DETERMINACIN DE

NITRATOS EN AGUA
Se realiz el anlisis de nitratos en agua mineral bebible mediante espectrofotometra UV,
para lo cual se prepararon muestras de concentracin de nitrato lo suficientemente bajas
como para que la ley de Beer pueda cumplirse, y luego poder determinar la concentracin
final. El espectrofotmetro utilizado fue el UV-1700 Shimadzu.

Determinacin de Nitratos en Agua por

Espectrofotometra Ultravioleta
Universidad Nacional Mayor de San Marcos
Laboratorio de Anlisis Instrumental

Prctica No. 01
01/10/2007
15/10/2007

Facultad de Qumica e Ingeniera Qumica

Escuela Acadmico Profesional de Ingeniera Qumica
Departamento Acadmico de Qumica Analtica e Instrumentacin

Profesor Fernando Anaya Melndez

Stuart Campos Guerra

06070018

N. Orden: 04

Lunes 08am - 12m

Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Universidad del Per | Decana de Amrica

FUNDAMENTO DEL MTODO Y OBJETIVOS

FUNDAMENTOS
ESPECTROSCOPIA ULTRAVIOLETA
El espectro Ultravioleta y Visible de las molculas est asociado a transiciones electrnicas
entre los diferentes niveles energticos en ciertos grupos o tomos de la molcula y no
caracterizan a la molcula como entidad.
En contraste la absorcin de energa en la regin Infrarroja estimulan la molcula completa y
causa cambios vibracionales y rotacionales en esta lo cual caracteriza la entidad estructural de
dicha molcula.
Los grupos de tomos que dan origen a la absorcin en el UV cercano o UV de cuarzo, se
conocen como grupos cromforos. La mayora de los grupos insaturados y heteroatmicos que
tienen pares de electrones no compartidos, son cromforos potenciales y estos grupos son la
base de la elucidacin de grupos estructurales en las molculas activas en el UV cercano.

Teora De Orbitales Moleculares

Cuando dos tomos forman un enlace qumico,
los orbitales atmicos de cada uno de ellos se
combinan para formar dos orbitales moleculares,
uno de baja energa que es el orbital enlazante y
otro de energa mayor, que es el orbital
antienlazante (Figura 1). Los enlaces covalentes
que se originan entre los orbitales de dos tomos
que se enlazan qumicamente pueden ser de dos
tipos y se conocen como enlaces y enlaces .
Al efectuarse dicho enlace covalente se forman
simultneamente orbitales antienlazantes:
en
el caso de un orbital molecular enlazante y
en el caso de un orbital molecular enlazante .
Los electrones que no participan en la formacin
de enlaces covalentes en la molcula, se
denominan electrones n o no enlazantes. En las
molculas orgnicas los electrones
estn
localizados principalmente en los orbitales
atmicos de tomos como: Nitrgeno, Oxgeno,
Azufre y del grupo de los halgenos.

Mientras mayor sea la energa requerida para una determinada transicin, menor es la
longitud de onda de la radiacin que debe suministrarse para conseguir tal fin; por ejemplo: la
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Pgina

La absorcin de energa radiante en el

Ultravioleta o Visible por los electrones , resulta en la excitacin de stos, los cuales
pasan a ocupar alguno de los orbitales antienlazantes. La absorcin de radiacin Ultravioleta o
Visible es capaz de efectuar
dichas transiciones.

Figura 1: Orbitales Moleculares

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transicin
para el propano requiere de radiacin de 135nm, la cual se encuentra en la
regin del Ultravioleta lejano por lo que es necesario un equipo de alto vaco si se desea
estudiar dicha regin del espectro. La transicin
es la que requiere de menor energa y
mayor longitud de onda. Las cetonas y aldehdos saturados efectan esta transicin a una
longitud de onda de aproximadamente 285nm.
Es necesario hacer notar que asociado a estas transiciones electrnicas existen cambios
rotacionales y vibracionales en la molcula lo cual origina que el espectro obtenido se aun
espectro de bandas y no un espectro de una o ms lneas agudas, como s ocurre en un
tomo.

INTERPRETACIN Y USOS DE LA ESPECTROSCOPIA ULTRAVIOLETA

El espectro Ultravioleta de una molcula se obtiene generalmente en forma adicional al
espectro infrarrojo de la misma especie. Este espectro IR frecuentemente sirve como dato
confirmativo de la ausencia o presencia de ciertos grupos funcionales.
En algunos casos la espectroscopia UV puede ser fundamental para el estudio de ciertos
problemas especficos. Por ejemplo en la industria de los cosmticos, tintes, colorantes y
pinturas. El estudio de los grupos auxocromos y de su influencia en el desplazamiento de
ciertos compuestos qumicos hacia la regin visible hacen de esta tcnica una de las de mayor
inters en sta rea.
Desde el punto de vista del estudio estereoqumico y de grupos funcionales en una molcula
orgnica, la espectroscopia UV no rivaliza con otras tcnicas que tienen el mismo propsito,
especialmente con la espectroscopia IR por las razones mencionadas anteriormente, sin
embargo su aplicacin en la cuantificacin de sustancias que absorben radiacin UV la hacen
una tcnica insustituible.
Existe un gran nmero de tcnicas para determinar substancias que no tienen un nmero
suficiente de grupos cromforos para que la banda de absorcin est dentro del espectro
Visible; por ejemplo cidos orgnicos, alcoholes, fenoles, aldehdos, cetonas, etc. Muchos de
este tipo de compuestos muestran al menos una banda de absorcin en el UV cercano y
tomando como dato su longitud de onda de mxima absorbancia se pueden cuantificar en la
misma forma en que se determina compuestos en espectroscopia Visible.
Es posible determinar un gran nmero de sustancias como son: cido ascrbico, fructuosa,
glicerol, cido 1-glutmico, lactosa, galactosa, maltosa, glucosa, rafinosa, sorbitol, etanol, cido
actico, etc. Estas tcnicas analticas son de mltiples aplicaciones en bioqumica general y
bioqumica de alimentos, y esta es la razn de su importancia. En Qumica Clnica tambin son
muy utilizados los mtodos de espectroscopia UV.

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Los objetivos principales de la prctica son:

Aprender el manejo y uso del espectrofotmetro UV.
Determinar la cantidad de nitratos presentes en el agua mineral bebible.
Trazar las curvas de calibracin y de adicin de patrn.

OBJETIVOS

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DESCRIPCIN BREVE DE LA TCNICA EMPLEADA

Este mtodo es aplicable a muestras limpias con bajo contenido de materia orgnica, tales
como las provenientes de plantas de suministro y/o pozos de agua subterrnea. Las
mediciones se realizan utilizando un fotmetro a 220nm, para concentraciones inferiores a
10ppm, rango para el cual se cumple la Ley de Beer.
Teniendo en cuenta que tanto la materia orgnica como el ion nitrato absorben energa
radiante a una longitud de onda de 220nm y que la materia orgnica mas no el nitrato,
absorbe tambin a 275nm, el mtodo analtico realiza las mediciones a estas dos longitudes de
onda, con el objeto de corregir las primeras mediciones por la interferencia que haya podido
ocasionar la materia orgnica presente en la muestra.
El mtodo fotomtrico es muy bueno para muestras limpias y puede adaptarse bien para
muestras con materia orgnica, siempre que sta permanezca estable y constante. La filtracin
de las muestras a travs de membranas de 0,45 antes de realizar las mediciones, ayuda
bastante a minimizar las interferencias ocasionadas por presencia de materia orgnica en las
muestras.

DESCRIPCIN BREVE DEL INSTRUMENTO

El
nombre
del
equipo
utilizado
es:
Espectrofotmetro UV-Visible UV-1700, de marca
Shimadzu.
Especificaciones: (exactitud espectral, resolucin,
exactitud fotomtrica, etc. ...) y funciones en
conformidad con las farmacopeas de EE.UU., Europea
y Japonesa.
Validacin del hardware (9 tems) como estndar.
Soporte IQ/OQ*
Diseo compacto - modelo liviano de slo 17 kg que puede ser transportado por una
persona.
Operacin sencilla con teclas especficas para funciones.
Facilidad en la operacin a travs de la amplia pantalla de cristal lquido.
Funciones completas para anlisis cualitativo y cuantitativo instaladas como estndar; se
pueden agregar programas especiales usando tarjetas IC.
Compatible con PC usando software bajo Windows.
Modo de medicin fotomtrica de mltiples longitudes de onda (estndar).

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1. IQ (Calificacin de la Instalacin) Confirma que el instrumento fue instalado correctamente en la

configuracin original y en el ambiente apropiado.
2. OQ (Calificacin de Operacin) Confirma que el instrumento alcanz el desempeo original deseado.

*IQ/OQ contiene los siguientes detalles que son verificados y registrados durante la instalacin del
equipo. Son documentos fundamentales para cumplir con las pautas de la FDA.

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ACCESORIOS DEL INSTRUMENTO

Utilice el software UVProbe para controlar el UV-1700 mediante una computadora personal. El
paquete incluye funciones para mediciones fotomtricas, espectrales y cinticas, adems de
elaboracin de informes.

CLCULOS DETALLADOS
Preparacin de la solucin Stock:

Preparando la solucin intermedia mediante dilucin de la solucin Stock:

Preparacin de las soluciones de Lectura:

No. De
Solucin
1
2
3

(mL)

(mL)
Intermedia
(mL)
1
3
5

1
1
1

50
50
50

Concentracin
final (ppm)
0.1
0.3
0.5

Haciendo los clculos para la solucin nmero 1:

TABLA DE RESULTADOS

Pgina

La longitud de onda de absorcin mxima que se obtuvo mediante una lectura rpida (modo
SCAN) con el instrumento utilizado una lnea base entre 350 y 170nm, fue de 201.5nm.

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En la lectura de los Estndares preparados (soluciones de lectura, para realizar la cuerva de

calibracin):
Estndar
0 (blanco)
1
2
3

Concentracin
(ppm)
0
0.1
0.3
0.5

Absorbancia
-0.049
0.005
0.107
0.287

Se realiza el ajuste por mnimos cuadrados:

Concentracin Absorbancia
0.00
0.10
0.30
0.50

-0.049
0.005
0.107
0.287

0.000
0.001
0.032
0.144

0.000
0.010
0.090
0.250

0.90

0.350

0.176

0.350

Se obtiene la ecuacin:

, y de las

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Calculamos el coeficiente de correlacin, a partir de la covarianza de

desviaciones estndar de y .

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Este coeficiente de correlacin, al estar tan cercano a 1, nos indica que estos datos forman una
recta de pendiente positiva al ser graficados, como se aprecia en la seccin grficas.
Para la curva de adicin de patrn se hace un clculo semejante, donde la recta obtenida es:

Este valor de nos dice que coinciden perfectamente para una recta, y como la pendiente es
casi igual a la de la curva de calibracin, decimos que se puede confiar en los resultados de la
primera.
En la lectura de las muestras:
Muestra

Absorbancia

1
2
3

0.050
0.376
0.406

Concentracin
(ppm-N)
0.168
0.660
0.707

Para el clculo de la concentracin de la muestra 2:

De estas concentraciones, las coinvertimos a concentracin de nitrato y las llevamos al

volumen de muestra sin diluir:

0.168
0.660
0.707

(ppm)
1.212
4.763
5.102

en agua
mineral (ppm)
60.617
79.379
51.019

Para la curva de adicin de patrn se tuvo los siguientes resultados:

0.024
0.191
0.217
0.356

0.126
0.381
0.421
0.631

Pgina

0
1
2
3

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TRATAMIENTO ESTADSTICO
Se obtienen los datos estadsticos principales para estas tres muestras:

Entonces el resultado de la concentracin de nitratos es:

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
MATERIALES Y REACTIVOS
Balanza Analtica.
Desecador de Vidrio con agente deshidratante.
Pipetas Volumtricas de 1, 2, 4,4 y 5mL.
Matraces Volumtricos de 10, 50, 100 y 500mL.

EQUIPOS
Espectrofotmetro UV-Visible, Shimadzu 1700, para uso 220nm y 275nm.
Celdas de Cuarzo.

PROCEDIMIENTO
Obtencin de la Curva de Calibracin

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Encender el espectrofotmetro.
Seleccionar la longitud de onda de mxima absorbancia.
Correr el blanco en el equipo para obtener un factor de correccin.
Seleccionar los parmetros del mtodo (en este caso seleccionar la lnea base de 350 a
190nm).
Leer las soluciones de estndar (soluciones de lectura) y anotar los valores.
Graficar la curva de calibracin con los valores obtenidos.

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Tratamiento de la Muestra
Las muestras se preparan de la siguiente forma:

1
3
5

1
1
1

50
50
50

Estas muestras se colocan en el espectrofotmetro para la lectura correspondiente de las

absorbancias.
Para la preparacin de las muestras para la curva de adicin de patrn:

1
1
1
1

0
1
2
3

1
1
1
1

50
50
50
50

De igual manera, se realiza el anlisis con el espectrofotmetro para estas muestras y se

procede a graficar la curva de adicin de patrn.

Figura 2: Resultados del UVProbe

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Los resultados obtenidos con el Software UVProbe se observan en la figura 2.

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DISCUSIN DE RESULTADOS
Podemos atribuir la falta de precisin en los resultados del anlisis de las muestras a la mala
manipulacin de las celdas de cuarzo, pues se determin en el trazado de la curva de
calibracin por adicin de patrn que la solucin estaba preparada correctamente.
Cabe notar que hubo una rotulacin equivocada de las soluciones, lo que pudo llevar a errores
consiguientes de lectura.
Esta es la razn por la que leemos que la concentracin de nitratos en el agua es tan alta, pues
aparte de esto, no se realiz la correccin que se debi haber hecho a los 275nm, debido a la
falta de tiempo en el laboratorio de instrumentacin.
Se debe tener en cuenta que el lmite establecido para la concentracin de nitratos en el agua
es de 45mg/L a nivel mundial.

DISCUSIN DE LA TCNICA EMPLEADA

En el laboratorio, no se realiz la medicin a 275nm para tener una correccin. Esto no se
realiz debido a que se asumi que esta agua estaba libre de materia orgnica y que esta no
estaba interfiriendo con la medicin en la longitud de onda mxima.
En general esta tcnica de determinacin de nitratos en agua es la usada como mtodo
estndar, debido a su alta precisin, encontrndose adems, registrada en el INDECOPI .

CONCLUSIONES
Se concluye, que no se pudo determinar exactamente el contenido en nitratos en el agua
mineral que consumimos (agua Vida) pero podemos asegurar que contiene menos de
63.7mg/L de nitratos pues este valor estara representando a todas las especies que absorben
radiacin a esta longitud de onda.

RECOMENDACIONES
Se recomienda mayor precisin y cuidado en la preparacin de las soluciones para la muestra,
as como tal vez un mejor manejo de las celdas de cuarzo en el equipo, pues se determin que
hubo error en este sentido.
Tambin se recomienda analizar a su vez otros tipos de agua mineral, pero provenientes de
manantiales, para poder verificar su mayor limpidez en comparacin al resto.

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Principios de Anlisis Instrumental. Skoog Holler Nieman

McGraw-Hill Interamericana de Espaa. Quinta edicin. 2001

BIBLIOGRAFA