INMUNOHEMATOLOGIA

Banco
de Sangre

Autoabsorcin de anticuerpos a 37C

La autoabsorcin es un mtodo que permite detectar en el suero de un
paciente con AHAI asociada a anticuerpos calientes, la presencia de
aloanticuerpos. Para que el autoanticuerpo se absorba es necesario eliminar de la
membrana de los GR una buena cantidad del anticuerpo que se fij in vivo. Para
ello, es necesario aplicar una elucin por calor, con el fin de dejar sitios
disponibles para la autoabsorcin in vitro. Algunos autores recomiendan la
utilidad de tratar las clulas con enzimas despus que se ha hecho la elusin.
Esta tcnica puede ser usada en pacientes que no han sido transfundidos
recientemente.
Mtodo:
1.- Extraer al paciente dos muestras suficientes de sangre.
2.- Centrifugar la muestra con anticoagulante, separar el plasma y dividir los GR.
en alcuotas de 1 ml. Lavar cada muestra con salino calentado a 45 C por 6
veces. Empaquetar las clulas del ltimo lavado.
3.- Agregar a cada tubo un volumen igual de salino, mezclar e incubar a 45 C por
3 5 minutos agitando constantemente.
4.- Centrifugar rpidamente y separar el sobrenadante.
5.- Lavar las clulas 3 veces en salino calentado a 45 C.
6.- A un volumen de las clulas agregar igual volumen del suero a absorber.
7.- Mezclar e incubar a 37 C por 30 60 minutos, mezclando peridicamente.
8.- Centrifugar de inmediato a altas velocidades y separar todo el suero.
9.- Repetir la absorcin con otra alcuota de GR. tratada de igual forma, para
asegurar una adecuada autoabsorcin.
10.-Probar el suero autoabsorbido contra las propias clulas y contra clulas
detectoras de anticuerpos (panel I y panel II) (ver esquema).

Si no se observa aglutinacin, el suero solo contena autoanticuerpos. Si

aglutina solo las clulas pantalla, el anticuerpo se absorbi y queda el
aloanticuerpo, el cul se debe identificar. Si se observa aglutinacin con las
clulas antlogas y las pantallas, la autoabsorcin fue insuficiente. Es necesario
continuar con ms autoabsorciones.
Referencia:
Linares G. Jess. 1986. Inmunohematologa y Transfusin.

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Elusin de anticuerpos con Formamida

1.

Transferir de 5 a 20 gotas de los eritrocitros del paciente (TCD+) a un tubo de Khan.

2.

Agregar el mismo volumen de salino y mezclar bien.

3.

Con una pipeta Pasteur agregar el mismo volumen de Formamida y mezclar bien.

4.

Centrifugar por 5 minutos a 2000 rpm.

5.

Transferir el sobrenadante a un nuevo tubo y diluir 1:2 con salino.

6.

mezclar el sobrenadante y el salino con una pipeta Pasteur y centrifugar

nuevamente a 2000 rpm.
7. El sobrenadante de esta ltima centrifugacin es el eluato. Si es demasiado
viscoso se puede filtrar y volver a centrifugar.
8. Probar el eluato frente a un panel I y II con TCI.

Referencia:
Caruccio L, Byrne K, Procter J, Stroncek D. . A novel method using formamide for the
elution of antibodies from erythrocytes. Vox Sanguinis 2002; 83:63-69.