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UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD


ESCUELA PROFESIONAL DE TECNOLOGIA MDICA

AGLUTINACION EN LATEX
PCR, ASO, FR
CATEDRTICO:

Lic.TM. : ENRIQUE SOTELO TASAYCO

CATEDRA:

INMUNOLOGA ESPECIAL

ESPECIALIDAD:

LABORATORIO CLINICO Y ANATOMIA PATOLOGIA

PRESENTADO POR:
MIRANDA MACAVILCA, George C.
CICLO:

VI

TURNO:

NOCHE

HUANCAYO -2010

AGLUTINACIN
Es la interaccin entre un anticuerpo y una partcula antignica
que se visualiza por la formacin de agregados o grumos macroscpicos.
En este proceso, el anticuerpo es conocido como aglutinina y el antgeno
como el aglutingeno.
Las reacciones de aglutinacin utilizan el mismo principio de las
reacciones de precipitacin. Cuando el anticuerpo est en exceso inhibe
la reaccin de precipitacin, lo mismo ocurre en las reacciones de
aglutinacin. Esta inhibicin es llamada el efecto
prozona.
Esta tcnica es ampliamente usada para la identificacin rpida de
bacterias, hongos, grupos sanguneos y otros antgenos; tambin es
utilizada para la deteccin de anticuerpos que pueden ser indicativos de
un estado de enfermedad.
La temperatura, el pH, la concentracin de electrolitos, son importantes
para la realizacin de la prueba. La reaccin final se evidencia por la
formacin de malla o grumos visibles macroscpicamente.

Las ventajas de las reacciones de aglutinacin desde el punto de


vista de su utilidad en el laboratorio es que son muy sencillas de
realizar, no requieren ningn equipamiento para su lectura, son rpidas
y fciles de implementar. Sin embargo, cabe mencionar, que las
reacciones de aglutinacin presentan menor sensibilidad que las
reacciones
de
interaccin
primaria
tales
como
ELISA
e
Inmunofluorescencia indirecta.
a) INTERPRETACIN Y LECTURA: para todo test de aglutinacin en
ltex.
Si vemos grumos en la superficie es positivo, si solo hay una turbidez es
no concluyente y si no hay nada es negativo.

b) TIPOS DE TEST DE AGLUTINACIN


Si bien es cierto hay una gran gama de pruebas de aglutinacin en
ltex sin embargo en el presente trabajo nos bocaremos a las pruebas
de:
A.
B.
C.
D.
E.

Protena C reactiva (PCR)


Antiestreptolisina-O (AS0)
Factor reumatoide (FR)
RPR
WIDAL

A. PROTENA C REACTIVA (PCR)


a. OTROS NOMBRES

CRP,

Reactantes de fase aguda.

b. DEFINICIN
La protena C reactiva se produce en el hgado cuando hay una
infeccin o inflamacin aguda en el cuerpo. Su importancia es que
reacciona con el sistema del complemento que es un sistema de
defensa contra agresiones externas del cuerpo humano.
c. PARA QU SE REALIZA?
Se utiliza para evaluar la presencia de enfermedades infecciosas
bacterianas, enfermedades inflamatorias (fiebre reumtica, artritis
reumatoide, etc..) pero no se eleva de forma habitual en
enfermedades producidas por virus.
Si se trata la enfermedad con Aspirina o antiinflamatorios
desaparece
su
elevacin.
La protena C reactiva aparece elevada en el infarto de miocardio.
Tambin puede ser de ayuda tras una intervencin de ciruga, ya que
aparece elevada durante 3 4 das, para luego disminuir, si persiste
elevada es que hay alguna infeccin o complicacin post-quirrgica.
d. VALORES NORMALES DE PROTENA C REACTIVA EN SUERO
Niveles normales de PCR en adultos

menores de 1 mg/ml

e. VALORACIN DE RESULTADOS ANORMALES


Los niveles aumentados de PCR pueden indicar:

Artritis aguda

Artritis reumatoide

Fiebre reumtica

Otras
enfermedades
autoinmunes
(Sndrome
Enfermedad de Crohn, vasculitis, LED, etc...)

Infarto de miocardio

Infarto pulmonar

de

Reiter,

Problemas de rechazo de transplantes

Traumatismos

Infecciones bacterianas (urinarias, tuberculosis, etc...)

Cncer.

f. Tcnica de PCR
PCR-Latex
Determinacin de la protena C-reactiva
PRUEBA EN PORTA
1. FUNDAMENTO
El PCR-Latex Test es una prueba rpida de aglutinacin en porta
basada en la tcnica de Singer1, para la deteccin directa y la
semicuantificacin de la protena C-reactiva (PCR) en suero. La
determinacin se efecta ensayando una suspensin de ltex
recubierto con anticuerpos anti-PCR, frente a los sueros problema. La
presencia de aglutinacin es indicativa de un aumento del nivel de
PCR por encima del lmite superior del intervalo de referencia de las
muestras ensayadas.

2. COMPOSICION DE LOS REACTIVOS


R

Reactivo PCR-Latex. Suspensin estabilizada y


tamponada de partculas de ltex recubiertas con
anticuerpos especficos anti-PCR humana. Contiene
0,95g/L de azida sdica.

CONTROL +
Suero humano con una concentracin de PCR > 15
mg/L. Contiene 0,95 g/L de azida sdica.

CONTROL - Suero animal, con una concentracin mxima de 1


mg/L de PCR humana. Contiene 0,95 g/L de azida
sdica.

3. MUESTRAS
Suero claro, reciente. Una vez separado, el suero puede guardarse a 28C durante una semana antes del ensayo, o por un perodo mayor a
20C.
4. EQUIPO ADICIONAL

Pipetas de volumen variable.


Solucin salina (NaCl 0,9%, para tcnica semi-cuantitativa).
Agitador mecnico rotatorio de velocidad regulable a 100 r.p.m.
Cronmetro.

5. TECNICA
I.

Prueba cualitativa
1. Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente
(Nota 1).
2. Resuspender el vial de ltex con suavidad. Aspirar y vaciar
varias veces el cuentagotas para asegurar su homogeneidad
antes del ensayo.
3. Depositar 1 gota (50 L) de suero problema en uno de los
crculos de la tarjeta visualizadora. En crculos adicionales,
depositar 1 gota de control positivo y 1 gota de control
negativo.
4. Aadir a cada crculo 1 gota del Reactivo PCR-Latex, prxima
a la muestra a analizar.
5. Efectuar la mezcla con ayuda de un palillo desechable,
extendindola de forma que cubra por completo la superficie
interior de cada anillo. Emplear palillos distintos para cada
mezcla.
6. Mover la tarjeta con agitador rotatorio (100 r.p.m.) durante 2
minutos (Nota 2).
7. Observar de inmediato con la ayuda de una luz adecuada, la
aparicin de cualquier signo de aglutinacin.
Lectura

Reaccin negativa: Suspensin uniforme sin cambio visible alguno,


tal como se presenta en el control negativo (Nota 3).
Reaccin positiva: Aglutinacin dbil o intensa, fcilmente visible
macroscpicamente (Nota 4).
II.

Prueba semi-cuantitativa
1. Para cada muestra a analizar se utilizan 6 crculos de una tarjeta
pipeteando 50 L de solucin salina (0,9%) en cada uno de ellos.
2. Pipetear sobre el diluyente del primer crculo 50 L de muestra, y
empleando la misma punta, mezclar mediante aspiraciones y
expulsiones repetidas, transfiriendo 50 L de la mezcla resultante
sobre el diluyente del segundo crculo.
3. Continuar con la serie de dobles diluciones hasta el sexto crculo,
desechando los 50 L provenientes del mismo. Las diluciones
finales obtenidas sern: 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32,1:64.
4. Ensayar cada una de las diluciones tal como se describe en los
pasos 4-7 de la Prueba cualitativa.

6. VALORES ESPERADOS
Mientras en las personas sanas la concentracin de protena
Creactiva en el suero es inferior a 5 mg/L, durante algunas
enfermedades, dentro de las 4-8 horas subsiguientes a un episodio
agudo, estos valores aumentan y la concentracin de PCR en suero
puede llegar hasta 500 mg/L. Dado que un nivel elevado de PCR
siempre esta ligado a cambios patolgicos, la determinacin de la
PCR tiene un gran valor para la confirmacin del diagnstico, el
tratamiento y el control de la evolucin de las enfermedades
inflamatorias.
-

La contaminacin bacteriana de controles y muestras, as como la


congelacin y descongelacin del reactivo, son causas generales
de resultados positivos falsos.
Trazas residuales de detergentes en las tarjetas visualizadoras
pueden ocasionar asimismo falsas positividades. Lavar las tarjetas
bajo el grifo hasta que se hayan eliminado todos los residuos y
enjuagarlas con agua destilada. Secar al aire, evitando el empleo
de solventes orgnicos puesto que modifican el acabado especial
de las placas.

El Reactivo PCR-Latex no debe utilizarse con posterioridad a su


fecha de caducidad, puesto que un almacenamiento ms
prolongado puede afectar su sensibilidad.

F. ANTIESTREPTOLISINA-O (AS0)
a. OTROS NOMBRES

Anlisis de antiestreptolisinas O,

Pruebas reumticas ASLO,

ASLO.

b. DEFINICIN
El ttulo de ASLO es la medicin de anticuerpos anti-Estreptococo
betahemolticos del tipo A. Esta bacteria produce una enzima llamada
estreptolisina O, que puede destruir los hemates y el cuerpo reacciona
contra ella produciendo anticuerpos especficos antiestreptolisina O.
La medicin de estos anticuerpos es lo que refleja el anlisis de
antiestreptolisinas O ASLO.
c. PARA QU SE REALIZA?
La presencia de ttulos altos de antiestreptolisinas O ASLO, indican una
infeccin por la bacteria Estreptococo betahemolticos del tipo A, que
puede producir una glomerulonefritis, una fiebre reumtica, una
endocarditis bacteriana o una escarlatina.
La elevacin de ASLO aparece a la semana de la infeccin por el
estreptococo, los valores ms elevados se dan en la tercera semana de
la infeccin y es cuando pueden aparecer las enfermedades secundarias
a esta infeccin (glomerulonefritis, una fiebre reumtica, una
endocarditis bacteriana o una escarlatina) pero no son especficos de
ninguna de ellas. Deben ser diagnosticadas cada una de ellas por la
clnica o por otros estudios diagnsticos.
El ASLO pueden mantenerse elevado a los 6 meses en el 30% de los
casos.
d. VALORES NORMALES DE ASLO
Niveles normales de ASLO

en
en
en
en

adultos
nios menores de 2 aos
nios entre 2 y 4 aos
nios entre 4 y 12 aos

Menores de
Menores de
Menores de
Entre 160 y

160 Unidades/ml
50 Unidades/ml
160 Unidades/ml
300 Unidades/ml

En estos valores puede haber ciertas diferencias por la tcnica o por


criterios de normalidad propios de laboratorios concretos, a veces en el
rango de valores y otras veces por las unidades a las que se hace
referencia.
e. VALORACIN DE RESULTADOS ANORMALES
Los niveles aumentados de ASLO pueden indicar:

Infeccin por Estreptococo betahemolticos del tipo A

Glomerulonefritis

Fiebre reumtica

Endocarditis bacteriana

Escarlatina

Pioderma por Estreptococo betahemolticos del tipo A

f. TCNICA DE ASO
ASLO-Latex
Determinacin de anti-estreptolisina O
PRUEBA EN PORTA
1.

FUNDAMENTO
El ASLO-Latex Test es una prueba rpida de aglutinacin en porta
para la deteccin directa y la semi-cuantificacin de niveles
clnicamente significativos de anticuerpos anti-estreptolisina O
(ASLO) en suero.
La determinacin se efecta ensayando una suspensin de partculas
de ltex recubiertos con estreptolisina frente a los sueros problema.
La presencia o ausencia de aglutinacin visible es indicativa de la
presencia o ausencia de ASLO en las muestras nsayadas a niveles
significativos

2.

COMPOSICION DE LOS REACTIVOS

Antgeno ASLO-Latex. Suspensin estabilizada y


tamponada de partculas de ltex recubiertas con
estreptolisina O. Contiene 0,95 g/L de azida sdica.

Suero humano con una actividad ASLO superior a


CONTRO +
200 UI/mL. Contiene 0,95 g/L de azida sdica
L
Suero animal con una actividad ASLO inferior a 100
UI/mL. Contiene 0,95 g/L de azida sdica.
CONTROL

3.

MUESTRAS

Suero claro, reciente. Una vez separado, el suero puede guardarse a


2-8C durante una semana antes del ensayo, o por un perodo mayor
a 20C.
4.

EQUIPO ADICIONAL

1.Pipeta de volumen variable.


2.Solucin salina (NaCl 0,9%, para tcnica semi cuantitativa)
3.Agitador mecnico rotatorio de velocidad regulable a 100 r.p.m.
4.Cronmetro.
5.
I.

TECNICA
Prueba cualitativa

1. Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente


(Nota 1).
2. Resuspender el antgeno con suavidad. Aspirar y vaciar
varias veces el cuentagotas para asegurar su homogeneidad
antes del ensayo.
3. Depositar 1 gota (50 L) de suero problema en uno de los
crculos de la tarjeta visualizadora. En crculos adicionales,
depositar 1 gota de control positivo y 1 gota de control
negativo.
4. Aadir a cada crculo 1 gota de Antgeno ASLO-Latex,
prxima a la muestra a analizar
5. Efectuar la mezcla con ayuda de un palillo desechable,
extendindola de forma que cubra por completo la superficie
interior de cada anillo. Emplear palillos distintos para cada
mezcla.
6. Mover la tarjeta con agitador rotatorio (100 r.p.m.) durante 2
minutos (Nota 2).
7. Observar de inmediato con la ayuda de una luz adecuada, la
aparicin de cualquier signo de aglutinacin
Lectura
Reaccin negativa: Suspensin uniforme sin cambio visible alguno,
tal como se presenta en el control negativo.
Reaccin positiva: Aglutinacin dbil o intensa, fcilmente visible
macroscpicamente.
II.

Prueba semi-cuantitativa
1. Para cada muestra a analizar se utilizan 4 crculos de una tarjeta
pipeteando 50 L de solucin salina (0,9%) en los tres primeros y
25 L en el cuarto.
2. Pipetear sobre el diluyente del primer crculo 50 L de muestra, y
empleando la misma punta, mezclar mediante aspiraciones y
expulsiones repetidas, transfiriendo 50 L de la mezcla resultante
al tercer crculo. Mezclar de nuevo y desechar 50 L.
3. Pipetear sobre el segundo crculo 25 L de muestra y empleando
la misma punta, mezclar con el diluyente en la forma indicada.

Transferir 25 L de la mezcla sobre el diluyente del cuarto crculo


y mezclar. Las diluciones finales obtenidas sern: 1:2, 1:3, 1:4, 1:6.
4. Ensayar cada una de las diluciones tal como se describe en los
pasos 4-7 de la Prueba cualitativa.
Lectura
Como en la Prueba cualitativa. El ttulo de la muestra corresponde a
la mxima dilucin que presenta reactividad. La dilucin siguiente
debe ser negativa
1. La sensibilidad del ensayo puede reducirse a temperaturas bajas.
Los mejores resultados se obtienen trabajando entre 15 y 25C.
2. Retrasos en las lecturas pueden ocasionar una sobre-valoracin de
la tasa de anticuerpos presentes.
3. Los ttulos obtenidos con la prueba de ltex se comparan
favorablemente con los obtenidos con la prueba hemoltica en tubo
dentro de los margenes de precisin de ambos mtodos
-

La contaminacin bacteriana de controles y muestras, as como la


congelacin y descongelacin del antgeno, son causas generales
de resultados positivos falsos.
Trazas residuales de detergentes en las tarjetas visualizadoras
pueden ocasionar asimismo falsas positividades. Lavar las tarjetas
bajo el grifo hasta que se hayan eliminado todos los residuos y
enjuagarlas con agua destilada. Secar al aire, evitando el empleo
de solventes orgnicos puesto que modifican el acabado especial
de las placas.
La suspensin antignica no debe utilizarse con posterioridad a su
fecha de caducidad, puesto que un almacenamiento ms
prolongado puede afectar su sensibilidad.
G. FACTOR REMATOIDEO (FR)

a. OTROS NOMBRES

FR.

RF.

b. DEFINICIN
El factor reumatoide (FR) es una prueba que mide la presencia y nivel
de la IgM especfica contra las inmunoglobulinas IgG anormales,

producidas por los linfocitos de la membrana sinovial, de las


articulaciones de personas afectadas por la Artritis Reumatoide.
c. PARA QU SE REALIZA ESTE ESTUDIO?
La Artritis Reumatoide es una enfermedad crnica, que produce la
inflamacin de las articulaciones principalmente de manos y pies.
Cuando se originan estas inmunoglobulinas IgG y se fija la IgM, se
forman inmunocomplejos IgG-IgM que activan el Complemento y otros
factores inflamatorios que producen secundariamente la destruccin
de las articulaciones afectadas. Por ello se le llama una enfermedad
autoinmune, ya que es el sistema inmunitario del individuo el que
destruye tejidos del propio cuerpo.
No es un anlisis especfico de esta enfermedad, aparece positivo en
el 80 % de los pacientes con Artritis Reumatoide, pero puede aparecer
negativo. Inclusive puede aparecer positivo en otras enfermedades no
relacionadas (Lupus Eritematoso Sistmico, Sndrome de Sjogren,
etc...).
En personas de la tercera edad pueden aparecer niveles elevados sin
repercusin clnica.

d. VALORES NORMALES DE FACTOR REUMATOIDE (FR)


Valores normales o NEGATIVOS:

Menor de 60 U/ ml (por nefelometra).

Ttulo menor de 1:80 (mtodo de aglutinacin)

En estos valores puede haber muy pequeas diferencias por la tcnica


o por criterios de normalidad propios de laboratorios concretos, a
veces en el rango de valores y otras veces por las unidades a las que
se hace referencia.
e. VALORACIN DE LOS RESULTADOS ANORMALES
Puede aparecer POSITIVO el Factor Reumatoide (FR) en:

Artritis Reumatoide

Dermatomiositis

Escleroderma

Hepatitis crnica

Infeccin viral crnica

Mononucleosis infecciosa

Leucemia

Lupus Eritematoso Sistmico

Sndrome de Sjogren

Sndrome Nefrtico

Tuberculosis

a. TCNICA
FR-Latex
Determinacin de factores reumatoideos
1. FUNDAMENTO
El FR-Latex Test es una prueba rpida de aglutinacin basada en una
modificacin de la tcnica de Singer1, para la deteccin directa y la
semicuantificacin en porta de los factores reumatoideos (FR) presentes
en el suero.
La determinacin se efecta ensayando una suspensin de partculas de
ltex recubiertos con gamma globulina humana frente a los sueros
problema. La presencia o ausencia de aglutinacin visible es indicativa
de la presencia o ausencia de FR en las muestras ensayadas

2.

COMPOSICION DE LOS REACTIVOS


R

3.

Reactivo FR-Latex. Suspensin estabilizada y tamponada de


partculas de ltex recubiertas con gamma globulina humana.
Contiene 0,95 g/L de azida sdica.

CONTROL +

Suero humano con una actividad aproximada


equivalente a 25
UI/mL. Contiene 0,95 g/L de
azida sdica.

CONTROL -

Suero animal con una actividad inferior a 5


UI/mL. Contiene 0,95 g/L de azida sdica.

MUESTRAS
Suero claro, reciente.
Una vez separado, el suero puede guardarse a 2-8C durante una
semana antes del ensayo, o por un perodo mayor a 20C.

4.

EQUIPO ADICIONAL

1.Pipeta de volumen variable.


2.Solucin salina (NaCl 0,9%, para tcnica semi cuantitativa)
3.Agitador mecnico rotatorio de velocidad regulable a 100 r.p.m.
4.Cronmetro
5.
I.

TECNICA
Prueba cualitativa

1. Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente


Resuspender el antgeno con suavidad. Aspirar y vaciar varias
veces el cuentagotas para asegurar su homogeneidad antes del
ensayo.
2. Depositar 1 gota (50 L) de suero problema en uno de los crculos
de la tarjeta visualizadora. En crculos adicionales, depositar 1
gota de control positivo y 1 gota de control negativo.
3. Aadir a cada crculo 1 gota de Reactivo FR-Latex, prxima a la
muestra a analizar.
4. Efectuar
la
mezcla
con
ayuda
de
un
palillo
desechable,extendindola de forma que cubra por completo la

superficie interior de cada anillo. Emplear palillos distintos para


cada mezcla.
5. Mover la tarjeta con agitador rotatorio (100 r.p.m.) durante 2
minutos
6. Observar de inmediato con la ayuda de una luz adecuada, la
aparicin de cualquier signo de aglutinacin.
Lectura
Reaccin negativa: Suspensin uniforme sin cambio visible alguno,
tal como se presenta en el control negativo.
Reaccin positiva: Aglutinacin dbil o intensa, fcilmente visible
macroscpicamente.
II.

Prueba semi-cuantitativa
1. Para cada muestra a analizar se utilizan 6 crculos de una tarjeta
pipeteando 50 L de solucin salina (0,9%) en cada uno de ellos.
2. Pipetear sobre el diluyente del primer crculo 50 L de muestra, y
empleando la misma punta, mezclar mediante aspiraciones y
expulsiones repetidas, transfiriendo 50 L de la mezcla resultante
sobre el diluyente del segundo crculo.
3. Continuar con la serie de dobles diluciones hasta el sexto crculo,
desechando los 50 L provenientes del mismo. Las diluciones
finales obtenidas sern: 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64.
4. Ensayar cada una de las diluciones tal como se describe en los
pasos 4-7 de la Prueba cualitativa.

Lectura
Como en la Prueba cualitativa. El ttulo de la muestra corresponde
a la mxima dilucin que presenta reactividad. La dilucin siguiente
debe ser negativa (Nota 3).
En el caso de resultar positiva la dilucin ms alta ensayada,
repetir el ensayo comenzando con una dilucin inicial al 1:16.
Como diluyente de esta nueva serie de dobles diluciones se
emplear control negativo diluido al 1:50 con solucin salina, en vez
de la solucin salina empleada anteriormente.