PRCTICA 1

MICROSCOPA

El microscopio es un instrumento que fue empleado por los primeros bilogos para
estudiar la clula y los tejidos. El nombre deriva etimolgicamente de dos races
griegas: mikrs, que significa pequeo y skopoo, que significa observar. Es decir el
microscopio es un instrumento que sirve para observar objetos o estructuras pequeas.
Existen dos tipos de microscopios que emplean la luz como fuente de energa para
formar imgenes aumentadas y detalladas de objetos que a simple vista no es posible
observar:
a) Microscopio fotnico simple o lupa.
b) Microscopio fotnico compuesto.
El microscopio simple o lupa es un instrumento de amplificacin de imgenes que
consiste en la utilizacin de una o ms lentes convergentes en un solo sistema ptico.
Dependiendo de la curvatura de la superficie de las lentes las lupas pueden ampliar las
imgenes de los objetos desde 5, 8,10, 12, 20 y hasta 50 veces. Forman una imagen
de mayor tamao, derecha y virtual.
Los microscopios fotnicos compuestos que se emplean actualmente tienen sus
antecesores en los instrumentos pticos desarrollados, en el periodo comprendido
entre 1590 y 1610, por Hans (padre) y Zacaras (hijo) Janssen; quienes mediante el
tallado cuidadoso de lentes biconvexas construyeron los primeros microscopios
compuestos.
A partir de esa poca, el microscopio es el instrumento ms utilizado en el estudio de
clulas y tejidos. Se fue perfeccionando, tanto en su parte ptica como en su parte
mecnica, gracias a los adelantos tecnolgicos aplicados a los componentes antes
mencionados.
Se denominan compuestos porque la imagen se forma mediante la utilizacin de tres
sistemas de lentes, cada uno de ellos constituidos por lentes convergentes y
divergentes. Los sistemas de lentes son el condensador, los objetivos y los oculares.
En la actualidad, el microscopio fotnico es un instrumento de uso cotidiano en los
laboratorios de investigacin y de diagnstico as como en las aulas de enseanza de
Biologa, Embriologa, Histologa, Microbiologa y Patologa.

Figura 1. Microscopio ptico compuesto en el que se indican numricamente,

sus principales componentes. (1) Ocular; (2) Tubo; (3) Cabezal; (4) Revolver;
(5) Objetivo; (6) Platina; (7) Pinzas para sujetar el portaobjetos; (8)
Condensador; (9) Fuente luminosa con diafragma; (10) Base o pie; (11)
Interruptor; (12) Brazo; (13) Macromtrico; (14) Micromtrico; (15 y 16) Mandos
para de desplazamiento de la platina; (17) Botn regulador de intensidad.

TIPOS DE MICROSCOPIOS FOTNICOS

Las caractersticas descritas, de los componentes del microscopio fotnico, as como la
formacin de las imgenes de los objetos observados corresponden al microscopio
fotnico de mayor uso en los mbitos acadmicos docentes y de investigacin el
denominado:
Microscopio de transparencia o de campo claro. Este microscopio se caracteriza
porque emplea luz natural o luz artificial como energa luminosa para formar las
imgenes del objeto que se observa. La imagen muestra puntos o reas iluminadas
(generalmente coloreados) sobre un fondo claro o transparente.
Microscopio de campo oscuro. Se denomina as porque La imagen que se forma est
constituida por una serie de estructuras brillantes sobre un fondo oscuro. El principio
ptico de este microscopio es el de aprovechar un conjunto de rayos luminosos
oblicuos que inicialmente no entran a la lente frontal del objetivo, observndose el
campo microscopio totalmente oscuro.
MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES
Es el microscopio fotnico ms utilizado para observar objetos o estructuras
transparentes sin teir. Al igual que el microscopio de campo oscuro facilita la
observacin de clulas vivas para distinguir y analizar sus componentes morfolgicos y
ciertas funciones que ellas puedan desarrollar (fagocitosis, mitosis, movimientos
ameboideos, ciliares o flagelares, etc.). De acuerdo a la construccin especial de
ciertos aditamentos (anillo de fases y placa de fases) que posee el microscopio de
contraste de fases, es factible que el sistema separe los dos rayos luminosos que
inciden y emergen del objeto (el directo y el refractado) para que, de manera artificial, el
rayo refractado retrase su recorrido ms o menos a la mitad de longitud de onda y

cuando estos rayos de luz se interfieran puedan anularse ofreciendo una porcin
oscura de la imagen es decir disminucin de la intensidad luminosa en un fondo
iluminado formado por los rayos luminosos directos.
MICROSCOPIO DE CONTRASTE INTERFERENCIAL DIFERENCIAL (CID) O DE
NOMARSKI
Este tipo de microscopio fue diseado y construido basndose en los principios pticos
semejantes al microscopio de contraste de fases, porque la imagen se genera
utilizando las diferencias de fase de los rayos luminosos que atraviesan el objeto
observado.
La diferencia con el microscopio de contraste de fases radica en que el sistema ptico,
mediante un filtro especial (de luz polarizada) hace vibrar las ondas de luz en un solo
plano, ms o menos en un ngulo de 45; estas ondas de luz polarizada se dirigen a un
prisma especial donde en la primera parte del prisma, se dividen en dos ondas
luminosas que vibran ahora en dos planos diferentes de 90 entre ellas, pero
ligeramente desfasadas, emergen, despus de atravesar la segunda parte del prisma,
como dos ondas luminosas separadas pero ahora en fase y se dirigen al objeto para
que iluminen puntos muy cercanos y los atraviesen (Las zonas iluminadas pueden
tener ndices de refraccin homogneas, una zona homognea y otra con un IR
diferente o bordes de estructuras con diferentes IR, etc.). En cualquiera de los casos, la
onda luminosa que atraviesa el objeto se retrasar con relacin a la otra onda que no lo
atraviesa, la cual servir como referencia.
MICROSCOPIO DE LUZ POLARIZADA
Una serie de componentes biolgicos, vegetales y animales, celulares o tisulares estn
constituidos por molculas que por su organizacin cristalina, para cristalina o fibrilar en
su estructuracin bioqumica, adoptan determinada orientacin en el espacio. Estas
estructuras orientadas en el espacio con un arreglo molecular especial, interactan con
las ondas luminosas que incidan en ellas de formas muy variadas, dependiendo de
cmo ese objeto est orientado. As, los ndices de refraccin del objeto sern
diferentes dependiendo de los ejes de rotacin del objeto. Un objeto con ejes que
poseen varios ndices de refraccin se denomina birrefringente. Por la disposicin
espacial de los tomos y molculas tambin se denominan anisotrpicas.
MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA O DE RADIACIN ULTRAVIOLETA
Ciertas sustancias naturales o artificiales poseen la propiedad que cuando son
estimuladas por energa de cierta longitud de onda (por ejemplo energa radiante
invisible como la radiacin ultravioleta o radiacin luminosa violeta o azul) absorben
esta energa y emiten fotones que integran ondas visibles de luz, de longitudes de onda
siempre mayores que las ondas con las que fueron excitadas. Este fenmeno se
denomina fluorescencia. La luz emitida se observa en forma de destellos coloreados
sobre un fondo oscuro.
MICROSCOPIO TRIDIMENSIONAL DE RASTREO CONFOCAL
Las imgenes obtenidas con los microscopios de fluorescencia, de transmisin y de
epifluorescencia, tienen el inconveniente que no siempre muestran una resolucin y
una nitidez deseada, ya sea porque los especmenes examinados son demasiado

gruesos (los componentes que fluorescen muestran varios planos focales, los que al
superponerse exhiben una imagen desenfocada) o porque durante proceso de
preparacin de la muestra y su observacin posterior el fluorocromo tiende a ser foto
oxidado por la energa radiante que lo excita y su capacidad de generar luminiscencia
se pierde con rapidez; en otros casos suele difundirse lentamente y el contorno del
espcimen aparece levemente difuso.
MICROSCOPIO ELECTRNICO. El microscopio fotnico tiene una capacidad mxima
de mostrar detalles de la imagen de un objeto (poder de resolucin), cuando entre ellos
existe una distancia aproximada de 0.2 de micrmetro. Este tipo de microscopio es
incapaz de ofrecer un poder de resolucin mayor porque existen dos factores
limitantes: la longitud de onda () de la energa luminosa utilizada y la apertura
numrica (A.N.) de la lente del objetivo. La nica manera de aumentar el poder de
resolucin de un microscopio era encontrar energa radiante con longitudes de onda
menores a las que posee el espectro radiante visible.
MICROSCOPIO ELECTRNICO DE TRANSMISIN
Fue diseado y construido basndose en los mismos principios de un microscopio
fotnico; con la diferencia que en vez de usar energa luminosa emplea haces de
electrones y reemplaza las lentes pticas (de vidrio) por lentes construidas mediante
campos electromagnticos.
MICROSCOPIO ELECTRNICO DE BARRIDO (SCANNING)
Este tipo de microscopio electrnico funciona con los mismos principios electrnicos del
M.E de transmisin: una fuente generadora de electrones, campos electromagnticos
que actan como lentes concentradoras de los haces de electrones o como
ampliadoras de imgenes. La diferencia estriba en que los electrones no atraviesan el
espcimen para formar las imgenes. Los electrones se aceleran y concentran hasta
formar un haz sumamente delgado de ms o menos 5 nm de dimetro que rastrea o
barre la superficie de la muestra. Los electrones son reflejados por los componentes
de la misma o al chocar con ellos generan electrones secundarios. En ambos casos los
electrones se envan e inciden en la superficie de un detector localizado en las
cercanas de la muestra. Este aditamento est conectado a un amplificador que enva
seales en forma de rayos catdicos a la pantalla de un monitor de televisin. Para
registrar la imagen formada se utiliza una cmara fotogrfica. El M.E de barrido, ofrece
imgenes con una resolucin que alcanzan de 10 a 20 nm. El aumento efectivo es de
15,000 a 50,000 dimetros. Otra ventaja de este microscopio es que forma imgenes
con una gran profundidad de foco; de aproximadamente 500 veces que la del
microscopio fotnico. Esta propiedad le confiere a la imagen su aspecto tridimensional.

REFERENCIAS
Bernis, M. J. Atlas de microscopa, Ediciones Jover, S. A. Barcelona. 1978
Locquin, M., Langeron, M. Manual de microscopa. Editorial Labor. S.A. Barcelona.
1995
Diaz, R., Gamazo, C., Lpez, Y. Manual prctico de mirobiologa, editorial Masson.
2003