
Dextrosa
3.87%
Dextrosa
3.87%
Experimento N 3
Despus de 2 horas, se saca el sapo del beaker y se retira la ligadura de la cloaca .Se vaca comprimiendo
el abdomen y se recolecta la orina.
Se pesa nuevamente al sapo .La diferencia entre este peso y el obtenido inmediatamente antes de quitar la
ligadura es igual al peso de la orina recolectada. La diferencia entre el peso despus de recolectar la orina
del animal y el peso inicial antes de sumergido equivale al peso ganado o perdido durante el experimento.
Se debe tomar en cuenta el peso despus de inyectar los 4ml.de solucin en los sacos dorsales .Se calcula
el porcentaje de variacin de peso con respecto a la medida inicial y se registra la cantidad de orina
formada durante el experimento.
Experimento N 4: Anlisis de glucosa en orina del sapo.
La glucosa se determinara en la orina del sapo mediante el mtodo de la glucocinta.
ESTIMULACIN MUSCULAR
Introduccin
Los tejidos neural y muscular tienen la propiedad de excitabilidad y responden a estmulos, es decir
variaciones del medio qumicas o fsicas, tales como alteraciones de la temperatura, deformacin
mecnica, estmulo elctrico, etc.
En los fenmenos estmulo respuesta, la respuesta depende de las caractersticas del estmulo y de las
condiciones del tejido estudiado. La descripcin correcta de la relacin entre estmulo y respuesta
requiere el control de la duracin, intensidad y frecuencia del estmulo.
Las relaciones estimulo-respuesta se desarrollan en funcin al tiempo y al espacio.
Material
Sapos grandes
Tabla de fijacin para Alambre de cobre -Zinc
Estimulador elctrico Equipo de diseccin
Mtodo
Experimento N 1
Anestesiar el animal con Halotano, ter o Cloroformar al animal. Se anestesia al sapo por destruccin del cerebro y la mdula
espinal.
a) Coger un sapo grande con una toalla de papel para que ste no resbale (utilice los guantes de ltex) y
colocarlo sobre la palma de la mano que va a sujetarlo, quedando el sapo en decbito ventral en relacin
a la palma, despus colocar su cabeza entre los dedos ndice y medio, flexionando sta en sentido ventral
de tal manera que forme un ngulo de 90 en relacin al cuerpo. b) Con el estilete de acero se traza una
lnea imaginaria que pase por el plano sagital de la cabeza del sapo y otra en sentido transversal que
pase por atrs de las membranas acsticas( membrana timpnica), y en el lugar en donde se cruzan
estas dos lneas, se introduce el estilete grueso unos 2 mm. aproximadamente en sentido perpendicular a
la cabeza y se gira hacia derecha e izquierda abarcando 180 grados para lograr la seccin medular
completa. Observaremos EL SHOCK ESPINAL.
A todo lo largo del nervio se ir seccionando sus colaterales y se lo aislar hasta la rodilla, comprobando
que exista conexin funcional entre el nervio y el msculo gastrocnemio. Una vez que el nervio ha sido
aislado, se debe evitar que se seque humedecindolo constantemente en solucin fisiolgica.
Experimento N 3
Se toma la pata del animal y se pasa un hilo por debajo de la aponeurosis plantar, amarrndola
fuertemente. La ligadura queda ubicada proximalmente y se realiza la diseccin de la aponeurosis, que en
el sapo se contina hacia la pierna por el tendn de Aquiles que tiene un sesamoideo.
Se libera el tendn de Aquiles por diseccin roma y se separa el gastrocnemio hasta llegar a su insercin
superior. Con un golpe de tijera se secciona la tibia por debajo de la rodilla y el fmur un poco por encima
de esta. Se libera el fragmento de fmur del exceso del tejido muscular y se le hace una fuerte ligadura.
Con cuidado se coloca el electrodo sobre el nervio y se procede a estimular la preparacin neuromuscular.
Con el estimulador elctrico se realiza el estmulo de menor intensidad y se incrementa gradualmente
hasta obtener una contraccin muscular este es el nivel de umbral que genera la respuesta de contraccin.
Con el estmulo elctrico de esta misma intensidad se continuara la estimulacin durante todo el
experimento (estimulo superior al umbral).
Humedecer
constantemente
la
preparacin
con
un
got
ero.
Experimento N 4: fenmeno de la escalera
Se realizan descargas simples para buscar el umbral de estimulacin y despus se disminuye el voltaje
para obtener el estmulo subliminal.
Luego de repetir la estimulacin por un tiempo se observar que las contracciones son cada vez ms
amplias, de mayor intensidad hasta alcanzar un valor mximo. Este incremento progresivo de la amplitud
es lo que se denomina el fenmeno de la escalera.
Experimento N 5: tetania
Se realizaran estimulaciones intensas, muy rpidas y/o continuas y se obtendr una serie de contracciones
sucesivas de modo que las estimulaciones no permitan que termine la sacudida anterior y continuaremos
as hasta obtener una contraccin sostenida, permanente, intensa y que es lo que denominamos tetania.
Discusin:
Placa Mioneural
La placa mioneural media la transmisin de la seal de la fibra nerviosa motora a la clula muscular. Salvo en el caso
de las fibras musculares intrafusales, existe una sola placa terminal por cada fibra muscular. A medida que el axn del
nervio se acerca a su fin emite varias ramas, cada una de las cuales inerva una fibra muscular. Ests ramas terminales
son de poco dimetro y carecen de mielina, por lo que la velocidad de conduccin en ellas es baja. La placa mioneural
es una discontinuidad entre la clulas nerviosa y la muscular donde la transmisin del impulso de despolarizacin
queda a cargo de un mediador qumico, la ACh acetilcolina. La terminal presinptica posee vesculas
sinpticas, las cuales han sido sintetizadas en el soma neural, y presenta canales de membrana de sodio y
calcio dependientes del voltaje.
La generacin del potencial de accin da lugar a la apertura de los canales de calcio y se incrementa la
concentracin citoslica de calcio. Este incremento promueve la fusin de las vesculas sinpticas con la
membrana citoplasmtica del rafe sinptico, liberando acetilcolina. La acetilcolina acta sobre receptores
nicotnico presentes en el miocito y produce despolarizacin de la membrana celular muscular. Este
fenmeno es denominado potencial de la placa terminal.
Este potencial de accin excita a las miofibrillas para que se contraigan. Para el control de la actividad
muscular existe adems una va inhibitoria recurrente, es decir, un mecanismo de retroalimentacin
negativa que mejora la resolucin espacial de la accin neural. Esta va inhibitoria provee un mecanismo
para evitar la contraccin muscular persistente.
El axn de la motoneurona A sale de la sustancia gris a nivel de la medula espinal, pero emite antes una
rama colateral, la rama recurrente. Esta rama se desprende a partir del primer ndulo de Ranvier,
permanece dentro de la materia gris ventral y pasa medialmente y dorsalmente. Est rama forma sinapsis
con interneuronas que se encuentran en la regin ventromedial del asta anterior y son denominadas clulas
de Renshaw. Sus axones se proyectan hacia las motoneuronas , tanto hacia aquella en la cual se origin la
primera sinapsis desde el hasta dorsal, representada como la motoneurona A, y a sus vecinas,
representadas como motoneuronas B, terminan en sinapsis inhibitorias. La transmisin de este sistema
inhibitorio est a cargo de la glicina.
Existen adems unas Protenas llamadas PROTENAS SNARES que median la fusin de las vesculas y
las ayudan a pegarse a la porcin distal del botn sinptico para favorecer la exocitosis y salida del botn
terminals al espacio sinaptico espacio sinptico Snare es ( Acrnimo de Soluble N Atachment Protein).
Succinilcolina
Vecuronio
Neostigmina
Atropina
Mtodo
Experimento N 1
Despus de anestesair al animal con Halotano, ter o Cloroformo ,generamos un shock espinal.Se diseca y
se expone el nervio citico en la cara posterior de ambos muslos, evitando lesionar la arteria femoral que
corre paralela al nervio.
En una de las extremidades, se separa el nervio de la arteria y se procede a ligar alrededor del msculo y
de la arteria, dejando libre al nervio.
Se aplica estmulos de baja intensidad a los nervios citicos y se va incrementando su intensidad hasta
obtener la contraccin muscular.
Luego se estimula directamente al msculo gastrocnemio a travs de una incisin hecha en la piel.
Experimento N 2
Se administra 1 mL de succinilcolina en el saco linftico dorsal del sapo. Luego de unos minutos se
procede a estimular con el carrete de induccin ambos citicos.
Experimento N 3
Se administra 1 mL de vecuronio en el saco linftico dorsal del sapo. Luego de unos minutos procede a
estimular con el carrete de induccin ambos citicos.
Experimento N 4
Se administra 1 mL de solucin de atropina y neostigmina en el saco linftico dorsal del sapo. Luego de
unos minutos se procede a estimular con el carrete de induccin ambos citicos.
Discusin
La succinilcolina es un bloqueador muscular despolarizante. Inicialmente simula el efecto de la
acetilcolina, produciendo apertura de los canales inicos y despolarizacin persistente. Inicialmente puede
producir excitacin, la que se manifiesta por fasciculaciones transitorias. Esta fase es seguida por el
bloqueo de la transmisin neuromuscular y parlisis flcida.
La estricnina acta a nivel de la medula espinal, bloqueando la sinapsis inhibitoria de las clulas de
Renshaw sobre las motoneuronas , en las que ejerce el rol de antagonista competitivo selectivo que
bloquea los efectos inhibitorios de la glicina.
La estricnina produce aumento de los impulsos nerviosos sucesivos, creando contracciones similares a las
tetnicas. Origina una contraccin muscular sostenida de extensores y flexores y espasmo muscular
persistente.
REFLEJOS EN EL SAPO
Leyes Pfluger, Turck, Sumacion Espacial, Sumacion Temporal
ablacin medular.Aprendamos primero que es el Shock espinal:
y efecto de la
Material
Sapo
Beakers, estilete de acero,
Carrete de Runckford
Acido sulfrico diludo 0.1 %; 0.2%; 0.3 %; 0.4%; 0.5 %; 1% sol. acuosas.
Suero fisiolgico
Equipo de diseccin, guantes ltex descartables
Sol.Ringer para batracio.
Mtodo
Experimento N 1: PREPARACIN DEL SAPO ESPINAL
Observar la postura, los movimientos espontneos y respuesta a los diversos estmulos, movimientos
respiratorios, reflejos del salto, respuesta a la rotacin y posicin de espalda del sapo normal.
Se anestesia el sapo igual que en las practicas anteriores y luego se fija al animal con la mono izquierda y
se determina lasa siguientes lneas: una lnea transversal a nivel del lmite posterior de la membrana
timpnica ( A-B), Una segunda lnea entre el ojo y la membrana timpnica (X-Z). Se toma una tijera y se
introduce uno de sus extremos en la boca del animal y se lo decapita con un solo golpe, procurando que en
este momento el sapo se encuentre con el dorso hacia abajo, a lo largo de la lnea X-Z Realizar hemostasia
por compresin y realizar las mismas observaciones que en el sapo normal. Este es el sapo descerebrado.
En este caso, el sapo puede realizar movimientos complejos tales como saltar y si se coloca de espalda
puede regresar a la posicin normal.
En otro sapo hacer las observaciones del tono y la respuesta a la estimulacin elctrica y luego realice el
corte a lo largo de la lnea A-B. Inmediatamente se observa el tono y la actitud postural del animal y se
efecta el pinzamiento de uno de sus dedos. Se objetivar la depresin motora que constituye uno de los
componentes del shock espinal, ademasno se encuentra los resultados del sapo descerebrado.
Se espera unos minutos y se observa nuevamente el tono y la actitud postural del animal y se efecta el
pinzamiento de uno de sus dedos. Se objetivar las respuestas motoras.
Experimento N 2: leyes de Pfluger
Se pasa un hilo a travs de un orificio hecho en el piso de la boca y se cuelga al sapo espinal de un
estativo.
A continuacin se efecta una secuencia de estmulos graduados: pellizcos, los que producen respuestas
determinadas:
a Ley de UNILATERALIDAD.- Se pellizca suavemente un dedo y se produce contraccin de la
misma pata solamente.
b Ley de SIMETRA.- Se pellizca con mayor intensidad el dedo y se produce contraccin de la
misma pata y de la pata opuesta.
c Ley de IRRADIACIN.- Se pellizca fuertemente un dedo y se produce contraccin de la misma
pata, de la pata opuesta y finalmente de las extremidades anteriores.
d Ley de GENERALIZACIN.- Se pellizca muy fuertemente un dedo y el animal se contrae y se
mueve enrgicamente.
Experimento N 3: experiencia de Turck
Se emplea la preparacin de sapo espinal. Se la cuelga de un estativo y se espera que est en reposo.
Se prepara varios beakers con concentraciones crecientes de CIDO SULFRICO desde 0.1, 0.2, 0.3,
0.4, 0.5 y 1%. Se sumerge la pata del animal en cada una de las distintas soluciones, empezando por la de
menor concentracin; se espera y se registra el tiempo necesario para la respuesta. Una vez que se haya
producido la respuesta, se lava la pata del animal en suero fisiolgico antes de pasar a la solucin
siguiente.
Se observa y se registra las caractersticas y tipo de respuesta en cada caso.
Experimento N 4: sumacin temporal
Se sumerge la pata del animal en una solucin de cido sulfrico al 0.1% varias veces. Se observa el
incremento progresivo de la respuesta.
Experimento N 5: sumacin espacial
Se sumerge en una solucin de cido sulfrico al 0.1% primero la punta del dedo, luego el dedo completo,
toda la la pata yal final hasta la rodilla. Se observa la mayor intensidad de las respuestas.
Experimento N 6
Se introduce un estilete dentro del canal vertebral y se destruye la mdula. Despus se repite las mismas
estimulaciones hechas previamente.-
regresar al rgano efector, son de este tipo. Los reflejos espinales no requieren de intervencin del sistema
nervioso central y funcionan igualmente bien en un animal cuya mdula se ha seccionado por encima de la
localizacin de las neuronas de los nervios correspondientes.
Las inserciones tendinosas de los msculos poseen receptores sensitivos especiales que responden a ala
distensin y envan la informacin al sistema nervioso central sobre la posicin de un msculo o de un
miembro. Cuando estos receptores tendinosos son estimulados por una distensin rpida y brusca, mandan
impulsos a la mdula espinal y, a travs de una sinapsis a la motoneurona anterior que inerva el msculo.
Esta neurona manda impulsos al msculo y produce una sacudida rpida.
La respuesta de los reflejos espinales puede incrementarse elevando el nivel de excitacin de la mdula
espinal. Esta facilitacin puede conseguirse haciendo que el sujeto enganche sus manos y tire con fuerza.
Material
Sujeto de prueba
Martillo de reflejos
Mtodo
Experimento N 1: reflejo rotuliano
Se sienta al sujeto en una posicin cmoda y cruza las piernas. La pierna superior debe estar relajada. Por
palpacin, se localiza el tendn rotuliano y se da un golpe seco con el martillo de reflejos. La respuesta
adecuada es la contraccin del cuadriceps, lo que produce extensin de la pierna.
Experimento N 2: reflejo aquiliano
El sujeto se pone de rodillas sobre una silla y deja colgar fuera los pies sin contraccin de los msculos de
las pantorrillas. Se busca el tendn de Aquiles y se estimula. La respuesta apropiada es la contraccin de
los msculos gemelos y del sleo, lo que produce extensin del pie.
Experimento N 3: reflejo bicipital
El sujeto flexiona su antebrazo sobre el brazo, mientras el examinador soporta el antebrazo. Se busca el
tendn del bceps con el pulgar de la mano que sostiene el antebrazo, se deja el pulgar sobre el tendn y se
da un golpe sobre el pulgar. la respuesta apropiada es la contraccin del bceps, lo que produce flexin del
antebrazo.
La estimulacin de un receptor tctil de la piel es transmitida por la va del asta posterior (sensitiva) hasta
la corteza somestsica. En esta la excitacin del receptor activa un determinado nmero de neuronas que
constituye su campo cortical. Sin embargo, no todas las neuronas de este campo se estimulan en la misma
magnitud, sino que las que corresponden al centro del campo descargan de forma mxima y las de la
periferia en menor magnitud. Este contraste es el que permite localizar el punto exacto de estimulacin.
Las capacidades tctiles se determinan en muchas ocasiones por la posibilidad de discriminar dos puntos
de estimulacin sobre la piel.
Las diferencias en las capacidades de discriminacin en las diferentes zonas del cuerpo se deben al
nmero de receptores que exista en esa zona y a la representacin cortical que stos poseen. Los dedos
estn profusamente poblados de receptores y el rea de corteza a que llega la informacin proveniente de
ellos es amplia, de ah su mayor posibilidad de discriminacin. Otras zonas del cuerpo tienen menor
densidad de receptores siendo ste uno de los factores que conlleva a que la informacin que llega al rea
de la corteza sea reducida y, por lo tanto, sea menor su posibilidad de discriminacin.
Cuando se estimulan dos puntos cercanos de la piel, cada uno excitar de forma mxima al centro de su
campo cortical; pero como los campos se superponen parcialmente, la resultante ser una excitacin
mayor, aunque se mantienen los mximos de excitacin separados.
El ser humano puede percibir diferentes grados de calor y fro, que pasan del fro glacial, al fro, al fresco,
a la temperatura indiferente, a lo tibio, caliente y quemante.
Objetivos
1. Discriminar procesos y modalidades de percepcin sensorial en el ser humano de tal manera que
pueda sistematizarlos.
2. Comprobar la distribucin anatmica de los receptores cutneos y la importancia fisiolgica de
dicha distribucin.
3.
4.
Materiales
Sello especial
Hoja de papel
Pelo de cerda (pelo de Von Frey)
Sujeto experimental (alumno 1)
Sujeto experimentador (alumno 2)
Procedimiento
1. Por medio de un sello especial marcar un rea en la piel de un compaero: cara, dorso del cuello,
antebrazo, dorso de la mano.
2.
3.
Luego el sujeto experimental deber cerrar los ojos y se le aplica por medio de un instrumento
sensibilizador llamado pelo de Von Frey, una ligera presin en cada uno de los cuadrantes del
rea delimitada por el sello.
4.
El sujeto experimental deber reportar las modalidades de sensaciones que percibe en la piel de
cada cuadrante (tacto, dolor, temperatura, otros).
5.
6.
Anotar cuantos puntos diferentes hay para cada una de las sensaciones investigadas.
Resultados
Materiales
Comps de doble punto.
Regla.
Sujeto experimental (alumno 1).
Sujeto experimentador (alumno 2).
Procedimientos
Para la realizacin de estos experimentos los estudiantes se dividirn por parejas, actuando cada uno como
sujeto experimental y como experimentador.
1. Indique a su compaero que cierre los ojos y se concentre en las sensaciones que va a percibir.
2. Aplique los dos extremos del comps de forma tal que lleguen simultneamente al rea de piel
estimulada. Se deber estimular las siguientes zonas: Yema de los dedos, antebrazo, cara y nuca.
3. En cada paso la separacin de las puntas del comps se aplicarn de forma tal que la diferencia
entre ellas sea diferente y, alternante, mantenindose constante para cada zona corporal esto es
0.5, 1, 1.5, 2, 2.5 y 3 cm.
4. Durante la aplicacin de las agujas, pregunte al compaero cuantos puntos discrimina y anote su
respuesta.
5. Analice el comportamiento de los receptores.
Resultados
Area de la Piel
Estimulada
Yema de los dedos
Antebrazo
Cara
Dorso del Cuello
Dorso de mano
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
Materiales
Tensimetro.
Cronmetro.
Sujeto Experimental (alumno 1).
Sujeto Experimentador (alumno 2).
Procedimiento
1. El sujeto de experimentacin deber sentarse cmodamente, colocando el brazo sobre la mesa de
modo que quede a nivel del corazn.
2. Coloque el manguito del esfigmomanmetro, completamente desinflado, alrededor del brazo de
manera que su borde inferior quede 2-4 cm sobre el pliegue del codo.
3. Aumentar la presin del sistema, con la pera insufladora, hasta alcanzar una presin de 200 mm
Hg.
4. Solicitar al sujeto de experimentacin que abra y cierre rtmicamente ambas manos.
5. Registrar el tiempo en que el sujeto empieza a reportar que siente dolor y el momento en que el
6.
7.
8.
Resultados
BRAZO
Derecho
Izquierdo
Inicia el dolor
Dolor insoportable
Desaparece el dolor
TIEMPO (MIN)
TEMPERATURA (C)
Insoportable
Izquierdo
PRUEBAS CEREBELOSAS
Marco Terico.
Anatoma.
Rol Fisiolgico.
Evaluacin de la Fisiologa Cerebelosa.
Sntomas y Signos de la alteracin Cerebelosa.
Tambin contribuye a la COORDINACIN DE LOS MOVIMIENTOS
POLIARTICULARES. Las fibras paralelas recorren una larga distancia en la
corteza del cerebelo, y en su recorrido pueden actuar sobre clulas de Purkinje
correspondientes a VARIAS ARTICULACIONES, COORDINANDO SU
ACTIVIDAD.
EL CEREBELO PARTICIPA EN EL APRENDIZAJE DE LOS
MOVIMIENTOS. MIENTRAS SE EST APRENDIENDO UN
MOVIMIENTO NUEVO SE PRODUCEN FRECUENTES ESPIGAS
complejas en las clulas de Purkinje. Esto produce depresin a largo plazo, por
lo que una vez que el movimiento se ha aprendido disminuye la frecuencia de
las espigas simples. Puesto que las clulas de Purkinje inhiben a los ncleos
profundos, la disminucin de las espigas simples produce una mayor actividad
de los ncleos profundos y de las vas motoras.
Colabora con los ncleos vestibulares en las funciones de mantenimiento
del equilibrio y de ajuste del reflejo vestibuloocular.
Las lesiones del vestibulocerebelo en un lado producen sntomas
parecidos a las lesiones de los ncleos vestibulares en el lado cotralateral. La
razn de esto es que, puesto que la corteza del vestibulocerebelo inhibe a los
ncleos vestibulares ipsolaterales, la lesin del vestibulocerebelo produce
hiperactividad vestibular ipsoateral, que equivale a una lesin de los ncleos
vestibulares contralaterales.
Espinocerebelo.
Incluye al vermis cerebeloso y la zona intermedia de los hemisferios
cerebelosos. El vermis junto con el ncleo fastigio se asocia a los movimientos
axiales (del tronco y raz de los miembros) y la zona intermedia de los
hemisferios cerebelosos se asocia a los movimientos la parte distal de las
extremidades. Por5 eso las lesiones del ,los hemisferios cerebelosos se asocian
con alteraciones de los movimientos de las extremidades partes distales. Y las
lesiones de la lnea media (VERMIS) producen inestabilidad en la marcha. Por
eso debe ampliar la base de sustentacin.
El espinocerebelo se encarga de controlar la ejecucin de los
movimientos. Recibe informacin por las vas espinocerebelosas de cmo se
estn realizando los movimientos, y si detecta que el movimiento comienza a
apartarse del objetivo deseado, enva seales correctoras. El ncleo fastigio
enva las seales correctoras al origen de las vas que controlan los
movimientos axiales, que son la vestibuloespinal y reticuloespinal, y el ncleo
interpuesto enva seales correctoras al origen de las vas que controlan los
movimientos distales, que son la va corticoespinal lateral y rubroespinal.
El espinocerebelo coordina la actividad de msculos agonistas y
antagonistas durante los movimientos. Regula la relajacin del antagonista
durante realizacin del movimiento, y tambin la contraccin del antagonista al
final del movimiento para frenarlo cuando llega al objetivo. Cuando se altera
produce el temblor intencional( no puede ensartar la aguja con un hilo).
Cuando se altera la parte lateral (hemisferio neocerebeloso se produce la ataxia,
disimetra, disdiadococinesia (juego sucesivo de palma- dorso de las manos
muy dificultoso) .
Cerebrocerebelo.
Comprende la parte lateral de los hemisferios cerebelosos y el ncleo
dentado.
Participa en la preparacin del movimiento. Recibe informacin de la
corteza, a travs de los ncleos del puente, sobre el movimiento que se desea
realizar, elabora el plan motor (determina qu msculos hay que contraer, y en
qu secuencia, para realizar ese movimiento) y enva ese plan motor a la corteza
motora, a travs del tlamo, para que se ejecute.:Cuando se retrasa esta accin
de descompone el movimiento en sus partes ( movimientos roboticos)
El cerebrocerebelo es necesario para el aprendizaje de movimientos
complejos (p. ej. aprender a tocar el piano).
El cerebrocerebelo tambin interviene en funciones cognitivas no
relacionadas directamente con el movimiento.
Evaluar Disdiadococinesia
Evaluar Temblor intencional
LESIONES DEL CEREBELO
Los sntomas de las lesiones cerebelosas se pueden comprender fcilmente si se conocen
las funciones del cerebelo:
Dismetra. Consiste en que el movimiento pasa de largo del objetivo,
porque los msculos antagonistas no se activan a tiempo para frenarlo
Temblor intencional. el temblor cerebeloso o intencional se acenta con
los movimientos voluntarios. Se produce porque se contraen a la vez los
msculos agonistas y antagonistas al realizar el movimiento
Disdiadococinesia. Dificultad para los movimientos alternantes y
repetitivos, como golpear rtmicamente con el dorso y la palma de la mano. Se
debe a la falta de coordinacin en la activacin alternante de agonistas y
antagonistas.
Disartria. Dificultad en el habla, por falta de coordinacin en los
msculos de la articulacin de las palabras.
Descomposicin de los movimientos. Cuando un movimiento implica a
varias articulaciones de un miembro, primero se mueve una articulacin y luego
otra.
Alteracin del equilibrio y nistagmus si la lesin afecta al
vestibulocerebelo
Las pruebas de audicin constituyen lo que se llama: Acumetra Puede ser Fnica o
Instrumental.
PRUEBAS DE AUDICION
TEST DE WEBER COMPARATIVO: ambos odos
Es una prueba de lateralizacin y generalmente se utiliza cuando la audicin por va area es diferente en
los dos odos.
En el odo normal y en el paciente con hipoacusia simtrica, no hay lateralizacin del sonido.
La prueba se realiza pellizcando las ramas de un diapasn de 500, 250 o 128 Hertzios y no golpendolas
para no originar armnicos, se coloca el mango del diapasn en la frente o en los incisivos superiores y se
le pregunta al paciente de qu lado oye mejor el sonido.
- Si el paciente afirma sentir el sonido ms fuerte hacia el odo hipoacsico quiere decir que se trata de
una sordera de tipo conductivo o de transmisin.
- Si el sonido del diapasn colocado en la frente o en los incisivos superiores lateraliza hacia el odo sano,
ello indica que el odo contralateral presenta una hipoacusia de tipo neurosensorial.
RESULTADO
Si el sonido se lateraliza hacia el lado sano, entonces es hipoacusia Neuro sensorial Derecha. Si
se lateraliza hacia el odo que escucha mejor, el odo Derecho enfermo peor prcticamente no
escuchara.
Si el odo Derecho (enfermo) escucha mejor, el sonido lateraliza hacia la izquierda, ser
hipoacusia de transmisin o de conduccin.
TEST DE RINNE
Compara la calidad de la Percepcin Auditiva por medio de 2 Vas:
AEREA
OSEA
Transmisin
Apfisis mastoides
Conduccin
(Investigamos un solo odo cada vez ; es monoaural)
PARA COMPARAR AEREA Y OSEA SE TOMA EL TIEMPO DE DURACION DEL SONIDO
CON CRONMETRO DESDE EL INSTANTE EN QUE COLOCAMOS EL MANFGO DEL
DIAPASON VIBRANTE EN HUESO MASTOIDES (INICIO) HASTA QUE DES APARECE
EL SONIDO
TEST DE RINNE:
Tiene por objeto comparar la audicin de un sonido transmitido por va sea(mastoidces), con la audicin
del mismo sonido transmitido por va area ( delante oreja ) tomando los tiempos de duracin del sonido
en segundos con el diapason en mastoides y luego con el mismo estmulo tomar tiempo delante de la
oreja.
Al poner un diapasn vibrante en la mastoides de un individuo sano, ste oir el sonido generado hasta que
la magnitud de la vibracin no se se escuche pues se hace insuficiente para vencer la impedancia acstica
que le ofrecen los tejidos que se interponen en su transmisin hasta la cclea, el sonido en regin
mastoidea normalmente se percibe durante 20 segundos.
Una vez que el diapasn deja de ser audible por va sea si se lo coloca INMEDIATAMENTE frente al
conducto auditivo externo (sin tocar la oreja) reaparece la sensacin auditiva por va area 40 segundos
ms, ya que la impedancia a vencer por esta va es mucho menor que por va sea. En este caso que es el
normal se dice que el RINNE es POSITIVO.
En las hipoacusias conductivas la percepcin se mantiene durante un tiempo mayor por va sea que por
va area, por ejemplo 35 segundos por va sea y 20 segundos por va area, esto constituye el RINNE
NEGATIVO.
En las hipoacusias neurosensoriales se hayan disminuidas ambas fases, las proporciones se mantienen pero
los tiempos estn disminuidos y se habla de RINNE POSITIVO ACORTADO. Los valores podran ser 10
segundos por va sea y 20 segundos por va area.
TEST DE SCHWABACH
Consiste en comparar el tiempo de audicin de un diapasn vibrante colocado en el vrtex del paciente
con el tiempo que oye un sujeto normal. Se aplica el diapasn vibrante en el vrtex del paciente hasta que
deja de orlo.
Si el examinador o testigo normal oye, se habla de SCHWABACH CORTO y orienta a una sordera
neurosensorial;
en el caso contrario SCHWABACH LARGO orienta hacia una lesin de tipo conductivo, por ejemplo una
otosclerosis.
Si los tiempos son semejantes se dice que el SCHAWABACH es normal.
RESULTADOS COMPARATIVOS ENTRE LA ACUMETRA FNICA (VOZ) Y LA
ACUMETRA INSTRUMENTAL ENTRE UNA PERSONA NORMAL Y UNA CON HIPOACUSIA
NEUROSENSORIAL:
FONICA
Voz cuchicheada
Voz alta
Instrumental
Conduccin sea
Conduccin area
Weber
Rinne
Schwabach
NORMAL
6 metros
40 metros
NEUROSENSORIAL
0.2 metros
1 metro
20 segundos
40 segundos
Sin lateralizacin
Positivo (normal)
Igual al examinador
10 segundos
20 segundos
Lateralizacion (al mejor odo)
Positivo (corto)
Menor que el examinador normal
Resumen :
En la hipoacusia de conduccin (Trastorno de la conduccin area , afecciones del odo externo
y/o medio) tenemos:
El Weber se lateraliza hacia el odo afectado el odo peor
El Rinne es negativo en el odo afectado
El Schwabach es normal o ms prolongado en el lado afectado
En la hipoacusia de percepcin o nerviosa(trastorno de la transmisin sea , afecciones del odo
interno laberinto u nervio auditivo) tenemos:
Weber lateralizado hacia el lado sano
Rinne es positivo en el odo afectado
El Schwabach s acorta en el odo afectado.
RGANO
RESPUESTAS
SIST. SIMPTICO
RESPUESTAS
SIST.
PARASIMPTICO
Miosis(contraccin
pupilar)
Saliva abundantes y
fluda
Vasoconstricc Central
Vasodilat perif y
coronaria
OJO (PUPILA)
Midriasis (dilatacin)
Gland.SALIVA
LES
VASOS
SANGUNEOS
CORAZON
Bradicardia e
Hipotensin
Disminucin fuerza
contracc
(sobre todo aurculas)
SANGRE
RESPIRATORI
O
DIGESTIVO
Hipercalcemia
Broncodilata
Relaja msc.LISO(disminucin del
tono
y del peristaltismo)
Contrae esfnteres
Aumenta tono f. m.
lisa
Aumenta tono y
peristaltism
Relaja esfnteres
RION
VEJIGA
PENE
Pelos
TMBasal
Relajacin
Pilo ereccin
Aumenta la TMB(puede llegar al
100%
de aumento)
Sudoracin copiosa(colinrgica)
(Son fibras simptico colinrgicas)
Nulo
Contrae f.m. lisa
pared
Y relaja esfnter
favorece la
Miccin
Ereccin
Gland
Sudorparas
Disminuye la TMB
Sudoracin tpica de
las
Palmas de las manos.
Material
Sapos grandes
Conejos
Adrenalina
Acetilcolina
Atropina
Tabla de fijacin para batracios
Pilocarpina
Equipo de diseccin
Algodn
Jeringas descartables
Suero fisiolgico
Electrocardigrafo con juego de agujas de metal
Atenolol
Solucin de Ringer para batracios
Mtodo
Experimento N 1
Anestesiar commo de costumbre y luego se le practica un shock espinalal .Colocar al animal en la tabla
de fijacin. Abrir el peto esternal y exponer el corazn. Humedecer peridicamente con la solucin de
Ringer para batracios. Conectar el electrocardigrafo por medio de las agujas de metal y obtener un
trazado electrocardiogrfico basal. Instilar una gota de solucin de Acetilcolina al 1/5000 y obtener un
nuevo trazado electrocardiogrfico. Lavar la preparacin con la solucin de Ringer y dejarla reposar por al
menos 2 minutos.
Experimento N 2
Emplear la preparacin descrita en el experimento anterior. Instilar dos gotas de solucin de Adrenalina al
1/2000 y obtener un trazado electrocardiogrfico. Lavar la preparacin con la solucin de Ringer y dejarla
reposar por al menos 2 minutos.
Experimento N 3
Emplear la preparacin descrita en el experimento anterior. Instilar una gota de solucin de Atenolol y
obtener un trazado electrocardiogrfico. Lavar la preparacin con la solucin de Ringer y dejarla reposar
por al menos 2 minutos. A continuacin instilar dos gotas de solucin de Adrenalina al 1/2000 y obtener
un nuevo trazado electrocardiogrfico. Lavar la preparacin con la solucin de Ringer y dejarla reposar
por al menos 2 minutos.
Experimento N 4
Emplear la preparacin descrita en el experimento anterior. Instilar una gota de solucin de Atropina al
0.1% y obtener un trazado electrocardiogrfico. Lavar la preparacin con la solucin de Ringer y dejarla
reposar por al menos 2 minutos. A continuacin instilar dos gotas de solucin de Acetilcolina 1/5000 y
obtener un nuevo trazado electrocardiogrfico. Lavar la preparacin con la solucin de Ringer y dejarla
PRCTICA
CARDIOVASCULAR
Corazn in situ: Propiedades del Corazn
1.- Fundamento
El miocardio tiene propiedades tales como: automatismo, excitabilidad, conductibilidad y contractilidad
que le permite al corazn trabajar como bomba, de una manera adecuada a las necesidades del organismo.
Tiene inervacin autnoma y sistema de conduccin elctrica organizada.
La actividad elctrica que genera puede ser captada por electrodos colocados en la superficie corporal y
graficarse en ondas por medio del Electrocardigrafo. Existe una correlacin entre la actividad elctrica y
el
ciclo
cardiaco.
3.-Materiales
- Animal para experimentar- sapo
- Electrocardigrafo
-
- Tablilla de fijacin
- Tubos de ensayo (03)
- Agua caliente (40), fra (80)
- Sol. Ringer.
- Adrenalina 1/2000
- Acetilcolina 1/5000
- Sol. C12Ca 1%
- Atenolol 1/1000
4.-Experimentos
4.1 N 1: Exposicin del corazn-anatoma- ciclo cardiaco
Anestesiar al sapo Halotano ter o cloroformo.Luego seccin espinal .
Colocar al sapo en la tablilla en decbito dorsal-fijarlo con alfileres
Cortar la piel del trax (tijera) y ampliar el corte desde el piso de la boca hasta la porcin media
del abdomen
Humedecer permanentemente las vsceras y tejidos con Sol. Ringer
Reconocer la punta del esternn y cortar por su lado izquierdo
Con tijera cortar el esternn en su lnea media
Exponer al corazn e identificar el pericardio, cortarlo y observar las partes del corazn y vasosreconocer las fases del ciclo cardiaco
Observar sstole i distole .Determinar la Frecuencia Cardiaca Basal por inspeccin visual4.2 N 2. Experimento de GASKEL- ESTMULO FSICO (TEMPERATURA) AL CORAZN
Colocar la tablilla con el sapo en forma vertical, (la cabeza hacia abajo); identificar la pared
posterior del corazn.
Observar los latidos por minutos (Seno Venoso, Aurculas y Ventrculo)
Con tubo de ensayo (agua fra) tocar el Seno venoso y observar los latidos
Esperar que regrese al basal y proceder de igual manera con el tubo de ensayo con agua
caliente; observar latidos
Interpretar los eventos que acontecen
4.3.A: Efectos del vago en el corazn
Determinar el ritmo, frecuencia y amplitud
.Estimular al nervio vago ( usar los electrodos del carrete de induccin ), observar los cambios en
el latido Estimular con una aguja a las aurculas y al ventrculo y reconocer la contraccin prematura
morfologa y la pausa compensadora.
4.3.B Efecto de la Acetilcolina y Adrenalina
Instilar una gota de acetilcolina 1/5000; observar efectos. Lavar c/Sol. Ringer
Instilar una gota de adrenalina 1/2000; observar efectos. Lavar
Instilar 1 gota de sol CIK 1%; observar efectos. Lavar
Instilar 1 gota de sol C12Ca 1%; observar efectos. Lavar
4.3.C Ligadura de STANNIUS- Conduccin elctrica automatismo
En el surco en el Seno venoso y las aurculas colocar un hilo humedecido con sol. Ringer y ligar.
Observar efectos en el ECG. Analizar
Una segunda ligadura entre las aurculas y el ventrculo ; ligar y observar ECG
Observar la frecuencia de contraccin de aurcula y el ventrculo (Bloqueo aurculo- ventricular)
--------------------------------------
DE LOS ELECTROLITOS
Fundamento
Los potenciales de membrana de la clula cardiaca tienen relacin directa con la concentracin de los
iones dentro y fuera de la clula. El potencial de accin es consecuencia de la entrada y salida de los iones,
de la clula. Algunos iones INTERVIENEN en la despolarizacin y otros en la repolarizacin celular.
La perfusin del corazn con soluciones que tienen mayor concentracin de iones que lo normal van a
alterar los potenciales de la clula y se expresarn en la contraccin del miocardio.
En HiperKalemia se alarga la Fase 2 meseta y disminuye la intensidad del Pot de Acc con Inotrp negativo
---se debilita la fuerza de contraccin ,flacidez cardiaca no se excita la fibra miocardica se alarga el QRS
produce severa arritmia v entricular mortal por parlisis en distole.
ECG
mEq/
aplanada
dePuna
pacienteQRS
de 72
5.2.2K 7ECG
aos
de
edad,
en
el
que
ancho y deformado se
aprecia
presencia
de BAV
Bloqueo AVlade
primer gradol
Nota: vemos que el QTc vara en relacin inversa al nivel del Ca sang. Alto Ca+ con QTc corto. La
Hipercalcemia la detectaremos por su efecto Inotrpico +++ y blanqueamiento prolongado y puede
producir contracciones espsticas con parlisis en sstole . Tambiem hay alargamiento del PR y
bloqueo A.V de Primer grado.
HIPERMAGNESEMIA
SOBRE EL SISTEMA CARDIOVASCULAR algunos de los efectos del
Mg son semejantes a los del in Potasio . Alarga la Fase 2 meseta y
disminuye la intensidad del Pot de Acc con Inotrp negativo.
Disminuye la frecuencia de formacin de los impulsos nodales del Sinus
Auricular.
Con el INOTROPISMO NEGATIVO se debilita la fuerza de
contraccin, hay flacidez cardiaca, no se excita la fibra miocrdica
se alarga el Intervalo PR y alarga QRS y puede producirse arritmia
ventricular. Las altas concentraciones de Mg 10 mEq/L aumentan el
tiempo de conduccin y se alarga el intervalo PR y el intervalo QRS
del ECG .
Si la concentracin plasmtica llega a ser 15 mEq/l entonces puede
producirse severa arritmia ventricular y paro cardiaco en DIASTOLE.
Tiene un efecto inotrpico negativo. Disminuye la Frecuencia cardiaca
y disminuye la Presin Arterial.
Debemos saber desde ahora que el exceso de magnesio puede tener
adicionalmente un efecto depresivo directo sobre y Sistema Neuro
muscular y el msculo esqueltico, pues el Mg, en dosis elevadas,
inhibe la liberacin de Acetilcolina a nivel de la placa motora y este
efecto se usa para prevenir las convulsiones en la pre-eclampsia y
disminuirlas en la eclampsia del embarazo.
Cuando se encuentran niveles moderadamente elevados de Mg y
comienzan a exceder los 4 mEq/L (Insuf. Renal) los reflejos
Osteotendinosos van disminuyendo (hiporeflexia) y cuando est en 10
mEq/L pueden abolirse estos reflejos.
2.
MATERIAL
Animal de experimento: sapo
Tablilla de fijacin
Equipo de diseccin
3.- Soluciones de Sol. Ringer
Sol Ringer con Cl2Ca 1 gm/ L
Sol. Ringer con CIK 0.3 gm/ L
Sol. Ringer con CI2Mg 1 gm/ L
4.
EXPERIMENTOS:
Introduccin
El corazn tiene la capacidad de generar su propio potencial de accin , el que es transmitido a travs del
sistema de conduccin a las aurculas y los ventrculos. Es transmitido a travs del volumen conductor a la
superficie del cuerpo. Donde es captado por los electrodos del electrocardigrafo.
La electrocardiografa puede realizarse en reposo (electrocardiografa clnica de reposo) o en actividad
(prueba de esfuerzo).
En la presente prctica se realizara la electrocardiografa de reposo en el adulto.
QTc =
Cusas de alargamiento del QTc : Drogas anti arrtmicas quinnidina, procainamida, antidepresivos
tricclicos, fenotiazina, alteraciones electrolticas Hipo K. Hipo Ca ,Hipo Mg, hemorragia en el tronco
cerebral, coma, infartos. El acortamiento del QTc no tiene mucha implicancia clnico, nis intera mychi}o
ms el alargamiento.
Colocar al sujeto en decbito dorsal y aplicar los electrodos de acuerdo a la convencin internacional.
Estandarizar el aparato aplicando 1 mV , debiendo deflexionar positivamente la aguja inscriptora 10 mm
amplitud; la velocidad de registro del aparato deber ser 25 mm/seg. Realizar 6 trazados de derivaciones
de miembros y 6 trazados de derivaciones precordiales.
Informar de acuerdo al siguiente protocolo:
Nombre:
Edad:
Peso:
Fecha:
Talla:
Tipo constitucional:
Informe electrocardiogrfico:
Ritmo:
Intervalo PR:
Complejo QRS:
Eje QRS
Morfologa de P
Morfologa de QRS:
Morfologa de T:
Conclusiones:
Comentario:
3.
Frecuencia cardiaca:
Intervalo Q-T:
Q-Tc:
Discusin
P Art. Sistlica
90 139 mm Hg ( Es la presin mas alta alcanzada cuando el
corazn late)Esd la presin en las arterias despus que la sangre es expulsada del
Ventrculo izquierdo en la sstole.
P Art. Diastlica 60 - 90 mmHg ( Es el valor mnimo de la Presin arterial cuando
el corazn est en relajacin distole, cuando el v.izq no expulsa sangre)
Presin Arterial Media Es la presin arterial promedio en un ciclo cardiaco completo
Equivale a la Presin Diastlica ms 1/3 de la presin del Pulso ( Sistlica menos
Diastlica).
Presin del Pulso: Es la Diferencia entre la presin Sistlica y Diastlica, refleja el
volumen latido o seas el volumen de sangre expulsado por el ventrculo izquierdo en un
solo latido.
Losartan
ARTERIOESCLEROSIS
ARTERIESCLEROSIS
Joven sano
EEsfi
1.
-
OBJETIVOS
a. Determinar la presin arterial sistlica, diastlica, en forma indirecta
b. Determinar los cambios de la presin arterial cuando se expone factores, fsicos (temperatura),
cambios de posicin y de actividad fsica
MATERIAL
Sujeto de prueba: alumnos
Tensiometro de mercurio o anaeroide
Estetoscopio
Beakers
Agua fra (5 C)
2.
-
EXPERIMENTO
Experimento 1: Determinar la presin arterial
Sujeto de prueba en posicin sentada, brazo descubierto a la altura del corazn
Esperar 5 minutos
Colocar el brazalete por encima del pliegue del codo
Colocar la campana del estetoscopio sobre la arterial humeral
Inflar el manguito hasta que desaparezca el pulso arterial
Desinflar el manguito lentamente y
Registrar la presin sistlica con el primer ruido de Korotkoff
Registrar la presin diastlica con el quinto ruido de Korotkoff
Recordar: 1mmHg = 0.13 Kpa = 13.6 cm. H2O
Bibliografa
Introduccin
La medicin de los volmenes pulmonares se realiza por medio de la Espirometra. Este procedimiento
permite determinar todos lo volmenes pulmonares, excepto el volumen residual, cuya medicin se realiza
por mtodos indirectos. Emplearemos el Espirmetro Pneumotacmetro Fleich Datospir 120
En esta prctica el alumno adquirir competencia para entender:Volumenes y Capacidades sus funciones e
interpretar un Espirograma.
Pinza Nasal
Dispositivo bucal descartable para espirar e inspirar
EQUIPO ESPIRMETRO NEUMOTACMETRO FLEICH DATOSPIR
2.
Mtodo
c)
normalmente.
Al final de una inspiracin normal (FIN) realizar una espiracin mxima seguida de una
inspiracin mxima, luego respirar normalmente.
Para que esta reaccin ocurra, el hierro debe encontrarse en la forma divalente (Fe 2+o ferroso).
Este estado no se modifica cuando el hierro reacciona con la hemoglobina: existe oxigenacin y no
oxidacin de la hemoglobina. Cuando el tomo de hierro es oxidado a su forma trivalente (frrico), como
ocurre en la metahemoglobina, no reacciona con el oxigeno, perdiendo la hemoglobina la capacidad de
transportarlo. En condiciones normales in vivo, el sistema metahemoglobina reductasa del eritrocito
mantiene al hierro de la molcula en estado ferroso.
2) La hemoglobina tambin se combina con el monxido de Carbono (CO2), unin que se
realiza, al igual que con el oxgeno, con el hierro. Cada tomo de hierro puede fijar una molcula de
monxido. EI producto resultante recibe el nombre de "carboxihemoglobina".
Cada tomo de hierro puede fijar una molcula de monxido de carbono, compuesto producido
por la combustin incompleta del carbono (braseros, estufas, gas de alumbrado, motores a explosin). El
monxido de carbono se combina ms fcilmente con la hemoglobina, unas 200 a 300 veces, que el
oxigeno. El peligro de la intoxicacin con monxido de carbono radica en el hecho de que la
carboxihemoglobina no tranporta oxigeno. Si un 30% del total de la hemoglobina circulante esta
ocupada con monxido de carbono aparecen las cefaleas y vmitos; si lo esta un 50 %, la vida peligra; si
lo est un 60-70 %, se produce la muerte por asfixia.
3) El hierro de la hemoglobina sufre constantemente procesos de oxidacin, formndose la
metahemoglobina. Ocurre en un 3% del total de la hemoglobina por da. La conversin de una fraccin
de hemoglobina en metahemoglobina tiene un efecto similar al de la carboxihemoglobina, es decir, pierde
la capacidad de transportar oxigeno. En condiciones normales "in vivo" la metahemoglobina es
reducida a hemoglobina por accin de la diaforasa del eritrocito, enzima que permite acoplar la NADH2
generada por la gliceraldehido-fosfato-deshidrogenasa en la reaccin de Embden-Meyerhoff
Entre los factores que ocasionan una acumulacin excesiva de metahemoglobina se encuentra: a)
La metahemoglobinemia hereditaria, por disminucin de la actividad de la diaforasa o bien por sntesis
de hemoglobinas anormales, y b) La metahemog!obinemia adquirida., que ocurre como resultado de lai
ingesta de frmacos oxidantes (nitritos, nitratos, derivados de la anilina) y desaparece cuando se suspende
la administracin de las drogas.
4)
La hemoglobina se combina con el dixido de carbono, producindose la
carboxihemoglobina. Esta combinacin se efecta con la globina de la molcula, mediante la formacin
de compuestos carbamnicos, reaccin que aumenta considerablemente cuando desciende la saturacin
con oxgeno.
5) La combinacin de la deoxihemoglobina (Hb) con el oxgeno da lugar a la formacin de
oxihemoglobina (HbO2). Esta combinacin es reversible y la proporcin de desoxihemoglobina que se
transforma en oxihemoglobina al ponerla en contacto con el oxigeno depende de la presin parcial de
oxigeno (PO2) del medio que rodea a la molcula. Cuando toda la hemoglobina est como
oxihemoglobina, se dice que el contenido de oxigeno de la hemoglobina ha alcanzado la "capacidad de
oxigeno" del compuesto, pero cuando el contenido de oxigeno de la sangre es menor que la capacidad de
oxigeno, el contenido de oxgeno se expresa en trminos de porcentaje de saturacin (SO2).
La saturacin arterial de oxgeno (SaO2), es la cantidad de oxgeno unida a las molculas de
hemoglobina en relacin a la cantidad total de molculas presente en la sangre arterial. Contenido/
capacidad x 100
La medicin de la saturacin arterial de oxgeno requera de mtodos invasivos, puncin
vascular arterial, que hacan difcil su utilizacin en estudios dinmicos y en estudios poblacionales. Esta
limitacin se ha superado en la actualidad gracias al advenimiento de mtodos no invasivos, como la
oxirnetra de pulso.
[HbO2 ]
Saturacin (%) =
---------------------------- x 100
[HbO2] + [ Hb ]
Los oxmetros de pulso (figura 1) basicamente estn constituidos por dos diodos que emiten luz
en forma intermitente, y una clula fotosensitiva, capaz de medir por separado y en forma secuencial la
luz transmitida a travs de la piel, en el orden de mil veces por segundo. Primero se ilumina el diodo que
emite luz roja y luego el diodo que emite luz cerca del infra-rojo y la luz transmitida por los tejidos, en
ambas longitudes de onda, son cuantificadas y cornparadas por la clula fotosensitiva para determinar el
porcentaje de la saturacin arterial de oxgeno.
La saturacin arterial de oxgeno normalmente vara entre 95 a 100% en sujetos de nivel del mar
y entre 84 a 92% en sujetos adultos, nativos-residentes en las grandes alturas. En recin nacidos vara entre
85 a 90%. Valores que se modifican con el ejercicio fsico y la altitud de residencia.
Experimento N 1:
MEDIDA DE LA SATURACIN ARTERIAL DE OXIGENO
Materiales:
- Oxmetro de pulso
- Sensores de Oxgeno (Fig. 2)
- Algodn
- Alcohol
Procedimiento:
1. Encender el oxmetro de pulso.
2. Limpiar y secar el dedo ndice, con algodn y alcohol.
3. Colocar el sensor de oxgeno en el dedo ndice.
4. Leer y registrar la saturacin arterial de oxgeno y la frecuencia cardiaca, tres veces.
Resultados:
Saturacin (%)
1ra. Medicin
2da. Medicin
3ra. Medicin
Fr. Cardiaca
Promedio
5.
Determinar si la saturacin arterial de oxgeno vara en los diferentes dedos de la mano derecha e
izquierda
Saturacin (%)
Fr. Cardiaca
Derecha
Izquierda
Derecha
Izquierda
Dedo Pulgar
Dedo ndice
Dedo Cardinal
Dedo Anular
Dedo Meique
6.
Fr. Cardiaca
Posicin Decbito
Posicin Sentado
Posicin de Pie
Resultados:
Tiempo (min.)
saturacin (%)
Fr. Cardiaca
Pre-Ejercicio
Post-Ejercicio
1ra. Medicin
2da. Medicin
3ra. Medicin
4ta. Medicin
5ta. Medicin
6ta. Medicin
7ma. Medicin
8va. Medicin
9na. Medicin
10ma. Medicin
Materiales:
Tensimetro
- Cronmetro.
- Oxmetro de pulso.
- Sensor de oxgeno.
Procedimiento:
1. El sujeto experimental deber sentarse cmodamente, colocando los brazos sobre la mesa de
modo que quede a nivel del corazn, medir la saturacin arterial de oxigeno en el dedo ndice de
ambas manos (1ra. Medicin).
2. Coloque el manguito del tensimetro, completamente desinflado, alrededor del brazo derecho, de
manera que su borde inferior quede de 2-4 cm. sobre el pliegue del codo.
3. Aumentar la presin del sistema, con la pera insuflora, hasta alcanzar una presin de 200 mmHg.
4. Solicitar al sujeto experimental que abra y cierre rtmicamente la mano derecha hasta que el
sujeto empiece a reportar dolor e inmediatamente medir la saturacin arterial en el dedo ndice de
la mano derecha y luego en el dedo ndice de la mano izquierda (2da. Medicin).
5.
6.
7.
Solicitar al sujeto experimental que siga abriendo y cerrando rtmicamente la mano derecha hasta
el momento en que el dolor sea insoportable y medir nuevamente la saturacin arterial en ambas
manos (3ra. Medicin).
Disminuir rpidamente la presin del sistema abriendo la vlvula de la pera isuflora y retirar el
tensimetro.
Medir y registrar la saturacin arterial y la frecuencia cardiaca, cada dos minutos durante 10 min.
hasta obtener valores similares al de las condiciones basales. (4ta.-6ta. Medicin).
Resultados:
Saturacin (%)
ndice Derecho
1ra. Medicin
2da. Medicin
3ra. Medicin
4ta. Medicin
5ta. Medicin
6ta. Medicin
ndice Izquierdo
Frecuencia Cardiaca
ndice Derecho
ndice Izquierdo
Nombre:............................................................................................................................Fecha:....../....../......
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------ANTECEDENTES PERSONALES:
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Nombre:..................................................................................Sexo:.................. Edad:..............aos
Peso:............Kg
Talla:.............. mts
Peso Ideal:...............Kg
Lugar de Nacimiento:............................................................... T. Resd. Lima:.......................
Actividad Fsica: 1) Sedentaria: ..........
2) Ocasional: ..........
3) Frecuente: ..........
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------EJERCICIO FSICO Y SATURACIN ARTERIAL DE OXIGENO:
Saturacin (%)
Fr. Cardiaca
Pre-Ejercicio
Post-Ejercicio
Tiempo (min.) de Recuperacin
ISQUEMIA LOCAL Y SATURACIN ARTERIAL DE OXIGENO:
Saturacin (%)
BRAZO DERECHO:
Basal
Iniciar Dolor
Dolor Soportable
Tiempo (min.) de Recuperacin
BRAZO IZQUIERDO:
Basal
Inicia Dolor
Dolor Soportable
Fr. Cardiaca
FISIOLOGIA DE LA SANGRE
HEMATOCRITO
Es la relacin porcentual entre la cantidad de glbulos rojos y el plasma sanguneo en relacin a la sangre total. Esta
determinacin es muy til para del diagnstico diferencial de anemias porque ayuda a determinar su intensidad y tipo.
HEMOGLOBINA
Es una molcula de estructura cuaternaria, tetramrica proteica, es el pigmento rojo portador del Oxgeno
de los hemates. Est formada por un ncleo Hem y una protena llamada Globina.
MEDICION DE LA HEMOGLOBINA:
Materiales:
Jeringa y agujas descartables.
Desinfectante.
Algodn.
Ligadura.
Alcohol.
Anticoagulante de Wintrobe.
Pipeta de Sahl de 0.02 ml
Tubos de prueba.
Solucin de HCl 0.1 N
Espectrofotmetro.
Procedimiento
Obtener 3 ml sangre venosa con anticoagulante. Medir 0.02 ml sangre con la pipeta de Sahl (0.02 ml).
Limpiar la parte externa de la punta de la pipeta para eliminar la sangre adherida al exterior de la pipeta.
Vaciar en contenido de la pipeta en un tubo conteniendo 5.0 ml de la Sol. de HCl 0.1 N
Mezclar, por inversin, suavemente, sin agitar. Reposo 10 min. Lectura en el Espectrofotmetro, en Long.
Onda de 540 nm. Colocar el espectrofotmetro en 0.00 Abs. ; leer luego la muestra problema. Anotar la
lectura de Absorbancia.
CALCULOS:
Absorbancia del Problema X Factor de Calibracin = gm Hb %
Valores Referenciales:
Hemoglobina
Valores
Referenciales
gm %
Recien Nacidos
17 a 25
Infantes
10 a 15
Hombre Adulto
l4a17
Mujer Adulto
12 a 16
Hombre de Altura
16.4 a 18.8
Adulto:
83 a 95 micras cbicas
100
pmm3
pmm3
pmm3
pmm3
EVALUACION DE LA HEMOSTASIA
Y LA COAGULACION DE LA SANGRE
TIEMPO DE COAGULACIN
Se denomina as al tiempo que transcurre desde que la sangre es extrada hasta que pasa al estado de gel.
Esta prueba mide el tiempo tomado por la sangre para coagular en ausencia de factores provenientes de los
tejidos (factor tisular). El trauma que significa la obtencin de sangre venosa marca el inicio, y el intervalo
de tiempo entre la obtencin de la muestra y su coagulacin es lo que se denomina Tiempo de
Coagulacin. Esta es en trminos generales una prueba grosera de la coagulacin. Sirve para detectar
groseramente alteraciones de la coagulacin que puedan alargarla. La prolongacin del Tiempo de
Coagulacin puede deberse a varias causas;:
1.- Disminucin de la Tromboplastina,
2.- Disminucin de la Protrombina,
3.- Disminucin del Fibringeno
4.- A la presencia en la sangre de algn anticoagulante.
Esta prueba por las razones dadas no es especifica y ha cado en desuso en la actualidad.
TIEMPO DE SANGRA
El tiempo de sangra depende de la elasticidad de la pared vasos sanguneos y de la cantidad y capacidad
funcional de las plaquetas.
El tiempo de sangra es el tiempo transcurrido desde el momento en que se hace una puncin standard
profunda en la oreja o en el pulpejo del dedo y aqul en que la sangre deja de brotar de la herida.
METODO DE DUKE
Reactivos y Aparatos:
Cronmetro, lancetas descartables, desinfectante de piel, papel de filtro.
Procedimiento:
Desinfectar la yema de un dedo (anular) el lbulo de una oreja y punzar con la lanceta descartable
standard de manera que la sangre fluya libremente, gota a gota, sin necesidad de exprimir la piel. Anotar el
tiempo de aparicin de la primera gota y, luego con el papel de filtro ir secando cada gota, cada 30
segundos sin tocar la piel, hasta que deje de sangrar. Anotar el tiempo transcurrido.
Valores Referenciales:
1 a 3 MINUTOS.
determinacin del Tiempo de Quick. Esta prueba no detecta deficiencias en los factores de la va
intrnseca (VIII, IX, XI, XII).
Para el TP usaremos un exceso de Tromboplastina Tisular o Factor III (de cerebro) y calcio. Puede usarse
Simplastin de Warner Chilcota. El mtodo que emplearemos para TP es el de la Casa Wiener que se
llama Soluplastn y que es una Tromboplastina tisular (de cerebro) de alta calidad e incluye cloruro de
calcio y cloruro de sodio.
Materiales:
Soluplastin (Tromboplastina clcica) Casa Wiener
Lab. (Rosario. Argentina)
Tubos de ensayo de vidrio de 12 x 75 mm.
Cronmetro
Bao Mara 37 C
Asa de alambre Nquel Cromo Nuevas (Bacteriolgicas)
Micropipetas 100 y 200 lambdas.
Muestra de plasma sanguneo:
En un tubo de ensayo contendiendo
0.5 mI de anticoagulante citrato trisdico 3.8 %
aadir
4.5 ml de sangre venosa
Mezclar suavemente, centrifugar y separar el plasma.
Procedimiento para TP:
Usar tubos de 13 x 100 mm:
Pre incubar el plasma: en un tubo de ensayo, marcado (Px) colocar 1 ml del plasma en BM 37 C, por 3
min. (El saldo del plasma refrigerarlo). (No pre incubar mas de 10 min.)
Pre incubar el Soluplastin: en otros dos tubos de ensayo colocar 0.2 ml de Soluplastin en cada uno y
colocar en BM a 37 C por 3 min. (No pre incubar mas de 10 min.).
Pipetear 100 lambdas del plasma Pre incubado y aadir rpidamente al tubo conteniendo los 0.2 ml de
Soluplastin, disparando simultneamente el cronmetro.
Soluplastin pre incubado 37C
( incluye calcio) ml
0,2
1.1 y ! cronmetro!!
Simultneo
Con estos valores en segundos a travs de una curva de calibracin podemos expresarlos en porcentaje de
actividad protrombinica en relacin a los valores normales: examinemos el siguiente cuadro que muestra
los valores porcentuales:
Tiempo Protrombina
en segundos
Actividad Protrombnica
Valores porcentuales
Respecto de lo Normal
11 - 12.5
100 %
13.5
60
15
50
17
40
19.5
30
22
25
24 36
20
37 40
10
55 65
finsimas partculas slice micronizado (activador para el Factor XII) de la va intrnseca solamente y un
tampon de piperazida estanolsulfnico. Adems este reactivo tiene una especial reactividad con la
presencia de heparina lo cual lo hace especial para el monitoreo de la teraputica con heparina.
Emplearemos en esta practica el mtodo de la casa WIENER LAB. Que usa cefalina fosfolpido y que se
llama reactivo APTTEST
METODO DE CASA WIENER LAB.
PTT APT TEST
A. REACTIVOS: Cloruro de calcio, listo para usar (0.0125 mol/l y ClNa 0.1 mol/l)
B. Reactivo de APTT:
al vial del liofilizado, aadir el volumen de agua indicado en el rasco
que es 2.5 cc de agua destilada, tapar y mezclar suave por inversin, queda as listo el
homogenizado.
C. Obtencipn de la muestra de sangre:
A 4.5 cc de sangre venosa aadirle 0.5 cc del anticoagulante oxlato de sodio. Centrifugar para
separar el plasma.
D. Distribuir los reactivos en la lsiguiente forma utilizando tubos de vidrios de 12 x 75 mm de
dimetro o 13 x 100 ml:
TUBO 1
Plasma desconocido
100 ul (LAMBDAS)
PLASMA
CONTROL
NORMAL O ESTANDAR
REACTIVO
DE
APTT
(HOMOGENIZADO)
TUBO 2
100 ul (LAMBDAS)
100 ul (LAMBDAS)
100 ul (LAMBDAS)
Tambin podemos emplear los reactivos de cefalina con caoln de la casa francesa que vemos a
continuacin.
Equipos, reactivos y materiales .-(idem que TP).Procedimiento para APTT:
Emplearemos CK Prest activado (Cefalina con Kaolin) (APTT) (Diagnostica Stago-Francia).
Reactivo N 1: Cefalina
Reactivo N 2: Kaoln tamponado :
Agitar el contenido del frasco N2 y transferido completamente dentro del frasco N1. Dejar
que repose 30 min. para embeber el gel. Y despus de la imbibicin, agitar
suave y circunferencialmente para homogenizar la mixtura.
0.1
ml
0.1
ml
0.1
ml
3 minutos
0.1
ml
EXACTO
Los valores referenciales varan de 30 a 45 segundos y deben reportarse en relacin a un control normal
Cuando el Tiempo Tromboplastina Parcial est prolongado, pero el Tiempo de Protrombina es Normal nos
indica un a alteracin de alguno de los factores de la va intrnseca de tipo congnito: VIII, IX
(Hemofilias), XI, XII. Si todos estos factores estn normales, puede haber una deficiencia de HMWK
kiningeno (Factor Fritgerald). Tambin se encuentra alargado el APPT en deficiencias adquiridas
condiciones anormales como: Enfermedades hepticas, Coagulopata por consumo, anticoagulantes
circulantes, en la terapia anticoagulante oral, o en la heparizacin. en el tratamiento con inhibidores de
la trombina como hirudina, argatroban., etc
VA FINAL COMUN
X
V
PF -3
Trombina
Protrombina
Fibriongeno
VIII
XIII
Fibrina
Referencias Bibliogrficas:
Clinical Hematology Wintrobe. EJ. Lea Feboger. Phila. London. 1998
Technical Hematology Simmons. Lippincott. 1999.
Laboratory Methods by J. B. Henry. Saunders Co. 1999.
The Principles and Practice of Blodd Grouping Addine G Mosby Co 1993
Fisiologa Mdica W Ganong El Manual Moderno 2002
An Introduction to Inmunohematology N Bryant W B Saunders Co. Pfila. London 1997
AB
AB
Wiener
Rho
Rh1
Rh2
rh (hr)
rh
rh
Rhy
Rhz
INTERPRETACIN:
Sangre total paciente +
Suero Anti- Rh (D)
RESULTADO
AGLUTINACIN
NO AGLUTINACIN
Rh (D) POSITIVO
Rh (D) NEGATIVO
FILOGENIA DE LA INMUNIDAD NO ESPECFICA.En los animales ms primitivos, como en los unicelulares, el mecanismo de resistencia es la fagocitosis la
cual es esencialmente una funcin nutritiva: y en las formas evolutivas ms elevadas involucra tambin un
mecanismo defensivo. A medida que evolucionan a formas ms complejas aprenden a reconocer los
cuerpos extraos. En los invertebrados superiores se desarrollan un sistema vascular en el cual la
fagocitosis se desarrolla adems por medio de clulas circulantes y en el ser humano por fin hay cinco
clulas circulantes (leucocitos), tres de los cuales son fagocitarias o fagocticas (monolitos, polinucleares y
eosinfilos). Entonces filogenticamente los elementos no especficos ms importantes, fagocitosis y
respuesta inmunitaria vienen desde la forma
ms primitiva de vida. Con la evolucin, estos mecanismos persistieron y fueron suplementados e
implementados por la adicin de nuevos componentes tales como la
inmunidad especfica y los sistemas de amplificacin de esta inmunidad, por ejemplo el complemento,
coagulacin, etc. Entonces, pues, en resumen, estos mecanismos antiguos no fueron reemplazados por la
evolucin de las especies sino que ms bien continuaron y fueron reforzados adicionalmente con nuevas
respuestas (amplificadoras).
FILOGENIA DE LA INMUNIDAD ESPECFICA.La primera evidencia de la inmunidad especfica apareci en los vertebrados primitivos que presentan un
sistema linfoide diseminado (elasmobrnquios) que generan inmunoglobulinas M. posteriormente en los
anfibios apareci la inmunoglobulina G, en los conejos aparece la Ig A y en el hombre se aaden la Ig D y
E.
Con la evolucin filogentico tambin aprendieron a desarrollar sustancias y sistemas de amplificacin y
reforzamiento de la eficiencia de la resistencia como el sistema complemento.
Invertebrado
s
Amebas
Fagocitosis
Vertebrados
En lampreas, ciclstomos, peces de rio,
etc.
Ig M
Anfibio
s
Ig M
Ig G
Mamferos
Ser humano
Ig M
Ig G
IG A
Ig M
Ig G
Ig A
Ig D
Ig E
Sistemas de
amplificaci
n
biolgicas
Sistemas de
amplificaci
n
biolgicas
ONTOGENIA DE LA RESPUESTA INMUNE EN EL HOMBRE.La maduracin del sistema inmune en el hombre comienza durante el segundo a tercer mes de la gestacin
a partir de las clulas madres pluripotenciales o hemocitoblastos en la mdula sea se generan dos lneas
celulares:
Hematopoytica y linfopoytica, segn el siguiente esquema
Ig
Funcin
Estructura
Cadena
pesada
Ig G
Fijacin del
Complemento
Monomrica
Ig A
(secretora
)
Proteccin
Mucosas secreciones
externas lgrimas,
secrecin intestinal,
bronquial
Fijacin del
complemento
Reconocimiento de
antgeno por las
clulas B.
Liberacin de
histamina por los
basfilos (alrgias) y
de reaginas (prot
inespecficas: sfilis,
pian)
Monmero, dmero o
trmero, con cadena J
Gama 1
gama2
Gama 3
gama 4
Alfa 1
Alfa 2:
Ig M
Ig D
Ig E
Cadena
Adiciona
l
Concentraci
n
Plasmtica
mg/dl
700 - 1600
J, CS
70 -400
40 -260
Mu
Delta
Monomrica
psilon
0.05
El rol fisiolgico de la inmunidad tumoral o respuesta bursal en la defensa del husped es la sntesis de
anticuerpos (cuadro anterior) ayudando a prevenir la infeccin y esto lo hace por medio de varios
mecanismos: opsonizacin, antitoxicidad, activacin del complemento, neutralizacin de los antgenos,
unindose al antgeno ( bacterias o virus) lo neutralizan impidiendo su accin ganndole la entrada a la
clula husped.
OBJETIVO DE LA PRCTICA.
En la presente prctica tiene por objeto DETERMINAR LA RESPUESTA BURSAL EN PERSONAS
NORMALES Y EN PACIENTES CON INMUNODEFICIENCIA POR DESNUTRICIN, A
TRAVS DE LA DETERMINACIN CUANTITATIVA DE IG A, IG M, IG G EMPLEANDO
ANTICUERPOS ESPECFICOS QUE FORMEN INMUNOCOMPLEJOS INSOLUBLES,
TURBIOS, Y SU MEDICIN ESPECTROFOTOMTRICA.
MATRIALES Y REACTIVOS.
Solucin salina fisiolgica 9/1000ml
Solucin anticoagulante: heparina sdica, frasco por 5 ml, 500 U.I./ml (LIQUEMINE).
Jering descartabla por 5 ml y aguja de 20x1.
Antisueros: anti Ig A, anti Ig M, anti Ig G.
Buffers Ig A, IgM, Ig G.
Solucin patrn de protenas de concentracin conocida.
Suero sanguneo o plasma heparinizado normal
Suero sanguneo o plasma heparinizado de paciente desnutrido.
1 sapo grande para puncin intracardiaca
Equipo de diseccin completo y estilete para obtener animal espinal previa anestesia con Holano o ter o
cloroformar al animal-
Espectrofotmetro y microcubetas.
Micropipetas automticas de 0 200 y de 0 a mil microlitos o lambdas.
Tubos de prueba 10x75 mm
Cronmetro
PROCEDIMIENTO.Se repartir el trabajo en 5 mesas diferentes del siguiente modo:
Mesa 1: determinara en un suero normal la Ig A
Mesa 2: determinar en un suero normal la IgM
Mesa 3. determinar en un suero normal la Ig G
Mesa 4: determinar en la sangre de un sapo la Ig A (puncin intracardiaca con anticoagulante).
Mesa 5: determinar en el suero de un paciente desnutrido la Ig G.
Distribuir las muestras y reactivos segn los siguientes protocolos para cada inmunoglobulina.
Nota: las muestras problemas para el dosaje de cada inmunoglobulina debern ser diludas al 1/10 antes
de empezar a trabajar:
Suero problema: ----------------------------- -------------- 0.1 ml
Solucin salina fisiolgica: (9 por mil) ------------------ 0.9. ml
DOSAJE DE Ig A
Suero diludo 1/10 :
50 ul
Buffer IgA
900 ul
Homogenizar y leer la absorbancia en 340 nm (DO 1) llevando el aparato a 0 con agua destilada y luego
agregar:
Antisuero anti Ig A
80 ul
Mezclar e incubar a temperatura ambiente
Leer la absorbancia nuevamente a 340 nm (DO2), llevando el aparato a 0 con agua destilada.
FUNCIN GLOMERULAR
DEPURACIN DE CREATININA ENDOGENA.
Es una medida muy aproximada de la funcin glomerular.
La filtracin glomerular es un proceso mecnico que se produce como resultado de un juego de presiones:
1. La presin hidrosttica dentro del glomrulo es
+ 60 mmHg (70% de la presin artica)
2. Se oponen a la filtracin:
a. La presin onctica proteica
32 mmHg
b. La Presin Inters. caps. Bowman
18 mm Hg
- 50 mm Hg
Presin Neta de Filtracin
+10 mmHg
El rin trata, dentro de ciertos lmites, de mantener una presin de filtracin eficiente mediante
mecanismos de aumento del tono de la arteriola eferente.
En 24 horas se filtran 180 litros de lquido por los glomrulos pero se excretan solamente 1 a 1.5 litros de
orina en 24 horas, lo que quiere decir que los tubulis reabsorben 178.5 a 179 litros en 24 horas.
No solamente hay reabsorcin de agua a nivel tubular sino tambin de muchas otras sustancias del filtrado
glomerular y que son tiles al organismo como glucosa, aminocidos, sodio, potasio, cloro, etc.
El filtrado glomerular tiene todos los constituyentes y en la misma proporcin que en el plasma sanguneo
exceptuando las protenas.
La densidad del filtrado glomerular es 1010 y su pH es 7.40.
Si este filtrado glomerular no fuese sometido a la accin tubular el organismo perdera grandes cantidades
de agua, sales, elementos tiles como glucosa, aminocidos, etc. Junto con los productos finales del
metabolismo de las protenas como la urea, creatinina, cido rico, y otros.
Concepto de Clearance:
El concepto de CLEARANCE fue introducido por Van Slyke, la palabra clearance significa depuracin o
limpieza y se entiende por Clearance o Depuracin renal de una sustancia al nmero de centmetros
cbicos de plasma que son liberados de dicha sustancia en la unidad de tiempo (minuto), por el rin. Si
una sustancia es nicamente filtrada por el glomrulo, y no reabsorbida, ni secretada por el tbuli, su
depuracin medir el nmero de ml que los glomrulos filtran en un minuto. Es el caso de la Inulina, el
manitol, thiosulfato, etc., que solo se filtran por el glomrulo, pero no se reabsorben ni secretan por los
tbulis renales.
La depuracin de una sustancia se obtiene dividiendo la cantidad de dicha sustancia excretada en la orina
en la unidad de tiempo entre la cantidad que existe de dicha sustancia en un ml de plasma.
Llamemos V el Vol. Minuto de orina; (Vol. recolectado/tiempo de recoleccin en minutos (cc/min.))
U a la concertacin de una sustancia x en orina mg/ml y
P a la concentracin de la sustancia x en 1 ml de plasma mg/ml
SI MULTIPLICAMOS U x V , NOS DARA LA CANTIDAD DE SUSTANCIA X EXCRETADA EN 1
min. y LA FORMULA DE LA DEPURACIN SER:
C=UxV
P
Generalmente se recolecta orina durante 12 o 24 horas.
Se escoge la CREATININA para medir la filtracin glomerular porque el manejo renal de este metabolito
es muy parecido al de la Inulina y Manitol, por eso su Depuracin es una medida muy aproximada de la
El mismo da de la recoleccin de orina obtener la muestra de sangre para el dosaje de Creatinina srica.
1.- Primer paso.- DESPROTEINIZACION de la muestra de suero:
En un tubo prueba 13 x 100 mm 12 x 75:
Medir 0.7 ml de suero y aadir 3.5 ml Reactivo N 1 (cido pcrico)
Mezclar por inversin y reposo 10 minutos.
Centrifugar a 3000 RPM x 5 min.
Separar el sobrenadante del suero con la pipeta Pasteur y trasladarlo a otro tubo y
marcarlo: Sobrenadante suero (SS).
2.- Disponer los tubos de prueba 13 x 100 mm segn la siguiente tabla y marcarlos segn lo indicado:
Tubos
Blanc
Standard Sobrenad del Orina Dilucin
o
Suero (SS)
1/50
Sobrenadante Suero SS
ml
3
Sol St. : 2 mg/dl
ml
0.5
Orina Dil 1/100
ml
0.5
Agua Destil.
Ml
1.0
0.5
0.5
React N 1 (Ac.Pcrico 41.4 mMol/l) ml
2
2
2
React N 2 (Buffer Glicina alcalino pH 12.4) ml 0.5
0.5
0.5
0.5
Mezclar por inversin. Reposar 15 min. a Temp. Ambiente.
3.- Lecturas: Colocar el Espectrofotmetro en 510 mm de Long. Onda, y colocando el espectofotometro
en 100% de T osea 0% de Absorbancia.
Leer la Absorbancia de cada uno de los tubos anotando las absorbancias de: Blank, estndar, sobrenadante
del suero (SS) y de la orina diluida.
4.-
Clculos.
Conc St
X Abs suero =
Abs St Abs blank
2
X Abs suero Abs Blank = mg/dl
Abs St Abs Blank
tubular.
Procedimiento
Para esta prctica se seleccion a una persona a quien el da anterior se le hizo un dosaje de Osmolaridad
Plasmtica y luego al da siguiente se le someti a una prueba de hidropenia, es decir dieta seca, supresin
total de lquidos pero con una dieta normal en protenas, hasta conseguir en lo posible una disminucin del
3% del peso corporal.
A las 6 de la tarde miccion (vejiga vaca), y se descart esta orina y se anot la hora exacta. Luego
empez a recolectar toda la orina emitida, en un mismo frasco hasta las 6 am del da siguiente.
Dos horas mas tarde, 8 am, se obtuvo una segunda muestra de orina en recipiente a parte. En este
momento se obtuvo una muestra para determinar Osmolaridad Plasmtica. Aqu termina el test de
Concentracin.
Inmediatamente se inici la Prueba de Dilucin, para ello se le dio a beber 20 ml de agua x cada Kg. de
peso corporal, con el objeto de probar su capacidad para diluir la orina. Se recolectaron las muestras
emitidas, cada una en frascos separados, cada 20 30 minutos, segn el protocolo del cuadro adjunto,
numerndose todas las muestras emitidas durante casi tres horas.
Al intermedio y al final de las recolecciones se obtuvieron muestras de sangre para determinar las
Osmolaridades plasmticas, en el osmmetro. Para la prctica, a partir de estas muestras calcularemos las
Osmolaridades Urinarias a partir de las densidades y con los datos obtenidos de Volmenes urinarios,
tiempos de recoleccin, Uosm, y Posm se determinarn, para cada muestra, los valores de U/P, Cosm,
TcH2O, y CH2O.
Prueba
De
12 Hs
2 Hs
De
Inmedia
to
se hizo:
30
25
20
22
20
18
15
N
de
Mue
s
tra
Vol.
Orin
a
ml
Vol.
Minu
t
ml/
min
Posm
mOs
m
Kg
H2O
432
60
Y se
Conti
Nu
Reco
leccion
298
CION
1a
2a
Inges
ta de
20
ml
agua
/
Kg
Peso
30
55
75
97
117
135
150
3a
4a
5a
6a
7a
8a
9a
18
200
190
209
140
126
38
295
Densi
Dad
Urina
ria
Uosm U/
mOsm P
/
Kg
H2O
Cos
m
Tc
H2
O
ml/
min
CH2
O
ml/
min
CONCEN
TRACIN
Supres
lquidos
720
840
Prueba
De
DILU
294
290
-----------
------------------------
El NH3 liberado por la Glutaminasa sirve para neutralizar las sustancias cidas: NH3 + H+ NH4
Se conserva sodio por medio de la excrecin de NH4, el sodio ingresa en favor de la salida de H+
EI NH3 neutraliza el H+ formando NH4; y el H+ con el NH3 se excretan como NH4. (ClNH4)
TEST DE SOBRE CARGA CIDA CON CLORURO DE AMONIO (Durante tres das)
Un da antes de la prueba se recolecta orina de 24hs para acidez de titulacin Basal. Luego se le prescribe
una dosis de 0.1 gm de Cloruro de amonio por Kg de peso corporal, durante tres das consecutivos y se va
recolectando la orina de 24 horas cada da, durante tres das. En cada una de las muestras de orina se
medir el volumen y el pH, Acidez de titulacin fosftica y acidez amoniacal. Se determinar el pH
sanguneo basal y al final del test.
Fundamento de la prueba de sobrecarga cida de Cloruro de amonio para medir la capacidad de
acidificacin del tbuli urinario:
El Cloruro de amonio ingerido extrae H+ de la clula.
El Hgado depura el amonio que llega por la circulacin portal y se produce la siguiente reaccin que
libera H+:
2 NH4+
+ CO2 ----------- CO(NH2) 2 + 2 H+ + H2O
(La conversin de amoniaco en urea e
acidificante.)
Acidificante
El H+ liberado se combina con el Na2HPO4 de la orina tubular:
Na2HPO4
H+
NaH2PO4
Sal ms cida y baja el pH hasta
menos de pH 5.4 en la orina.
las 6 horas siguientes. Se extraen muestras de sangre antes y tres horas despus de la administracin del
Cloruro amnico. Con la carga administrada el pH urinario deber descender por debajo de 5.4
En nuestra prctica solamente haremos una prueba de corta duracin (2 horas) del siguiente modo:
Equipos, Materiales y Reactivos
pH Meter para determinacin de pH sanguneo
Potencimetro para determinar pH en soluciones.
Cinta para determinacin universal de pH
06 Cilindros graduados de vidrio o plstico de 500 ml
08 beakers de 50 ml
02 Pipetas de 5 ml graduadas al 0.1
02 Pipetas de 1 ml graduadas al 1/100
03 Buretas para titulacin qumica
03 Ehrlemeyers de 500 ml con agua destilada
Fenolsulfotalena indicador (PSP) sol alcohlica 1 % o Rojo fenol.
Sol. NaOH 0.1 Normal titulada, Formol 40 % 50ml.
Procedimiento
Colocar a una persona de prueba en reposo. Evacuar la vejiga por miccin espontnea (con deseos de
orinar) y ser la muestra basal. (identificarla). Determinar el pH sanguneo al inicio de esta prueba.
Administraremos luego 400 ml de una solucin de Cloruro de amonio al 0.5% en 15 minutos.
Iniciar la recoleccin de orina cada 20 min., por miccin espontnea, en muestras separadas durante dos
horas.
Medir el Volumen y pH en cada una de las muestras de orina emitidas.
Determinaremos el pH sanguneo basal y al final del test. Titularemos la acidez Fosftica y Amoniacal
urinaria con sol. valorada NaOH 0.1 Normal y retitulacin de la acidez amoniacal previo tratamiento con
formol taponado:
Colocar en beakers : 5 ml orina + 1 gota Roja fenol. Titular con NaOH 0.1N hasta rosado.
Anotar gasto.
Corresponde a la acidez del Fosfato cido. Cada ml NaOH gastado 0.1 mEq H+
Luego aadir 0.5 ml formol para extraer los H+ del Amonio y titular de nuevo la acidez amoniacal.
Hacer la sumatoria de acidez fosftica + amoniacal, acidez total y luego calcular la (H+) urinaria en mMol
/ litro. Calcular la Depuracin de Hidrogeniones.
Emplearemos una persona normal como CONTROL a la cual le haremos la misma prueba anterior
sustituyendo el cloruro de amonio por una dosis de 25 ml de agua hervida y fra por kilo de peso corporal
as:
Colocar a una persona de prueba en reposo. Evacuar la vejiga por miccin espontnea (con deseos de
orinar) y ser la muestra basal. (identificarla). Determinar el pH sanguneo al inicio de esta prueba.
Administraremos luego 25 ml de agua x Kg peso corporal en 15 minutos.
Iniciar la recoleccin de orina cada 20 min., por miccin espontnea, en muestras separadas durante 2
horas.
Medir el Volumen y pH en cada una de las muestras de orina emitidas.
Determinaremos el pH sanguneo basal y al final del test. Titularemos la acidez Fosftica y Amoniacal
urinaria exactamente igual como el caso anterior con sol. valorada NaOH 0.1 Normal y retitulacin de la
acidez amoniacal previo tratamiento con formol taponado, todos los clculos tambin se harn
exactamente iguales al caso anterior.
CLCULOS:
En la prctica anterior ya hemos aprendido como se calcula la Depuracin de una sustancia, entonces si
hemos recolectado un volumen de orina en un plazo de tiempo determinado podemos calcular el Volumen
minuto y si conocemos las concentraciones de H+ urinarias y pH, y adems se conocemos el pH
sanguneo estamos en condiciones de poder calcular las respectivas depuraciones y evaluar la Depuracin
del in Hidrgeno.
CONCLUSIONES:
En la condicin Basal encontraremos que: Dep H+ > Vol min
En la Acidosis como la concentracin de H+ urinaria es mucho mayor que la sangunea
tendremos:
Dep H+ ser > Vol. min.
en la Alcalosis ser la inversa: Vol. min. > Dep H+
Para estos clculos recordar que:
D=UxV/P
y
pH
(H+)
= -log (H+)
= antilog pH
(H+)
-pH
10
Referencias Bibliogrficas:
Libro: Fisiologa Renal, Autores Manuel y Carlos Ramrez Velasco
Editorial Escomel. Arequipa. Per. 1a Ed. 1988.
Libro: Fisiologa Medica Guyton 1996
Physiology and Kidney Diseases, Brow, Londiniun EdCo.2002. First Ed.
Sol. almidn 1 %
ml.
2,0
2,0
2,0
2,0
ml.
1,0
1,0
1,0
----
HCI 0,3 N
ml.
----
----
----
3,4
CIN a 0,9%
ml.
3,0
2,4
----
----
Agua destil.
ml.
Bao Mara 37 C x 5'(Preincubacin,no aadir saliva
todava
Despus de los 5 minutos,recin aadir:
----
----
2,4
---
si
si
si
si
0,6
0,6
0,6
si
si
si
---ml.
si
Luego se determinarn los substratos remanentes y los productos de degradacin intermedia del almidn
en cada digerido:1.2.3 y 4, por separado, empleando soluciones de Lugol y Benedict cualitativo.
6
-
7
-
8
-
0.5
0.5
0.5
HCl 0.05 N : mI
0.5
0.5
0.5
0.5
10
11
12
13
0.5
2
0.5
2
0.5
2
0.5
2
0.5
Sol. De Lugol: mI
6
Cloroper
mmmmm
Cl-
5
J G 160
mEq/L
4a
H+/K ATPasa
Transp.Activo Cl-
H2O osmosis
Hay varias teoras para explicar la formacin del HCl a partir de las clulas oxnticas, la ms aceptada es la siguiente:
1.-Empezamos con el Transporte Activo del Cloro desde el citosol de la clula oxntica hasta la luz del canalculo arribando unos
173 mEq. Na+ /Litro
2.-En el citosol el H2O se disocia en OH y H+ y la bomba H+ - K ATPasa activamente transporta el H+ hacia el canalculo
arribando a la luz canalicular unos 155 mEq. H+ / Litro, en un intercambio por K
3.-El agua diluyente penetra en el canalculo por Osmosis secundariamente a la secrecin de iones.
4.- Los iones de Na+ se reabsorben desde el canalculo hacia el citosol por una bomba distinta, es la bomba Na+/K ATPasa
5.-De esta manera la secrecin final en los canalculos es una solucin de HCl de 150 a 160 mEq. /Litro
6.-Por fin el Intercambio dc CLORO por Bicarbonato .-EL CO2 del metabolismo se combina con el OH de la disociacin del
agua y luego con el sodio difundir hacia el extracelular recuperndose as como Bicarbonato, INTERCAMBINDOSE CLORO
POR BICARBONATO mediante una protena antiport llamada Cloropermeasa, localizada en la membrana basal.
Ejecucin de
la prctica de
Secrecin
Gstrica.
El
Gastroenterlogo
A.
W.
Kay
describi
un
mtodo con el
objeto de lograr
una estimulacin
mxima de las
clulas apritales
del estmago.
En el contexto de la fisiologa gstrica, se considera condicin basal aquella en la cual el paciente est en
completo ayuno despus de haber dormido unas 6 horas tranquilamente, sin estar expuesto a ningn
estmulo visual, ni olfativo, ni auditivo.
Bajo control fluoroscpico debe insertarse una sonda naso-gstrica de modo que la punta de la sonda se
encuentre en la parte ms baja del cuerpo del estmago. En seguida el paciente se coloca en decbito
lateral izquierdo y escupe toda saliva que tenga durante toda la prueba. En estas condiciones la sonda se
conecta a una bomba de succin continua elctrica. Paciente en ayunas y el contenido del estmago es
aspirado continuamente a presin negativa de 30 a 50 mmHg, se aspira primero todo el contenido gstrico
de la noche anterior y se conserva aparte, para otros estudios este volumen se llama Residuo Gstrico.
Queda as el estmago vaco.
Para los fines didcticos de esta prctica nosotros la hemos modificado y el PROTOCOLO DE
TRABAJO es el siguiente:
Depues de extrado el Residuo Gstrico, cada 15 minutos se recolectar todo el jugo gstrico secretado
durante un lapso de hora, tendremos as 4 muestras que denominaremos Basales (B) as : B15 ; B30 ;
B45 ; B 60
Los vols de JG obtenidos fueron: B15= 20 ml; B30 = 40ml; B45= 28ml; B60=43ml
Luego debe inyectarse un antihistamnico como Clorotrimetn 20 mg Intramuscular (para disminuir en
lo posible los efectos colaterales de una fuerte dosis de Histamina que recibir luego). Se usa como
estimulante de la clula parietal Fosfato de Histamina a una dosis de 0.04 mg x Kg. de peso, va
subcutnea, Pentagastrina: 6 microgramos x Kg. Peso; o Histalog (betazol 1.7 mg /Kg peso. En el
presente experimento hemos usado Histalog.
Despues de haber inyectado el Estimulante de las clulas parietales (Histalog)
se inyectar el Estimulante de las clulas parietales y se continuar la recoleccin cada 15 minutos
durante la hora siguiente y tendremos as 4 MUESTRAS Post ESTIMULO que denominaremos
muestras Estimuladas (E) : E15 ; E30; E45; y E60 , en total 60 minutos adicionales.
Los vols de JG Estimulados obtenidos fueron: E15= 41 ml; E30 = 57ml; E45= 50ml; E60=61ml
Se medir la acidez de titulacin usando un volumen de 10 ml de Jugo gstrico de cada una de las
muestras (B) por separado, y anotando cada vez el gasto para la neutralizacin de cada una de las
muestras, empleando NaOH 0.1 Normal, usando indicador de Fenolftalena solucin alcohlica al 1%
Hasta la aparicin de un color rosado tenue y persistente..
Luego se titularn cada una de las muestras obtenidas por separado, empleando Solucin de NaOH 0.1
Normal, gota a gota, agitando suavemente despus de la adicin de cada gota de NaOH, hasta la aparicin
de un color rosado muy tenue y persistente, color que indica la completa neutralizacin del cido del Jugo
Gstrico.
CALCULOS y RACIOCINIO:
Ejemplo: Se gast 2.40 ml en la titulacin de una de las muestras de JG (B1):
Cada 1 ml de NaOH 0.1 N que se gaste en la titulacin indicar ------- 0.1 mEq. H+
2.40 ml de NaOH 0.1 N gastados indicarn -------------------------- X mEq. H+
2.4 x 0.1 /1 = 0.24 mEq.H+
1
0.24mEqH+estn contenidos en .10 ml de Jugo Gstrico usado
X
En 20 ml JG obtenido en B1
0.24 x 20 /10 = 0.48 mEq.H+ en la muestra B1
Esto se llama dbito acido. Y stos 0.48 mEqH+ es el dbito acido de los primeros 15 minutos (B1),en
estado Basal asi continuaremos en la misma forma calculando el dbito acido para los 30, 45 y 60
minutos basales restantes . La SUMATORIA de estos 4 valores basales ser por consiguiente el dbito
acido Basal / hora o gasto acido basal/h ( DAB / h) de la clula parietal.
Exactamente igual procederemos con cada una de las muestras Estimuladas y la SUMATORIA nos dar
el Dbito Acido Estimulado Mximo / hora (DAEMx / h).
Comparar sus resultados con los valores referenciales.(Nuestra paciente fue sexo femenino)
Valores Referenciales
Residuo Gstrico en ayunas: Despus de 12 hs de ayuno: 20 a 100 ml (generalmente menos de 50 ml)
pH: 1.5 a 3.5
Acidez sin Estmulo: 1 a 4 mEq H+ / litro
Dbito cido Basal/hora: Normal
Dbito cido Mximo/hora: Normal
Haremos una titulacin adicional, en una muestra post prandial filtrada de JG. despus de haber recibido
benzimidazol 20 mg ( Omeprazol, Pantoprazol, Esomeprazol,Lansoprazol,Rabeprazol,etc.) diarios
durante 5 das.
El alumno har un cuadro con sus clculos, resultados y conclusiones.
Importancia mdica de esta Practica:
La acidez ayuda en la digestin del alimento al promover la desnaturalizacin de las protenas ingeridas.
Al ocurrir esto, los enlaces peptdicos que unen los aminocidos quedan al descubierto. El HCl gstrico
simultneamente activa el pepsingeno, que es una endopeptidasa que contina la digestin al cortar los
enlaces peptdicos, un proceso conocido como protelisis.
Cuando las clulas parietales se atrofian (Gastritis crnica atrfica) se produce disminucin del cido
gstrico y del factor intrnseco.
Valores bajos de acidez : se encuentran en la anemia perniciosa(deficiencia de Vit B12 dficit del
Factor intrnseco) , llegando a la aclorhidria; valores bajos tambin se encuentran en el carcinoma del
estmago(50% de los pacientes), en la gastritis crnica atrfica, y en el 30% de los adultos por encima de
los 60 aos.
Valores elevados de acidez : en la lcera duodenal.
Valores muy elevados de acidez :en el Sndrome de Zollinger-Ellison (desde 95 a 300 mEq H+) y con
valores de volmenes de Jugo gstrico muy altos que pueden llegar hasta 2 litros en el 85 % de los casos.
El sndrome de Zollinger-Ellison (SZE) es una enfermedad pptica grave (lcera/enfermedad esofgica)
causada por una hipergastrinemia secundaria a un gastrinoma, que provoca un incremento de la secrecin
gstrica cida. La incidencia anual se estima en 1-2 casos por milln. Afecta ligeramente ms a las mujeres
(relacin mujer/hombre: 1,3/1). El SZE se diagnostica generalmente entre los 40 y los 50 aos. El dolor
abdominal (tpicamente epigstrico) y la diarrea son las manifestaciones ms frecuentes. Signos tpicos
son: acidez estomacal (40% de los casos), nauseas, vmitos, malabsorcin y prdida de peso. La primera
manifestacin de la enfermedad puede ser una lcera duodenal complicada (hemorragia, perforacin y
penetracin gastrointestinales). El SZE est provocado por un tumor secretor de gastrina (gastrinoma),
generalmente localizado en el duodeno (50-85% de los casos), pncreas, ganglios linfticos abdominales o
raramente, en corazn, ovarios o hgado. El SZE puede ocurrir de forma espordica (75% de los casos) o
estar asociado a una neoplasia endocrina mltiple de tipo 1 (NEM1)
dbito cido basal (anormal 95 a 300 mEq/h).
MOTILIDAD INTESTINAL
1.
Introduccin
El esfago, el estmago y los intestinos tienen inervacin parasimptica predominante. La acetilcolina es
el neurotransmisor de este sistema y acta como un agonista de la motilidad intestinal.
2.
Material
Equipo para rganos aislados
Conejo
Quimgrafo
Equipo de diseccin
Solucin de Ringer para mamiferos
Suero fisiolgico
Baomara a 40 C
Baln de oxgeno
3.
Mtodo
3.1. Experimento No. 1
Luego de anestesiar como de costumbre al animal de experimentacin, se sacrifica al animal y se realiza
una laparotoma para resecar una segmento de intestino delgado de unos 20 centmetros. Se marca el
extremo proximal. Se lava la pieza operatorio con suero fisiolgico, se le sumerge en un bao de solucin
de Ringer a 40 C y se fija a la palanca inscriptora de1 quimgrafo. Se mantiene oxigenado e! medio por
burbujeo constante.
Se realiza el registro de la actividad intestinal basa1.
.
3.2. Experimento No. 2
Se aade unas gotas de acetilcolina en el baornara y se obtiene un nuevo registro en el quimgrafo.
3.3. Experimento No. 3
Se aade unas gotas de pilocarpina en el baomara y se obtiene un nuevo registro en el quimgrafo.
3.4. Experimento No. 4
Se aade unas gotas de adrenalina en el baomara y se obtiene un nuevo registro en el quimgrafo.
3.5. Experimento No. 5
Se aade unas gotas de pilocarpina en el baomara y se obtiene un nuevo registro en el quimgrafo.
3.6. Experimento No. 6
Se aade unas gotas de atropina en el baomara y se obtiene un nuevo registro en el quimgrafo.
3.7. Experimento No. 7
Se suspende la oxigenacin y se obtiene un nuevo registro en el quimgrafo.
3.8. Experimento No. 8
Se introduce un pedazo de algodn embebido en aceite en el extremo proximal intestinal y se observa su
progresin.
4.
Discusin
MOTILIDAD GASTRO-INTESTINAL
Objetivo
El objeto de esta prctica es estudiar los movimientos peristlticos rtmicos del aparato gastrointestinal y el
control que el Sistema Nervioso Autonmico tanto Simptico como Parasimptico ejercen sobre la
motilidad gstrica e intestinal; adems demostraremos la influencia de los neurotransmisores acetilcolina y
adrenalina sobre las funciones de contraccin y relajacin de la musculatura lisa gastrointestinal.
Introduccin
La actividad motora del estmago est gobernada fundamentalmente por dos tipos de inervacin redes
de fibras nerviosas: una intrnseca a la va gastrointestinal y otra extrnseca.
a.-La inervacin intrnseca del estmago comprende dos plexos interconectados el plexo Mientrico de
Auerbach y el plexo submucoso de Meissner dentro de la pared estomacal, como lo hacen a travs de toda
la va intestinal. Estos plexos son directamente responsables de la peristalsis y otras contracciones. Como
este sistema es continuo entre el estmago y el duodeno, la peristalsis del antro influencia la peristalsis del
bulbo duodenal.
b.- La inervacin extrnseca es autonmica dual y proviene del Sistema Nervioso Autnomo: la Simptica
de actividad noradrenrgica inhibidora, va plexo celaco; y la Parasimptica de actividad colinrgica
excitatoria, va del Nervio Vago.
La inervacin simptica inhibe la motilidad lisa, pero contrae los esfnteres; y la parasimptica estimula la
contraccin de la fibra m. lisa pero relaja los esfnteres. Estos dos sistemas juntos modifican la actividad
motora coordinada que se origina independientemente en el sistema intrnseco.
Existe adems un marcapaso controlador en la curvatura mayor del cuerpo del estmago dentro de la capa
muscular longitudinal. Este marcapaso es responsable del ritmo y frecuencia de las contracciones gstricas
y genera una onda excitatoria que tiene un ritmo elctrico basal (REB) de una frecuencia de 3/min. y una
velocidad de 1 cm./seg. cuando pasa por el cuerpo del estmago, y aumenta hasta 3-4 cm./seg. cuando
pasa por el antro.
El sistema nervioso entrico se conecta con el SNC mediante fibras simpticas y parasimpticas, pero es
capaz de funcionar de manera autnoma sin estas conexiones. El plexo mientrico inerva las capas de
msculo liso circular y longitudinal y tiene a su cargo principalmente el control motor; en cambio el plexo
submucoso inerva el epitelio glandular, las clulas intestinales endocrinas y los vasos sanguneos de la
submucosa y adems est involucrado sobre todo en el control de la secrecin intestinal. Los
neurotransmisores en el sistema nervioso entrico incluyen la acetilcolina, noradrenalina, serotonina,
Gaba, ATP, Oxido ntrico, CO y numerosos pptidos, CCK, endotelina 2, SustanciaP, Neuropptido Y, VIP,
etc.
El PERISTALTISMO es una respuesta refleja que se inicia cuando la pared del intestino se elonga por el
contenido en el lumen y se presenta en todas las partes de la va gastrointestinal desde el esfago hasta el
recto. Esta elongacin inicia una onda de contraccin circular detrs del estmulo y una de relajacin en el
frente de ste. Esta onda de contraccin se mueve en direccin oral-caudal para impulsar hacia adelante
los contenidos del lumen a una velocidad variable entre 2 a 25 cm. /seg.
Aunque la actividad peristltica puede aumentarse o disminuirse mediante la actividad autnoma del
intestino, su presencia es independiente de la inervacin extrnseca.
El estiramiento local libera serotonina que activa las neuronas sensitivas que a su vez activan el plexo
mientrico. Las neuronas colinrgicas que pasan en direccin retrgrada en este plexo mientrico activan a
las neuronas liberadoras de la sustancia P, as como de acetilcolina y dan lugar a la contraccin del
msculo liso. Al mismo tiempo, las neuronas que pasan en direccin antergrada activan a las neuronas
secretoras de NO, VIP, Y ATP para producir la relajacin que precede al estmulo.
El REB del msculo liso gastrointestinal trabaja a un potencial de membrana entre -65 y - 45 mV. Este
REB se inicia en las clulas intersticiales de Cajal, que son clulas mesenquimatosas estrelladas similares
al msculo liso y actan como marcapasos, estas clulas de Cajal envan mltiples prolongaciones hacia el
msculo liso intestinal. .El REB por s solo rara vez produce contraccin muscular, pero los potenciales de
espiga sobrepuestos a la mayor parte de las porciones despolarizadas de la ondas del REB incrementan la
tensin (contraccin) muscular. Las despolarizaciones se deben al ingreso del Calcio y las repolarizaciones
a la salida del K. Muchos polipptidos y neurotransmisores afectan esta onda de ritmo elctrico basal por
ejemplo la acetilcolina incrementa la cantidad de espigas y la tensin (contraccin de la F m lisa) en tanto
que la adrenalina disminuye la cantidad de espigas y la tensin. En el estmago la frecuencia del REB es
de 4/min., en el duodeno 12/min., colon, 9/min., ciego 16/min. Por lo tanto el rol fisiolgico del REB es
coordinar la actividad peristltica y otras actividades motoras gastrointestinales. Las contracciones se
producen solamente durante la parte despolarizante de las ondas. Si hacemos una vagotoma el
peristaltismo estomacal de hace irregular a veces catico. La motilidad gastrointestinal y la secrecin es
regulada tambin por polipptidos biolgicamente activos que son segregados por las clulas nerviosas y
las clulas glandulares de la mucosa, algunas son paracrinas y otras endocrinas y se les llama hormonas
gastrointestinales, aunque sus efectos fisiolgicos son discretos, sin embargo sus alteraciones pueden
producir enfermedades del trnsito intestinal (ejemplo algunas diarreas motoras).
Se agrupan en familias, y entre algunas ellas tenemos:
Familia de la Gastrina: Gastrina y CCK ( CCK-PZ: Colecistoquinina-pancreocimina)
Familia de la Secretinas: GIP, Secretina, VIP, enterogastrona.
Otros grupos: Motilina, Sustancia P, Serotonina.
Materiales, equipos, animales de experimentacin y reactivos.- Para cada mesa de trabajos prcticos:
Reactivos:
Materiales:
01 sapo vivo
Tabla de corcho para soporte y fijacin anfibio
Alfileres para sujecin extremidades
01 par guantes descantables
Equipo de diseccin quirrgico
Estilete para seccin medular y tijera, algodn
04 jeringas descartables de 3 ml
01 Aguja descartable de 18 G x 1
01 Aguja descart. doblada en 90
3 hilos blancos de 15 cm. largo N 50 para las
ligaduras
Cnula de vidrio 2mm dim. ad-hoc
Procedimiento
l.- El alumno anestesiar al animal y luego realizar la preparacin de sapo espinal segn lo aprendido
para producir el shock espinal en el sapo (Ver prctica de reflejos en animal espinal) y realizar la
hemostasia con algodn por compresin.
2.- Diseccin: Sujetar luego el animal en posicin decbito dorsal en la tabla de fijacin con los alfileres y
realizar un corte en toda la lnea medio abdominal y seguir disecando por planos hasta llegar al peritoneo.
3.-Abrir la cavidad abdominal en la misma forma y localizar el estmago cardias, estmago, ploro e
intestinos. Observar de inmediato y muy cuidadosamente los movimientos peristlticos espontneos del
estmago e intestinos. Anote estas observaciones basales . Si estuviesen ausentes estimularlos
mecnicamente.
4.- Con un algodn mojado en Ringer-Batracio a 30 mantener en todo momento la preparacin bien
hmeda con instilaciones abundantes de la sol. Ringer.
5.- Aplicar sobre el estmago e intestino (en cada uno) 6 gotas de cada una de las siguientes soluciones en
el orden: a, b, c, d, e siguiente:
a.- Acetilcolina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer
b.- Adrenalina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer
c.- Fisostigmina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer
d.- Atropina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer
e.- Al final, nuevamente Acetilcolina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer.
Graduar las observaciones visuales de relajacin o contraccin con cruces, comparando con los
movimientos peristlticos espontneos del inicio del experimento.
Conclusiones y Comentario
+
+EI trabajo biolgico tiene como fuente de energa a los enlaces intramoleculares y puede ser medido en
condiciones de actividad o reposo. A esta ltima condicin se le denomina METABOLISMO
BASAL, que puede ser medido directamente por el mtodo calorimtrico o indirectamente por el
consumo de oxgeno.
Las hormonas tiroideas incrementan el metabolismo basal, el consumo de oxgeno por los tejidos y
la produccin de calor por el organismo. Estas hormonas activan los procesos oxidativos celulares.
En humanos, extirpacin de la glndula tiroidea disminuye el consumo de oxgeno a cifras inferiores, del
30 a 50% de lo normal. En los hipertiroideos aumenta el consumo de oxgeno.
EI aumento o disminucin del metabolismo basal a partir de la determinacin del consumo de oxgeno se
emple como un mtodo diagnstico del hipertiroidismo y del hipotiroidismo. En los sujetos
hipertiroideos con sintomatologa definida el metabolismo basal est incrementado en 40 a 60% y puede
superar ms del 100%. Al aumentar el metabolismo disminuyen las reservas de carbohidratos y se emplea
grasas para cubrir las necesidades metablicas. Este produce prdida de peso y aumento de la temperatura
corporal. Debido a que los mecanismos de disipacin de calor estn sobrecargados, los sujetos
hipertiroideos toleran muy mal los ambientes clidos. Las hormonas tiroideas aumentan la frecuencia
cardiaca y la presin arterial sistlica.
EI sujeto hipotiroideo presenta sntomas opuestos: metabolismo bajo, temperatura inferior a la normal,
depsito de grasa y reacciones lentas.
Material
Ratones
Jaulas
Jaulas cmaras
metab1icas
Cal sodada
Metimazol
Levotiroxina
Termmetro
Plastilina
En la presente prctica se comparar los metabolismos de ratones hipotiroideos e hipertiroideos con
ratones eutiroideos ( normales).
Diez a quince das antes del experimento se toma ratones machos adultos jvenes, de la misma edad y
similar peso. Se los coloca en jaulas separadas, que se rotulan eutiroideo, hipertiroideo e hipotiroideo. Los
ratones sern pesados todos los das.
EI ratn hipertiroideo recibe diariamente 15 ug. D levotiroxina. EI ratn hipotiroideo recibe diariamente
1.25 g de metimazol.
Mtodo
Experimento N 1
Se coloca en tres jaulas metab1icas a un ratn eutiroideo, uno hipertiroideo y uno hipotiroideo.
Las jaulas o cmaras metab1icas deben contener cal sodada. Se recomienda que los animales reciban
luz, ya que esta permite que se mantengan quietos, pues los ratones son muy susceptibles a los ruidos a los
movimientos bruscos.
Se coloca un termmetro dentro de cada jaula metablica. Se espera cinco minutos para que se equilibre la
temperatura dentro de la jaula y se registra.
Se humedece el interior de la pipeta colocada en la tapa de la jaula metab61ica con agua jabonosa.
Se coloca una pelcula de espuma de jabn al final de la pipeta y se observara como, a que medida que el
animal va consumiendo el oxgeno, la pelcula de jabn va moviendo a lo largo de la pipeta. EI CO 2
producido ser absorbido por la cal sodada.
Con un cronmetro se determina el tiempo requerido para consumir 1 cm3 de oxigeno y se convierte los
segundos en fraccin centesimal.
A continuacin se calcula en consumo de oxgeno por minuto del animal y se convierte litros por hora.
Este volumen calculado se encuentra en condiciones ATPS y debe ser convertido en condiciones STPD de
acuerdo a la siguiente frmula:
o
Vo STPD = {[Vol ATPS x (Pb - PH2O / Ts)] / 760} x [273 / (273 + Ts)]
Donde:
Vol = L/h
Pb= presin baromtrica.
PH2O= presin de vapor de agua Ts= temperatura del aparto
EI valor cal6rico del oxigeno varia segn el cociente respiratorio. Con una dieta promedio el cociente
respiratorio es 0.8 y el equivalente cal6ricodel Oxgeno es 4.8 Kcal/l, por 1o que el nmero de caloras
por hora ser:
Cal/h = 4.8 cal/l x L/h
Dado que el nmero de caloras es proporcional al peso y a la superficie corporal, entonces:
S=K x W 2/3
o
S = K x logW X 2/3
Donde:
S = superficie corporal
K = constante de von Muralt
Animal
Hombre
Conejo
Caballo
Ratn
12.3
11.2
8.5
11.4
xml O2
consumi
cosumir
1ml de O2
x ml de O2
(60 seg ) (1 ml de O2 )
1,5 ml de O2 / min
40 seg
1 min
60 min
x ml O2 / h
Consumo de O2 en 1 hora =
condiciones ATPS
3) Consumo de O2 en ml/h en condiciones STPD
a) 90 ml/h = 0,09 L/h
b) Encontrar el factor de conversin: Si la presin baromtrica fue de 754 mm de Hg y la
temperatura fue de 37C encontramos en la tabla que el factor de conversin es 0,867.
c) Multiplicando el consumo de O2 en ml/h por el factor de conversin tendremos:
(0,09 L/h) (0,867)= 0,078 L de O2/h como consumo en condiciones STPD.
4) Cuntas Kcal se habrn producido cuando el ratn en su metabolismo consumi 0,078 L/ de
oxgeno, en condiciones STPD?
a) Sabemos que en una dieta mixta el equivalente calrico del O2 es de 4,825 Kcal/L de oxgeno.
b) Entonces podemos calcular las Kcal/h producidas por nuestro ratn, razonando as:
1L
de 02 .equivale a
4,835 Kcal
0,078 L de O2
equivale ax Kcal
O sea:
x Kcal
c)
Pero para poder comparar un indivduo con otro debemos referir este resultado al rea de
superficie corporal (ASC).
i) Calculo del ASC: peso del ratn de 28g de peso
ASC =
11,4( peso 2 / 3 )
segn Mulralt la K=11.4
105 cm 2
0,01 m 2
10.000
como ASC en m2
iv) Entonces nuestro ratn produce 0,376 kcal/h/0,01 m2
5) Cuntas Kcal por m2/h produce nuestro ratn?
Si el animalito produce 0,376 kcal
Entonces producir
x Kcal
por
por
0,01 m2
1,00 m2
(0,376 Kcal ) (1 m 2 )
37,6 Kcal / mm m 2 / h
N2
0,01 m
X Kcal/m2/h=
(RESPUESTA)
TOLERANCIA A LA GLUCOSA
Introduccin
La glicemia en condiciones basales, vara entre 70 y 110 mg/dl, ( 0 3.8 a 5.6 mmol/L. )En la diabetes
mellitus se presenta elevacin de la glicemia en ayunas
En la prctica vamos a estudiar la respuesta del organismo a una carga de glucosa es el llamado test de
Tolerancia a la glucosa..
Material
Sujeto de prueba en ayunas.
Glucosa 75 gr. Anhidra disuelta en 300 ml de agua ms zumo de tres limones.
Glucmetro "Glucotrend" con las cintas reactivas.
Balanza.
Tallmetro.
Tubos de prueba.
Pipetas.
1 fiola de 100 ml.
Matraz de 1000 ml.
Reactivos para anlisis de glucosa en orina:
Sulfato de cobre (puro cristalizado) 17.3 g
Citrato de sodio o potasio (cristalizado) 173.0 g Carbonato
de sodio (cristalizado) 200.0 g
Agua destilada, c.s.p.
1000.0 ml
Peso previo:
Colocar el chip del glucmetro.
Encender y ver el nmero de cinta reactiva que reconoce para su uso.
Colocar la tira reactiva en el glucmetro para su reconocimiento.
Mtodo
Experimento N 1
Pesar y tallar al alumno en estado de ayuno de 12 horas.
Hacer una determinacin de glicemia en ayunas y despus administrar una solucin de 75 gr de glucosa.
Obtener muestras de sangre cada 30 minutos por 2 horas y determinar la glicemia. Simultnea buscar
presencia de glucosa en orina. Construir el grfico correspondiente.
EXPERIMENTO N 2: Test de Benedict
EI test de Benedict puede detectar concentraciones tan pequeas como 0.15 a 0.2 por ciento de glucosa. La
solucin de Benedict no es reducida por el cido rico, la creatinina
FIG N 1
Fig N 2
FIG N 2
Figura N3
Fig N
3
Fig N 4
El Corion Placentario secreta a partir del TERCER mes la PROGESTERONA, hCG , Relaxina,
Somatotrofina o Lactgeno placentario humano (HPL)
Fig.
Introduccin
En la prctica la Diabetes Mellitus se presenta en dos modalidades. Insulina
Dependiente (tipo 1) e Insulina No Dependiente (tipo 2). Estudiaremos la
Diabetes de Tipo I por medio de la destruccin experimental de las clulas
beta del pncreas por medio de la administracin intraperitoneal de una
sustancia txica Alloxan en la rata , es la Diabetes experimental.
Diferenciaremos la glucosuria diabtica de la glucosuria renal y para ello
1 tijera.
2 tubos de prueba.
Reactivo de Benedict
Procedimiento
Identificar tres ratas A, B, y C .
Determinar la glicemia basal en las tres ratas previamente pesadas (la
muestra de sangre se obtiene de la cola a travs de un corte en el extremo).
Administrar va intraperitoneal:
A la rata A (control) se administra va intraperitoneal1.5 ml de
Suero fisiolgico.
- A la rata B: se administra va intraperitoneal Alloxan en solucin al 4%
a la dosis de 200 mg. par kilogramo de peso corporal.
- A la rata C: se administra va intraperitoneal Phorizin en solucin al 4%
a la dosis de 200 mg. por kilogramo de peso corporal.
En la rata B hacer control cada 5 minutos hasta que se haga diabtica, y
luego cada 20 minutos.
A la rata B, cuando ya est diabtica hiperglicmica administrarle
Insulina intraperitoneal a la dosis de 1 UI por cada 100 gramos de peso.
En la rata C investigaremos la Glucosuria con Benedict y chequearemos
la glicemia como de costumbre.
Discusin
FIN___________________
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