Clulas dendrticas: explorando

novas vacinas
O sistema imunitrio: um vigilante
contra o cancro

2011

Objectivos de estgio
1.Caracterizar o papel das clulas dendrticas
- No sistema imunitrio
- Na imunoterapia
2. Conhecer melhor o processo da citometria de fluxo
e as suas aplicaes
3.Caracterizar apoptose/necrose
4. Regras de trabalho em condies de esterilidade
5. Isolamento de moncitos a partir do sangue total
6. Diferenciao de moncitos em DCs
7. Fenotipagem
8.Ensaios de maturao, fagocitose e apoptose.

Clulas
dendrticas
!!!!!!!!!

No sistema imunitrio
As clulas dendrticas (DCs) so
clulas com longas extenses
membranares que so capazes de
fagocitar no estado imaturo e
tambm de apresentar antignios
processados aos linfcitos T.
Estes, quando activados, so
essenciais numa resposta de
combate a organismos invasores
ou clulas cancergenas.

Na imunoterapia

Na rea de imunologia tm-se realizado variados

estudos tentando manipular o sistema imunitrio para
produzir vacinas celulares e us-las com fins
teraputicos.

Em laboratrio estas clulas so produzidas para uso

em imunoterapia. O processo envolve o isolamento de
moncitos do sangue perifrico e depois a
diferenciao in vitro para clulas dendrticas (DCs).
Depois de maturas e postas em contacto com um
antignio tumoral do paciente, estas clulas so reintroduzidas com maior capacidade de estimulao
imunitria.

Tcnicas laboratoriais usadas

esta semana
1.Isolamento de moncitos e induo de
diferenciao em DCs
2.Induo da maturao das DCs.
3.Fenotipagem por citometria de fluxo
4.Monitorizao do isolamento dos moncitos
5.Avaliao da maturao das DCs.
6.Avaliaao da capacidade fagocitica das DCs
7. Cultura das linhas celulares tumorais
8. Induo da apoptose
9. Determinao das clulas em apoptose.

Isolamento de moncitos e induo de

diferenciao em DCs
 Marcao com Beads anti-CD14
(marcador de moncitos)
 Separao imunomgnetica

Resultados experimentais
Monitorizao do isolamento dos moncitos por citometria de
fluxo (com marcao com o anticorpo anti- CD14):
a)Pr-coluna;
b)Primeiro eludo;
c)Segundo eludo.

a) Pr-coluna

10 0

10 1

10 2

10 3

10 4

FL4-H ->
Data.004

256

512

768

1024

FSC-H ->
Data.004
10 0
FL4-H ->
Data.004

10 1

10 2

10 3

10 4

b) Primeiro eludo

10 0

10 1

10 2

10 3

10 4

FL4-H ->
Data.003

256

512

768

1024

FSC-H ->
Data.003

10 0
FL4-H ->
Data.003

10 1

10 2

10 3

10 4

c) Segundo eludo

256

512

768

1024

FSC-H ->
Data.006

10 0

10 1

10 2

10 3

10 4

FL4-H ->
Data.006
10 0
FL4-H ->
Data.006

10 1

10 2

10 3

10 4

Concluses
Todos os objectivos foram cumpridos com sucesso:
Conseguiu-se isolar a populao de moncitos
com elevado grau de pureza
Os moncitos em cultura diferenciaram-se em DCs
As DCs apresentaram uma boa capacidade fagoctica
As DCs maturaram convenientemente aps
estimulao
As clulas cancergenas sofreram um processo de
apoptose induzido por aco de um frmaco

Thank you
Guadalupe Cabral
Zlia Silva
Manuela Correia
Teresa Verssimo

Trabalho realizado por

Andr Ramos
Ctia Gonalves
Daniela Carvalho
Margarida Santos

A nossa equipa