INTRODUCCION A LA ESPECTROFOTOMETRIA

I.

II.

III.

FUNDAMENTO
Se basa en la descomposicin ordenada de radiaciones monocromticas
que sufre una energa luminosa (R.E.) al pasar a travs de un medio
dispersante formando el espectro electromagntico.
OBJETIVOS
1. Reconocimiento y manejo del equipo espectrofotmetro.
2. Observar la descomposicin de la luz blanca para determinar las
rangos de la longitud de onda en los diferentes colores de la zona
visible (VIS).
3. Encontrar el lambda analtico () para una muestra coloreada.
MARCO TEORICO

Desde hace muchos aos se ha usado el color como ayuda para reconocer las
sustancias qumicas;
al reemplazar el ojo humano por otros detectores de radiacin se puede estudiar la
absorcin de
sustancias, no solamente en la zona del espectro visible, sino tambin en ultravioleta
e infrarrojo.
Se denomina espectrofotometra a la medicin de la cantidad de energa radiante
que absorbe un
sistema qumico en funcin de la longitud de onda de la radiacin, y a las mediciones
a una
determinada longitud de onda.
La teora ondulatoria de la luz propone la idea de que un haz de luz es un flujo de
cuantos de
energa llamados fotones; la luz de una cierta longitud de onda est asociada con los
fotones, cada
uno de los cuales posee una cantidad definida de energa.
Transmitancia

La figura muestra un haz de radiacin paralela antes y despus de que ha pasado a

travs de una
capa de solucin que tiene un espesor de b cm y una concentracin c de una especie
absorbente.
Como consecuencia de interacciones entre los fotones y las partculas absorbentes,
la potencia del
haz es atenuada. La transmitancia T de la solucin es entonces la fraccin de la
radiacin incidente
transmitida por la solucin:

I=

I
I0

La transmitancia se expresa a menudo como porcentaje:

I=

I
X 100
I0

La absorbancia A de una solucin se define mediante la ecuacin:

A=logT =log

I
I0

La mayor parte de los trabajos analticos se realizan con soluciones de manera que
vamos a
desarrollarla relacin que existe entre la concentracin de la solucin y su capacidad
de absorber
radiacin.

Medicin de Transmitancia y Absorbancia

La transmitancia y la absorbancia se miden en un instrumento llamado
espectrofotmetro, la
solucin del analito se debe contener en algn recipiente transparente, tubo o celda.

Como se ve en la representacin, ocurre reflexin en las interfases: aire-pared, tanto

como en la
pared-solucin. La atenuacin del haz resultante es sustancial. Adems, la
atenuacin de un haz
puede ocurrir por dispersin de las molculas grandes y a veces por absorcin de las
paredes del
recipiente.
Para compensar estos efectos, la potencia del haz transmitido por la solucin del
analito es
comparada comnmente con la potencia del haz transmitido por una celda idntica
que contiene
solamente solvente. Una absorbancia experimental que se aproxima mucho a la
absorbancia
verdadera se obtiene con la ecuacin.

A=log

I solvente
I s olucion

Los espectrofotmetros, estn a menudo, equipados con un dispositivo que tiene una
escala lineal
que se extiende de 0 a 100%. De manera de hacer tal instrumento de lectura directa
en porcentaje de transmitancia, se efectan dos ajustes preliminares, llamados 0%T
y 100%T. El ajuste del 0%T se lleva a cabo mediante un cierre mecnico del detector.
El ajuste de 100%T se hace con el cierre abierto y el solvente en el camino de la luz.
Normalmente el solvente est contenido en una celda que es casi idntica a las que
contienen las muestras.
Cuando la celda del solvente es reemplazada por la celda que contiene la muestra, la
escala da la
transmitancia porcentual.
Los instrumentos actuales poseen un sistema electrnico que realiza la operacin
matemtica y da
la respuesta directamente absorbancia. Tambin hay que hacer una calibracin
previa con el
solvente o blanco.
Aspectos Cuantitativos de las Mediciones de Absorcin

Ley de Beer
Consideremos un bloque de materia absorbente (slido, lquido o gas). Un haz de
radiacin
monocromtica paralelo con intensidad I0 llega al bloque perpendicular a la
superficie; luego pasa a travs de la longitud b del material, que contiene n
partculas absorbentes (tomos, iones o
molculas), la intensidad del haz disminuye a I como resultado de la absorcin.
Consideremos
ahora una seccin transversal del bloque que tiene un rea S (X x Y) y un espesor
infinitesimal dx.
Dentro de esta seccin hay dn partculas absorbentes; asociada a cada partcula
podemos imaginar
una superficie en que ocurrir la captura del fotn. Esto es, si un fotn alcanza una
de esas reas por casualidad, ocurrir inmediatamente la absorcin. El rea total de
esas superficies de captura dentro de la seccin se designa ds; la relacin del rea de
captura al rea total es ds/S.
En un promedio estadstico, esta relacin representa la probabilidad para la captura
de fotones
dentro de la seccin. La intensidad del haz que entra en la seccin, Ix es proporcional
al nmero de fotones por cm2 y por segundo, y dIx representa la cantidad removida
por segundo dentro de la seccin, la fraccin absorbida es entonces -dIx/Ix y esta
relacin tambin es la probabilidad promedio por captura. El trmino tiene signo
negativo para indicar que la intensidad del haz disminuye.

dI x d s
:
Ix S

Recordemos que ds es la suma de las reas de captura para cada partcula dentro de
la seccin;
puede ser por eso proporcional al nmero de partculas ds = dn; siendo dn el nmero
de partculas dentro de la seccin y una constante de proporcionalidad, que se puede
llamar seccin transversal de captura.
Considerando las ecuaciones e integrando de 0 a n

Luego de convertir los logaritmos a base 10 e invirtiendo la fraccin para cambiar de

signo, se
Obtiene:

Siendo n el nmero total de partculas dentro del bloque.

La seccin transversal S se puede expresar en trminos del volumen del bloque en
cm3 y su longitud b en cm, entonces S = V/b Sustituyendo en la ecuacin anterior,
da:

Se nota que n/V tienes las unidades de concentracin (esto es nmero de partculas
por cm3), se
Puede convertir a moles por litro. El nmero de moles es:

x=

n particulas
particulas
6.02 X 1023
mol

Y c expresado en mol/l:

cm3
1000
n
l
C=
mol
X
23
3
6.02 X 10
V [ cm ]
Combinando:

log

I 0 6.02 x 1023 . a . b . c
=
I
2.303 x 1000

Finalmente, las constantes de esta ecuacin se pueden reunir en una nica

constante:

log

I0
= . a . c= A
I

Absortividad y Absortividad Molar

La absorbancia es directamente proporcional a la longitud del camino b a travs de la
solucin y la
concentracin c de la especie absorbente. Estas relaciones se dan como:

A=a .b . c
Siendo a una constante de proporcionalidad llamada absortividad. La magnitud de a
depender de

las unidades empleadas para b y c. A menudo b es dada en trminos de cm y c en

gramos por litro,
entonces la absortividad tiene unidades de lg1cm1.
Cuando la concentracin se expresa en moles por litro y la longitud de la celda en
centmetros, la
absortividad se llama absortividad molar, se designa como y tiene unidades de
lmol1cm1,
entonces la absorbancia es:

A= .b .c
Curva de Calibracin
Denominamos espectro de una sustancia a la representacin de absorbancia (A) en
funcin de
longitud de onda (),este grfico presenta ondulaciones con mximos y mnimos.
Para hacer las determinaciones cuantitativas se elige, en general, la longitud de onda
correspondiente a un mximo, pues el error de medicin es mnimo y la sensibilidad
mxima. Para verificar el cumplimiento de la ley de Beer, se debe realizar la curva de
calibracin; absorbancia (A) en funcin de concentracin (c), para lo cual se preparan
soluciones de la sustancia de concentraciones conocidas y se mide la absorbancia a
la longitud de onda elegida.

Si es vlida la ley de Beer, para esa sustancia a esas concentraciones, la relacin

debe ser una recta, que pase por el origen de los ejes cartesianos; a menudo se
observan desviaciones debidas a
diversos factores.

Aplicaciones de la Ley de Beer a Mezclas

La ley de Beer tambin se aplica a una solucin que contiene ms de una clase de
sustancia
absorbente. Siempre que no haya interaccin entre las varias especies, la
absorbancia total para un sistema multicomponente est dada por:

A= A 1+ A 2+ A 3 + A n= 1 b c1 + 2 b c1 +...+ n b cn

Indicando los subndices 1,2, .. n, las especies absorbentes.

Limitaciones a la Aplicabilidad de la Ley de Beer

Se encuentran pocas excepciones a la generalizacin que la absorbancia est
relacionada
linealmente a la longitud del camino ptico. En cambio, las desviaciones de la
proporcionalidad directa entre la absorbancia medida y la concentracin, para b
constante, son ms frecuentes.
Estas desviaciones son fundamentales y representan limitaciones reales de la ley.
Algunas ocurren como una consecuencia de la manera en que las mediciones de
absorbancia se hacen, o como un resultado de cambios qumicos asociados con
cambios en la concentracin. Otras ocurren a veces como desviaciones
instrumentales.
Limitaciones Propias de la Ley de Beer
La ley de Beer es exitosa en describir el comportamiento de absorcin de soluciones
diluidas
solamente; a concentraciones altas (generalmente mayores que 0,01 M), la distancia
promedio entre las especies responsables de la absorcin est disminuida hasta el
punto que cada una afecta la distribucin de cargas de sus vecinas. Esta interaccin,
a su vez, puede alterar la habilidad de las

especies para absorber en una longitud de onda de radiacin. Debido a que la

extensin de la
interaccin depende de la concentracin, la ocurrencia de este fenmeno provoca
desviaciones de la relacin lineal entre absorbancia y concentracin. Un efecto
similar se encuentra a veces en soluciones que contienen altas concentraciones de
otras especies, particularmente electrolitos. La proximidad de iones a la especie
absorbente altera la absortividad molar de la ltima por atracciones electrostticas,
este efecto se disminuye por dilucin.
Se encuentran algunas excepciones entre ciertos iones o molculas orgnicas
grandes, que
presentan interacciones significativas a concentraciones debajo de 0,01 M.
Desviaciones de la ley de Beer tambin surgen porque es dependiente del ndice de
refraccin de la solucin; entonces, si cambios de concentracin provocan
alteraciones en el ndice de refraccin de la solucin, se observan desviaciones de la
ley.
Desviaciones Qumicas Aparentes
Surgen cuando un analito se disocia, se asocia, o reacciona con el solvente para
producir un
producto teniendo un espectro de absorcin diferente del analito. Por ejemplo CrO4
2- en funcin del pH va a absorber diferente.
Desviaciones Instrumentales Aparentes con Radiacin Policromtica
Se observa una adhesin estricta a la ley de Beer solamente cuando la radiacin es
monocromticaverdadera; esta observacin es otra informacin del carcter
limitante de la ley. El uso de radiacin que est restringida a una longitud de onda
simple es raro porque los elementos que aslan porciones de la salida de una fuente
continua producen una banda mas o menos simtrica de longitudes de onda
alrededor de la deseada. La derivacin siguiente muestra el efecto de la radiacin
policromtica de la ley de Beer. Consideremos un haz que consiste de dos longitudes
de onda y . Suponiendo que la ley de Beer se aplica estrictamente para cada
una de estas individuales, se puede escribir para

Igualmente para

Cuando una medida de absorbancia se realiza con una radiacin compuesta por
ambas longitudes de onda, la intensidad del haz emergente de la solucin viene
dada por (I + I) y la del haz procedente del solvente por (I0 + I0). Por lo tanto, la
absorbancia medida Am de la muestra es:

De manera que la absorbancia medida es un rango (error de medicin instrumental).

Es conveniente hacer las mediciones en un mximo del espectro, para tener mayor
sensibilidad y menor error.
Tipos Generales de Instrumentos Para Mediciones de Absorcin Molecular
Titulaciones Fotomtricas
Las mediciones fotomtricas o espectrofotomtricas se pueden emplear para
localizar el punto de
equivalencia de una titulacin, siempre que el analito, el reactivo o el producto de la
titulacin
absorban radiacin. Alternativamente un indicador absorbente puede proveer el
cambio necesario
de absorbancia para la ubicacin del punto final.
Curvas de Titulacin
Una curva de titulacin fotomtrica es un grfico de absorbancia, corregida por
cambios de
volumen, como una funcin del volumen del titulante. Si se eligen las condiciones
adecuadamente, la curva consistir de dos regiones de lneas rectas con pendientes
diferentes, una que ocurre al comienzo de la titulacin y la otra ubicada ms all de
la regin del punto de equivalencia; se toma el punto final como la interseccin de
las porciones lineales extrapoladas.

IV. PARTE EXPERIMENTAL

Materiales y equipos
Fiolas
Pipetas
Probetas
Vasos de precipitado
Piscetas
Espectrofotmetro marca Jenway
Otros
Reactivos
Solucin de Sulfanilamida (R1)
Solucin de N-Naftiletilendimida ioduro alcalino (R2)
Solucin patrn de Nitritos
Colorantes orgnicos
Agua destilada
Otros solventes
Muestras
MA= muestras coloreadas preparada en el laboratorio (M1 y M2)
MB= colorante orgnico
V. PROCEDIMIENTO O METODOLOGIA

V.1. Reconocimiento del equipo espectrofometrico (marca Jenway) y observancia de

los colores del espectro electromagntico en la zona VIS
Anote y sigue las indicaciones del laboratorista en cuanto al reconocimiento e
identificacin de las partes externas del equipo. Luego observar los colores de las
radiaciones comprendidas en la zona VIS del expectro electromagntico empezando
desde 360 nm y terminando en 780 nm en intervalos de 20nm.
V.2. Para encontrar el lambda analtico en muestras coloreadas
V.2.1 En una muestra coloreada preparada
a) Se toman 3 fiolas de 50ml. A la primera se le enrasa con agua destilada y
luego se le adiciona 1 ml de R1 y 1m de R2. Se le rotula como blanco.
b) En la segunda y tercera fiola se le agrega 0.1m y 0.4 ml respectivamente, de
la solucin patrn de nitritos. Seguidamente se les enrasa con agua destilada y
luego se les adiciona 1 ml de R1 y 1 ml de R2 a cada una. A estas se les rotula
como muestras M1 y M2 respectivamente.
c) Una vez estabilizado la coloracin se procede a efectuar las lecturas de las
absorbancias en el espectrofotmetro para cada una, empezando desde 490
hasta 580 nm en intervalos de 5nm. Grafique la curva del espectro para cada
muestra y determine el lambda analtica para la muestra coloreada (nitritos).
V.2.2 En una muestra coloreada orgnico
a. Si el colorante extrado estuviera muy concentrado, tome un volumen
adecuado y realice la dilucin correspondiente con el solvente utilizado en la
extraccin.
b. Llena una celda con la muestra de colorante diluida y otra con el solvente
utilizado la que ser el blanco para la calibracin del equipo.
c. Proceda a realizar las lecturas de las absorvancias con el equipo en la zona
correspondiente a la coloracin del colorante a intervalos de 5 nm. Grafique
la curva del espectro y determine el lambda analtico de la muestra del
colorante organico respectivo.

VI. Resultados
CUADRO 1: COLORES RESULTANTES DE LA OBSERVACION EN EL
ESPECTROFOTOMETRO
RADIACIONES
ZONA VISIBLE
380
390
400
410
420
430
440
450
460
470
480
490
500
510
520
530
540
550
560
570

COLOR
OBSERVADO
Azul
Azul
Azul
Azul
Azul-Violeta
Violeta
Violeta
Violeta
Violeta
Violeta
Violeta
Violeta-Verde
Verde
Verde
Verde
Verde
Verde
Verde
Anaranjado
tenue
Anaranjado

580
590
600
610
620
630
640
650
660
650
660
670
680
690
700
710
720

tenue
Anaranjado
Anaranjado
Rojo tenue
Anaranjado
AnaranjadoRojo
AnaranjadoRojo
AnaranjadoRojo
Rojo
Rojo
Rojo
Rojo
Rojo
Rojo
Rojo
Rojo tenue
Rojo tenue
Sin color

CUADRO 2: MGENES CAPTURADAS COMO FUENTE DE INFORMACION PARA

DETERMINACION DEL COLOR
380

390

400

410

420

430

440

450

460

470

480

490

500

510

520

530

540

550

560

570

580

590

600

610

620

630

640

650

660

670

680

690

700

710

720

CUADRO 3: Muestra coloreada preparada de menor concentracin

(nm)
480
485
490
495
500
505
510
515
520
525
530
535
540
545
550
555
560
565

A
0.169
0.197
0.184
0.185
0.19
0.195
0.199
0.202
0.206
0.209
0.213
0.212
0.212
0.21
0.204
0.198
0.189
0.183

570
575
580
585
590
595
600

0.183
0.178
0.17
0.153
0.137
0.129
0.125

CUADRO 4: Muestra con mayor concentracin

(nm)
480
485
490
495
500
505
510
515
520
525
530
535
540
545
550
555
560
565
570
575
580
585
590
595
600

A
0.215
0.24
0.236
0.246
0.26
0.275
0.29
0.302
0.314
0.325
0.332
0.335
0.335
0.33
0.321
0.307
0.29
0.271
0.258
0.239
0.217
0.186
0.157
0.142
0.131

GRAFICO 1: Determinacin del lanmda analtico

El grafico podemos determinar:

(nm) menor concentracin = 540
(nm) mayor concentracin = 540

Por lo tanto el analtico es = 540 nm

VII. CONCLUSIONES
1. Durante el desarrollo de la prctica en el laboratorio se reconoci el
espectrofotmetro y tambin el adecuado uso del equipo.
2. Se observ durante la prctica de laboratorio la descomposicin de la
luz blanca dando diferentes colores, dependiendo de cada longitud de
onda.
3. Por consiguiente, despus de tomar todos los datos correspondiente se
pudo determinar el analtico para nuestra muestra coloreada.

VIII. DISCUSIONES
1. Segn Douglas R., se recomienda usar una celda de cuarzo, pues esta es de
mejor calidad, pero por cuestiones de costo y tambin porque a diferencia del
cuarzo es ms sencillo desechar una celda de plstico, utilizamos una celda de
plstico en la prctica.
2. Segn Donald M. West, las titulaciones fotomtricas se pueden emplear para
localizar el punto de

Equivalencia de una titulacin, siempre que el analito, el reactivo o el producto

de la titulacin
Absorban radiacin, esto no se realiz en la prctica porque las muestras no
recibieron una radiacin externa.
3. Segn el cuadro entregado en la gua de prctica para la longitud de onda 380
450 corresponde el color violeta, pero en la prctica se determin el color
azul esto se pudo deber a algn error del analista.
4. Segn la tabla de la gua de prcticas, el color rojo se manifiesta a partir de la
longuitud de onda de 620 750, pero para nosotros se manifiesta el color rojo
desde la longitud de onda de 600, pues se debe tratar de una mala
observacin del analista.
IX. RECOMENDACIONES
1. Se recomienda, calibrar el equipo antes de realizar las pruebas
correspondientes para el debido anlisis.
2. Se recomienda, tomar nota atentamente del tamao de la longitud de onda.
3. Se debe observar atentamente el color arrojado por el espectofotometro, para
no errar en los colores.
X. BIBLIOGRAFIA
Qumica Analtica Cuantitativa, Day and Underwood.
Qumica Analtica, Skoog and West.
Anlisis Instrumental, Douglas R. Skoog and Donald M. West.